CN114657187A - 一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用 - Google Patents

一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114657187A
CN114657187A CN202210284969.0A CN202210284969A CN114657187A CN 114657187 A CN114657187 A CN 114657187A CN 202210284969 A CN202210284969 A CN 202210284969A CN 114657187 A CN114657187 A CN 114657187A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ntwrky65
tobacco
gene
filament length
plant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210284969.0A
Other languages
English (en)
Inventor
张小全
李举旭
武云杰
夏宗良
王帅
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Henan Agricultural University
Original Assignee
Henan Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Henan Agricultural University filed Critical Henan Agricultural University
Priority to CN202210284969.0A priority Critical patent/CN114657187A/zh
Publication of CN114657187A publication Critical patent/CN114657187A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A01H1/02—Methods or apparatus for hybridisation; Artificial pollination ; Fertility
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8262—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield involving plant development
    • C12N15/827—Flower development or morphology, e.g. flowering promoting factor [FPF]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用，该NtWRKY65核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，本发明通过构建烟草基因NtWRKY65的植物表达载体，经农杆菌介导转化，侵染野生型烟草，获得NtWRKY65‑OE转基因烟草植株，NtWRKY65‑OE花丝长度显著缩短，而雌蕊无明显变化，在烟草杂交制种过程中，以NtWRKY65‑OE花丝长度变短品种作为母本，不进行人工去雄，直接用父本花粉授粉获得杂交种种子，NtWRKY65‑OE花丝长度变短品种通过人工辅助授粉完成自交繁种，可省去母本不育系转育或人工去雄的步骤，提高了烟草杂种优势利用的杂交制种效率。

Description

一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其 应用
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域，尤其涉及一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用。
背景技术
WRKY转录因子是植物中最大的转录调控因子家族之一，是植物信号网络的重要组成部分，其通常作为抑制或激活因子在包括生物及非生物胁迫、种子萌发与休眠、植物防御、发育和衰老等在内的多种不同的植物过程发挥调节作用。WRKY转录因子因其包含由60个氨基酸残基构成的保守结构域而得名，WRKY结构域的N端有一个高度保守的WRKYGQK基序，C端具有Cx4-5Cx22-23HxH型或Cx7Cx23HxC型的锌指结构，可用来与顺式作用元件特异性结合，从而调控目的基因的表达。
杂种优势是指两个具有遗传差异的亲本通过杂交，所产生的子代在生长势、适应性、抗逆性和繁殖力等性状上优于双亲或超过双亲的现象。杂种优势利用作为提高作物产量和品质的一条重要途径，在水稻、高粱、玉米等作物上已得到广泛验证。
基于水稻光温敏核不育系的发现而建立起来的两系法杂交水稻技术是继三系法杂交水稻成功以后又一水稻杂种优势利用的有效途径（范优荣等. 光温敏雄性不育水稻的研究进展[J]. 科学通报, 2016,61(35): 3822-3832）。由于光温敏雄性不育系水稻对光温敏感从而表现出不育系和恢复系特性，实现了“一系两用”。两系法杂交水稻育性受核基因控制，没有恢保关系，具有配组自由；种子繁育程序简单，成本低；稻种资源利用率高，选育出优良组合机率高等优点，从而解决了不育系母本培育困难等三系法存在的限制，使水稻杂种优势利用进入一个新阶段（牟同敏. 中国两系法杂交水稻研究进展和展望[J]. 科学通报, 2016, 61(35): 3761-3769）。而通过利用花丝变短材料同样可以实现“一系两用”。
烟草杂交制种通常要将杂交种的母本转育成雄性不育系，利用雄性不育系来生产杂交种种子。要实现规模化烟草杂交种子生产，不但要先用回交转育的办法将母本转育成雄性不育系，生产种子的过程中还要不断的用可育母本与不育系母本进行回交以生产不育系母本，不育系母本的培育和种子繁种费时费工。迫切需要一个“一系两用”的杂种优势利用模式。
由于烟草的花是两性完全花，其雌蕊柱头包裹在花冠的中央，因此，在进行人工授粉时，必须人工去除母本雄性不育株待授花朵顶端花冠露出雌蕊柱头，但是，在去除花冠时，容易损伤母本的雌蕊的柱头和花柱，形成无效花，同时需要投入大量的劳力，费时费工，导致人工授粉难度大，烟草雄性不育系和杂交种种子生产成本较高，育种效率低下，并且人工并不能保证彻底去雄，从而影响杂交种制种的效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用。
为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65，所述NtWRKY65基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
一种NtWRKY65-OE转基因烟草植株的培育方法，包括以下步骤：
（1）构建烟草花丝长度转录因子NtWRKY65基因的表达载体；
（2）将所构建的烟草花丝长度转录因子NtWRKY65基因的表达载体通过农杆菌介导转化，侵染野生型烟草K326；
（3）通过培育和筛选获得烟草NtWRKY65-OE转基因纯合植株。
进一步的，步骤（1）中植物表达载体上带有35S强启动子。
一种NtWRKY65-OE转基因烟草植株的应用，在烟草杂交制种过程中，以NtWRKY65-OE花丝长度变短品种作为母本，不进行人工去雄，直接用父本花粉授粉获得杂交种种子。
本发明具有的优点是：本发明通过构建烟草基因NtWRKY65的植物表达载体，经农杆菌介导转化，侵染野生型烟草，获得NtWRKY65-OE转基因烟草植株，NtWRKY65-OE花丝长度显著缩短，而雌蕊无明显变化，导致转基因烟草不能完成自花授粉，需要人工辅助授粉才能完成授粉结种子，在烟草杂交制种过程中，以NtWRKY65-OE花丝长度变短品种作为母本，不进行人工去雄，直接用父本花粉授粉获得杂交种种子，NtWRKY65-OE花丝长度变短品种通过人工辅助授粉完成自交繁种，可省去母本不育系转育或人工去雄的步骤，提高了烟草杂种优势利用的杂交制种效率，降低种子生产成本，对促进烟草育种杂种优势利用提高烟叶产质量具有重要价值。
附图说明
图1为NtWRKY65转录因子基因在烟草表皮细胞中的亚细胞定位图。
图2为NtWRKY65基因过量表达烟草株系与野生型烟草花发育过程形态学特征比较图。
图3为NtWRKY65基因过量表达烟草株系与野生型烟草花发育过程花器官长度比较图。
图4为花发育过程中NtWRKY65基因实时荧光定量PCR检测图。
图5为NtWRKY65基因过表达烟草母本花丝变短杂种优势利用模式图。
具体实施方式
下面结合实施例及说明书附图对本发明作进一步详细描述说明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所用的试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂。
一、烟草NtWRKY65基因的克隆
1.烟草总RNA的提取及cDNA第一条链合成
以K326叶片为材料，在液氮中充分研磨成粉末，按照天根生化科技（北京）有限公司的植物总RNA提取试剂盒提供的方法提取总RNA，使用1%琼脂糖凝胶电泳检验RNA的完整性，将所得到的RNA溶液置于-80℃冷藏。以K326叶片总RNA样品1.0 ug为模版，采用OligodT-Adaptor Primer进行反转录，合成cDNA第一条链，反转录条件为：42℃ 40 min，50℃ 30min，99℃ 5 min，5℃ 5 min。
2.烟草NtWRKY65基因克隆
根据所述NtWRKY65基因的编码序列（SEQ ID NO.1）设计特异性引物，如表1所示。以1 uL烟草叶cDNA第一条链为模板，采用标准的50 uLPCR反应体系，以Phusion超保真DNA聚合酶通过PCR扩增出烟草NtWRKY65基因并测序，获得该转录因子的全长编码序列（SEQ IDNO.1），其编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。PCR扩增cDNA时，94℃预变性4min，35个循环，72℃保温10 min。循环过程为94℃变性1 min，58℃退火1 min，72℃延伸2min。
表1 PCR扩增引物
引物名称 引物序列5’-3’
NtWRKY65-F TCCCCAAAAAGGAGCAGAAGA
NtWRKY65-R TGCCCAAGAATCAGATGGTGG
二、烟草NtWRKY65基因植物表达载体的构建与遗传转化
使用特异性引物扩增NtWRKY65的整个编码序列（CDS），表1，构建过表达载体NtWRKY65-pCAMBIA1305。在扩增引物上下游分别引入SpeⅠ、KpnⅠ酶切位点。使用SacI/KpnI消化PCR产物，在花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子的控制下克隆到SacI/KpnI消化的pCAMBIA1305.1超表达载体上，转入农杆菌感受态细胞，涂板在含有卡那霉素抗性的培养基上，28 ℃培养2 d。进行菌液PCR检测验证，选取阳性菌落进行测序验证，结果表明含NtWRKY65-pCAMBIA1305的植物过量表达载体已经成功转入农杆菌中。
将测序正确的农杆菌菌液保存在-80 ℃冰箱备用。取幼嫩的烟草（Nicotiana tabacum L. cv. K326）叶片，经75%酒精消毒后，烟草叶片切块放入灭菌的培养皿中。放置烟草叶片的培养皿中加入农杆菌溶液，共培养8 min左右，让农杆菌侵染烟草叶片。待培养出的愈伤组织分化出不定芽后，将芽切下转移到含有选择标记的MS培养基上生根，幼苗生根后进行适当的炼苗处理再进行移栽。取一小块转基因植株的叶片对其进行鉴定是否转基因成功。将取下的叶片放入GUS染液中，在37℃条件下观察几个小时，看叶片是否出现蓝色，若叶片呈现蓝色则证明转基因成功。获得烟草NtWRKY65转基因株系命名为NtWRKY65-OE在研究中使用。
表2 基因过量表达载体构建引物
引物名称 引物序列5’-3’
NtWRKY65-F2 TGACTAGTTCCCCAAAAAGGAGCAGAAGA
NtWRKY65-R2 ATGGTACCTGCCCAAGAATCAGATGGTGG
三、在烟草表皮细胞中的亚细胞定位
扩增NtWRKY65的整个编码序列（CDS），通过LR反应构建N端绿色荧光蛋白（GFP）融合载体pMDC43-NtWRKY65。将检测成功的农杆菌菌液过夜扩摇，28℃，200 rpm；配好最终悬浮菌液，室温静置1至3小时，准备侵染；侵染前，将烟草放于白色荧光灯下1 h，使其气孔打开；选择倒三叶和倒四叶，用于侵染，一株选两叶，侵染一种菌液；用去掉针头的注射器，轻柔地摩擦待转叶片的背部（0.5 cm2），或用小针头刺穿，以去除其蜡质层；侵染前，用记号笔标记待转区域；将最终悬浮菌液吸入1 ml去针头的注射器中；将注射器对着叶片背面的待转区域，一手按着叶片上面，另一手轻轻推动活塞，直到看到液体扩散，再侵染其他部位，侵染后，用记号笔圈定侵染区域；然后将叶片喷水，套上保鲜袋，将侵染后的烟草放回培养室，黑暗放置过夜。第二天打开保鲜袋，注射后2~3天表达量最高。切取侵染区域，撕表皮制片，荧光显微镜观察。构建花椰菜花叶病毒35S启动子驱动的N端GFP融合载体，并将其侵染烟草表皮细胞作为对照细胞。转化后，将烟草表皮样品使用奥林巴斯激光共聚焦显微镜对GFP荧光进行成像观察。结果显示在对照GFP空载体转基因细胞中，在整个细胞中检测到GFP信号，而NtWRKY65-GFP融合表达载体只能在细胞核中检测到GFP信号（图1），确认NtWRKY65不具有跨膜蛋白结构，定位在细胞核中，具有转录因子的一般特征。
四、 NtWRKY65基因过量表达烟草和野生型烟草花发育过程中花丝和花柱形态学特征比较
在河南农业大学许昌校区烟草学院科研基地使用野生型烟草（WT）K326种子和引入NtWRKY65过表达结构的NtWRKY65-OE转基因烟草（OE）种子（T2代），经消毒后进行漂浮育苗。育苗完成后选取肥力均匀、地势平坦的地块进行移栽，试验地为壤土，土壤基础化学性质为：有机质 18.09 g/kg，碱解氮 75.7 mg/kg，速效磷 8.3 mg/kg，速效钾 112.5 mg/kg，水溶性氯 24.8 mg/kg。施肥以纯氮计，各处理氮用量为37.5 kg/hm，m(N):m(P2O5):m(K2O)=1:2:5，所用肥料为烟草复合肥（10-12-18）、重过磷酸钙和硫酸钾，灌溉方式为喷灌，株行距为50 cm×110 cm。参照Koltunow等对烟草花蕾发育时期划分的方法，以花蕾发育过程中花萼、花冠、花药、柱头等器官的大小、颜色、相对位置为基础，对2个材料花蕾发育过程中的形态学特征与划分的时期进行对应，界定2个材料的发育时期。每品种取长势一致的5株，按照花蕾长度标准取花药和柱头完全分化厚的时期1~12等12个时期每时期取10个花蕾，置于冰盒中，快速转移至室内，用游标卡尺对花蕾长度、花冠长度、花柱长度、花丝长度等指标进行测量。根据各花器颜色、大小、相对位置与花蕾长度的关系，以不同材料花蕾长度为参照，将2个材料的花蕾对应时期1~12分为T3、T4、T5三个发育阶段以方便后续取样研究。
T3（时期4-5）：花蕾长20.96 mm~28.26 mm；
T4（时期7-8）：花蕾长34.11 mm~49.11 mm；
T5（时期10-11）：花蕾长44.02 mm~56.80 mm。
如图3所示，NtWRKY65基因过表达烟草植株（OE）各花器官长度在花发育后期均显著低于野生种（WT）。T3时期后OE花丝长度开始显著短于WT，而花柱长度在T5时期后才与WT之间表现出显著差异，且相对于花丝变化较小。最终导致NtWRKY65-OE花药在各花发育时期均低于柱头，无法自花授粉造成不育（图2）。
五、花发育过程中NtWRKY65基因实时荧光定量PCR检测
将获得的烟草花丝和花柱样品按照一中的方法进行RNA提取和cDNA第一条链的合成。使用表1中的NtWRKY65基因的特异性引物，以烟草NtACTIN基因作为内参基因，使用qRT-PCR法测定NtWRKY65基因在野生型烟草K326（WT）和NtWRKY65基因过表达烟草NtWRKY65-OE（OE）的T3和T5时期花丝和花柱中的相对表达量，如图4所示。结果表明花蕾T3时期和T5时期，NtWRKY65基因在过表达烟草植株花柱和花丝中的相对表达量均显著高于野生型。
六、NtWRKY65过量表达转基因烟草植株结果数比较
对自然条件下野生种（WT自然自交）和NtWRKY65过表达烟草（OE自然自交）自交以及NtWRKY65过表达烟草人工辅助授粉三次（OE人工授粉）分别随机选取5株，统计每株的结果数，结果表明，NtWRKY65过量表达烟草花丝缩短导致其在自然条件下无法正常自交，需要人工辅助授粉才可结种子，利于烟草杂种优势利用，烟草母本花丝变短杂种优势利用模式如图5所示。
序列表
<110> 河南农业大学
<120> 一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用
<141> 2022-02-22
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1420
<212> DNA
<213> Nicotiana tabacum L.
<400> 1
ctataaacaa ttacctctac cccatctctc cctttttata ctattcgctt ctcttcctcc 60
attttcttgt tcccatgaaa tctctctctt atcttccata aatatcaaca gcttctgtat 120
ataaattaca aaactttgga ccaaaagaga caaaaaaaaa attacttcaa ttcaatatag 180
ccatggatgg aagattcaat aatatttttg tatctcatga gcaagaagat tccgagaatt 240
cgccggaaaa cagcctcgac tcgccgcgtt ccgacatgtt caatgataat aagatgatga 300
cttctacttc ctccccaaaa aggagaagat ccatacaaaa gagagtggta tcagtgccaa 360
ttaaagaagt tgaaggtaca aagatgaagg gtgaaataag catgccacca tctgattctt 420
gggcatggag gaaatatgga caaaagccca tcaaaggctc tccctatcct aggggatatt 480
atagatgcag tagttcaaag ggatgtccag caagaaaaca agtagaaagg agccgtgcag 540
accctaacat gttggtagtg acgtattctt gcgaacataa ccacccttgg ccggcttcta 600
ggaataatca acacaaccaa cgtacaacta ctacatcatg tatcaataat gcaaagacga 660
agacgaaaac attagcatca ctaacagcaa caacaacaac aataataaca actaccaata 720
ttgcagtttc agactttgag cgcaaaaaag acacgagcaa tttcgcaagc caatcggagc 780
caaattcgga cgaaaacttt accaatcttg gcgaatcatc tcttattagt tgcaatgaat 840
ttggatggtt ttcggatttt gagtgtactt ctactaccat gctagaaagt cctattttaa 900
cagaagtcga agttactgat attgacatgt catcaacttt aacaacaatg agagaagaag 960
atgattcact tttcgccgat ctcggagagt tgccggaatg ttcaagggtt tttggccgtg 1020
gaatgatgga aagggacgag gaacgccggc gacatagctt gagcttgaca tcttggtgtg 1080
ggaccttggg ttgagatcgt tcaacacgtg tcacttctct acatttgtct ttacttgagg 1140
aaaatatttt taactctttt aattcattag aaaattgcgc gtcgtgcgcc ataagatacc 1200
aaagcaattt ggttttgctt tttaatattt ttaacttttt cttagatttc agtgtaggtt 1260
ttgtagtata gtaaaataaa agttctccaa ttgagagggc tttgtctcaa tcttattgta 1320
attagcatca ttgccggccg tttcattttc aatggctaaa ttcctctcga tgcctcttta 1380
ctttacttta agtgagaagg aagagatatg ctattgttta 1420
<210> 2
<211> 303
<212> PRT
<213> Nicotiana tabacum L.
<400> 2
Met Asp Gly Arg Phe Asn Asn Ile Phe Val Ser His Glu Gln Glu Asp
1 5 10 15
Ser Glu Asn Ser Pro Glu Asn Ser Leu Asp Ser Pro Arg Ser Asp Met
20 25 30
Phe Asn Asp Asn Lys Met Met Thr Ser Thr Ser Ser Pro Lys Arg Arg
35 40 45
Arg Ser Ile Gln Lys Arg Val Val Ser Val Pro Ile Lys Glu Val Glu
50 55 60
Gly Thr Lys Met Lys Gly Glu Ile Ser Met Pro Pro Ser Asp Ser Trp
65 70 75 80
Ala Trp Arg Lys Tyr Gly Gln Lys Pro Ile Lys Gly Ser Pro Tyr Pro
85 90 95
Arg Gly Tyr Tyr Arg Cys Ser Ser Ser Lys Gly Cys Pro Ala Arg Lys
100 105 110
Gln Val Glu Arg Ser Arg Ala Asp Pro Asn Met Leu Val Val Thr Tyr
115 120 125
Ser Cys Glu His Asn His Pro Trp Pro Ala Ser Arg Asn Asn Gln His
130 135 140
Asn Gln Arg Thr Thr Thr Thr Ser Cys Ile Asn Asn Ala Lys Thr Lys
145 150 155 160
Thr Lys Thr Leu Ala Ser Leu Thr Ala Thr Thr Thr Thr Ile Ile Thr
165 170 175
Thr Thr Asn Ile Ala Val Ser Asp Phe Glu Arg Lys Lys Asp Thr Ser
180 185 190
Asn Phe Ala Ser Gln Ser Glu Pro Asn Ser Asp Glu Asn Phe Thr Asn
195 200 205
Leu Gly Glu Ser Ser Leu Ile Ser Cys Asn Glu Phe Gly Trp Phe Ser
210 215 220
Asp Phe Glu Cys Thr Ser Thr Thr Met Leu Glu Ser Pro Ile Leu Thr
225 230 235 240
Glu Val Glu Val Thr Asp Ile Asp Met Ser Ser Thr Leu Thr Thr Met
245 250 255
Arg Glu Glu Asp Asp Ser Leu Phe Ala Asp Leu Gly Glu Leu Pro Glu
260 265 270
Cys Ser Arg Val Phe Gly Arg Gly Met Met Glu Arg Asp Glu Glu Arg
275 280 285
Arg Arg His Ser Leu Ser Leu Thr Ser Trp Cys Gly Thr Leu Gly
290 295 300

Claims (4)

1.一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65，其特征在于：所述NtWRKY65基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的蛋白质氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种NtWRKY65-OE转基因烟草植株的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）构建烟草花丝长度转录因子NtWRKY65基因的表达载体；
（2）将所构建的烟草花丝长度转录因子NtWRKY65基因的表达载体通过农杆菌介导转化，侵染野生型烟草K326；
（3）通过培育和筛选获得烟草NtWRKY65-OE转基因纯合植株。
3.如权利要求2所述的NtWRKY65-OE转基因烟草植株的培育方法，其特征在于：步骤（1）中植物表达载体上带有35S强启动子。
4.一种NtWRKY65-OE转基因烟草植株的应用，其特征在于：在烟草杂交制种过程中，以NtWRKY65-OE花丝长度变短品种作为母本，不进行人工去雄，直接用父本花粉授粉获得杂交种种子。
CN202210284969.0A 2022-03-23 2022-03-23 一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用 Pending CN114657187A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210284969.0A CN114657187A (zh) 2022-03-23 2022-03-23 一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210284969.0A CN114657187A (zh) 2022-03-23 2022-03-23 一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114657187A true CN114657187A (zh) 2022-06-24

Family

ID=82030951

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210284969.0A Pending CN114657187A (zh) 2022-03-23 2022-03-23 一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114657187A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106148345A (zh) * 2016-07-13 2016-11-23 华南农业大学 象草维管组织特异性启动子及其应用
CN110964740A (zh) * 2019-12-10 2020-04-07 河南农业大学 一种高黄酮醇烟草的制备方法及其应用
CN114032244A (zh) * 2021-01-26 2022-02-11 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) 烟草NtPIF1基因及其编码蛋白和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106148345A (zh) * 2016-07-13 2016-11-23 华南农业大学 象草维管组织特异性启动子及其应用
CN110964740A (zh) * 2019-12-10 2020-04-07 河南农业大学 一种高黄酮醇烟草的制备方法及其应用
CN114032244A (zh) * 2021-01-26 2022-02-11 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) 烟草NtPIF1基因及其编码蛋白和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GENBANK: ""PREDICTED: Nicotiana tabacum probable WRKY transcription factor 65 (LOC107828746), transcript variant X2, mRNA"，Accession Number：XM_01665611 4.1", 《GENBANK》 *
王中 等: ""烟草NtMYB59基因克隆及过表达对绿原酸含量的影响"", 《烟草科技》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107022551B (zh) 一种调控拟南芥苗期营养体大、早花和粒重增加的玉米基因ZmGRAS37及其应用
CN110872598B (zh) 一种棉花抗旱相关基因GhDT1及其应用
CN111440808B (zh) 植物氨基酸通透酶及其编码基因在调控植物耐高温性能中的应用
CN110358772B (zh) 提高水稻非生物胁迫抗性的OsEBP89基因及制备方法与应用
CN113088526B (zh) 热激相关基因ZmHsf11及其在调控植物耐热性中的应用
CN112522283B (zh) 一种花粉发育相关基因及其应用
CN109468333A (zh) 柑橘漆酶家族基因CsiLAC4及其应用
CN110760526B (zh) 甜橙CsMYB120基因及其应用
EP2963117B1 (en) Plant type related protein, and coding gene and application thereof
CN111454963A (zh) 火龙果耐盐基因HuERF1基因及其应用
CN114213515B (zh) 基因OsR498G0917707800.01及其编码的蛋白在调控水稻垩白中的应用
CN106995492B (zh) 蔗糖转运蛋白及其在调控植物雄性不育中的应用
CN107033229B (zh) 小麦抗白粉病相关蛋白TaEDS1-D1及其编码基因与应用
CN102731633B (zh) 植物侧枝数目相关转录因子AtDOF4.2及其编码基因与应用
CN114907465A (zh) 水稻孕穗期耐冷性相关的OsLEA9蛋白及其相关生物材料与应用
CN107573411A (zh) 小麦TaZIM1‑7A蛋白在调控作物抽穗期中的应用
CN103525816A (zh) 一种姜花花部特异和伤害、虫害诱导的tps2启动子及其应用
CN114657187A (zh) 一种调控烟草花丝长度的WRKY转录因子基因NtWRKY65及其应用
CN110468138B (zh) 控制水稻耐冷性的基因tsg2及其应用
CN104450749A (zh) 黄瓜CsLOX1基因花特异表达载体及其应用
CN114107333B (zh) 一种大麦受体类激酶HvSERK1在根毛生长中的应用
CN113789308B (zh) 一种表达载体及其在提高大豆生物量中的应用
CN116622725B (zh) 杂交鹅掌楸LhMFT2基因及应用
CN107653252A (zh) 棉花GbSLR1基因在植物根和分枝发育中的应用
CN111850031B (zh) 蛋白质GmFULc在调控植物产量中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination