CN114642612B - 一种银耳石斛提取物的制备方法及应用 - Google Patents
一种银耳石斛提取物的制备方法及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种银耳石斛提取物的制备方法及应用。该银耳石斛提取物通过包括以下步骤方法制备得到的：将一定重量比的银耳、石斛加水浸泡后，进行淘洗，提取，得到银耳石斛提取物。该制备方法得到的银耳石斛提取物，能够明显提高石斛多糖的稳定性，改善化妆品中银耳多糖添加量高时产生的不良肤感，并且该提取物可以直接作为基质在化妆品中应用。本发明提取方法设备简单，提取条件温和，提取率高，成本较低，同时解决了石斛提取液不稳定的问题、并可提升组合物肤感，具有较高的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种银耳石斛提取物的制备方法及应用。
背景技术
含天然植物成分的化妆品和保健品深受人们的喜爱。含天然植物的化妆品刺激小，风险低，尤其受到敏感肌人群的青睐。但是目前市场中大多都只是概念添加，真正的植物提取物添加量很少，因此开发一种可以直接应用于化妆品配方的高植物提取物含量的植物添加剂是必要的。
银耳是我国的传统药食用菌，是治疗虚弱和衰老的滋补药。银耳中富含天然的植物性胶质，能够有效滋养肌肤，而且它的滋阴功效，能够调理女性身体，对脸上的黄褐斑、雀斑等都有很好的治愈效果。银耳多糖是其重要的活性物质，具有广泛的生理活性，能提高免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、降血糖和降血脂等。此外，银耳多糖作为百万级分子量的天然保湿原料，具有良好的吸水性能和极好的成膜性，在护肤品中应用广泛，但其在护肤品中的添加量受到限制。添加量过多会严重影响护肤品肤感和使用，例如在膏霜中添加过量时，会产生拉丝现象。
铁皮石斛又名黑节草、铁吊兰，有“救命仙草”、“中华仙草”等美誉。铁皮石斛具有抗氧化、抗衰老以及一定的保湿效果。文献（汪娇梅, 余丽丽, 黄锁义, 等. 广西野生铁皮石斛水提取物稳定因子测定[J]. 中国野生植物资源, 2015, 34(003):31-33.）公开了石斛水提取物稳定性研究，采用水提取法从铁皮石斛中提取物质，通过紫外分光光度计法测定pH和温度对石斛水提取物稳定性影响发现，石斛水提物在中性条件稳定性较差。因此，生产加工过程中需要重点关注石斛稳定性，以期最大限度的发挥石斛的药效作用。
开发具有良好肤感和高稳定性、高护肤活性、高安全性的植物护肤提取物是本领域技术人员亟待解决的问题。
发明内容
为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种银耳石斛提取物的制备方法及应用。该制备方法得到的银耳石斛提取物多糖得率高、稳定性好，该提取物具有一定的抗氧化活性，且添加到化妆品中可改善化妆品肤感，可广泛应用于化妆品中。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种所述的银耳石斛提取物的制备方法。
根据本发明，所述银耳石斛提取物通过包括下述步骤的制备方法制备得到：
将一定重量比的银耳、石斛加水浸泡后，进行淘洗，提取，得到银耳石斛提取物。
根据本发明的一些具体实施方式，所述提取方法中，提取压力为40～130 KPa。
根据本发明的一些具体实施方式，所述提取方法中，提取温度为105～125℃。
根据本发明的一些具体实施方式，所述提取方法中，提取时间为1～4 h。
根据本发明的进一步的实施方式，所述提取方法中，提取压力为40～75 KPa。
根据本发明的进一步的实施方式，所述提取方法中，提取温度为105~115℃。
根据本发明的进一步的实施方式，所述提取方法中，提取时间为2~3 h。
根据本发明的又一些优选实施方式，所述提取方法中，提取压力为70 KPa，提取温度为115℃，提取时间为3 h。
根据本发明的一些具体实施方式，所述银耳、石斛的重量比为，银耳：石斛（m/m）=1：1～5：1。
根据本发明的一些优选实施方式，所述提取步骤中，银耳石斛与水的料液比（m/m）为1：30～1:70。
根据本发明的一些具体实施方式，所述浸泡步骤中，浸泡温度为20～30℃。
根据本发明的一些具体实施方式，所述浸泡步骤中，浸泡时间为0.5～1.5 h。
根据本发明的一些实施方式，所述银耳石斛提取物的制备方法还包括过滤步骤。
根据本发明，所述过滤采用100～200目滤布过滤提取物，得银耳石斛提取物。
上述方法制备得到的银耳石斛提取物。
根据本发明，所述银耳石斛提取物具有良好的肤感及稳定性，可在化妆品中得到广泛的应用。
根据本发明，所述银耳石斛提取物的分子量分布范围为400Da～580万 Da。
根据本发明一些具体实施方式，所述银耳石斛提取物多糖得率为1.20mg/mL～4.24 mg/mL。
根据本发明，所述银耳石斛提取物具有改善化妆品肤感的效果，添加进化妆品中减少了辅料成分添加量，可大大减少因化学辅料，如增稠剂等的添加引起皮肤敏感反应概率，提高化妆品的安全性。
根据本发明，所述银耳石斛提取物在化妆品中的用量可高达90%，突破了银耳、石斛在化妆品中的添加量的局限。
本发明另一方面提供了本发明所述的制备方法制备得到的银耳石斛提取物在化妆品中的应用。
根据本发明，所述化妆品可以是护肤水、精华液、面膜、膏霜、啫喱等剂型，不受限制。
根据本发明，所述化妆品具有良好的抗氧化性能，良好的肤感及使用感。
本发明有益效果：
通过本发明制备方法得到的银耳石斛提取物多糖得率高、稳定性好，可以明显提升肤感，同时，具有一定的抗氧化活性，可以直接作为基质广泛的应用于化妆品领域中。在提升护肤功效及肤感的同时，突破银耳提取物、石斛提取物在护肤品中添加量的局限。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1 是石斛多糖分子量分布情况图；
图2是银耳多糖分子量分布情况图；
图3是银耳石斛多糖分子量分布图；
图4是银耳和两种制备工艺的银耳石斛提取物肤感对比图；
图5是不同添加比例的银耳石斛提取物的肤感雷达图；
图6 是石斛高温高压稳定性观察结果（A）和传统水提法石斛稳定性观察结果（B）；
图7是7种不同条件下银耳石斛提取物的30天稳定性观察结果；
图8 是不同添加量的银耳石斛提取物对ABTS自由基清除实验结果图；
图9 是银耳石斛精华液整体功效评价图；
图10 是不同银耳石斛提取物添加量和银耳添加量对肤感的影响。
具体实施方式
下面结合具体实例对本发明进行进一步阐述，但本发明并不局限于此。
下面实施例所述的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述的实验材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
表1 原料及来源
| 原料名称 | 供应商/生产商 | 产地 |
| 铁皮石斛 | 普洱达润铁石斛种植有限公司 | 云南 |
| 银耳 | 康旺食品有限公司 | 福建 |
| 对羟基苯乙酮 | 德之馨 (上海) 有限公司 | 德国 |
| 已二醇 | 德之馨 (上海) 有限公司 | 德国 |
实施例1
银耳石斛提取物的制备步骤如下：
（1）称取银耳20 g，石斛20 g（银耳：石斛=1：1）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 2000 mL水，即料液比1：50，将混合物于70 KPa，115℃的条件下提取3 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳石斛提取物。
实施例2
（1）称取银耳20 g，石斛10 g（银耳：石斛=2：1）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 2100 mL水，即料液比1：70，将混合物于70 KPa，115℃的条件下提取3 h；
（4）过滤：用200目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳石斛提取物。
实施例3
（1）称取银耳20 g，石斛5 g（银耳：石斛=4：1）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡0.5h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 720 mL水，即料液比1：30，将混合物于70 KPa，115℃的条件下提取3 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳石斛提取物。
实施例4
（1）称取银耳20 g，石斛4 g（银耳：石斛=5：1）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡1.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 1250 mL水，即料液比1：50，将混合物于130 KPa，125℃的条件下提取4 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳石斛提取物。
实施例5
（1）称取银耳20 g，石斛20 g（银耳：石斛=1：1）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡1.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 2000 mL水，即料液比1：50，将混合物于50 KPa，110℃的条件下提取1 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳石斛提取物。
实施例6
（1）称取银耳20 g，石斛20 g（银耳：石斛=1：1）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 2000 mL水，即料液比1：50，将混合物于40 KPa，105℃的条件下提取3 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳石斛提取物。
对比例1
（1）称取银耳5 g，石斛20 g（银耳：石斛=1：4）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 1250 mL水，即料液比1：50，将混合物于70 KPa，115℃的条件下提取3 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳石斛提取物。
对比例2
（1）称取银耳20 g，石斛2.5 g（银耳：石斛=8：1）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 1125 mL水，即料液比1：50，将混合物于70 KPa，115℃的条件下提取3 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳石斛提取物。
对比例3
除不添加石斛外，其余与实施例1相同，得到银耳提取物。
（1）称取银耳20 g；
（2）将银耳在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 1000 mL水，即料液比1：50，将混合物于70 KPa，115℃的条件下提取3 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到银耳提取物。
对比例4
除不添加银耳外，其余与实施例1相同，得到石斛提取物。
（1）称取石斛20 g；
（2）将石斛在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 1000 mL水，即料液比1：50，将混合物于70 KPa，115℃的条件下提取3 h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到石斛提取物。
对比例5
传统水提法银耳石斛提取物的制备步骤如下：
（1）称取银耳20 g，石斛20 g（银耳：石斛=1：1）；
（2）将银耳石斛混合物在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 2000 mL水，即料液比1：50，将混合物于常压80℃的条件下提取3h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到传统水提法的银耳石斛提取物。
对比例6
传统水提法的石斛提取物的制备步骤如下：
（1）称取石斛20 g；
（2）将石斛在20～30℃的水中浸泡0.5 h后，进行淘洗；
（3）提取：加入 1000 mL水，即料液比1：50，将混合物于常压80℃的条件下提取3h；
（4）过滤：用100目滤布将提取液过滤一遍；得到传统水提法的石斛提取物。
实施例7
按照实施例1制备银耳石斛提取物，再按照表2银耳石斛精华液配方表添加相应成分，搅拌溶解，加入氢氧化钠调节溶液pH值至6.0~6.5，即得到银耳石斛精华液。
表2银耳石斛精华液配方表
| 序号 | 成分 | 添加量（wt%） |
| 1 | 本发明银耳石斛提取物 | 96.965 |
| 2 | 1,2-己二醇 | 2.00 |
| 3 | 对羟基苯乙酮 | 1 |
| 4 | 氢氧化钠 | 0.035 |
试验例1 多糖得率测试
测试方法：采用苯酚-硫酸法进行多糖测定（具体参照银耳中多糖的含量测定[J].黑龙江医药科学, 1999(06):32-32.）。
测试样品：实施例制备银耳石斛提取物。
测试结果：多糖含量为1.20mg/mL~4.24 mg/mL。
其中多糖含量最高的为实施例1制备银耳石斛提取物，其多糖含量为4.24mg/mL。
试验例2 银耳石斛提取物多糖分子量测定
分子量分布测定：检测方法采用高效凝胶渗透色谱法（具体参照基于高效凝胶渗透色谱法的银耳多糖质量控制研究，[J]中草药，2011，42（09）：1732~1735.）。
测定实施例1中制备的银耳石斛多糖、对比例4石斛多糖和对比例3银耳多糖分子量分布如图1、图2和图3所示。
由图1、图2和图3可以看出，石斛多糖分子量较小，主要分布在300 Da到26万 Da。而银耳多糖分子量较大，主要集中在590万 Da左右。本发明通过将石斛、银耳复配并结合高温高压技术实现了石斛银耳多糖分子量分布情况的改变。本发明中实施例1所制备的银耳石斛多糖分子量的分布情况相较于单独的石斛提取物和银耳提取物发生较大变化，分子量分布范围从400 Da到580万 Da都有，实现了大中小分子多糖的搭配组合。也正是不同分子的组合搭配使得其肤感、功效等都有了进一步的提高。
上述实验说明，本发明制备工艺条件下，对银耳石斛提取物的分子量分布有所改善。
试验例3 银耳石斛提取物肤感
肤感测试： 招募30名女性，年龄18-40岁，干性皮肤，在手臂画出3个区域1、2、3，分别涂抹样品1、样品2、样品3。对试用后肤感进行打分，共五项，每项分值满分5分，越满意分值越高；粘感除外，分值越低越好。
受试样品：
样品1 实施例1的方法制备银耳石斛提取物；
样品2 对比例3银耳高温高压提取物；
样品3 对比例5传统水提法的银耳石斛提取物。
图4为受试样品肤感对比图，从五个维度来看，样品2银耳高温高压提取物过于浓稠，粘感明显，感觉粘腻，肤感较差，具有较强的成膜感。与样品2和样品3相比，本发明制备方法得到的银耳石斛提取物可以明显改善银耳的粘感，使肤感得到很大程度的提升，且滋润感、吸收速度和上手滑感也得到不同程度的提升。
图5为不同银耳石斛配比下（实施例1、对比例1、对比例2制备样品）的肤感雷达图，不同的添加比例，肤感有所差别。相对于对比例，本发明实施例制备银耳石斛提取物在吸收速度、上手滑感及滋润度、粘感方面具有明显的优势。
本发明配比下的银耳石斛对所得提取物的肤感改善明显。
试验例4 银耳石斛提取物稳定性测试
稳定性测试：将样品1、样品2和样品3装入80 g透明样品瓶中，日常条件下储存，每天观察样品摇晃前后是否有沉淀产生。同时，将样品1即高温高压银耳石斛提取物，在灌装6瓶分别放置暗、热、冷藏、冷冻、光照、冷热交替6种环境下，每天观察样品摇晃前后是否有沉淀产生。
石斛提取物在化妆品原料端稳定性较差，容易出现沉淀现象。本发明研究证明银耳石斛的组合，可增强石斛的稳定性。
受试样品：
样品1 实施例1的方法制备银耳石斛提取物；
样品2 对比例4石斛高温高压提取物；
样品3 对比例6传统水提法的石斛提取物。
如表3所示，为在常温条件下稳定性观察的结果。由表3可知，传统水提法及高温高压法制备得到的石斛提取物均在日常条件下放置第三天观察到絮状沉淀物。而本发明银耳石斛提取物没有产生沉淀，并且在15天和30天后观察银耳石斛提取物，依旧没有产生沉淀，说明石斛稳定性得到显著提升。此外，发明人观察了本发明银耳石斛提取物在不同条件下的30天稳定性，均未发现有沉淀产生。
高温高压法制备得到的石斛提取物稳定性观察结果见图6（A），石斛水提物稳定性观察结果见图6（B）；本发明实施例1制备银耳石斛提取物稳定性观察结果见图7。
表3稳定性观察表
试验例5 银耳石斛提取物清除自由基实验
清除自由基实验方法如下：制备为7 mmol·L-1 ABTS储备液和140 mmol·L-1过硫酸钾储备液。将一定量的7 mmol·L-1 ABTS和140 mmol·L-1过硫酸钾混合，在室温下避光静置一段时间后，形成ABTS自由基储备液。取一定量的ABTS自由基储备液，用50%乙醇稀释，使最终测试阴性对照吸光值为0.70 ± 0.02。
将实施例1所制备的银耳石斛提取物稀释成不同浓度梯度，将测试液、ABTS自由基储备液依次加入，涡旋混匀，置于酶标仪避光孵育一定时间，用酶标仪在波长734 nm处测定其吸光值，计算ABTS自由基清除率。从图8可以看出，银耳石斛提取液具有很高的自由基清除率。
试验例6 含银耳石斛提取物的精华液的功效
（1）精华液的人群试用测试
参照实施例7制备银耳石斛精华液，对其进行人群试用和功效测试，试用人群选择30名25-45岁的女性志愿者，早晚洁面后涂抹精华液，连续使用2周，同时填写试用感受问卷对产品打分，满分5分，分值越高代表越满意；粘感除外，粘感分值越低越好。整体功效评价如图10所示。
由图9可知，本发明制备工艺制备得到的银耳石斛提取物制备所得精华液在整体感受、粘感、吸收速度、滑感以及补水保湿功效等方面均具有良好的效果。
（2）精华液肤感调整测试
银耳多糖分子量很大，通常银耳提取物过于浓稠，在化妆品中添加量不能过高，否则会引起肤感粘腻，吸收不好的问题。而本发明银耳石斛提取物的稠度降低，具有良好的肤感，添加量可以高达90%，高的添加量也意味着更优的功效，这样可以减少其他类的化妆品添加剂成分过多添加，如保湿的多元醇，增稠剂以及调整肤感的成分等。
如图10所示，为不同比例的银耳石斛提取物（实施例1）和银耳提取物（对比例3）添加量的精华液肤感效果对比图。所述精华液具体制备方法参考实施例7，缺失的比例，用去离子水补齐。银耳精华液肤感非常粘腻，难吸收，保湿效果大打折扣，想要改善这种肤感，就需要加入其它化妆品成分调整肤感，或者减少银耳提取物添加量，这样又会造成功效降低。而本发明制备银耳石斛精华在银耳石斛提取物添加量高达90%时，还保证了良好的肤感。
Claims (9)
1.一种银耳石斛提取物的制备方法，包括下述步骤：将一定重量份比的银耳、石斛加水浸泡后，进行淘洗，用水提取，得到银耳石斛提取物；
所述的提取步骤中，提取压力为40～130KPa；提取温度为105～125℃；
其中，所述的银耳、石斛的重量比为银耳:石斛＝1:1～5:1；
其中，所述提取步骤中，提取时间为1～4h。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取步骤中，提取压力为40～75KPa；提取温度为105～115℃。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述的提取步骤中，提取压力为70KPa；提取温度为115℃；提取时间为3h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取步骤中，银耳石斛与水的料液比为1:30～1:70。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的浸泡步骤中，浸泡温度为20～30℃，浸泡时间为0.5～1.5h。
6.权利要求1～5任一项方法制备得到的银耳石斛提取物。
7.根据权利要求6所述的银耳石斛提取物，其特征在于，所述银耳石斛提取物的分子量分布为400Da～580万Da。
8.根据权利要求7所述的银耳石斛提取物，其特征在于，所述银耳石斛提取物的多糖得率为1.20mg/mL～4.24mg/mL。
9.权利要求1-5任意一项所述制备方法得到的银耳石斛提取物或权利要求7-8任意一项所述银耳石斛提取物在制备护肤品中的应用。
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