CN114224819B - 一种葛仙米匀浆提取液及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种葛仙米匀浆提取液，以葛仙米鲜品为原料，采用酶和煮沸共同提取葛仙米鲜品有效物质。本发明还公开了葛仙米匀浆提取液的制备方法，通过优化胶体磨打浆次数，料液比，酶解温度，时间和煮沸时间等建立一个最佳提取工艺。本发明还公开了一种肤用产品，包含所述的葛仙米匀浆提取液。本发明还公开所述葛仙米匀浆提取液应用于皮肤护理化妆品的用途，发挥其抗糖化、抗氧化、保湿等功效，具有广泛应用前景。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种葛仙米匀浆提取液及其制备方法和应用。
背景技术
葛仙米学名拟球状念珠藻(Nostoc sphaeroides)，又称天仙米、天仙菜，是一种可以食用的固氮蓝藻。淡水水生藻类植物，生长速度快。锁水能力强，锁水重量可达藻体重量的98～99％。
葛仙米藻体呈球形，有许多单细胞聚集而成，富含氨基酸、蛋白质、维生素C、维生素B1和B2、多种矿物质,具有可观的药用价值和保健功能。开展葛仙米的研究与开发，探索提高葛仙米提取物产量和质量的新方法，能为我国化妆品加工领域广泛地应用优质葛仙米提供重要的理论依据。
目前葛仙米提取物的生产工艺是取葛仙米粉末直接煮沸数小时，提取数次过滤收集滤液,滤液经减压浓缩,浓缩并醇沉,离心得到沉淀物,沉淀物经烘干成葛仙米提取物。该工艺提取能耗高，步骤复杂，反复提取，提取率低，本发明提供一种有效低能提取工艺，采用中性蛋白酶酶解不仅降低能耗，还能减少时间，将部分蛋白质酶解成多肽，增加稳定性，将其添加到化妆品中,能起到给皮肤抗氧化、抗糖化和保湿的功效。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述问题，提供一种葛仙米匀浆提取液及其提取方法。
本发明提出一种葛仙米匀浆提取液的提取方法，以葛仙米鲜品为原料，经杀青、研磨、酶解、离心过滤，并在离心过滤之前后分别调节pH值，从而得到所述葛仙米匀浆提取液。
在一个具体实施方案中，本发明所述葛仙米匀浆提取液的提取方法，包括如下步骤：
S1.杀青，称量1重量葛仙米鲜品，加6份～12份去离子水，煮沸10min；
S2.研磨，冷却后胶体磨研磨循环3～10次，调节pH＝6～7；
S3.酶解，在10～60℃条件下，加体积分数为0.03％～3％的酶，酶解1～2h后，煮沸1～2h，得到葛仙米酶解混合液；
S4.离心过滤，加酸调节pH＝2～4，离心保留上层的葛仙米提取液；再通过加压过滤得到澄清的葛仙米提取液；
S5.调节pH＝5～7，浓缩至原体积30％～40％；通过加压过滤得到葛仙米匀浆提取液。
优选地，步骤S1采用葛仙米鲜品提取。
步骤S3中，所述酶选自果胶酶，α-淀粉酶，中性蛋白酶，木瓜蛋白酶等中的一种或多种；优选地，为果胶酶和中性蛋白酶；进一步优选地，为中性蛋白酶。
优选地，步骤S3中酶的质量分数为0.03％～0.1％。
进一步优选地，步骤S3中酶的质量分数为0.06％。
优选地，步骤S3中酶解温度为50℃。
优选地，步骤S3中酶解时间为1h。
优选地，步骤S3中酶解结束后，升温至100℃后保持1h。
步骤S4中，所述酸选自柠檬酸或盐酸；优选地，为柠檬酸。
优选地，步骤S4离心前用酸调节pH＝3.0。
步骤S5中，所述碱选自碳酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠等中的一种或多种；优选地，为碳酸钠。
优选地，步骤S5浓缩前用碱调节pH＝6.0。
本发明还提供了按前述方法制备得到的葛仙米匀浆提取液，其具有抗糖化、抗氧化、保湿等作用。
所述抗糖化包括但不限于抑制高级糖化终末产物(AGEs)生成等。
所述抗氧化包括但不限于抑制ABTS自由基的生成和积累以及清除ABTS自由基等。
本发明还提供了一种肤用产品，其特征在于，其包括如上所述的葛仙米匀浆提取液。
所述肤用产品包括膏霜、乳液、化妆水、精华素、凝胶、面膜、洗面奶。
本发明还提供了葛仙米匀浆提取液在化妆品中的应用，所述应用包括将葛仙米匀浆提取液作为抗糖化、抗氧化、保湿原料在皮肤护理化妆品中应用。
其中，所述抗糖化指所述葛仙米匀浆提取液抑制高级糖化终末产物(AGEs)生成。所述抗糖化指葛仙米匀浆提取液抑制ABTS自由基的生成和积累，及清除ABTS自由基。
优选地，所述皮肤护理化妆品包括但不限于膏霜、乳液、化妆水、精华素、凝胶、面膜、洗面奶等。
本发明提供的葛仙米匀浆提取液制备方法，步骤简便，以使用葛仙米鲜品为原料，采用中性蛋白酶和煮沸共同提取葛仙米鲜品有效物质，通过优化胶体磨打浆次数，料液比，酶解温度，时间和煮沸时间等建立优化的提取工艺。本发明制备所得产物具有很好的抗糖化、抗氧化和保湿功效，尤其是抗糖化功效。至目前尚未见有关于葛仙米匀浆提取液及其功效的文献报道。本发明首次创新提出将葛仙米匀浆提取液作为功效性植物添加剂(非动物来源添加剂)添加到化妆品中，包括但不限于皮肤护理化妆品中的应用，包括但不限于在具有抗糖化、抗氧化和保湿功效的化妆品中的应用，具有广泛应用前景。
附图说明
图1是本发明提取的葛仙米匀浆提取液。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
实施例1葛仙米匀浆提取液的制备
一种葛仙米匀浆提取液的提取方法，包括如下步骤：
S1.杀青，称量1重量葛仙米鲜品，加8份去离子水，煮沸10min；
S2.研磨，冷却后胶体磨研磨循环3次，调节pH＝7.0；
S3.酶解，在50℃条件下，加体积分数为0.03％的中性蛋白酶，酶解2h后，煮沸1.5h，得到葛仙米酶解混合液；
S4.离心过滤，加柠檬酸调节pH＝3，离心10000r/min 10min保留上层的葛仙米提取液；再通过加压过滤得到澄清的葛仙米提取液；
S5.调节pH＝6，浓缩至原体积35％；通过加压过滤得到液体产品。
实施例2葛仙米匀浆提取液的制备
一种葛仙米匀浆提取液的提取方法，包括如下步骤：
S1.杀青，称量1重量葛仙米鲜品，加8份去离子水，煮沸10min；
S2.研磨，冷却后胶体磨研磨循环10次，调节pH＝6.8；
S3.酶解，在50℃条件下，加体积分数为0.06％的中性蛋白酶，酶解1h后，煮沸1.5h，得到葛仙米酶解混合液；
S4.离心过滤，加柠檬酸调节pH＝3，离心10000r/min 10min保留上层的葛仙米提取液；再通过加压过滤得到澄清的葛仙米提取液；
S5.调节pH＝6.2，浓缩至原体积35％；通过加压过滤得到液体产品。
实施例3葛仙米匀浆提取液的制备
一种葛仙米匀浆提取液的提取方法，包括如下步骤：
S1.杀青，称量1重量葛仙米鲜品，加8份去离子水，煮沸10min；
S2.研磨，冷却后胶体磨研磨循环6次，调节pH＝6.8；
S3.酶解，在50℃条件下，加体积分数为0.06％的中性蛋白酶，酶解1h后，煮沸2h，得到葛仙米酶解混合液；
S4.离心过滤，加柠檬酸调节pH＝3，离心8000r/min 40min保留上层的葛仙米提取液；再通过加压过滤得到澄清的葛仙米提取液；
S5.调节pH＝6，浓缩至原体积35％；通过加压过滤得到液体产品。
实施例4葛仙米匀浆提取液的制备
一种葛仙米匀浆提取液的提取方法，包括如下步骤：
S1.杀青，称量1重量葛仙米鲜品，加8份去离子水，煮沸10min；
S2.研磨，冷却后胶体磨研磨循环6次，调节pH＝7.2；
S3.酶解，在50℃条件下，加体积分数为0.06％的中性蛋白酶，酶解1h后，煮沸1.5h，得到葛仙米酶解混合液；
S4.离心过滤，加柠檬酸调节pH＝3，离心10000r/min 30min保留上层的葛仙米提取液；再通过加压过滤得到澄清的葛仙米提取液；
S5.调节pH＝6.1，浓缩至原体积40％；通过加压过滤得到液体产品。
实施例5葛仙米匀浆提取液的制备
一种葛仙米匀浆提取液的提取方法，包括如下步骤：
S1.杀青，称量1重量葛仙米鲜品，加8份去离子水，煮沸10min；
S2.研磨，冷却后胶体磨研磨循环6次，调节pH＝7.0；
S3.酶解，在50℃条件下，加体积分数为0.03％的中性蛋白酶，酶解1h后，煮沸2h，得到葛仙米酶解混合液；
S4.离心过滤，加柠檬酸调节pH＝3，离心10000r/min 30min保留上层的葛仙米提取液；再通过加压过滤得到澄清的葛仙米提取液；
S5.调节pH＝6.2，浓缩至原体积35％；通过加压过滤得到液体产品。
实施例6本发明提供的葛仙米匀浆提取液的功效评价
将本发明实施例1-5制备的葛仙米匀浆提取液分别进行ABTS自由基清除率、高级糖化终末产物(AGEs)抑制率实验测试。
1葛仙米匀浆提取液对ABTS自由基抑制效果评价
溶液配制：磷酸盐缓冲液(PBS)的配制：磷酸二氢钠和磷酸氢二钠分别配成浓度为0.2mol/L的溶液，以体积比约51：49混合均匀，用pH计测定调节至pH＝7.4左右备用；ABTS溶液的配制：精确称取ABTS粉末，用PBS配成7.4mmol/L的ABTS溶液；硫酸钾溶液的配制：精确称取过硫酸钾粉末，用PBS配成2.6mmol/L的过硫酸钾溶液；ABTS工作液的配制：将ABTS溶液和过硫酸钾溶液按照1：1避光混匀，4℃下静置12h，用PBS溶液稀释成OD734＝0.7。
实验步骤：按表1添加试剂，混合均匀，置37℃水浴环境中恒温反应10min后，各迅速加入1mL多巴溶液，混合均匀，再室温避光反应6min，迅速移入酶标板中，于第7min时在734nm处测定吸光度AC1、AC2、AT1、AT2。按上述方法，加入表1所示的各溶液，在475nm处测定吸光度AC1、AC2、AT1、AT2。
表1ABTS自由基抑制实验试剂添加量单位：mL
| 反应组 | V(PBS)/mL | V(葛仙米匀浆提取液)/mL | V(ABTS工作液)/mL |
| C1 | 0.5 | 0 | 2.0 |
| C2 | 2.5 | 0 | 0 |
| T1 | 0 | 0.5 | 2.0 |
| T2 | 2.0 | 0.5 | 0 |
ABTS自由基清除率计算公式为：清除率％＝{1-(AT1-AT2)/(AC1-AC2)}×100％(结果见表3)
注：本发明中测ABTS的清除率所用葛仙米匀浆提取液都是原液的3倍稀释液，因本发明所有不稀释的葛仙米匀浆提取液的清除率都是90％以上，因清除率太高不能区分不同条件匀浆液ABTS清除功效的区别，因此本发明选择实施例中测ABTS的清除率的葛仙米匀浆提取液都是原液的3倍稀释液。
2葛仙米匀浆提取液对高级糖化终末产物(AGEs)抑制效果评价
溶液的配制：PBS缓冲液的配制：0.1mol/L含8mmol/L的EDTA，100U/mL青霉素和100U/mL链霉素的PBS缓冲液调节pH＝7.4，0.22μm滤膜过滤除菌；牛血清白蛋白溶液的配制：精确称量牛血清白蛋白，用上述PBS缓冲液溶解配制成20g/L的牛血清白蛋白溶液，0.22μm滤膜过滤除菌；葡萄糖溶液的配制：精确称量葡萄糖粉末，用上述PBS缓冲液配制成400mmol/L的葡萄糖溶液，0.22μm滤膜过滤除菌。
实验步骤：按照按表2添加试剂，混合均匀，置37℃环境中恒温避光反应40d后，荧光分光光度计在激发波长370nm，发射波长440nm，测反应液。
注：所有测AGEs抑制率的功效的葛仙米匀浆液都未稀释。
表2高级糖化终末产物(AGEs)抑制实验试剂添加量单位：mL
AGEs的抑制率计算公式为：抑制率％＝[1-(AT3-AT2-AT1)/(AC1-AC2)]×100％(结果见表2)表3葛仙米匀浆提取液性能测试结果
| 功效项目 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 |
| ABTS清除率％ | 74.06 | 85.02 | 66.48 | 65.39％ | 57.23％ |
| AGEs抑制率％ | 47.33 | 52.33 | 42.23 | 40.05％ | 38.62％ |
表3中ABTS清除率测定的各实施例均为葛仙米匀浆提取液的3倍稀释液，表中AGEs抑制率测定的各实施例均为葛仙米匀浆提取液的原液，未稀释。
由上表3可以看出，本发明实施例1-5提取的葛仙米匀浆提取液的AGEs抑制率明显高于传统葛仙米多糖性能，其中本发明实施例2的ABTS清除率和AGEs抑制率效果最佳。
另外，本发明所有不稀释的葛仙米匀浆提取液的清除率都是90％以上，明显比传统葛仙米多糖性能10mg/mL的ABTS清除率如50.3％，87.1％，71.2％要高，因此，本发明葛仙米匀浆提取液在化妆品中的应用功效将更为显著。
实施例7安全性评价
7.1检测项目
7.11多次皮肤刺激性试验
7.12检测依据
《化妆品安全技术规范》(2015)，中华人民共和国食品药品监督管理总局
7.13实验动物
普通级新西兰白兔4只，体重2.0～3.0kg，由上海科硕实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK(沪)2019-0033，环境温度18～23℃；相对湿度45～65％。
7.14实验步骤
试验前24h，去除实验动物背部脊柱两侧部位毛，避免损伤皮肤，去毛范围约3cm×10cm；
取样品(本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液)0.5ml涂抹于一侧的测试部位皮肤，每天涂抹一次，连续14天。每天涂抹前用温水清除残留受试物，1h后观察结果。
7.15实验结果
表4家兔皮肤刺激反应积分
由表2可知，样品(本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液)对皮肤的累积性刺激为0。
表5兔刺激反应类型
7.16结论
按兔刺激反应类型，该样品(本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液)对家兔皮肤的刺激强度属无刺激性。
7.2检测项目
7.21急性眼刺激性试验
7.22检测依据
《化妆品安全技术规范》(2015)，中华人民共和国食品药品监督管理总局
7.23实验动物
普通级新西兰雌性白兔4只，体重2.0～3.0kg，由上海科硕实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK(沪)2017-0013，动物饲料由湖州东方希望动物营养食品公司提供，批准文号：浙饲证(2019)05022。
7.24试验环境
普通级兔房合格证号：SYXK(沪)2019～0033，环境温度18～23℃；相对湿度45～65％。
7.25试验步骤
取0.1mL样品(本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液)涂入一侧眼睛结膜囊中，将眼被动闭合1s。另一侧眼睛不处理作自身对照。
滴眼后1、24、48和72h，观察记录眼角膜、虹膜和结膜的症状。
7.26实验结果
表6兔眼睛临床观察症状评分
动物的结膜积分均值为0/0，角膜和虹膜的积分均值为0和0。
7.27结论
按眼刺激反应分级，该样品(本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液)无刺激性物质。
7.3检测项目
7.31皮肤变态反应试验
7.32检测依据
《化妆品安全技术规范》(2015)，中华人民共和国食品药品监督管理总局
7.33实验动物
白色豚鼠，雌性，体重300-500g，由上海科硕实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK(沪)2017-0013。动物饲料由江苏省协同医药生物工程有限公司提供，批准文号：苏饲证(2019)01008。
7.34检测环境
普通级动物房，合格证号：SYXK(沪)2019～0033，环境温度20～22℃；相对湿度45～65％。
7.35试验步骤
准备阶段：试验前将豚鼠背部试验部位皮肤的被毛剃除。
诱导阶段：将0.2mL受试物(本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液)涂布于豚鼠背部的被毛部位，封闭性包扎6小时后除去包扎带。间隔1周重复操作3周。对照组给予生理盐水并采用相同的处理方式。
激发阶段：最后一次诱导贴敷14天后，将0.2mL受试物(本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液)涂布于受试动物右侧去毛的末测试部位进行激发，6小时后除去包扎带和敷料。
动物观察：观察动物激发后24h和48h的皮肤反映情况，利用表5Magnusson-Kligman评分法对皮肤红斑和红肿情况进行评分。
表7皮肤反应评分分级
7.36试验结果
表8葛仙米(NOSTOC SPHAEROIDES)提取物皮肤致敏试验结果
7.37结论
在本试验条件下，受试物(本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液)未引起豚鼠皮肤致敏反应。
实施例8保湿性测试
葛仙米凝胶的制备
U20增稠剂1.5％浓度；10％NaOH溶液的浓度为9％；本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液的质量浓度分别为5％、10％、20％、40％；试液用水补足，制备成葛仙米凝胶。
将U20增稠剂加热溶解在去离子水中搅匀，边搅拌边加入9％NaOH溶液，调pH至6-7左右，添加一定质量浓度的本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液，继续搅拌直至所形成的凝胶冷却至室温(15-30℃)，最后每个浓度得到100g样品。
实验步骤
通过24h人体保湿试验评价含有不同本发明葛仙米匀浆提取液添加量的葛仙米凝胶和不添加葛仙米匀浆提取液(空白)及市售保湿产品的保湿功效及对干燥引起的粗糙和起屑的抚平作用；并通过专家小组进行肤感评价。
志愿者人数：30名，每组5人，女性
年龄：25～35岁
测试区域：前臂屈测
测试周期：24h
测试仪器
皮肤水分含量测试仪(Corneometer CM825)
皮肤水分含量测试仪Corneometer(CM825,Courage andKhazaka,德国)是基于电容的原理进行测量的。水的介电常数是81，其他物质的介电常数通常小于7，水是皮肤上介电常数最大的物质。当水分含量发生变化时，皮肤的电容值亦发生变化，故可通过测定皮肤电容值分析皮肤表面的含水量。皮肤水分含量值越大，说明皮肤含水量越高。
计算公式
初始值：指未使用任何产品时的基础值。
均值：个体参数测量值＝所有个体参数测量值总和/有效数据数量。
与初始值的差值＝使用后测量值-使用前测量值
相对于初始值的均值变化率＝(使用后测量值均值-使用前测量值均值)/使用前测量值均值*100％。
测试结果：
样品使用前，使用后1h，4h，8h和24h，皮肤水分含量测试结果见表2皮肤水分含量值越大，皮肤含水量越多。
表9皮肤水分含量测试结果
结论：通过以上实验可以看出，对比空白凝胶的保湿效果，添加了本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液的凝胶产品对皮肤保湿有一定的作用。随着本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液浓度的增加，保湿的效果越明显。当本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液浓度40％时，保湿效果达到高点，保湿24h后变化率达24.9％，与市售保湿产品24h后变化率达24.8％相当，具有较强保湿性。
皮肤感官评价
由评价人员对样品试用后的肌肤进行皮肤感官评价，分值为0-5分，测试结果见表3，分值越高，该项感觉越明显。
表10样品试用后的皮肤感官评价
结论：由表3可见，当本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液添加量越高，其保湿效果增强的同时，皮肤弹性、吸收度较明显，涂抹在肌肤上，可使肌肤莹润丝滑，缩水保湿，有弹性。
实施例9本发明护肤乳液的制备
表11护肤乳液原料及配比
制备方法：
(1)按上述的组分及用量称取各原料；
(2)将A相(油相)和B相(水相)分别加热至80℃搅拌使原料溶解完全；
(3)将A相加入乳化锅中搅拌，搅拌速率为100转/分钟，边搅拌边将B相(除八珍提取液外)加入乳化锅中，充分乳化，均质2min，搅拌保温30分钟后降温，待60℃时加入葛仙米匀浆提取液，搅拌均匀后继续降温至于60℃时加入C相，搅拌均匀后，冷却即可出料。
实施例10本发明活肤水的制备
表12活肤水原料及配比
制备方法：
(1)按上述的组分及用量称取各原料；
(2)将A相各成分分散均匀后，依次加入B相各成分，并搅拌均匀；
(3)将C相各成分搅拌混合均匀后，加入A相中，搅拌均匀即可。
实施例11本发明保湿凝露的制备
表13保湿凝露的原料及配比
制备方法：
(1)按上述的组分及用量称取各原料；
(2)将B相加热溶解分散均匀后，依次加入A相各成分，并搅拌均匀；
(3)将C相各成分搅拌混合均匀后，加入C相中，搅拌均匀即可。
实验步骤
通过24h人体保湿试验评价含有不同本发明葛仙米匀浆提取液添加量的葛仙米凝胶和不添加葛仙米匀浆提取液(空白)及市售保湿产品的保湿功效及对干燥引起的粗糙和起屑的抚平作用；并通过专家小组进行肤感评价。
志愿者人数：30名，每组5人，女性
年龄：25～35岁
测试区域：前臂屈测
测试周期：24h
测试结果：
样品使用前，使用后1h，4h，8h和24h，皮肤水分含量测试结果见下表。
表14皮肤水分含量测试结果
结论：通过以上实验可以看出，对比空白护肤乳液、空白活肤水和空白凝露的保湿效果，添加了本发明葛仙米匀浆提取液的产品对皮肤保湿有一定的作用。
皮肤感官评价
由评价人员对样品试用后的肌肤进行皮肤感官评价，分值为0-5分，测试结果见表3，分值越高，该项感觉越明显。
表15样品试用后的皮肤感官评价
结论：由表15可见，当本发明实施例2提取的葛仙米匀浆提取液加入到护肤乳液、活肤水和保湿凝露中，其保湿效果增强的同时，皮肤弹性、吸收度较明显，涂抹在肌肤上，可使肌肤莹润丝滑，缩水保湿，有弹性。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。
Claims (10)
1.一种葛仙米匀浆提取液的制备方法，其特征在于，以葛仙米鲜品为原料，经杀青、研磨、酶解、离心过滤，并在离心过滤之前后分别调节pH值，得到所述葛仙米匀浆提取液；所述方法包括以下步骤：
S1：杀青，称量1重量份葛仙米鲜品，加6份～12份去离子水，煮沸10min；
S2：研磨，冷却后胶体磨研磨循环3～10次，调节pH＝6～7；
S3：酶解，在10-60℃条件下，加质量分数为0.03％～0.1％的中性蛋白酶或木瓜蛋白酶，酶解1～2h后，煮沸1～2h，得到葛仙米酶解混合液；
S4：离心过滤，加酸调节pH＝2～4，离心保留上层的葛仙米提取液；再通过加压过滤得到澄清的葛仙米提取液；
S5：调节pH＝5～7，浓缩至原体积30％～40％；通过加压过滤得到葛仙米匀浆提取液。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中，所述酶解时间为1h；和/或，所述酶解结束后，升温至100℃后保持1h。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4中，所述酸选自柠檬酸或盐酸；和/或，步骤S4中离心前用酸调节pH＝3.0。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S5中浓缩前用碱调节pH＝6.0。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述碱选自碳酸钠、氢氧化钠、碳酸氢钠中的一种或多种。
6.一种如权利要求1-5任一项所述方法制备得到的葛仙米匀浆提取液。
7.一种肤用产品，其特征在于，其包括如权利要求6所述的葛仙米匀浆提取液。
8.如权利要求7所述的肤用产品，其特征在于，所述肤用产品包括膏霜、乳液、化妆水、精华素、凝胶、面膜或洗面奶。
9.如权利要求6所述的葛仙米匀浆提取液在制备皮肤护理类化妆品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述皮肤护理类化妆品包括抗糖化、抗氧化、保湿的产品，包括膏霜、乳液、化妆水、精华素、凝胶、面膜或洗面奶。
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