CN114602967B - 一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法 - Google Patents

一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，属于土壤修复技术领域。本发明以具有PAHs高效降解能力的功能土著菌群为对象，选取玉米秸秆为固定化载体，采用吸附法，制备具有PAHs降解能力的功能土著菌群固体菌剂，对土壤中PAHs具有较高的去除率，选用玉米秸秆为固定化载体，经过长时间的腐败，还可增加土壤肥力；本发明在综合考虑去除效率和成本的基础上，对总PAHs去除率可以达到88％，其中2‑3环PAHs的去除率达到93％以上。

Description

一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的 方法
技术领域
本发明属于土壤修复技术领域，具体是一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法。
背景技术
作为一种全球性的有毒有机污染物，PAHs污染问题已引起世界各国重视。进入环境中的PAHs通过大气干湿沉降最终在土壤中积累，更为严重的是，进入土壤的PAHs 可通过食物链进入人体，进而威胁人群健康。可见如何有效治理 PAHs污染土壤，实现土壤资源化利用，具有迫切地社会需求。
在众多污染土壤修复技术中，微生物修复凭借其不会对土壤造成二次污染、处理效果较好、耗资少、保护土壤结构等特点占据独特优势，被公认为是一种环境友好的污染土壤修复方法。近年来，国内外学者已从不同环境介质中分离获得大量具有PAHs降解能力的功能微生物。在长期受有毒有机物污染的土壤中存在着一系列经自然驯化，菌群结构和功能完整、稳定且复杂的具有有毒有机物降解能力的土著微生物菌群。研究表明，土著菌群作为一种多菌体共存的生物群体，在其生长过程可以依靠各种微生物之间相互共生增殖及协同代谢作用降解环境中的有机物，并能激活其他具有净化功能的微生物，从而形成复杂而稳定的微生态系统。利用土著菌群来修复PAHs复合污染土壤，可以避免一些未可分离培养的关键菌株的丢失，使PAHs的降解更加全面有效。
PAHs污染土壤修复技术的核心是高效降解菌对PAHs的降解作用，但能否将高效降解菌的降解能力淋漓尽致的发挥出来是关键。由于微生物投加到土壤中对生存环境较为敏感，启动速度慢，并且会与土著菌产生竞争，我们可以通过投加固定化微生物菌剂解决这些问题。固定化菌剂以固定化载体作为保护剂，可以将微生物或微生物含有的特定降解酶限定于特定的空间内。固定化载体不仅可以富集高浓度生物量，还可为微生物提供碳源和营养物质，使微生物保持较高的活性，从而达到去除污染物和净化环境的目的。此外，固定化载体还能够进行回收和重复使用，大大节约了成本。目前，固定化技术在降解 PAHs过程中，大多是以固定单一菌株为主，对于混合菌群固定化后进行PAHs 的降解研究还鲜有报道
发明内容
针对上述存在的问题，本发明专利提供了一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，该方法以具有PAHs高效降解能力的功能土著菌群为对象，选取玉米秸秆为固定化载体，采用吸附法，制备具有PAHs降解能力的功能土著菌群固体菌剂。该方法对土壤中PAHs具有较高的去除率，选用玉米秸秆为固定化载体，经过长时间的腐败，还可增加土壤肥力。
本发明的技术方案是：一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，包括以下步骤：
S1、土著微生物菌群富集、驯化
S1-1、土著微生物富集
将长期受PAHs污染的土壤样品加入盛有无菌水的锥形瓶中，随后置于摇床中，在30-40℃的温度条件下，以150-160rpm的转速震荡培养6-8h，离心后，得到的上清液即为土著微生物菌液；
S1-2、土著微生物驯化
取5-6mL的土著微生物菌液转接至95-100mL培养基中，加入USEPA PAHs混标，使培养基中PAHs浓度达到设定值，在30-40℃的温度条件下，以 150-160rpm速率在摇床上震荡培养5-6d，相同条件下连续培养5代后，获得稳定的具有高效降解PAHs能力的土著功能微生物菌群；
S2、发酵罐培养
S2-1、将上述土著功能微生物菌群转接至LB培养基中活化，在30-40℃的温度条件下，以150-160rpm的转速摇床震荡培养24-30h，作为一级种子液使用，按5wt％的接种量将一级种子液转接至发酵罐中进行放大发酵，培养至对数生长期，获得液体菌剂；
S3、固体菌剂的研制
选用玉米秸秆为固定化载体，按照重量比为1:10的比例称取玉米秸秆和液体菌剂，并置于锥形瓶中混合均匀，灭菌后冷却至常温，并置于恒温振荡培养箱内，在30-40℃的条件下，以150-160rpm的转速的培养2-3d后取出，随后在离心机中以5000-6000rpm的速率离心处理5-10min后，得到上清液和下层固体，然后，用无机盐洗涤下层固体，再离心5-10min后弃上清液，重复此过程2 次，最终离心所得固体即为功能土著微生物菌群固体菌剂；
S4、土壤的采集、污染老化
从农田采集土壤样品，将采集的土壤样品风干30-40d后，磨碎并充分打散混匀，过20目筛，向制备好的土壤样品中添加含有USEPA PAHs和丙酮的混合溶液，并充分混匀，待丙酮挥发完全后，老化土壤3-4个月，保存备用，其中，USEPA PAHs占混合溶液总重量的25％，丙酮占混合溶液总重量的75％；
S5、土壤接种
向步骤S4得到的污染土壤中添加重量为2-5wt％的土著微生物菌群固体菌剂，并充分混匀后，监测污染土壤中PAHs含量的变化。
进一步地，所述步骤S3中，将玉米秸秆和液体菌剂进行混合前，先对玉米秸秆进行预处理，预处理处理方法为：
S3-1、将玉米秸秆放入粉碎机中进行粉碎，过90-100目筛，得玉米秸秆粉末，然后，将玉米秸秆粉末放入生物炭炉中，在真空条件下，以5-10℃/min的升温速率升温至400-450℃，并保温1-2h，并冷却后得到生物质炭粉末；
S3-2、按照质量比为5:10:1的比例将生物质炭粉末、甲壳素溶液以及 NaHCO3混合后，在40-50℃的温度条件下，磁力搅拌2-3h，得到混合悬浊液，其中，甲壳素溶液的浓度为0.4mol/L；
S3-3、将混合悬浊液置于蒸汽滚筒内，烘干后冷却，过筛，制成颗粒直径为2-3mm的多孔秸秆颗粒成品，通过以NaHCO3为造孔剂，将玉米秸秆制备成多孔的颗粒，增加了固定化载体与液体菌剂的接触面积，提高功能土著微生物菌群固体菌剂上附着的菌种数量，从而提高功能土著微生物菌群固体菌剂对土壤中PAHs的去除率。
进一步地，所述步骤S1-2中，将制备的土著功能微生物菌群在未培养之前，放置于冰箱中暂存备用，其中，冰箱内温度为-70～-80℃，方便长期保存。
进一步地，所述步骤S1-2中，将制备的土著功能微生物菌群在放入冰箱暂存之前，按照土著功能微生物菌群菌液：甘油溶液为5:1的比例混合搅拌3- 5min，其中，甘油溶液的浓度为3-4M，利用甘油溶液处理后，避免因土著功能微生物菌群在冰冻的过程中产生冰晶体，使细胞内部的水分在结冻的过程中减少，细胞收缩，降低细胞的成活率。
进一步地，所述步骤S3中，利用无机盐洗涤下层固体时，先将无机盐进行灭菌处理，然后按照重量比为3:1的比例将无机盐溶液与下层固体均匀混合，并在30-40℃的温度条件下，超声波清洗1-2h，然后，置于保温吊带式离心机内，离心处理5-10min后即可，其中，超声波频率为40kHz，超声能量密度为 2-3W/cm2，通过将无机盐进行灭菌处理，避免因其他菌种的引入，而影响功能土著微生物菌群对PAHs的去除效果，通过超声波清洗，提高清洗效果，避免杂质影响功能土著微生物菌群固体菌剂纯度，通过吊带式离心机进行离心处理，提高固液分离效果，可靠性高。
进一步地，所述无机盐溶液的成分为磷酸钾。
进一步地，所述USEPA PAHs包括：萘，苊烯，苊，芴，菲，蒽，荧蒽，芘，苯并[a]蒽，
Figure BDA0003531985020000041
苯并[b]荧蒽，苯并[k]荧蒽，苯并[a]芘，二苯并[a,h]蒽，苯并[ghi]苝和茚并[1,2,3-cd]芘。
相对于现有技术，本发明的有益效果是：
(1)本发明以具有PAHs高效降解能力的功能土著菌群为对象，选取玉米秸秆为固定化载体，采用吸附法，制备具有PAHs降解能力的功能土著菌群固体菌剂，对土壤中PAHs具有较高的去除率，选用玉米秸秆为固定化载体，经过长时间的腐败，还可增加土壤肥力，总体来说，具有安全有效，环境友好，处理成本低的优点，适合大量推广。
(2)本发明直接从长期受PAHs污染的土壤中富集土著微生物，在持续高浓度PAHs选择压力下进行驯化，对PAHs具有降解广谱性和高效性，且固定化后能长期保持活性。
(3)本发明在综合考虑去除效率和成本的基础上，对总PAHs去除率可以达到88％，其中2-3环PAHs的去除率达到93％以上。
附图说明
图1是本发明的玉米秸秆固定化载体的扫描电镜图；
图2是本发明的功能土著菌群固体菌剂扫描电镜图；
图3是本发明的污染土壤中总PAHs去除率折线图；
图4是本发明的功能土著菌群固体菌剂对不同环PAHs的去除率图。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步地详细介绍，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1
一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，包括以下步骤：
S1、土著微生物菌群富集、驯化
S1-1、土著微生物富集
将长期受PAHs污染的土壤样品加入盛有无菌水的锥形瓶中，随后置于摇床中，在30℃的温度条件下，以150rpm的转速震荡培养6h，离心后，得到的上清液即为土著微生物菌液；
S1-2、土著微生物驯化
取5mL的土著微生物菌液转接至95mL培养基中，加入USEPA PAHs混标，使培养基中PAHs浓度达到95mg/kg，在30℃的温度条件下，以150rpm速率在摇床上震荡培养5d，相同条件下连续培养5代后，获得稳定的具有高效降解PAHs能力的土著功能微生物菌群，将制备的土著功能微生物菌群放置于冰箱中暂存备用，其中，冰箱内温度为-70℃，方便长期保存；
S2、发酵罐培养
S2-1、将上述土著功能微生物菌群转接至LB培养基中活化，在30℃的温度条件下，以150rpm的转速摇床震荡培养24h，作为一级种子液使用，按 5wt％的接种量将一级种子液转接至发酵罐中进行放大发酵，培养至对数生长期，获得液体菌剂；
S3、固体菌剂的研制
选用玉米秸秆为固定化载体，按照重量比为1:10的比例称取玉米秸秆和液体菌剂，并置于锥形瓶中混合均匀，灭菌后冷却至常温，并置于恒温振荡培养箱内，在30℃的条件下，以150rpm的转速的培养2d后取出，随后在离心机中以5000rpm的速率离心处理5min后，得到上清液和下层固体，然后，用磷酸钾洗涤下层固体，再离心5min后弃上清液，重复此过程2次，最终离心所得固体即为功能土著微生物菌群固体菌剂；
S4、土壤的采集、污染老化
从农田采集土壤样品，将采集的土壤样品风干30d后，磨碎并充分打散混匀，过20目筛，向制备好的土壤样品中添加含有USEPA PAHs和丙酮的混合溶液，并充分混匀，待丙酮挥发完全后，老化土壤3个月，保存备用，其中， USEPA PAHs占混合溶液总重量的25％，丙酮占混合溶液总重量的75％；
S5、土壤接种
向步骤S4得到的污染土壤中添加重量为2wt％的土著微生物菌群固体菌剂，并充分混匀后，监测污染土壤中PAHs含量的变化；
USEPA PAHs包括：萘，苊烯，苊，芴，菲，蒽，荧蒽，芘，苯并[a]蒽，
Figure BDA0003531985020000071
苯并[b]荧蒽，苯并[k]荧蒽，苯并[a]芘，二苯并[a,h]蒽，苯并[ghi]苝和茚并[1,2,3-cd]芘。
实施例2
一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，包括以下步骤：
S1、土著微生物菌群富集、驯化
S1-1、土著微生物富集
将长期受PAHs污染的土壤样品加入盛有无菌水的锥形瓶中，随后置于摇床中，在35℃的温度条件下，以155rpm的转速震荡培养7h，离心后，得到的上清液即为土著微生物菌液；
S1-2、土著微生物驯化
取5-6mL的土著微生物菌液转接至98mL培养基中，加入USEPA PAHs混标，使培养基中PAHs浓度达到95mg/kg，在35℃的温度条件下，以155rpm速率在摇床上震荡培养5.5d，相同条件下连续培养5代后，获得稳定的具有高效降解PAHs能力的土著功能微生物菌群，将制备的土著功能微生物菌群放置于冰箱中暂存备用，其中，冰箱内温度为-75℃，方便长期保存；
S2、发酵罐培养
S2-1、将上述土著功能微生物菌群转接至LB培养基中活化，在35℃的温度条件下，以155rpm的转速摇床震荡培养28h，作为一级种子液使用，按 5wt％的接种量将一级种子液转接至发酵罐中进行放大发酵，培养至对数生长期，获得液体菌剂；
S3、固体菌剂的研制
选用玉米秸秆为固定化载体，按照重量比为1:10的比例称取玉米秸秆和液体菌剂，并置于锥形瓶中混合均匀，灭菌后冷却至常温，并置于恒温振荡培养箱内，在35℃的条件下，以155rpm的转速的培养2.5d后取出，随后在离心机中以5500rpm的速率离心处理8min后，得到上清液和下层固体，然后，用磷酸钾洗涤下层固体，再离心8min后弃上清液，重复此过程2次，最终离心所得固体即为功能土著微生物菌群固体菌剂；
S4、土壤的采集、污染老化
从农田采集土壤样品，将采集的土壤样品风干35d后，磨碎并充分打散混匀，过20目筛，向制备好的土壤样品中添加含有USEPA PAHs和丙酮的混合溶液，并充分混匀，待丙酮挥发完全后，老化土壤3.5个月，保存备用，其中，USEPA PAHs占混合溶液总重量的25％，丙酮占混合溶液总重量的75％；
S5、土壤接种
向步骤S4得到的污染土壤中添加重量为3wt％的土著微生物菌群固体菌剂，并充分混匀后，监测污染土壤中PAHs含量的变化；
USEPA PAHs包括：萘，苊烯，苊，芴，菲，蒽，荧蒽，芘，苯并[a]蒽，
Figure BDA0003531985020000081
苯并[b]荧蒽，苯并[k]荧蒽，苯并[a]芘，二苯并[a,h]蒽，苯并[ghi]苝和茚并 [1,2,3-cd]芘。
实施例3
一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，包括以下步骤：
S1、土著微生物菌群富集、驯化
S1-1、土著微生物富集
将长期受PAHs污染的土壤样品加入盛有无菌水的锥形瓶中，随后置于摇床中，在40℃的温度条件下，以160rpm的转速震荡培养8h，离心后，得到的上清液即为土著微生物菌液；
S1-2、土著微生物驯化
取5-6mL的土著微生物菌液转接至100mL培养基中，加入USEPA PAHs 混标，使培养基中PAHs浓度达到95mg/kg，在40℃的温度条件下，以160rpm 速率在摇床上震荡培养6d，相同条件下连续培养5代后，获得稳定的具有高效降解PAHs能力的土著功能微生物菌群，将制备的土著功能微生物菌群放置于冰箱中暂存备用，其中，冰箱内温度为-80℃，方便长期保存；
S2、发酵罐培养
S2-1、将上述土著功能微生物菌群转接至LB培养基中活化，在40℃的温度条件下，以160rpm的转速摇床震荡培养30h，作为一级种子液使用，按 5wt％的接种量将一级种子液转接至发酵罐中进行放大发酵，培养至对数生长期，获得液体菌剂；
S3、固体菌剂的研制
选用玉米秸秆为固定化载体，按照重量比为1:10的比例称取玉米秸秆和液体菌剂，并置于锥形瓶中混合均匀，灭菌后冷却至常温，并置于恒温振荡培养箱内，在40℃的条件下，以160rpm的转速的培养3d后取出，随后在离心机中以6000rpm的速率离心处理10min后，得到上清液和下层固体，然后，用磷酸钾洗涤下层固体，再离心10min后弃上清液，重复此过程2次，最终离心所得固体即为功能土著微生物菌群固体菌剂；
S4、土壤的采集、污染老化
从农田采集土壤样品，将采集的土壤样品风干40d后，磨碎并充分打散混匀，过20目筛，向制备好的土壤样品中添加含有USEPA PAHs和丙酮的混合溶液，并充分混匀，待丙酮挥发完全后，老化土壤4个月，保存备用，其中， USEPA PAHs占混合溶液总重量的25％，丙酮占混合溶液总重量的75％；
S5、土壤接种
向步骤S4得到的污染土壤中添加重量为5wt％的土著微生物菌群固体菌剂，并充分混匀后，监测污染土壤中PAHs含量的变化；
USEPA PAHs包括：萘，苊烯，苊，芴，菲，蒽，荧蒽，芘，苯并[a]蒽，
Figure BDA0003531985020000101
苯并[b]荧蒽，苯并[k]荧蒽，苯并[a]芘，二苯并[a,h]蒽，苯并[ghi]苝和茚并 [1,2,3-cd]芘。
实施例4
本实施例与实施例3基本相同，不同之处在于：
步骤S3中，将玉米秸秆和液体菌剂进行混合前，先对玉米秸秆进行预处理，预处理处理方法为：
S3-1、将玉米秸秆放入粉碎机中进行粉碎，过100目筛，得玉米秸秆粉末，然后，将玉米秸秆粉末放入生物炭炉中，在真空条件下，以10℃/min的升温速率升温至450℃，并保温2h，并冷却后得到生物质炭粉末；
S3-2、按照质量比为5:10:1的比例将生物质炭粉末、甲壳素溶液以及 NaHCO3混合后，在50℃的温度条件下，磁力搅拌3h，得到混合悬浊液，其中，甲壳素溶液的浓度为0.4mol/L；
S3-3、将混合悬浊液置于蒸汽滚筒内，烘干后冷却，过筛，制成颗粒直径为3mm的多孔秸秆颗粒成品。
实施例5
本实施例与实施例3基本相同，不同之处在于：
所述步骤S1-2中，将制备的土著功能微生物菌群在放入冰箱暂存之前，按照土著功能微生物菌群菌液：甘油溶液为5:1的比例混合搅拌5min，其中，甘油溶液的浓度为4M。
实施例6
本实施例与实施例3基本相同，不同之处在于：
所述步骤S3中，利用无机盐洗涤下层固体时，先将无机盐进行灭菌处理，然后按照重量比为3:1的比例将无机盐溶液与下层固体均匀混合，并在40℃的温度条件下，超声波清洗2h，然后，置于保温吊带式离心机内，离心处理 10min后即可，其中，超声波频率为40kHz，超声能量密度为3W/cm2。
试验例1
利用扫描电镜对实施例1-6的玉米秸秆固定化载体和功能土著微生物菌群固体菌剂分别进行扫描，并观察功能土著微生物菌群在玉米秸秆固定化载体上的附着情况，由图1可知：本实施例1-6的玉米秸秆固定化载体表面几乎没有微生物的存在，由图2可知，本实施例1-6的功能土著微生物菌群固体菌剂表面附着了大量的微生物，固定化效率较高。
试验例2
利用实施例1-6的污染老化土壤进行试验，每隔3天搅拌土壤样品并定期补水维持土壤的含水量，分别于第0、3、6、9、12、15、20天取样，之后将处理后的土壤进行PAHs含量检测，具体结果如图3所示；
由图3可知，实施例1-6的功能土著菌群固体菌剂对PAHs具有良好的降解效能，经过20天的修复，去除率呈现上升的趋势，到第20天，BC2％和BC5％两种处理组对总PAHs的去除率分别可以达到80.65％和88.25％。
试验例3
向实施例1-6的PAHs强化污染土壤中，分别加入土壤质量2％、5％的功能土著菌群固体菌剂，并命名为BC2％、BC5％；同时设置相应的对照组只加入 2％、5％的玉米秸秆，分别命名为CK2％、CK5％，放入25℃气候箱中避光培养，定期取样测定土壤中PAHs残留量，具体结果如图4所示；
由图4可知，分别添加了2％和5％的功能土著菌群固体菌剂对污染土壤中的PAHs进行去除，结果表明添加了5％固体菌剂的处理对PAHs的去除率略高于添加2％的处理，对2-3环、4环、5-6环PAHs的去除率分别达到93.51％、 44.02％和18.71％。
综上所述，实施例1-6公开了利用功能土著菌群固体菌剂去除污染土壤中 USEPAPAHs的方法，能够有效的去除污染土壤中的PAHs，减小土壤中的PAHs对环境和人类健康的危害，总去除率高，且对环境不产生二次污染，具有环保、高效的特点。

Claims (4)

1.一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、土著微生物菌群富集、驯化
S1-1、土著微生物富集
将长期受PAHs污染的土壤样品加入盛有无菌水的锥形瓶中，随后置于摇床中，在30-40℃的温度条件下，以150-160rpm的转速震荡培养6-8h，离心后，得到的上清液即为土著微生物菌液；
S1-2、土著微生物驯化
取5-6mL的土著微生物菌液转接至95-100mL培养基中，加入USEPA PAHs混标，使培养基中PAHs浓度达到设定值，在30-40℃的温度条件下，以150-160rpm速率在摇床上震荡培养5-6d，相同条件下连续培养5代后，获得稳定的具有高效降解PAHs能力的土著功能微生物菌群；
S2、发酵罐培养
S2-1、将上述土著功能微生物菌群转接至LB培养基中活化，在30-40℃的温度条件下，以150-160rpm的转速摇床震荡培养24-30h，作为一级种子液使用，按5wt％的接种量将一级种子液转接至发酵罐中进行放大发酵，培养至对数生长期，获得液体菌剂；
S3、固体菌剂的研制
选用玉米秸秆为固定化载体，按照重量比为1:10的比例称取玉米秸秆和液体菌剂，并置于锥形瓶中混合均匀，灭菌后冷却至常温，并置于恒温振荡培养箱内，在30-40℃的条件下，以150-160rpm的转速的培养2-3d后取出，随后在离心机中以5000-6000rpm的速率离心处理5-10min后，得到上清液和下层固体，然后，用无机盐洗涤下层固体，再离心5-10min后弃上清液，重复此过程2次，最终离心所得固体即为功能土著微生物菌群固体菌剂；
S4、土壤的采集、污染老化
从农田采集土壤样品，将采集的土壤样品风干30-40d后，磨碎并充分打散混匀，过20目筛，向制备好的土壤样品中添加含有USEPA PAHs和丙酮的混合溶液，并充分混匀，待丙酮挥发完全后，老化土壤3-4个月，保存备用，其中，USEPA PAHs占混合溶液总重量的25％，丙酮占混合溶液总重量的75％；
S5、土壤接种
向步骤S4得到的污染土壤中添加重量为2-5wt％的土著微生物菌群固体菌剂，并充分混匀后，监测污染土壤中PAHs含量的变化；
所述步骤S3中，将玉米秸秆和液体菌剂进行混合前，先对玉米秸秆进行预处理，预处理处理方法为：
S3-1、将玉米秸秆放入粉碎机中进行粉碎，过90-100目筛，得玉米秸秆粉末，然后，将玉米秸秆粉末放入生物炭炉中，在真空条件下，以5-10℃/min的升温速率升温至400-450℃，并保温1-2h，并冷却后得到生物质炭粉末；
S3-2、按照质量比为5:10:1的比例将生物质炭粉末、甲壳素溶液以及NaHCO3混合后，在40-50℃的温度条件下，磁力搅拌2-3h，得到混合悬浊液，其中，甲壳素溶液的浓度为0.4mol/L；
S3-3、将混合悬浊液置于蒸汽滚筒内，烘干后冷却，过筛，制成颗粒直径为2-3mm的多孔秸秆颗粒成品；
所述步骤S1-2中，将制备的土著功能微生物菌群在未培养之前，放置于冰箱中暂存备用，其中，冰箱内温度为-70～-80℃；
所述步骤S1-2中，将制备的土著功能微生物菌群在放入冰箱暂存之前，按照土著功能微生物菌群菌液：甘油溶液为5:1的比例混合搅拌3-5min，其中，甘油溶液的浓度为3-4M；
所述步骤S3中，利用无机盐洗涤下层固体时，先将无机盐进行灭菌处理，然后按照重量比为3:1的比例将无机盐溶液与下层固体均匀混合，并在30-40℃的温度条件下，超声波清洗1-2h，然后，置于保温吊带式离心机内，离心处理5-10min后即可，其中，超声波频率为40kHz，超声能量密度为2-3W/cm2。
2.根据权利要求1所述的一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，其特征在于，所述无机盐溶液的成分为磷酸钾。
3.根据权利要求1所述的一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，其特征在于，所述USEPA PAHs包括：萘，苊烯，苊，芴，菲，蒽，荧蒽，芘，苯并[a]蒽，
Figure FDA0003907862680000031
苯并[b]荧蒽，苯并[k]荧蒽，苯并[a]芘，二苯并[a,h]蒽，苯并[ghi]苝和茚并[1,2,3-cd]芘。
4.根据权利要求1所述的一种利用功能土著菌群固体菌剂去除土壤中USEPA PAHs的方法，所述土著微生物菌液的可在35-45℃的条件下生存。
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