CN114456942B

CN114456942B - 一种处理高浓度糖蜜酒精废水的链带藻及其应用

Info

Publication number: CN114456942B
Application number: CN202210065883.9A
Authority: CN
Inventors: 黄罗冬; 申佩弘; 蒋煜; 邓红雨; 王子豪; 吕晓月
Original assignee: Guangxi University
Current assignee: Guangxi University
Priority date: 2022-01-20
Filing date: 2022-01-20
Publication date: 2023-12-15
Anticipated expiration: 2042-01-20
Also published as: CN114456942A

Abstract

本发明涉及污水处理和生物质能源技术领域，提供了一种处理高浓度糖蜜酒精废水的链带藻及其应用。该藻株名为链带藻(Desmodesmus sp.)GXU‑A4，于2021年12月17日保藏于位于中国武汉的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 20211641。同时提供了一种所述链带藻GXU‑A4处理糖蜜酒精废水和糖蜜酒精废水厌氧发酵后出水的方法，均可快速积累生物量和高价值储藏性物质以及净化废水。本发明还提供一种所述链带藻GXU‑A4可耐受高浓度糖蜜酒精废水，并获得高产量生物质，可降低处理废水和生产微藻生物质成本，在实际生产中具有重要的应用价值，具有良好的大规模产业前景。

Description

一种处理高浓度糖蜜酒精废水的链带藻及其应用

技术领域

本发明涉及污水处理和生物质能源技术领域，具体涉及一种处理高浓度糖蜜酒精废水的链带藻及其应用。

背景技术

能源的稀缺性和环境污染的不可逆性，制约经济发展与人类生存，使得全球各国对能源与环境问题更加重视。微藻作为第三代生物能源的原料，将其生产与废水处理相结合为解决能源与环境问题提供了新思路。

厌氧-好氧处理法可以结合有效避免厌氧发酵出水COD、色度无法到达排放标准的问题，好氧处理过程可以将厌氧出水中残留的有机物进行分解吸收，同时能够有效降低废水中残留的色素；好氧-厌氧处理法同时也避免的好氧处理法降解有机物能力有限，对高浓度有机废水不适用，只能用于处理中、低浓度有机废水。MinhT.Vu等人建立了一个包含厌氧膜生物反应器(AnMBR)和微藻膜反应器(MMR)的混合系统被开发用于从食品和农业企业工业废水中获取能量、营养和微藻生物质。AnMBR去除了97％以上的化学需氧量(COD)， AnMBR中的微生物产生大量NH₄ ⁺和PO₄ ^3-，富含NH₄ ⁺和PO₄ ^3-的流出物直接用于(即不经过滤或灭菌)在微型生物反应器中培养小球藻，微藻生物量在运行 6天后达到700毫克/升，养分去除率达到75％以上。

使用微藻耦合厌氧发酵处理糖蜜酒精废水，糖蜜酒精废水及其厌氧发酵后的出水中的营养物质能促进微藻细胞生长，微藻中的有用成分被提取，剩余的藻渣还能回收到厌氧发酵中提升沼气产量构成循环经济，从而降低整个处理过程的运行成本和对环境的影响。然而，每一种微藻都有本身特性和能力来清除各种污染物，研究新发现的藻种在环境修复中的各种特性具有重要意义。

近来研究者提出循环经济概念，工业化应用寻找一种经济可持续发展的方法，通过将废水资源化与生物能源生产联合，关键是要获得一株优质藻种，评估对废水的净化效果以及组成成分确认循环经济概念的技术可行性。

发明内容

为克服现有技术的缺陷，本发明的首要目的在于提供一种处理高浓度糖蜜酒精废水的链带藻。

本发明的再一目的在于提供上述链带藻的应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种链带藻，命名为链带藻(Desmodesmus sp.)GXU-A4，保藏编号为 CCTCC NO: M20211641，保藏日期为2021年12月17日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。

上述链带藻在废水处理中的应用。

优选地，所述废水为糖蜜酒精废水。

优选地，包括如下步骤：将链带藻接种至废水，处理时间至少为6天。

优选地，所述链带藻初始接种密度值OD750为0.30～1.20，温度为20～40℃，所述废水COD值为1000mg/L～5000mg/L。

优选地，链带藻接种前对所述废水进行厌氧发酵处理。

优选地，所述厌氧发酵处理条件为：进水循环周期为4d，每个进水周期进1L糖蜜酒精废水，每隔24h出1L水，所述废水COD值为10,000～30,000 mg/L。

优选地，向所述废水中加入氮源。

优选地，所述氮源为硝态氮、亚硝态氮或铵态氮，氮源浓度为18±5mmol/L。

上述链带藻在制备生物燃料中的应用。

本发明具有如下优点和有益效果：

(1)本发明的淡水链带藻GXU-A4能净化不同浓度糖蜜酒精废水以及糖蜜酒精废水厌氧发酵后的出水，对COD和氨氮去除率达70％和95.87％，脱色率达60％，相较于已报道微藻藻种其生物产量更高可达14.78g/L，生物燃料原料成分油脂含量占干重26％-47％，碳水化合物占干重33％-47％。

(2)GXU-A4能在高COD和高氨氮浓度条件下生长。

(3)本发明的链带藻还可通过厌氧发酵回收藻种生产更多沼气，从多方面降低微藻生物能源生产与废水处理成本，具有实际应用价值，为可持续生产循环经济工业化建设提供一株优良链带藻。

(4)本发明提供一株具有潜在商业价值的优质耐污链带藻，该链带藻 GXU-A4可以净化糖蜜酒精废水及其厌氧发酵后的出水，并利用废水生长累积生物燃料制备的原材料，该发明可以有效解决当前糖蜜酒精废水排放问题同时耦合厌氧发酵技术深度净化和微藻生物燃料生产成本过高的问题。

附图说明

图1为在光学显微镜(A)和电子显微镜(B-C)下微藻细胞形态，A-C 中的比例尺表示5μm。

图2为基于ITS序列构建系统发育树。

图3为厌氧发酵条件下COD变化。

图4为不同废水条件培养下链带藻GXU-A4的生长曲线(E:糖蜜酒精废水；O:厌氧发酵出水；EEN:糖蜜酒精废水外加氮源；OEN:厌氧发酵出水外加氮源)。

图5为废水中COD和氨氮动态变化(E:糖蜜酒精废水；O:厌氧发酵出水；EEN:糖蜜酒精废水外加氮源；OEN:厌氧发酵出水外加氮源)。

图6为废水脱色效果缺糖蜜酒精废水，(E:糖蜜酒精废水；O:厌氧发酵出水；EEN:糖蜜酒精废水外加氮源；OEN:厌氧发酵出水外加氮源)。

图7为废水中微藻组成成分(微藻组成从左到右依次为lipid，protein，carbohydrate和other)。

图8为链带藻GXU-A4处理糖蜜酒精废水和厌氧发酵出水的模式图。

图9为链带藻GXU-A4在高浓度废水中的生长曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步具体详细描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。

实施例1：藻种分离纯化与保藏

广西农垦思源酒业有限公司废水处理好氧池采取水样，取1ml水样放入 BG-11培养基中培养，25℃连续光照培养5天，显微镜下观察挑出目标藻种，再放入100mL三角瓶中，设置5个平行，于25℃连续光照培养数天。观察藻细胞是否生长，取5μL藻液，涂于BG-11固体平板上，于25℃连续光照培养。待藻细胞生长后取单一藻落继续划线于BG-11固体平板，重复几次，得到单一藻落。挑取单一藻落转入小体积的BG-11培养基中，待藻繁殖生长至对数期后，吸取1ml藻液转入含100mg/L氨苄青霉素的50ml BG-11培养基中，接着吸取5μL上述藻液涂布于含有抗生素的BG-11固体平板上，待藻落长出后，再挑取单一藻落划线于另一BG-11固体平板上得到无菌藻落，即得到纯化无菌藻株，命名为GXU-A4。之后将得到的无菌藻株GXU-A4，通过划线保存于BG-11培养基琼脂斜面。

BG-11培养基配方如下：NaNO₃1.5 g、MgSO₄·7H₂O 75mg、CaCl₂·2H₂O 36mg、Na₂CO₃20 mg、K₂HPO₄40 mg、FeCl₃·2H₂O 3.15mg、Na₂EDTA·2H₂O 4.36mg和Citric acid6.0mg和A5 mix 1mL加水到1L，灭菌。

其中A5 mix的配制是加入H₃BO₃2.86 g、MnCl₂·4H₂O 1.81g、ZnSO₄·7H₂O 0.222g、CuSO₄·5H₂O 0.079g、NaMoO₄·2H₂O 0.39g、Co(NO₃)₂·6H₂O 49.4 mg和浓H₂SO₄1 mL，随后加水至1L，灭菌。

实施例2：藻种形态学鉴定

利用普通光学显微镜对藻种进行制片观察，记录藻种形态结构特征(图1)。从光学显微镜观察(图1-A)，分离纯化获得的藻种，呈绿色，藻细胞体呈纺锤形，常四个细胞聚集，带有鞭毛，又能看到双细胞聚集以及独立单细胞；用电子显微镜观察(图1-B、C)其细胞表面特征，细胞壁结构由密度较高的小疣并有少数网状结构以及凸起刺组成，覆盖整个细胞表面，细胞呈椭圆形且外层两端带有长鞭毛，中间带有短鞭毛。因此，通过形态学特征将GXU-A4归属于链带藻属。

实施例3：藻种分子学鉴定

取500ml三角瓶无菌培养7天的藻液，取200mL,3000rpm离心5min收集藻泥，利用Takara植物DNA提取试剂盒(MiniBEST Plant Genomic DNA Extraction Kit)提取GXU-A4全基因组DNA，以提取的GXU-A4藻细胞DNA 作为模板，以ITS序列通用引物，引物序列如下：

ITS-F：CGTTCCGTAGGTGAACCTGC(SEQ ID NO.1)

ITS-R：CATATGCTTAAGTTCAGCGGGT(SEQ ID NO.2)

扩增其片段，PCR反应体系为(50μL):10×buffer 5μL、2.5μM dNTP 4μL、 MgCl₂ 3μL、S1F 2μL、S1R 2μL、DMSO 2.5μL、Taq酶0.5μL、模板DNA 2 μL和ddH₂O 29μL。PCR反应程序为95℃预变性3min；95℃30s、52℃45 s、72℃2min，共循环35次；72℃10min；最后4℃保存。将扩增获得的产物用1％琼脂糖凝胶电泳检测，选取具有单一清晰条带的送上海生工生物有限公司测序。

将测序获得的序列去除头和尾测序不准确的部分，将测序序列在NCBI 中进行Blast比对，利用MEGA7.0软件中muscle程序进行多序列比对，并利用Kimura 2-parameter和Gamma distribution with Invariant sites(G+I)替代模型构建最大释然法(MaximumLikelihood)系统树，以自展值(Bootstrap)检验树的准确性和支持率，频率设置为1000次。

扩增测序获得GXU-A4的ITS序列，将该序列在NCBI中进行Blast比对，下载21条近缘物种ITS序列，一共22条序列进行多序列比对和系统发育分析， ITS序列内容如下(SEQID NO.3)。

>Desmodesmus sp.stain GXU-A4 ITS

TCTCATATGCTTTAGTTCAGCGGGTAGCCTTGCCTGAGCTCAGGTCGA ATACAGAGTACGCGTCAGAAACGCGTTTCCTGCTTGGCTCCTAACCAGG TCCTCAGACACAACTTCGTGTAGGCACCCGAGGGTGTTGCTACCTATCCAGTTGAGCCCGAATCGGGTCCCAGTTTAAGCCTCTGTGCTTCAGCCAACC CAATCGAAGTGAATCCAATTGGGAGGGCCAGATCCACCCCTGCTATCGGCTTGAGCAAGCACAATAGGCGCCTCCTGTTAAGGAAGAGGGGTGAGGGTGTAAACCGACGCTGAGGCAGACATGCTCTTCTCCGAGGAGTCGAGCGC AATATGCGTTCAAAGATTCGATGGTTCACGGAATTCTGCAATTCACACTACGTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGTTGCGAGAGCCAAGATATCCG TTGTTGAGAGTTGTTCTTTGTTAGAACTGCCGGTTAACGGCAGCCAAAGCTTCAGAGTTTGGTTTGATAAGTGGTTGGTCAATGGTGTGTAGGTTAGTA GGCCCCACGCTTGCGCGTGTTGACCTAACGTCGGTACACAAATAGAGAG TGCGTGTTGTGGTTTGCATATTCAATGATCCTTCCGCAGGTTCACAACGGGAAACGGACCCCCTAATACTTA

通过ITS序列构建的系统发育树(如图2)，确定藻株GXU-A4隶属于绿藻门(Chlorophyta)绿藻纲(Chlorophyceae)、环藻目(Sphaeropleales)、栅藻科(Scenedesmaceae)、链带藻属(Desmodesmus)。

综上所述，本发明的淡水链带藻，命名为链带藻(Desmodesmus sp.) GXU-A4，保藏编号为CCTCC M 20211641，保藏日期为2021年12月17日，保藏单位为位于中国武汉的中国典型培养物保藏中心。

实施例4：链带藻用于处理糖蜜酒精废水和糖蜜酒精废水厌氧发酵后的出水

废水来源：

本实施例所用废水来自广西某糖厂生产酒精后产生的糖蜜酒精废水，液体呈深棕色相对清澈，有一股酱香味，pH为3-4，将废水储存在50L的塑料桶中，放在阴凉处保存。

试验装置：

本试验设计了用于废水厌氧处理的试验装置，三个平行。该试验装置包括了1个工作体积为4L的厌氧反应器，一个1L气袋用于收集气体并维持平衡气压，一套恒温水浴锅/摇床。试验设置进水循环周期为4d，每个厌氧反应器在每个进水周期分别进1L糖蜜酒精废水(保持同样进水负荷)。每隔24h出 1L水。

厌氧后的液体浑浊带有厌氧污泥，呈深棕色，带有刺鼻气味，pH为7-8，厌氧后的出水会带有厌氧淤泥，使用500目纱绢进行过滤。将保藏的GXU-A4 藻种在三角瓶中进行扩大培养，待指数期后离心去除上清再用无菌水洗掉藻种表明残余的营养成分，分别接种的初始浓度OD750为0.5±0.1到糖蜜酒精废水和厌氧后的出水(稀释COD在1000-3000范围内)，以BG-11培养基为对照，采用4.5cm×60cm的柱状光生物反应器进行培养，通入富含1-2％CO₂的压缩空气进行鼓气培养，培养温度为25±1℃，光强300μmol/(m²·s)持续光照，培养周期为15d-18d。

COD含量是废水污染程度的重要指标，氨氮抑制微藻生长并降低废水的利用率，氨氮含量过高会抑制微藻的生长，本发明在微藻培养过程中，主要对废水中这两种物质含量变化与去除率进行研究。

(1)测定COD

待测水样，经10000rpm离心10min后，用0.45μm微孔滤膜过滤。分别取过滤后的水样2ml加入COD专用测试试剂中，用哈希DRB200消解仪于 165℃消解20min，待消解溶液冷却至室温后用哈希水质检测仪DR900测定 COD数值，并记录。

COD去除率的计算公式如下：(COD0-COD1)×100％/COD0

其中：COD0表示处理前废水的COD；COD1表示处理后废水的COD。

厌氧发酵装置中，糖蜜酒精废水处理前后COD变化如图3所示，进水 COD0为25,480mg/L，出水COD1为7,480mg/L，COD去除率为70.64％，有机负荷9.265g/(L*d)。在此基础上进一步好氧处理。

(2)测定氨氮

待测水样，经10000rpm离心10min后，用0.45μm微孔滤膜过滤。分别取过滤后的水样5ml加入氨氮专用测试试剂中，用哈希DRB200消解仪于 125℃消解30min，待消解溶液冷却至室温后用哈希水质检测仪DR900测定吸光度值，根据氨氮标准曲线计算出样品中的氨氮含量。

如图5所示，处理糖蜜酒精废水不同浓度的COD的去除率都能达到70％以上，在外加氮源COD为1,000mg/L(EEN_1000)的条件下去除率最高达94.29％，处理厌氧发酵后糖蜜酒精废水，COD的去除率基本达到70％，在外加氮源COD为3,000mg/L(OEN_3000)条件下COD去除率达84.49％。

如图5所示，处理糖蜜酒精废水在外加氮源COD为3,000mg/L (EEN_3000)的条件下氨氮去除率最高达65.67％，而在处理厌氧发酵后的废水中其氨氮去除效果都能达到80％以上，在COD为2,000mg/L(O_2000)的条件下去除率最高达95.87％。

(3)脱色率

分别取10mL处理前后的废水于9000rpm离心10min，取离心后上清液，用分光光度计在475nm下测定OD值，并记录。

计算公式如下：脱色率＝(OD0-OD1)×100％/OD0

其中：OD0表示处理前废水的OD475；OD1表示处理后废水的OD475。

如图6所示，厌氧发酵出水的脱色率在60％左右，在O_2000条件下脱色率最高达66.18％。

(4)生物量

取孔径为0.8μm的滤膜做好标记，然后放进烘箱在80℃下烘至恒重，记膜重M1。抽取10ml藻液，通过滤膜进行抽滤，可将微藻截留在滤膜上，放进烘箱中烘至恒重，记膜重M2。

计算公式：藻重＝M2(藻+膜)-M1(膜)

图4为柱状光生物反应器中，不同废水条件培养下链带藻GXU-A4的生长曲线，相应的废水浓度培养基中再添加外源氮(Exogenous nitrogen,EN) (18mmol/LNaNO₃)，探究是否添加外源氮源更有利于微藻的生长。培养前两天微藻处于滞后期，从第二天开始进入生长对数期，生长速率一直加大没有出现抑制现象，培养至16天开始出现抑制现象，进入平缓期甚至有衰退的现象。对照组BG-11培养基，GXU-A4最高生物量达7.49g/L，在不添加外源氮源的情况下随着废水浓度的增加生物量也增加。如图4A所示，糖蜜酒精废水组不添加外源氮源在E_3000条件下生物量达10.96g/L，添加外源氮源后发现生物量生长的更好，GXU-A4在糖蜜酒精废水EEN_3000生物量达14.68g/L。如图4B所示，厌氧发酵后糖蜜酒精废水组在不添加外源氮源O_3000条件下生物量达13.98g/L，添加外源氮源OEN_3000的条件下生物量达14.78g/L，表明GXU-A4能够利用废水中营养物质进行快速的生长。

(5)油脂

称取50-80mg藻粉放入15mL的玻璃离心管中，并加入磁力搅拌子；首先向离心管中加入2mL二甲基亚砜-甲醇混合溶液(V:V＝1:9)，在50℃下水浴1.5h，结束后在3000rpm转速下离心5min，收集上清液于15mL的玻璃小瓶中；然后向离心管中加入4mL的乙醚-正己烷混合溶液(V:V＝1:1)，冰浴 1.5h后3000rpm离心5min，收集上清液至上述同一玻璃小瓶中；将上述提取过程重复一次。然后向收集上清液的小瓶中加入4mL蒸馏水，震荡混匀后静置分层；分层结束后将上层的有机相转移到已称重的5mL的Ep中并用氮气吹干，并称重。利用Ep管前后的差量计算出提取出来的脂质重量，从而得到藻粉中脂质含量。

(6)碳水化合物

称取20mg的脱脂藻渣，放入加有磁力搅拌子的15mL的玻璃离心管中。然后向离心管中加入5mL的0.5mol/L的H₂SO₄溶液(1L水里加26.6mL98％浓硫酸)，100℃下恒温水解4h，3500rpm离心5min后转移上清液于50mL 的容量瓶中，重复抽提3次直至提取完全，并用纯水将提取的上清液定容。采用苯酚-硫酸法，测定吸光度值，根据葡萄糖标准曲线计算出样品中的总碳水化合物含量。

(7)蛋白

称取20mg的脱脂藻渣，放入加有磁力搅拌子的15mL的玻璃离心管中。然后向离心管中加入5mL 0.5mmol/L的NaOH溶液，80℃下恒温水浴抽提 30min，3500rpm离心5min后转移上清液于50mL的容量瓶中，并用纯水将上清液定容。采用Lowry法测定提取出的蛋白液的吸光度值，根据蛋白标准曲线计算出样品中的蛋白质含量。

微藻的主要细胞组成成分包括蛋白质、油脂、碳水化合物，GXU-A4在糖蜜酒精废水及其厌氧发酵的出水中生长后能快速积累储藏性物质，其相对含量如图7，在糖蜜酒精废水原始组中油脂积累占优势，在E_1000的条件下的油脂含量最高占干重的47％，且废水的浓度越低其油脂含量呈上升趋势，表明低浓度废水中呈现氮缺乏状态，表明GXU-A4在缺氮情况下积累油脂。反之，糖蜜酒精废水厌氧发酵后的出水中主要积累碳水化合物，在加外源氮源 OEN_1000的条件下碳水化合物的含量最高占干重的48％，说明，GXU-A4在氮充足的情况下细胞内积累碳水化合物。因此，我们可以利用两种废水实现 GXU-A4在废水中快速的积累油脂和碳水化合物，均可作为生物燃料的良好原产料，具有潜在的经济价值，GXU-A4是一株能生产可观生物燃料原料的微藻。

实施例5：链带藻GXU-A4可耐受高浓度糖蜜酒精废水

如图9所示，逐渐提高糖蜜酒精废水浓度，结果显示链带藻GXU-A4可耐受更高浓度废水，在COD浓度为5000mg/L的条件下也能正常生长，该条件下GXU-A4生物量也可达14.94g/L，表明该藻可以很好的利用废水中的有机成分快速积累生物质。

与已报道文献中微藻对废水的净化和生物量积累情况来看(表1)，本研究藻株能获得更多的生物量积累，并且对废水净化效果好，值得注意的是能耐受高浓度氨氮(大于或等于270mg/L)。

表1不同微藻对不同废水净化和生物量积累情况

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 广西大学

<120> 一种处理高浓度糖蜜酒精废水的链带藻及其应用

<141> 2022-01-20

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 链带藻(Desmodesmus sp)

<400> 1

cgttccgtag gtgaacctgc 20

<210> 2

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

catatgctta agttcagcgg gt 22

<210> 3

<211> 662

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

tctcatatgc tttagttcag cgggtagcct tgcctgagct caggtcgaat acagagtacg 60

cgtcagaaac gcgtttcctg cttggctcct aaccaggtcc tcagacacaa cttcgtgtag 120

gcacccgagg gtgttgctac ctatccagtt gagcccgaat cgggtcccag tttaagcctc 180

tgtgcttcag ccaacccaat cgaagtgaat ccaattggga gggccagatc cacccctgct 240

atcggcttga gcaagcacaa taggcgcctc ctgttaagga agaggggtga gggtgtaaac 300

cgacgctgag gcagacatgc tcttctccga ggagtcgagc gcaatatgcg ttcaaagatt 360

cgatggttca cggaattctg caattcacac tacgtatcgc atttcgctgc gttcttcatc 420

gttgcgagag ccaagatatc cgttgttgag agttgttctt tgttagaact gccggttaac 480

ggcagccaaa gcttcagagt ttggtttgat aagtggttgg tcaatggtgt gtaggttagt 540

aggccccacg cttgcgcgtg ttgacctaac gtcggtacac aaatagagag tgcgtgttgt 600

ggtttgcata ttcaatgatc cttccgcagg ttcacaacgg gaaacggacc ccctaatact 660

ta 662

Claims

1.一种链带藻(Desmodesmus sp)，其特征在于，命名为链带藻GXU-A4，保藏编号为CCTCC M 20211641，保藏日期为2021年12月17日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。

2.权利要求1所述的链带藻在废水处理中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述废水为糖蜜酒精废水。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：将链带藻接种至废水，处理时间至少为6天。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述链带藻初始接种密度值OD₇₅₀为0.30～1.20，温度为20～40℃，所述废水COD值为1000mg/L～5000mg/L。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，链带藻接种前对所述废水进行厌氧发酵处理。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述厌氧发酵处理条件为：进水循环周期为4d，每个进水周期进1L糖蜜酒精废水，每隔24h出1L厌氧发酵后的出水，所述废水COD值为10,000～30,000mg/L。

8.根据权利要求2～7任一项所述的应用，其特征在于，向所述废水中加入氮源。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述氮源为硝态氮、亚硝态氮或铵态氮，氮源浓度为18±5mmol/L。