CN114601787B - 一种复合制剂、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本申请提供了一种复合制剂、制备方法及其应用，其中，复合制剂应用于治疗激素依赖性皮炎。包括以下组分：卡波姆0.50‑2.00％、甘油5.00‑15.00％、氮酮0.50‑6.00％、羟苯甲酯0‑0.40％、三乙醇胺0.50‑3.00％、纯化水75.00‑90.00％、丹皮酚提取物0.01‑0.10％以及地榆煎浸膏1.00‑10.00％。其中，所述地榆煎浸膏所含各组分配比如下：龙胆草：生地榆：苦参：牡丹皮：紫草：甘草为1.5：1.5：1：1：1：1。本申请对激素依赖性皮炎具有显著的缓解治疗作用。解决相关技术中使用地榆煎湿敷治疗HDD，存在中药煎煮费有效物质提取不充分、使用不方便的问题。

Description

一种复合制剂、制备方法及其应用

技术领域

本申请涉及复合制剂制备及用途技术领域，特别涉及一种复合制剂、制备方法及其应用。

背景技术

面部激素性皮炎(hormone dependence dermatitis，HDD)是接触性皮炎的一种，其病因是长期外用含有氟元素的皮质类固醇激素制品而引起的一种慢性皮炎。表现为面部潮红、红斑、丘疹及毛细血管扩张，可伴有瘙痒及灼热感。

目前，相关技术中使用地榆煎湿敷治疗HDD，但因具体作用机制尚不明确，且传统中药湿敷存在中药煎煮费时、有效物质提取不充分、使用不方便、易污染衣物等诸多因素，使得患者接受度较差。

本申请提供的复合制剂对临床疗效确切的中药湿敷方剂“地榆煎”进行凝胶制剂改良研究，充分发挥中医药疗效，为中医药复方外用制剂研究提供可借鉴的经验。同时具有安全性高和费用低的特点，使中医药在保障人民健康方面有更加广阔的应用天地，造福社会。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种复合制剂、制备方法及其应用，具体为地榆煎凝胶制剂，以解决相关技术中使用地榆煎湿敷治疗HDD，但因具体作用机制尚不明确，且传统中药湿敷存在中药煎煮费时、有效物质提取不充分、使用不方便、易污染衣物的问题。

第一方面，本申请提供了一种复合制剂，应用于治疗激素依赖性皮炎，包括以下组分：卡波姆0.50-2.00％、甘油5.00-15.00％、氮酮0.50-6.00％、羟苯甲酯0-0.40％、三乙醇胺0.50-3.00％、纯化水75.00-90.00％、丹皮酚提取物0.01-0.10％以及地榆煎浸膏1.00-10.00％。

可选的，所述地榆煎浸膏所含各组分配比如下：龙胆草：生地榆：苦参：牡丹皮：紫草：甘草为1.5：1.5：1：1：1：1。

第二方面，本申请提供了一种复合制剂在治疗激素依赖性皮炎中的应用。

第三方面，本申请提供了一种复合制剂制备方法，所述方法具体包括以下步骤：

取牡丹皮粉碎饮片，采用10倍量纯化水浸泡4h后蒸馏，回收蒸馏液，得到丹皮酚溶液；

将所述丹皮酚溶液加入5％氯化钠溶液后放置过夜，析出白色结晶；

将所述白色结晶过滤并采用纯化冷水冲洗，得到丹皮酚提取物；

取紫草粉碎饮片，采用5倍量80％乙醇浸泡12h，收集第一提取液；

将剩余药渣采用10倍量80％的乙醇渗漉4h，得到第二提取液；

将所述第一提取液和所述第二提取液合并，得到紫草素提取液；

将上述经提取后的牡丹皮、紫草药渣与龙胆草、生地榆、苦参和甘草进行水煎煮法提取，药液与所述紫草素提取液合并，浓缩至干，得到地榆煎浸膏；

在纯化水中加入增稠剂加热30min，依次加入保湿剂、透皮促渗剂、抑菌剂、丹皮酚提取物、地榆煎浸膏；并使用PH调节剂调节PH值，搅拌均匀即得所述复合制剂。

由以上技术方案可知，本申请提供了一种复合制剂，应用于治疗激素依赖性皮炎，包括以下组分：卡波姆0.50-2.00％、甘油5.00-15.00％、氮酮0.50-6.00％、羟苯甲酯0-0.40％、三乙醇胺0.50-3.00％、纯化水75.00-90.00％、丹皮酚提取物0.01-0.10％以及地榆煎浸膏1.00-10.00％。其中，所述地榆煎浸膏所含各组分配比如下：龙胆草：生地榆：苦参：牡丹皮：紫草：甘草为1.5：1.5：1：1：1：1。本申请的复合制剂具体为地榆煎凝胶制剂，对激素依赖性皮炎具有显著的缓解治疗作用。解决相关技术中使用地榆煎湿敷治疗HDD，但因具体作用机制尚不明确，且传统中药湿敷存在中药煎煮费时、有效物质提取不充分、使用不方便、易污染衣物的问题。

附图说明

为了更清楚地说明本申请的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本申请提供的技术路线示意图；

图2为本申请提供的豚鼠HDD皮肤变化示意图；

图3为本申请提供的地榆凝胶干预豚鼠HDD前后皮肤镜检变化示意图；

图4为本申请提供的豚鼠HDD组织病理学变化示意图。

具体实施方式

下面将详细地对实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下实施例中描述的实施方式并不代表与本申请相一致的所有实施方式。仅是与权利要求书中所详述的、本申请的一些方面相一致的系统和方法的示例。

本申请可为中医传统外用制剂的进一步研发提供研究思路。通常将皮肤屏障功能修复作为治疗HDD的重要评价指标，本申请拟通过研究不同浓度梯度的地榆凝胶对皮肤屏障的修复功能以及通过何种机制来实现皮肤屏障功能的修复，以此逐步开展动物药理学实验，为地榆凝胶治疗HDD提供理论依据，也为进一步的深入研究奠定理论基础。

第一方面，本申请提供了一种复合制剂，应用于治疗激素依赖性皮炎，包括以下组分：卡波姆0.50-2.00％、甘油5.00-15.00％、氮酮0.50-6.00％、羟苯甲酯0-0.40％、三乙醇胺0.50-3.00％、纯化水75.00-90.00％、丹皮酚提取物0.01-0.10％以及地榆煎浸膏1.00-10.00％。

其中，所述地榆煎浸膏所含各组分配比如下：龙胆草：生地榆：苦参：牡丹皮：紫草：甘草为1.5：1.5：1：1：1：1。

通常，相关技术中的功效型凝胶制剂多是以现代药理学研究为依据，以添加中药有效成分为主的制剂。而本申请所研究的“地榆凝胶”中药组成与配比则是完全遵循中医药组方原则组成的复方制剂，对HDD有全面的综合治疗作用，具有中医药外治特色。同时本申请也将为中医药复方外用制剂研究提供可借鉴的经验，充分发挥中医药疗效明显、安全性高、费用较低的特点，使中医药在保障人民健康方面有更加广阔的应用天地，造福社会。

进一步，本申请提供了一种复合制剂，具体为地榆凝胶，其组分最佳配比为：卡波姆1.00％、甘油8.00％、氮酮0.50％、羟苯甲酯0.10％、三乙醇胺0.60％、纯化水84.80％、丹皮酚提取物0.01％以及地榆煎浸膏4.99％。

由上述可知，本申请提供复合制剂的实际应用价值如下：根据不同剂型的适用范围和适应症，相关技术中的皮肤病中医外用传统制剂有软膏、酊剂、洗剂、溶液等。本申请通过对临床疗效确切的中药湿敷方剂“地榆煎”进行凝胶制剂改良研究，扩充了中医制剂类型。其配方更加科学合理，稳定性佳，携带方便、使用方便，与传统的湿敷制剂相比更容易被人们接受，以期为广大HDD患者带来福音，具有广阔的市场前景。

第二方面，本申请提供了一种复合制剂在治疗激素依赖性皮炎中的应用。

为了证实复合制剂具有上述新用途，本申请进行了如下实验。

1.复合制剂制备工艺优化及质量标准研究

1.1“地榆煎”浸膏制备

按照1.5:1.5:1:1:1:1比例，分别取龙胆草，生地榆，苦参，牡丹皮，紫草，甘草6味中药，粉碎。因牡丹皮主要活性成分丹皮酚易随水蒸气挥发，紫草主要活性成分紫草素不溶于水等特点，对传统水煎煮法进行改良。

取牡丹皮粉碎饮片，以10倍量纯化水浸泡4h，水蒸气蒸馏，回收乳白色蒸馏液，即含丹皮酚溶液，加入5％NaCl，4℃冰箱放置过夜。可见析出白色结晶，采用定性滤纸过滤，纯化冷水冲洗后，即得白色结晶样丹皮酚提取物，称重。

取紫草粉碎饮片，用5倍量80％乙醇浸泡12h，收集提取液，药渣再加10倍量80％的乙醇渗漉4h，将两次提取液合并，得紫草素提取液。

将上述经提取后的牡丹皮、紫草药渣与剩余4味药进行水煎煮法提取，药液与上述紫草素提取液合并，浓缩至干，即得“地榆煎”浸膏，称重。

1.2不同浓度梯度复合制剂制备

依据中药提取物(丹皮酚提取物及地榆煎浸膏)所占复合制剂百分比分别参照上法制备为不同浓度梯度复合制剂，即低剂量组(2.5％)、中剂量组(5％)、高剂量组(10％)。

各组凝胶配制：

低剂量组具体为凝胶低剂量组：卡波姆1.03％、甘油8.21％、氮酮0.51％、羟苯甲酯0.10％、三乙醇胺0.62％、纯化水87.03％、丹皮酚提取物0.01％、地榆煎浸膏2.49％。

中剂量组具体为凝胶中剂量组：卡波姆1.00％、甘油8.00％、氮酮0.50％、羟苯甲酯0.10％、三乙醇胺0.60％、纯化水84.80％、丹皮酚提取物0.01％、地榆煎浸膏4.99％。

高剂量组具体为凝胶高剂量组：卡波姆0.95％、甘油7.58％、氮酮0.47％、羟苯甲酯0.09％、三乙醇胺0.57％、纯化水80.34％、丹皮酚提取物0.02％、地榆煎浸膏9.98％。

1.3制剂基质成分筛选

1.3.1增稠剂

常用凝胶剂基质有卡波姆940、明胶、羟甲基纤维素钠、海藻酸钠、透明质酸等。分别取以上5种基质各0.5g，加入50ml纯化水中，考察各基质溶胀性、颜色、涂展性，筛选出最佳基质。

1.3.2PH调节剂

PH值可影响角质形成细胞的功能，从而影响角质层功能恢复。因此，制剂需符合皮肤表面PH值范围。因部分增稠剂如卡波姆呈酸性，需调节其PH值至正常范围，鉴于对皮肤刺激性、制剂安全性等诸多因素，本申请将三乙醇胺作为PH调节剂。

1.3.3保湿剂

本申请剂型为水性凝胶，长期放置可因失水而变干燥，影响涂抹，故需加入一定保湿剂。常用保湿剂为甘油和丙二醇等，甘油用量范围为5％～15％，丙二醇用量范围为5％～10％。

1.3.4透皮促渗剂

由于皮肤独特的皮肤屏障作用，大多数药物难以通过皮肤吸收，因此，需借助透皮促渗剂，以提高经皮吸收药物浓度。常用透皮促渗剂为氮酮，用量范围为1％～6％。

1.3.5抑菌剂

凝胶长期放置易霉变，常需加入抑菌剂，常用安全性高的抑菌剂为羟苯甲酯、羟苯乙酯，用量范围为单一酯类最大允许用量不超过0.4％(以酸计)。

1.4正交实验设计

凝胶剂处方中卡波姆-940用量多在1％。中药浸膏用量多在5％-15％，甘油用量范围为5％-15％，氮酮用量范围为0.5％-1.5％，抑菌剂用量低于0.4％。据此设计正交试验，以成型性、涂展度、粘度、气味、耐寒性、耐热性、离心稳定性作为凝胶制备工艺考察标准，得出如上复合制剂最佳配比处方。

1.5复合制剂制备

在纯化水中加入增稠剂卡波姆，加热30min，待其充分溶胀，按上述最佳配比依次加入保湿剂甘油、透皮促渗剂氮酮、抑菌剂羟苯甲酯、丹皮酚提取物、地榆煎浸膏，加入PH调节剂三乙醇胺调节PH值至6-7，搅拌均匀即得所述复合制剂。

2.技术方案

(1)建立HDD豚鼠模型：

豚鼠的表皮和真皮均在正常人体皮肤厚度范围之内，豚鼠的一般生理指标，以及血液学和血液化学成分等方面也与人相近，故本申请选用豚鼠进行研究。

购买雌性豚鼠53只，实验前适应性饲养7d后开始实验，自由进食。53只豚鼠于背部左右两侧对称部位选5cm×5cm区域剃毛，脱毛膏脱去残余毛发，随机抽取45只用于HDD模型建立。

其中，采用的建模方法如下：造模药物选用0.05％丙酸氯倍他索酊剂。用含0.05％丙酸氯倍他索酊剂均匀涂于背部右侧，另一侧用75％酒精涂抹作为自身对照，涂抹剂量为使液体均匀覆盖裸露皮肤即可。剩余8只即为空白对照组，均在背部右侧涂抹75％酒精，另一侧不做任何处理，该8只豚鼠做空白对照组(涂抹酒精做空白对照目的是为了说明酒精对造模过程无影响)。模型组每天涂药2次，并按摩1-2min，直至充分吸收，连续7周，停药2-3天后，随机选取5只取材，观察皮肤组织形态学变化以验证模型是否成功建立。

(2)技术路线

图1为本申请提供的技术路线示意图，参见图1，剩余40只HDD模型豚鼠造模成功7d后，随机分5组，每组8只，分别为空白基质组(空白基质凝胶)、阳性对照组(0.03％他克莫司软膏)、地榆凝胶低剂量组(2.5％)、中剂量组(5％)、高剂量组(10％)。各制剂涂抹剂量为使药物均匀覆盖裸露皮肤即可，每日涂药2次，连续涂药3周。自给药开始每天观察实验动物背部激发部位皮肤的改变，如红斑、丘疹及肿胀的情况。于末次给药12h后，脱毛，予麻醉后，取材。

(3)技术方法

单因素分析、正交试验法确定地榆凝胶的辅料最优处方和制备工艺；高效液相、薄层色谱分析法对地榆凝胶进行定量、定性检测；采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》对不同批次地榆凝胶共有峰进行相似度及主成分分析。采用HE染色、免疫组化法对皮肤组织进行形态学观察；WB等免疫学实验技术方法检测相关蛋白表达情况。通过对HDD豚鼠模型治疗前后的相关指标进行检测，探讨地榆凝胶的治疗机制和作用；运用皮肤镜、皮脂测试仪等设备对HDD豚鼠模型进行客观评价。

进一步地，具体进行的指标检测如下：

(1)皮肤含水量、油脂及皮肤镜检测

分别于HDD模型建立前、后及治疗后，使用皮脂测试仪检测皮肤含水量、油脂情况；皮肤镜检测表皮、真皮结构变化。

(2)局部皮肤病理形态学观察

取豚鼠背部皮肤，0.5×0.5cm，去掉皮下脂肪后，4％多聚甲醛液固定。HE染色后观察皮肤形态学变化。

3.实验结果

3.1豚鼠HDD皮肤变化

本申请于豚鼠背部两侧进行脱毛处理，脱毛区范围约5*5cm，左侧涂抹75％酒精，右侧涂抹丙酸氯倍他索酊剂。涂抹49天后，参见图2中的视图b和视图c，豚鼠右侧皮肤出现红肿、皮屑等症状，视图d模型组涂抹空白基质凝胶治疗，视图e阳性对照组予他克莫司软膏治疗，视图f、g、h分别给予地榆凝胶低、中、高剂量组治疗。3周后，可见经空白基质凝胶治疗后，红肿仍未消退；地榆凝胶低剂量组皮肤仍可见部分潮红，经他克莫司软膏、地榆凝胶中、高剂量组治疗后，皮肤红肿消退明显，皮屑消退，表明地榆凝胶对HDD具有缓解作用。

3.2地榆凝胶对豚鼠HDD干预前后皮肤含水量检测

本申请于治疗前、后采用皮脂检测仪对HDD模型豚鼠进行检测，结果如表1所示。采用SPSS 23.0进行实验数据分析，模型组水份、油份含量较空白组水份、油份含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，可以看出长期糖皮质激素的应用可使皮肤水分及油份减少，HDD模型制造成功。地榆凝胶低、中、高剂量组及阳性对照组水份、油份含量较模型组水份、油份含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)，表明本制剂可提高皮肤水份、油份含量，对HDD具有缓解作用。

表1地榆凝胶对豚鼠HDD皮肤水份、油份含量影响(x±s，n＝8)

3.3地榆凝胶对豚鼠HDD干预前后红外成像测试仪检测

本申请于治疗前、后采用红外成像测试仪对HDD模型豚鼠进行检测，结果如表2所示。采用SPSS 23.0进行实验数据分析，模型组造模区体温较空白组造模区体温升高，差异有统计学意义(P<0.05)，表明长期糖皮质激素的应用可使皮温升高，HDD模型制造成功。地榆凝胶高剂量组及阳性对照组造模区体温较模型组升高，差异有统计学意义(P<0.05)，表明本制剂可降低HDD造模区皮温，对HDD具有缓解作用。

表2对豚鼠HDD干预前后红外成像测试仪检测造模区皮温(x±s，n＝8)

3.4地榆凝胶对豚鼠HDD干预前后皮肤镜观察

图3可见，皮肤镜显示模型组豚鼠表皮下毛细血管扩张，表皮上可见散在鳞屑分布，表明HDD模型造模成功。地榆凝胶低剂量组治疗后，鳞屑明显减少，仍可见毛细血管扩张。地榆凝胶低、中、高剂量组及他克莫司凝胶治疗后，可见鳞屑明显消退，地榆凝胶中、高剂量组毛细血管扩张充血状态均较模型组改善明显，表明地榆凝胶对HDD具有缓解作用。

3.5地榆凝胶对豚鼠HDD干预后组织病理改变

图4为本申请提供的皮肤组织HE染色病理结果示意图。参见图4，模型组角质层融合性角化不全，表皮层可见明显增生，棘层肥厚，表皮层不规则向下延伸，真皮层毛细血管扩张充血，真皮乳头及真皮毛细血管周围淋巴细胞浸润，表明HDD模型造模成功。相比于模型组，地榆凝胶中、高剂量组及阳性对照组皮肤较模型组皮肤角质层结构及棘层增生改善，皮肤变薄；地榆凝胶高剂量组较地榆凝胶中剂量组及阳性对照组炎症部位减少，表明地榆凝胶对HDD有缓解作用。

由以上技术方案可知，本申请旨在研究地榆凝胶对HDD豚鼠模型干预效果，因此，模型成功建立后，本申请通过皮肤镜、皮脂测试仪等设备，从局部皮损微观状态、皮肤水份、油脂含量等对皮炎模型进行客观评价，以期为激素依赖性皮炎提供客观的量化评价标准。进一步本申请设地榆凝胶不同浓度并分组，分为低剂量组(浸膏2.5％)、中剂量组(浸膏5％)、高剂量组(浸膏10％)，通过比较不同浓度复合制剂在改善皮肤炎症、修复皮肤屏障等方面的效果，筛选最佳药物浓度。

本申请还提供了一种复合制剂制备方法，方法具体包括以下步骤：

S1、取牡丹皮粉碎饮片，采用10倍量纯化水浸泡4h后蒸馏，回收蒸馏液，得到丹皮酚溶液。

S2、将所述丹皮酚溶液加入5％氯化钠溶液后放置过夜，析出白色结晶。

S3、将所述白色结晶过滤并采用纯化冷水冲洗，得到丹皮酚提取物。

S4、取紫草粉碎饮片，采用5倍量80％乙醇浸泡12h，收集第一提取液。

S5、将剩余药渣采用10倍量80％的乙醇渗漉4h，得到第二提取液。

S6、将所述第一提取液和所述第二提取液合并，得到紫草素提取液。

S7、将上述经提取后的牡丹皮、紫草药渣与龙胆草、生地榆、苦参和甘草进行水煎煮法提取，药液与所述紫草素提取液合并，浓缩至干，得到地榆煎浸膏。

S8、在纯化水中加入增稠剂加热30min，依次加入保湿剂、透皮促渗剂、抑菌剂、丹皮酚提取物、地榆煎浸膏；以及加入PH调节剂调节PH值，搅拌均匀即得所述复合制剂。

由以上技术方案可知，本申请提供了一种复合制剂制备方法及其应用，应用于治疗激素依赖性皮炎，包括以下组分：卡波姆0.50-2.00％、甘油5.00-15.00％、氮酮0.50-6.00％、羟苯甲酯0-0.40％、三乙醇胺0.50-3.00％、纯化水75.00-90.00％、丹皮酚提取物0.01-0.10％以及地榆煎浸膏1.00-10.00％。其中，所述地榆煎浸膏所含各组分配比如下：龙胆草：生地榆：苦参：牡丹皮：紫草：甘草为1.5：1.5：1：1：1：1。本申请的复合制剂具体为地榆煎凝胶制剂，对激素依赖性皮炎具有显著的缓解治疗作用。解决相关技术中使用地榆煎湿敷治疗HDD，但因具体作用机制尚不明确，且传统中药湿敷存在中药煎煮费时、有效物质提取不充分、使用不方便、易污染衣物的问题。

本申请提供的实施例之间的相似部分相互参见即可，以上提供的具体实施方式只是本申请总的构思下的几个示例，并不构成本申请保护范围的限定。对于本领域的技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下依据本申请方案所扩展出的任何其他实施方式都属于本申请的保护范围。

Claims (3)

1.一种复合制剂，应用于治疗激素依赖性皮炎，其特征在于，由以下组分组成：卡波姆0.50-2.00%、甘油5.00-15.00%、氮酮0.50-6.00%、羟苯甲酯0-0.40%、三乙醇胺0.50-3.00%、纯化水75.00-90.00%、丹皮酚提取物0.01-0.10%以及地榆煎浸膏1.00-10.00%，所述地榆煎浸膏各组分配比如下：龙胆草：生地榆：苦参：牡丹皮：紫草：甘草为1.5：1.5：1：1：1：1。

2.一种复合制剂在制备治疗激素依赖性皮炎组合物中的应用，其特征在于，所述复合制剂为权利要求1所述的复合制剂。

3.一种复合制剂制备方法，其特征在于，所述复合制剂为所述权利要求1中的复合制剂，所述方法具体包括以下步骤：

取牡丹皮粉碎饮片，采用10倍量纯化水浸泡4h后蒸馏，回收蒸馏液，得到丹皮酚溶液；

将所述丹皮酚溶液加入5%氯化钠溶液后放置过夜，析出白色结晶；

将所述白色结晶过滤并采用纯化冷水冲洗，得到丹皮酚提取物；

取紫草粉碎饮片，采用5倍量80％乙醇浸泡12h，收集第一提取液；

将剩余药渣采用10倍量80％的乙醇渗漉4h，得到第二提取液；

将所述第一提取液和所述第二提取液合并，得到紫草素提取液；

将提取后的牡丹皮、紫草药渣与龙胆草、生地榆、苦参和甘草进行水煎煮法提取，药液与所述紫草素提取液合并，浓缩至干，得到地榆煎浸膏；

在纯化水中加入增稠剂加热30min，依次加入卡波姆、甘油、氮酮、羟苯甲酯、丹皮酚提取物、地榆煎浸膏；并使用PH调节剂调节PH值，搅拌均匀即得所述复合制剂。