CN114601886B - 一种对皮肤具有祛痘作用的中药复方组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种中药复方组合物，所述组合物含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻作为原料药的提取物。本发明还提供了制备所述中药复方组合物的方法。本发明的中药复方组合物可用于皮肤护理，特别是用于预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘。

Description

一种对皮肤具有祛痘作用的中药复方组合物
技术领域
本发明涉及一种中药复方组合物，所述组合物含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻作为原料药的提取物。本发明还涉及制备所述中药复方组合物的方法。本发明的中药复方组合物可用于皮肤护理，特别是用于预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘。本发明还涉及所述中药复方组合物在制备用于预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘的产品中的用途。本发明进一步涉及含有所述中药复方组合物的药物制剂或化妆品。
背景技术
痤疮是一种毛囊与皮脂腺的慢性炎症性皮肤疾病，好发于面部、上胸及背部等皮脂腺发达部位，中医学称为粉刺、肺风粉刺、面疱。青春期雄性激素分泌旺盛，更易形成痤疮，也俗称“青春痘”。多发病于青春期，影响着全球85％以上的青少年，具有广泛的潜在危害，已成为全球第八大流行疾病。且最新的研究表明，痤疮也正在影响越来越多的成年人，大约有50％的20岁及20岁以上的成年人受其影响，尤其是女性。
当前市场上治疗痤疮的方式方法有很多，但大多缺乏经济适用性，且安全和功效性不高，故消费者的依从性受限较大。近几年来中草药在治疗痤疮上显示出巨大的优势，比如其安全性高、耐受性强、经济性强等。中医研究证明，中药具有明显的抑菌、消炎和祛湿的功效。与抗生素相比，中药不易引发细菌的抗药性，还能提高人体免疫力。
防风为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根，始载于《神农本草经》，被列为上品。其主要含有挥发油、香豆素类、色原酮类等成分，具有解热镇痛、抗炎及抗血小板聚集等作用。抗炎作用是防风的主要药理作用之一，研究表明，防风可以通过抑制小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞释放一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子来发挥抗炎作用。
川芎为伞形科植物川苇Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎，具有活血化瘀的作用。研究表明，川芎提取物对酪氨酸酶具有明显的抑制作用，可抑制酪氨酸酶的单酚酶活力和二酚酶活力。此外川芎还可减轻UVB对成纤维细胞的损伤，提高细胞增殖活性，可抑制UVB辐射引起的炎性细胞因子IL-10、IL-12、TNF-α分泌。
当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。研究表明，当归提取物具有清除自由基和络合亚铁离子能力，并且能够抑制酪氨酸酶活性，促进透明质酸合成，从而发挥抗衰老、美白、保湿功效。
苦杏仁(即杏仁)为蔷薇科植物山杏Prunus armeniaca L.var.ansu Maxim.、西伯利亚杏Prunus sibirica L.、东北杏Prunus mandshurica(Maxim.)Koehne或杏Primusarmeniaca L.的干燥成熟种子。研究表明，苦杏仁能够显著地抑制HaCaT细胞增殖，在诱导细胞凋亡过程中和Caspase家族表达变化以及NF-κB活性抑制有关，具有初步的抗炎活性。
白蔹为葡萄科植物白蔹Ampelopsis japonica(Thunb.)Makino的干燥块根。主要用于清热解毒，消痈散结，敛疮生肌。研究表明，白蔹具有较好酪氨酸酶抑制作用，另有实验发现复方白蔹面膜对实验性兔耳痤疮具有治疗作用。
泽泻为泽泻科植物东方泽泻Alisma orientate(Sam.)J uzep.或泽泻Alismaplanta go-aquatica Linn.的干燥块茎。研究表明，泽泻能够剂量依赖性地抑制由脂多糖(LPS)激活的RAW264.7细胞产生的一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)，具有一定抗炎作用。
近年来对中药组方的研究逐步证实其具有多途径、多靶点、多渠道的特点。但是，很多市售抗皮肤制剂(特别是化妆品)的问题是，功效达不到预期目的，产品不稳定，给使用者带来很大的困扰。因此，目前存在对效果明确、安全、无不良反应的具有优异的抗炎、控油、抑菌作用的中药复方组合物的强烈需求。
发明内容
本发明通过含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻的中药复方组合物、其制备方法及其用途解决了现有技术中存在的问题。本发明提供了一种具有优异的协同抗炎、控油、抑菌作用的中药复方组合物。本发明的中药复方组合物含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻。本发明的中药复方组合物可用于皮肤护理，特别是用于预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘。
在本发明的第一方面涉及一种中药复方组合物，所述中药复方组合物含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻，或由防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻组成。
在一些实施方案中，在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风0-40％、川芎0-40％、当归0-40％、杏仁0-60％、白蔹0-40％和/或泽泻0-25％；或由它们组成。
在本发明的第二方面涉及一种中药复方组合物的制备方法，所述中药复方组合物含有第一方面中描述的各原料药及其重量百分比。
在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物的制备方法包括：称取原料药并粉碎，所述原料药包括防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻；将粉碎的原料药用水提取，然后用含10％-80％的C2-6醇的水溶液提取，将两种提取物相混合，得到提取物组合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将得到提取物组合物通过过滤进行纯化，并得到浓缩液，即本发明的中药复方组合物。
在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物的制备方法包括：分别称取防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻原料药并粉碎；将粉碎的原料药分别按照下面方法提取：首先用水提取，然后用含10％-80％的C2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到各单独的原料药提取物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将得到各单独的原料药提取物通过过滤进行纯化，并得到浓缩液，再按照各单独的原料药提取物的如下重量百分比进行混合：防风0-40％、川芎0-40％、当归0-40％、杏仁0-60％、白蔹0-40％和/或泽泻0-25％，即得本发明的中药复方组合物。
本发明的第三方面涉及由如在本发明第二方面所限定的制备方法获得的本发明的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述中药复方组合物包含防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻。进一步地，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定。
本发明的第四方面涉及用于预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。
在本发明的第五方面涉及中药复方组合物在制备预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘的产品中的用途。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述产品是药物制剂或化妆品。
在本发明的第六方面涉及一种药物制剂或化妆品，其中所述药物制剂或化妆品包含中药复方组合物，该中药复方组合物含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻，或由它们组成。
在本发明的第七方面涉及一种美容方法，其包括涂抹含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻的中药复方组合物。
本发明方法以防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻为原料药一起提取直接制备或分别提取再混合制备，本发明制备的中药复方组合物具有优异的协同抗炎、控油、抑菌的作用，并且产品稳定、安全、无副作用。
附图说明
图1显示实施例1-10(分别为0.1％、0.5％、1％(v/v))和度他雄胺(5μM，阳性对照)对5-α还原酶的抑制率％。
图2显示实施例5和对比实施例1-5(1％(v/v))以及度他雄胺(5μM，阳性对照)对5-α还原酶的抑制率％
发明详述
定义
在本文中使用的术语“中药组合物”、“中药复方组合物”和“组合物”具有类似的含义，若没有特别说明，可以互换使用。在本文中术语“重量％”与“重量百分比”可以互换使用，若没有特别说明，百分比是指重量百分比。
在本文中使用的术语“室温”是指25℃±1℃。同时，若没有具体指明实验温度，均为室温。
在本文中使用的术语“s”、“min”和“h”分别代表“秒”、“分钟”和“小时”。
在本文中使用的术语“约”是指该术语所修饰的数值的±10％，更优选为±5％，最优选为±2％，因此本领域的普通技术人员能够清楚地根据所修饰的数值确定术语“约”的范围。
在本文中使用的术语“由防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻组成”是指除了所限定的防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻之外，不含有其它活性成分，但是并不排除辅料、赋形剂以及载体等辅助成分。
在本文中使用的术语“将原料药粉碎”是指将防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻一起粉碎或者分别粉碎。
在本发明的第一方面涉及一种中药复方组合物，所述中药复方组合物含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻，或由防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻组成。
在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物中的防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻作为原料药选自如下重量百分比：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、33.3％、33.4％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％以及任意上述重量百分比之间的范围，例如，在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风0-40％、川芎0-40％、当归0-40％、杏仁0-60％、白蔹0-40％和/或泽泻0-25％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风10-25％、川芎10-25％、当归10-25％、杏仁20-40％、白蔹10-25％和/或泽泻0-10％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风10-25％、川芎10-25％、当归10-25％、杏仁20-40％、白蔹10-25％和/或泽泻2-10％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风12-20％、川芎10-24％、当归12-18％、杏仁22-35％、白蔹10-23％和/或泽泻2-10％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风12-19％、川芎10-20％、当归12-17％、杏仁22-30％、白蔹10-20％和/或泽泻2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风12％、川芎24％、当归12％、杏仁22％、白蔹20％和/或泽泻10％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风16％、川芎12％、当归17％、杏仁30％、白蔹23％和/或泽泻2％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风20％、川芎20％、当归16％、杏仁25％、白蔹14％和/或泽泻5％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％和/或泽泻8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％和/或泽泻8％；或由它们组成。
在本发明的第二方面涉及一种中药复方组合物的制备方法，所述中药复方组合物含有第一方面中描述的各原料药及其重量百分比。
在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物的制备方法包括：称取原料药并粉碎，所述原料药包括防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻；将粉碎的原料药用水提取，然后用含10％-80％的C2-6醇的水溶液提取，将两种提取物相混合，得到提取物组合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将得到提取物组合物通过过滤进行纯化，并得到浓缩液，即本发明的中药复方组合物。
在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物的制备方法包括：分别称取防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻原料药并粉碎；将粉碎的原料药分别按照下面方法提取：首先用水提取，然后用含10％-80％的C2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到各单独的原料药提取物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将得到各单独的原料药提取物通过过滤进行纯化，并得到各浓缩液，再按照一定重量百分比的比例将防风提取物、川芎提取物、当归提取物、杏仁提取物、白蔹提取物和/或泽泻提取物进行混合，即得本发明的中药复方组合物。具体地，所述一定比例为选自以下的重量百分比：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％以及任意上述重量百分比之间的范围，例如，在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风0-40％、川芎0-40％、当归0-40％、杏仁0-60％、白蔹0-40％和/或泽泻0-25％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风10-25％、川芎10-25％、当归10-25％、杏仁20-40％、白蔹10-25％和/或泽泻0-10％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风10-25％、川芎10-25％、当归10-25％、杏仁20-40％、白蔹10-25％和/或泽泻2-10％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风12-20％、川芎10-24％、当归12-18％、杏仁22-35％、白蔹10-23％和/或泽泻2-10％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风12-19％、川芎10-20％、当归12-17％、杏仁22-30％、白蔹10-20％和/或泽泻2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风12％、川芎24％、当归12％、杏仁22％、白蔹20％和/或泽泻10％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风16％、川芎12％、当归17％、杏仁30％、白蔹23％和/或泽泻2％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风20％、川芎20％、当归16％、杏仁25％、白蔹14％和/或泽泻5％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％和/或泽泻8％；或由它们组成。在一些实施方案中，所述各浓缩液用水调整。进一步地，所述各浓缩液用水调整至所需的量，例如，1000g。
在一些实施方案中，将提取物组合物通过滤膜过滤以进行纯化，并得到浓缩液。在一些实施方案中，采用5000-10000道尔顿超滤膜过滤，收取滤液。在一些实施方案中，采用100-1000道尔顿的纳米滤膜过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
在一些实施方案中，本发明的提取物是水和/或C2-6醇提取物，提取用溶剂为水、C2-6醇或其组合。在一些实施方案中，所述C2-6醇为乙醇、丙醇、丙二醇、正丁醇或其组合，优选为丙二醇和乙醇。在一些实施方案中，将原料药粉碎，先用水提取，然后用10％-80％的C2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到提取物组合物。在进一步优选的实施方案中，先将粉碎的原料药用水提取物，然后用60％-75％的C2-6醇的水溶液提取，将两种提取液相混合，得到提取物组合物。
在一些实施方案中，将原料药粉碎，先用水提取，然后用10％-80％的丙二醇和/或乙醇的水溶液提取，再将两种提取物相混合，得到提取物组合物。在一些实施方案中，将原料药粉碎，先用水提取，然后用60％-75％的丙二醇和/或乙醇的水溶液提取，再将两种提取物相混合，得到提取物组合物。
在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成10-20目的粗粉，加入5-10倍的水进行提取，提取温度为50-90℃，超声频率100-500w，获得提取液A1。残渣加2-10倍的乙醇、丙醇、丙二醇、正丁醇或其组合进行提取，提取温度为50-90℃，超声频率100-500w，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。在一些实施方案中，将提取物组合物通过滤膜过滤以进行纯化，并得到浓缩液。在一些实施方案中，采用5000-10000道尔顿超滤膜过滤，收取滤液。在一些实施方案中，采用100-1000道尔顿的纳米滤膜过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成10-20目的粗粉，加入5-10倍的水进行提取，提取温度为50-90℃，获得提取液A1；将残渣加2-10倍的乙醇、丙醇、丙二醇、正丁醇或其组合进行提取，提取温度为50-90℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。在一些实施方案中，所述原料药粉碎成10目或20目的粗粉。在一些实施方案中，加入5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或它们之间的倍数范围的水进行提取，提取温度为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃或它们之间的温度范围，超声频率200-400w，获得提取液A1。在一些实施方案中，将残渣加2倍、3倍、4倍、5倍或它们之间的倍数范围的乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1)进行提取，提取温度为50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、80℃、90℃或它们之间的温度范围，超声频率200-400w，获得提取液A2。在一些实施方案中，所述乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1体积百分比)为10％-80％的乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1体积百分比)。在一些实施方案中，所述乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1体积百分比)为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％或它们之间范围的乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1体积百分比)。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整至1000g，即得表示浓度为100％的提取液。
在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，超声频率300W，提取温度约60℃，获得提取液A1；将残渣加入约3倍的约60％乙醇进行提取，超声频率300W，提取温度约70℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率200W，提取温度约70℃，获得提取液A1；将残渣加入约3倍的约70％丙二醇进行提取，超声频率200W，提取温度约60℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率400W，提取温度约60℃，获得提取液A1；残渣加入约4倍的60％乙醇+75％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，超声频率400W，提取温度70℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率300W，提取温度约70℃，获得提取液A1；残渣加入约4倍的75％乙醇+60％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，超声频率300W，提取温度55℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约6倍的水进行提取，超声频率200W，提取温度约70℃，获得提取液A1；残渣加入约5倍75％乙醇溶剂进行提取，超声频率300W，提取温度65℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻，分别取原料药粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，超声频率300W，提取温度约60℃，获得提取液A1；将残渣加入约3倍的约60％乙醇进行提取，超声频率300W，提取温度约70℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：防风12％、川芎24％、当归12％、杏仁22％、白蔹20％和泽泻10％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻，分别取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率200W，提取温度约70℃，获得提取液A1；将残渣加入约3倍的约70％丙二醇进行提取，超声频率200W，提取温度约60℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：防风16％、川芎12％、当归17％、杏仁30％、白蔹23％和泽泻2％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻，分别取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率400W，提取温度约60℃，获得提取液A1；残渣加入约4倍的60％乙醇+75％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，超声频率400W，提取温度70℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：防风20％、川芎20％、当归16％、杏仁25％、白蔹14％和泽泻5％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻，分别取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率300W，提取温度约70℃，获得提取液A1；残渣加入约4倍的75％乙醇+60％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，超声频率300W，提取温度55℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％和泽泻8％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻，分别取取原料药粉碎成20目粗粉，加入约6倍的水进行提取，超声频率200W，提取温度约70℃，获得提取液A1；残渣加入约5倍75％乙醇溶剂进行提取，超声频率300W，提取温度65℃，获得提取液A2。合并提取液A1和A2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％和泽泻8％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
本发明的第三方面涉及由如在本发明第二方面所限定的制备方法获得的本发明的中药复方组合物。在一些实施方案，通过所述方法获得的中药复方组合物具有优异的协同抗炎、控油、抑菌作用。在一些实施方案中，所述中药复方组合物包含防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻。进一步地，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定。
本发明的第四方面涉及预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述中药复方组合物具有优异的协同抗炎、控油、抑菌作用。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。
在本发明的第五方面涉及中药复方组合物在制备预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘的产品中的用途。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是对皮肤具有祛痤疮、祛粉刺和/或祛痘作用的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述产品是对皮肤具有祛痤疮、祛粉刺和/或祛痘作用的产品。在一些实施方案中，所述中药复方组合物具有优异的协同抗炎、控油、抑菌作用。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述产品是药物制剂或化妆品。
在本发明的第六方面涉及一种药物制剂或化妆品，其中所述药物制剂或化妆品包含中药复方组合物，该中药复方组合物含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻，或由它们组成。在一些实施方案，所述药物制剂或化妆品具有优异的协同抗炎、控油、抑菌作用。在一些实施方案中，药物制剂或化妆品包含中药复方组合物作为活性成分以及一种或多种美容学或药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在一些实施方案中，所述药物制剂或化妆品是霜剂、乳液、糊剂、软膏剂、面膜、凝胶剂、洗剂或精华液。在一些实施方案中，本发明的药物制剂或化妆品还可以含有一种或多种其它成分，如植物提取物、营养性添加剂、表面活性剂、香精与香料、色素、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、紫外线吸收剂、收敛剂、助渗剂、pH值调节剂等。本领域技术人员可以根据他们的常识和具体需要进行选择。在一些实施方案中，在药物制剂或化妆品中，所述中药复方组合物按重量计占所述药物制剂或化妆品重量的约0.1-20％、优选2-15％，更优选5-10％。
在本发明的第七方面涉及一种美容方法，其包括涂抹含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是药物制剂或化妆品。在一些实施方案，所述美容方法有优异的协同抗炎、控油、抑菌作用。在一些实施方案中，本发明涉及一种美容方法，其包括涂抹包含所述中药复方组合物的药物制剂或化妆品。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述药物制剂或化妆品如在本发明的第六方面所限定的。
本发明的有益效果如下：
根据本发明的含有防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和/或泽泻的中药复方组合物以及含有所述组合物的药物制剂或化妆品具有预料不到的技术效果，特别是具有优异的协同抗炎、控油、抑菌作用，本发明含有六种原料药的提取物与含有五种原料药提取物相比对皮肤的有益效果显著提高，具有更好的协同作用。
可选择的，也可以对单个原料药分别进行提取获得提取物，然后将得到的提取物混合，从而得到本发明的提取物组合物。可以采用已知的提取方法对原料药进行提取，但优选的，采用本发明说明书所述的方法进行提取。通过本发明方法制备的产品具有对皮肤的优异的协同抗炎、控油、抑菌作用，更加稳定、安全、无副作用。
具体实施方式
本发明可通过以下实施方案进行实施，但本发明并不限于此。
本发明实施方案中涉及的百分比如无明确指示均为重量百分比。
本发明实施方案中采用的仪器设备均为本领域常规仪器设备并可采用符合相应标准的仪器设备替代。
本发明实施方案中采用的试剂如无明确指示均为市售分析纯试剂。
本发明所提及的原材料及仪器设备均为本领域常用原材料及仪器设备，仅为示例，并不旨在限定本发明的保护范围。本领域技术人员可以基于本发明的公开的内容选取等效的原材料及相关仪器设备。
1、中药复方组合物的制备
实施例1
取植物材料1000g，其中防风12％、川芎24％、当归12％、杏仁22％、白蔹20％、泽泻10％，粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，超声频率300W，提取温度约60℃，获得提取液A1；将残渣加入约3倍的约60％乙醇进行提取，超声频率300W，提取温度约70℃，获得提取液A2；合并A1、A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
实施例2
取植物材料1000g，其中防风16％、川芎12％、当归17％、杏仁30％、白蔹23％、泽泻2％，粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率200W，提取温度约70℃，获得提取液A1；残渣加入约3倍的约70％丙二醇进行提取，提取温度约60℃，超声频率200W，获得提取液A2。合并A1、A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
实施例3
取植物材料1000g，其中防风20％、川芎20％、当归16％、杏仁25％、白蔹14％、泽泻5％，粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率400W，提取温度约60℃，获得提取液A1；残渣加入约4倍的60％乙醇+75％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，超声频率400W，提取温度70℃，获得提取液A2。合并A1、A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
实施例4
取植物材料1000g，其中防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％、泽泻8％，粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，超声频率300W，提取温度约70℃，获得提取液A1；残渣加入约4倍的75％乙醇+60％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，超声频率300W，提取温度55℃，获得提取液A2。合并A1、A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
实施例5
取植物材料1000g，其中防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％、泽泻8％，粉碎成20目粗粉，加入约6倍的水进行提取，超声频率200W，提取温度约70℃，获得提取液A1；残渣加入约5倍的75％乙醇溶剂进行提取，超声频率200W，提取温度65℃，获得提取液A2。合并A1、A2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
实施例6
分别取植物材料防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻1000g，分别参照实施例1方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻提取液各1000g，再按照实施例1的比例进行组合，最终得到符合的标示浓度为100％的提取液。
实施例7
分别取植物材料防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻1000g，分别参照实施例2方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻提取液各1000g，再按照实施例2的比例进行组合，最终得到符合的标示浓度为100％的提取液。
实施例8
分别取植物材料防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻1000g，分别参照实施例3方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻提取液各1000g，再按照实施例3的比例进行组合，最终得到符合的标示浓度为100％的提取液。
实施例9
分别取植物材料防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻1000g，分别参照实施例4方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻提取液各1000g，再按照实施例4的比例进行组合，最终得到符合的标示浓度为100％的提取液。
实施例10
分别取植物材料防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻1000g，分别参照实施例5方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的防风、川芎、当归、杏仁、白蔹、泽泻提取液各1000g，再按照实施例5的比例进行组合，最终得到符合的标示浓度为100％的提取液。
对比实施例1
取植物材料1000g，其中川芎23％、当归22％、杏仁31％、白蔹19％、泽泻5％，采用与实施例1类似的方法进行提取。
比实施例2
取植物材料1000g，其中防风22％、当归23％、杏仁25％、白蔹17％、泽泻8％，采用与对比实施例1类似的方法进行提取。
对比实施例3
取植物材料1000g，其中防风22％、川芎21％、杏仁26％、白蔹24％、泽泻7％，采用与对比实施例1类似的方法进行提取。
对比实施例4
取植物材料1000g，其中防风24％、川芎23％、当归24％、白蔹20％、泽泻9％，采用与对比实施例1类似的方法进行提取。
对比实施例5
取植物材料1000g，其中防风22％、川芎20％、当归20％、杏仁30％、泽泻8％，采用与对比实施例1类似的方法进行提取。
2、体外功效测试对比
2.1 5-α还原酶抑制实验(抑制雄激素水平的研究)
2.1.1实验试剂：
HaCaT细胞(CAS,Shanghai,China)、睾酮(T，Dr.Ehrenstorfer)、二氢睾酮(DHT,Sigma)、NADPH(Roche Diagnostics)、胰酶、T-d3(Sigma)、乙酸乙酯(国药化学试剂有限公司)、甲醇(Fisher Scientific)、DMEM培养基(Grand Island,NY,USA)。
2.1.2样品配制：
实施例1-10的待测样品：样品浓度0.1％、0.5％、1％(v/v)。取实施例1-10制备的标示浓度为100％的提取液，加入DMEM培养基稀释100倍得1％浓度样品，用1％浓度样品对半稀释得0.5％浓度样品，最后用0.5％浓度样品稀释5倍得0.1％浓度样品。
对比实施例1-5与实施例组配制方法相同，样品浓度为1％(v/v)。
2.1.3实验方法：
使用对数生长期的HaCaT细胞，待其密度达到80％的时候，用胰酶消化4min后，再加入两倍体积量的新鲜培养基终止消化。使用离心机800r·min-1，4min离心，弃去上层培养基，加入新鲜培养基重悬。以2×105/孔的密度接种于24孔板中，每孔1mL，在培养箱中培养24h，待细胞贴壁后加药。按照一式三份(n＝3)，分别加入实施例1-10(0.1％、0.5％、1％)、对比实施例1-5(1％)的待筛选样品500μL(阳性对照5μM度他雄胺、空白对照组加同体积的新鲜培养基，待其与细胞作用30min后，加入含25μM T和250μM NADPH的培养基500μL，在培养箱中反应24h后，将培养基(1mL)取出，置于10mL离心管中，加入内标T-d3使其终浓度为10ng/mL，再加入3倍体积的乙酸乙酯，上下颠倒混匀，离心10000g，5min，取出同体积的上清液，氮气吹干。样品置于-20℃中保存。将吹干的样品用200μL的甲醇复溶，进入HPLC中进行DHT含量检测。5-α还原酶抑制率(％)＝100％*(空白组DHT含量-实验组DHT含量)/空白组DHT含量
2.1.3实验结果：
实施例1-10提取物各剂量组均有一定程度的5-α还原酶抑制作用。随浓度升高，实施例组对5-α还原酶的抑制作用更显著(P<0.01)，并呈剂量依赖性。对比实施例组对5-α还原酶抑制作用显著低于实施例组(P<0.01)。具体实验数据见图1和图2。
雄激素(睾酮(T)、二氢睾酮(DHT)等)对痤疮的发生起关键作用，其可介导皮脂腺过量分泌，继而堵塞毛囊皮脂管口引发痤疮。而5-α还原酶能够直接促进雄激素分泌，催化T转化为活性更强的DHT。从图1和图2中可以看出，本发明要求保护的中药复方组合物能够有效抑制5-α还原酶活性，从而抑制雄激素引起的皮脂腺分泌异常，具有潜在地预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘的功效。
2.2痤疮丙酸杆菌最小抑菌浓度实验(抑制痤疮致病菌的研究)
2.2.1实验试剂：
厌氧液体培养基(北京路桥)、厌氧琼脂(北京路桥)、日本三菱MGC厌氧产气袋(三菱气体化学股份有限公司)、痤疮丙酸杆菌ATCC6919(中国工业微生物菌种保藏管理中心)。
2.2.2样品配制：
实施例1-10的待测样品：样品浓度40％、20％、10％、5％、2.5％、
1.25％、0.625％、0.0125％(v/v)。取实施例1-10制备的标示浓度为100％的提取液适量，加入无菌水，配制成上述浓度样品。
对比实施例1-5与实施例组配制方法相同，同样样品浓度为40％、20％、10％、5％、2.5％、1.25％、0.625％、0.0125％(v/v)。
2.2.3实验方法：
将菌株在厌氧琼脂上复苏，37℃厌氧培养48h，再次接种到厌氧琼脂上37℃厌氧培养48h后在厌氧液体培养基(PH＝5.64)中制成痤疮丙酸杆菌浓度为105CFU。取96孔微量板加入150μL稀释为40％、20％、10％、5％、2.5％、1.25％、0.625％、0.0125％不同浓度的待筛选样品(实施例1-10、对比实施例1-5)与150μL带菌厌氧液体培养基，阳性对照组加入300μL带菌厌氧液体培养基，空白对照组加入300μL无菌厌氧液体培养基，每个稀释液做3个平行，厌氧培养37℃厌氧培养48h后，观察生长情况，以阳性对照生长良好为准。取无菌落生长的最低孔样品浓度为最小抑菌浓度(MIC)。
2.2.3实验结果：
实验结果表明，实施例1-10提取物均在较低浓度下对痤疮丙酸杆菌有显著抑制作用，但是对比实施例1-5没有表现出显著抑制作用。具体数据请参见表1，痤疮丙酸杆菌是导致痤疮的首要微生物，本实验结果表明本发明要求保护的中药复方组合物在较低浓度就能够显著抑制痤疮丙酸杆菌，从而能够有效减少痤疮致病菌滋生，具有潜在地预防、缓解、改善和/或治疗痤疮的功效。
表1
Figure BDA0003584948790000201
2.3对痤疮丙酸杆菌THP-1模型白介素1β抑制作用实验(抑制痤疮炎症的研究)
2.3.1实验试剂：人白介素-1βELISA试剂盒(上海吉泰依科赛生物科技有限公司)、人单核细胞THP-1细胞(中国典型培养物保藏中心)、痤疮丙酸杆菌菌株(上海复祥生物科技有限公司)。
2.3.2实验方法：
2.3.2.1供试物对THP-1细胞安全浓度的测定
在庖肉培养基中培养痤疮丙酸杆菌至对数生长期，将痤疮丙酸杆菌离心后重悬于PBS中，进行后续实验。1000g离心5min收集对数生长期细胞，再加入新鲜无血清培养基，将细胞浓度稀释为1×105个/mL，在96孔板中以每孔100μL接种。待筛选样品实施例1-10、对比实施例1-5分别用无血清培养基稀释并以100μL/孔加药，于37℃，5％CO2静置培养36h。在细胞被预处理36h后，以20μL/孔加MTT溶液，培养基内MTT浓度是0.5mg/mL，再于37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养4h。待MTT与细胞充分反应后，3000rpm离心96孔板10min使悬浮细胞沉淀，吸出上清液，再以150μL/孔加入DMSO，37℃振荡10min溶解结晶。在检测波长570nm和参比波长630nm下测定光吸收值，从而计算得出供试物对细胞增殖的影响，细胞存活率为80％以上为待筛选样品安全浓度。得到安全浓度为1％(v/v)。
2.3.2.2供试物对THP-1细胞IL-1β分泌的炎症因子测定
1000g离心5min收集对数期细胞，再加入新鲜无血清培养基把细胞浓度稀释为1×106个/mL，在96孔板中以每孔100μL接种。将1％安全浓度下的待筛选样品(实施例1-10和对比实施例1-5)用无血清培养基稀释并以100μL/孔加药，于37℃，5％CO2静置培养4h。收集对数生长期时的P.acnes菌体，用无菌PBS将菌浓度稀释至2×108CFU/mL。在待筛选样品预处理细胞4h后，加入25μL的菌悬液(阴性对照加入25μL的菌悬液，空白对照加入25μL无菌PBS缓冲液)，混合后于37℃，5％CO2孵育24h。刺激24h后，3000rpm离心10min收集上清样品，通过ELISA试剂盒检测IL-1β含量。
2.3.3实验结果：
实验结果表明，在安全浓度下实施例1-10对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞IL-1β分泌有显著抑制作用。但对比实施例1-5对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞IL-1β分泌的抑制率均低于50％，相比实施例组没有显著抑制作用。具体数据请参见表2。由表2可以得出，本发明要求保护的中药复方组合物能够显著抑制痤疮丙酸杆菌诱导的细胞IL-1β分泌，具有潜在地预防、缓解、改善和/或治疗痤疮、粉刺和/或青春痘的功效。
表2
Figure BDA0003584948790000211
Figure BDA0003584948790000221

Claims (18)

1.一种具有祛痘作用的中药复方组合物，其中所述组合物由如下原料药制成：防风10-25％、川芎10-25％、当归10-25％、杏仁20-40％、白蔹10-25％和泽泻2-10％；或者
所述组合物由如下原料药的提取物组成：防风10-25％、川芎10-25％、当归10-25％、杏仁20-40％、白蔹10-25％和泽泻2-10％。
2.根据权利要求1所述的中药复方组合物，其中所述组合物由如下原料药制成：防风12-20％、川芎10-24％、当归12-18％、杏仁22-35％、白蔹10-23％和泽泻2-10％；或者
所述组合物由如下原料药的提取物组成：防风12-20％、川芎10-24％、当归12-18％、杏仁22-35％、白蔹10-23％和泽泻2-10％。
3.根据权利要求1所述的中药复方组合物，其中所述组合物由如下原料药制成：防风12-19％、川芎10-20％、当归12-17％、杏仁22-30％、白蔹10-20％和泽泻2-8％；或者
所述组合物由如下原料药的提取物组成：防风12-19％、川芎10-20％、当归12-17％、杏仁22-30％、白蔹10-20％和泽泻2-8％。
4.根据权利要求1所述的中药复方组合物，其中所述组合物由如下原料药制成：防风12％、川芎24％、当归12％、杏仁22％、白蔹20％和泽泻10％；或者
所述组合物由如下原料药的提取物组成：防风12％、川芎24％、当归12％、杏仁22％、白蔹20％和泽泻10％。
5.根据权利要求1所述的中药复方组合物，其中所述组合物由如下原料药制成：防风16％、川芎12％、当归17％、杏仁30％、白蔹23％和泽泻2％；或者
所述组合物由如下原料药的提取物组成：防风16％、川芎12％、当归17％、杏仁30％、白蔹23％和泽泻2％。
6.根据权利要求1所述的中药复方组合物，其中所述组合物由如下原料药制成：防风20％、川芎20％、当归16％、杏仁25％、白蔹14％和泽泻5％；或者
所述组合物由如下原料药的提取物组成：防风20％、川芎20％、当归16％、杏仁25％、白蔹14％和泽泻5％。
7.根据权利要求1所述的中药复方组合物，其中所述组合物由如下原料药制成：防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％和泽泻8％；或者
所述组合物由如下原料药的提取物组成：防风19％、川芎10％、当归18％、杏仁35％、白蔹10％和泽泻8％。
8.一种制备权利要求1-7中任一项所述的中药复方组合物的方法，所述方法包括：
称取原料药并粉碎，所述原料药为防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和泽泻；将粉碎的原料药用水提取，然后用含10％-80％的C2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到提取物组合物，或者
分别称取原料药并粉碎，所述原料药为防风、川芎、当归、杏仁、白蔹和泽泻；将粉碎的各原料药分别按照如下方法提取：首先用水提取，然后用含10％-80％的C2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到各单独的原料药提取物，随后将各单独原料药提取物混合，得到提取物组合物。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述C2-6醇为乙醇、丙醇、丙二醇、正丁醇或其组合；用水提取的温度为50-90℃；用含10％-80％的C2-6醇的水溶液提取的温度为50-90℃。
10.根据权利要求8或9所述的方法，进一步包括将得到提取物组合物进行过滤进行纯化，并得到浓缩液。
11.根据权利要求8或9所述的方法制备的中药复方组合物。
12.根据权利要求1-7和11中任一项所述的中药复方组合物在制备祛痘产品中的用途。
13.一种具有祛痘作用的药物制剂或化妆品，其中包含根据权利要求1-7和11中任一项所述的中药复方组合物作为活性成分以及一种或多种美容学或药学上可接受的载体。
14.一种具有祛痘作用的药物制剂或化妆品，其中包含根据权利要求1-7和11中任一项所述的中药复方组合物作为活性成分以及一种或多种美容学或药学上可接受的稀释剂。
15.一种具有祛痘作用的药物制剂或化妆品，其中包含根据权利要求1-7和11中任一项所述的中药复方组合物作为活性成分以及一种或多种美容学或药学上可接受的赋形剂。
16.根据权利要求13-15中任一项所述的药物制剂或化妆品，其中所述药物制剂或化妆品为霜剂、乳液、糊剂、软膏剂、面膜、凝胶剂、洗剂或精华液。
17.根据权利要求13-15中任一项所述的药物制剂或化妆品，其中所述中药复方组合物按重量计占所述药物制剂或化妆品重量的0.1-20％。
18.根据权利要求16所述的药物制剂或化妆品，其中所述中药复方组合物按重量计占所述药物制剂或化妆品重量的0.1-20％。
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