CN114606141A - 一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养基组合物、液体发酵方法及蛋白制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养基组合物、液体发酵方法及蛋白制备方法，属于生物技术领域。第一方面，本发明提供一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养基组合物，猴头菇菌培养基组合物包括党参药渣、黑豆粉、破壁刀豆粉、菊花花粉、石膏、硫酸镁，还包括秋水仙素；第二方面，本发明提供猴头菇菌丝体液体发酵方法；第三方面，本发明还提供一种猴头菇菌丝体蛋白制备方法。利用本发明提高蛋白含量的猴头菇菌培养基组合物进行液体发酵得到的猴头菇菌丝体产量、蛋白含量、蛋白纯度与现有技术相比，均有显著提高。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种提高蛋白 含量的猴头菇菌培养基组合物、液体发酵方法及蛋白制备方法。
背景技术
作为食用菌王国的珍品,猴头菇属于药食两用真菌,尤其是 其医药方面的药用价值，受到广大消费者的青睐，具有健脾养 胃、安神、抗癌的功效,对体虚乏力、消化不良、失眠、胃与十 二指肠溃疡、慢性胃炎、消化道肿瘤等症有特效。
猴头菇菌丝体具有生长速度快，发酵步骤简单、易于控制 等优点，从菌丝体中提取蛋白等生物活性物质可以缩短生产时 间、提高生产效率、降低成本。
鉴于此，本发明提供一种生产猴头菇菌丝体发酵培养基组 合物及其发酵方法与蛋白制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养 基组合物、液体发酵方法及蛋白制备方法。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养 基组合物，猴头菇菌培养基组合物包括党参药渣、黑豆粉、破 壁刀豆粉、菊花花粉、石膏、硫酸镁。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，党 参药渣为5～15份、黑豆粉20～30份、破壁刀豆粉为6～16 份、菊花花粉为0.3～1份、石膏为0.6～1份、硫酸镁为0.3～1 份。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，猴 头菇菌培养基组合物还包括秋水仙素。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，党 参药渣为8～12份、黑豆粉23～27份、破壁刀豆粉为9～11份、菊 花花粉为0.3～1份、石膏为0.6～1份、硫酸镁为0.3～1份和秋水 仙素为0.0006～0.0010份。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，按重量份数计，党 参药渣为10份、黑豆粉25份、破壁刀豆粉为10份、菊花花粉为 0.7份、石膏为0.8份、硫酸镁为0.7份、秋水仙素为0.0008份。
第二方面，本发明提供一种猴头菇菌丝体液体发酵方法， 其包括：
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣5～15g/L、黑豆粉 20～30g/L、破壁刀豆粉为6～16g/L、菊花花粉为0.3～1g/L、石膏 为0.6～1g/L、硫酸镁为0.3～1g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.2～6.8，121℃灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇菌母种 按常规接种后进行液体发酵，温度28～30℃，通风并搅拌，发酵时 间6～10d，将培养好的发酵液过滤或离心3500～8000rpm处理，收 集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
进一步地，猴头菇菌丝体液体发酵培养基中所述党参药渣为 8～12g/L、黑豆粉23～27g/L、破壁刀豆粉为9～11g/L、菊花花粉为 0.3～1g/L、石膏为0.6～1g/L、硫酸镁为0.3～1g/L和秋水仙素为 0.0006～0.0010g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.2～6.8，121℃灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇菌母种按常规接种后 进行液体发酵，温度29℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好的 发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇 菌丝体。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，猴头菇菌丝体液体发 酵培养基中所述党参药渣为10g/L、黑豆粉25g/L、破壁刀豆粉为 10g/L、菊花花粉为0.7g/L、石膏为0.8g/L、硫酸镁为0.7g/L和秋 水仙素为0.0008g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.2～6.8，121℃ 灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇菌母种按常规接种 后进行液体发酵，温度29℃，通风并搅拌，发酵时间8d，将培养好 的发酵液离心4000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头 菇菌丝体。
第三方面，本发明还提供猴头菇菌丝体蛋白制备方法，其包括： 常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13～1﹕23的比例混合，调 节pH值为7～9，温度35～39℃，超声提取15～25min，4000rpm离 心取上清液；上清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔 顿以下部分备用，分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积 的10～20％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
进一步地，在本发明较佳的实施例中，常规方法粉碎后，菌丝 体粉末与水以1﹕18的比例混合，温度为37℃，超声提取20min。
本发明中液体发酵所用猴头菇菌母种按常规方法制备。
与现有技术相比，本发明的有益效果包括：
猴头菇菌的菌丝体干重、蛋白量、蛋白纯度与现有技术相比， 均有显著提高。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但 是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者， 按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注 明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描 述：
实施例1
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣5g/L、黑豆粉30g/L、 破壁刀豆粉6g/L、菊花花粉为1g/L、石膏为0.8g/L、硫酸镁0.3g/L， 加蒸馏水补充到规定量，pH6.8，121℃灭菌30min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度30℃，通风 并搅拌，发酵时间6d，将培养好的发酵液离心6000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13的比例混合，调节 pH值为9，温度35℃，超声提取25min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的20％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
实施例2
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣15g/L、黑豆粉20g/L、 破壁刀豆粉为16g/L、菊花花粉为0.3g/L、石膏为0.8g/L、硫酸镁 为1g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.2，121℃灭菌15min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度28℃，通风 并搅拌，发酵时间10d，将培养好的发酵液用60kg的压力进行板框 压滤，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕23的比例混合，调节 pH值为7，温度39℃，超声提取15min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的10％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
实施例3
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为8g/L、黑豆粉 27g/L、破壁刀豆粉为9g/L、菊花花粉为1g/L、石膏为0.8g/L、硫 酸镁为0.3g/L和秋水仙素为0.0006g/L，加蒸馏水补充到规定量， pH6.8，121℃灭菌20min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度28℃，通风 并搅拌，发酵时间10d，将培养好的发酵液离心2800rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13的比例混合，调节 pH值为9，温度35℃，超声提取25min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的20％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
实施例4
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为12g/L、黑豆粉 23g/L、破壁刀豆粉为11g/L、菊花花粉为0.3g/L、石膏为0.8g/L、 硫酸镁为1g/L和秋水仙素为0.0010g/L，加蒸馏水补充到规定量， pH6.5，121℃灭菌20min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心3000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕23的比例混合，调节 pH值为7，温度39℃，超声提取15min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的10％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
实施例5
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为10g/L、黑豆粉 25g/L、破壁刀豆粉为10g/L、菊花花粉为0.7g/L、石膏为0.8g/L、 硫酸镁为0.7g/L和秋水仙素为0.0008g/L，加蒸馏水补充到规定量， pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 pH值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
对比例1
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中葡萄糖为10g/L、党参药渣为 10g/L、黑豆粉25g/L、破壁刀豆粉为10g/L、菊花花粉为0.7g/L、 石膏为0.8g/L、硫酸镁为0.7g/L和秋水仙素为0.0008g/L，加蒸馏 水补充到规定量，pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 pH值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
对比例2
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为10g/L、党参药渣为 10g/L、黑豆粉25g/L、破壁刀豆粉为10g/L、菊花花粉为0.7g/L、 石膏为0.8g/L、硫酸镁为0.7g/L和秋水仙素为0.0008g/L，加蒸馏 水补充到规定量，pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 pH值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
对比例3
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为10g/L、党参药渣为 10g/L、黑豆粉25g/L、破壁刀豆粉为10g/L、菊花花粉为0.7g/L、 石膏为0.8g/L、硫酸镁为0.7g/L和秋水仙素为0.0008g/L，加蒸馏 水补充到规定量，pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到、猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 pH值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
对比例4
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中葡萄糖为10g/L、黑豆粉25g/L、 破壁刀豆粉为10g/L、菊花花粉为0.7g/L、石膏为0.8g/L、硫酸镁 为0.7g/L和秋水仙素为0.0008g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.5， 121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 pH值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
对比例5
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中蛋白胨为10g/L、党参药渣为 10g/L、黑豆粉25g/L、菊花花粉为0.7g/L、石膏为0.8g/L、硫酸镁 为0.7g/L和秋水仙素为0.0008g/L，加蒸馏水补充到规定量，pH6.5， 121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 pH值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
对比例6
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为10g/L、黑豆粉 25g/L、刀豆粉为10g/L、菊花花粉为0.7g/L、石膏为0.8g/L、硫酸 镁为0.7g/L和秋水仙素为0.0008g/L，加蒸馏水补充到规定量， pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到、猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 pH值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
对比例7
猴头菇菌丝体液体发酵培养基中党参药渣为12g/L、黑豆粉 30g/L、破壁刀豆粉为12g/L、菊花花粉为0.84g/L、石膏为0.96g/L、 硫酸镁为0.84g/L和秋水仙素为0.00096g/L，加蒸馏水补充到规定 量，pH6.5，121℃灭菌25min后冷却。
将猴头菇菌母种按常规接种后进行液体发酵，温度29℃，通风 并搅拌，发酵时间8d，将培养好的发酵液离心4000rpm处理，收集 菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合，调节 pH值为8，温度37℃，超声提取20min，4000rpm离心取上清液；上 清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用， 分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的15％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
本发明的有益效果如下表：
| 菌丝体干重(g/L) | 菌丝体蛋白含量(mg/g) | 蛋白纯度(％) | |
| 实施例1 | 16.1 | 19.6 | 87.8 |
| 实施例2 | 15.3 | 20.8 | 88.9 |
| 实施例3 | 18.2 | 23.5 | 90.5 |
| 实施例4 | 19.5 | 23.0 | 91.8 |
| 实施例5 | 20.6 | 25.9 | 93.5 |
| 对比例1 | 11.3 | 15.5 | 80.3 |
| 对比例2 | 11.8 | 14.8 | 77.1 |
| 对比例3 | 9.7 | 15.0 | 79.5 |
| 对比例4 | 11.5 | 15.2 | 81.4 |
| 对比例5 | 11.6 | 16.9 | 77.8 |
| 对比例6 | 10.8 | 15.6 | 76.9 |
| 对比例7 | 13.6 | 16.6 | 83.1 |
从上表可以看出，本发明实施例1～5中利用本发明提高蛋白含 量的猴头菇菌培养基组合物进行液体发酵得到的猴头菇菌丝体产 量、蛋白含量、蛋白纯度与对比例1～7相比，均有显著提高。
本发明中未详细说明的环节均为本领域普通技术人员可自行选 择的公知常识。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本 发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改 进，这对本领域普通技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本 发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
Claims (10)
1.一种提高蛋白含量的猴头菇菌培养基组合物，其特征在于，所述猴头菇菌培养基组合物包括党参药渣、黑豆粉、破壁刀豆粉、菊花花粉、石膏、硫酸镁。
2.根据权利要求1所述的猴头菇菌培养基组合物，其特征在于，所述猴头菇菌培养基组合物还包括秋水仙素。
3.根据权利要求1所述的猴头菇菌培养基组合物，其特征在于，按重量份数计，所述党参药渣为5～15份、所述黑豆粉20～30份、所述破壁刀豆粉为6～16份、所述菊花花粉为0.3～1份、所述石膏为0.6～1份、所述硫酸镁为0.3～1份。
4.根据权利要求2所述的猴头菇菌培养基组合物，其特征在于，按重量份数计，所述党参药渣为8～12份、所述黑豆粉23～27份、所述破壁刀豆粉为9～11份、所述菊花花粉为0.3～1份、所述石膏0.6～1份、所述硫酸镁为0.3～1份和所述秋水仙素为0.0006～0.0010份。
5.根据权利要求2所述的猴头菇菌培养基组合物，其特征在于，按重量份数计，所述党参药渣为10份、所述黑豆粉25份、所述破壁刀豆粉为10份、所述菊花花粉为0.7份、所述石膏为0.8份、所述硫酸镁为0.7份和所述秋水仙素为0.0008份。
6.一种猴头菇菌丝体液体发酵方法，其特征在于，权利要求1～5所述的猴头菇菌培养基组合物加蒸馏水补充到规定量，pH6.2～6.8，121℃灭菌15～30min后冷却制得液体培养基，将猴头菇菌母种接种至所述的液体培养基中进行发酵，温度28～30℃，通风并搅拌，发酵时间6～10d，将培养好的发酵液过滤或离心3500～8000rpm处理，收集菌丝体，经过洗涤、干燥得到猴头菇菌丝体。
7.根据权利要求6所述的发酵方法，其特征在于，所述液体发酵温度为24℃，所述发酵时间为8d，所述发酵液离心速度为4000rpm。
8.一种猴头菇菌丝体蛋白制备方法，其特征在于，将如权利要求6所述的猴头菇菌丝体粉碎得到菌丝体粉末；常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕13～1﹕23的比例混合，调节pH值为7～9，温度35～39℃，超声提取15～25min，4000rpm离心取上清液；上清液经分子量1000道尔顿膜过滤，分子量1000道尔顿以下部分备用，分子量1000道尔顿以上部分加水至原上清液体积的10～20％，经过S8大孔树脂层析，解析液经过冷冻干燥得蛋白。
9.根据权利要求8所述的猴头菇菌丝体蛋白制备方法，其特征在于，所述常规方法粉碎后，菌丝体粉末与水以1﹕18的比例混合。
10.根据权利要求8所述的猴头菇菌丝体蛋白制备方法，其特征在于，所述温度为37℃，所述超声提取20min。
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