CN114600869A - 一种细胞运输保存液及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种细胞运输保存液及其应用，所述细胞运输保存液按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.01mg/ml~2.5mg/ml、氯化钠0.05~10mg/ml、氯化钾0.05~3mg/ml、氯化钙0.05~1mg/ml、乳酸钠0.05~20mg/ml、氨磷汀0.05‑2.5mg/ml、右雷佐生0.05‑3.0mg/ml，其余为水。本发明的细胞运输保存液对多种细胞的活力维持在7天左右，与其他保存液相比在维持时间方面有一定的优势；本发明的细胞运输保存液为人体细胞在运输过程中使用的液体，成分较为简易，均为可正常输入人体的成分，无任何人源、动物源成分，对临床治疗用细胞向药品化方向发展有较大的作用。

Description

一种细胞运输保存液及其应用
技术领域
本发明涉及生命科学及医学技术领域，具体来说，涉及一种细胞运输保存液及其应用。
背景技术
细胞用于临床治疗涉及细胞采集、培养扩增、细胞多样化处理、细胞移植治疗等多个过程。这些过程在实施地点上一般包括实验室、医院，因此会涉及到细胞在不同地点之间运输使用。
目前已经有一些关于细胞运输保存液方面的专利，如CN108770836A、CN109090104A用于多种细胞的运输保存，基本上都是完全化学成分的细胞活性保存液，含pH缓冲液、多种渗透压稳定剂和多种氧自由基清除剂，添加了细胞维持代谢所需的能量底物，成分较为复杂，细胞活力维持3-5天不等。总体来说成分较为复杂，成本偏高，在推动细胞临床治疗简化方面作用有限，这些保存液中的大部分成分都不能进入人体，对细胞的临床治疗向药品化方向发展作用有限，尤其是贴壁培养的细胞在未来进行临床治疗时不得不需要专业人员进行酶消化和使用离心机、超净台等设备，而这些大大阻碍了细胞像药品一样便捷地用于临床治疗。
发明内容
针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种细胞运输保存液及其应用，能够克服现有技术的上述不足。
为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：
一种细胞运输保存液，所述细胞运输保存液按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.01~2.5mg/ml、氯化钠0.05~10mg/ml、氯化钾0.05~3mg/ml、氯化钙0.05~1mg/ml、乳酸钠0.05~20mg/ml、氨磷汀0.05~2.5mg/ml、右雷佐生0.05~3.0mg/ml，其余为水。
优选的，所述细胞运输保存液按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.2mg/ml、氯化钠3mg/ml、氯化钾1mg/ml、氯化钙0.8mg/ml、乳酸钠8mg/ml、氨磷汀0.1mg/ml、右雷佐生0.1mg/ml，其余为水。
优选的，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：甲硫氨酸0.1~20mg/ml、缬氨酸0.05~30mg/ml、赖氨酸0.2~20mg/ml、异亮氨酸0.05~40mg/ml、苯丙氨酸0.1~20mg/ml、亮氨酸0.2~30mg/ml、色氨酸0.05~20mg/ml、苏氨酸0.05~30mg/ml。
优选的，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：甲硫氨酸2.5mg/ml、缬氨酸3mg/ml、赖氨酸5mg/ml、异亮氨酸2mg/ml、苯丙氨酸3.5mg/ml、亮氨酸2mg/ml、色氨酸2mg/ml、苏氨酸4mg/ml。
优选的，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：甘氨酸0.05~30mg/ml、丙氨酸0.05~30mg/ml、丝氨酸0.05~30mg/ml、天冬氨酸0.05~20mg/ml、谷氨酸（及其胺）0.05~20mg/ml、脯氨酸0.05~30mg/ml、精氨酸0.05~40mg/ml、组氨酸0.05~30mg/ml、酪氨酸0.05~30mg/ml、胱氨酸0.05~50mg/ml。
优选的，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：甘氨酸3mg/ml、丙氨酸3.5mg/ml、丝氨酸1.5mg/ml、天冬氨酸2mg/ml、谷氨酸（及其胺）5.5mg/ml、脯氨酸2.2mg/ml、精氨酸4.6mg/ml、组氨酸2.5mg/ml、酪氨酸3.5mg/ml、胱氨酸8.5mg/ml。
优选的，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：维生素A 0.05~150IU/ml、维生素B2 0.05~25ug/ml、维生素D 0.05~500IU/ml、维生素E 0.05~30ug/ml、维生素C 0.5~300ug/ml。
优选的，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：维生素A 1.25IU/ml、维生素B2 2.5ug/ml、维生素D 10IU/ml、维生素E 7.5ug/ml、维生素C 25ug/ml。
根据本发明的另一方面，提供了一种上述细胞运输保存液的应用：收取细胞后计数，然后用所述细胞运输保存液重悬细胞，得到细胞悬液，0.83ml所述细胞运输保存液中细胞个数为1×102~1×106，并保持细胞悬液和空气的比例为1:0.2~30，然后保存于2~15℃。
优选地，将所述细胞悬液加入到生理盐水中，通过注射方式直接输入人体。
本发明的有益效果：本发明的细胞运输保存液对多种细胞的活力维持在7天左右，与其他保存液相比在维持时间方面有一定的优势；本发明的细胞运输保存液为人体细胞（尤其是贴壁培养的细胞）在运输过程中使用的液体，成分较为简易，均为可正常输入人体的成分，无任何人源、动物源成分，对临床治疗用细胞向药品化方向发展有较大的作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是使用本发明实施例所述的细胞运输保存液保存的骨髓间充质干细胞从酶消化下来到第七天细胞活率变化示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种细胞运输保存液，按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖2.5mg/ml、氯化钠0.05mg/ml、氯化钾3mg/ml、氯化钙0.05mg/ml、乳酸钠20mg/ml、氨磷汀0.05mg/ml、右雷佐生3.0mg/ml，其余为水。
实施例2
一种细胞运输保存液，按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.01mg/ml、氯化钠10mg/ml、氯化钾0.05mg/ml、氯化钙1mg/ml、乳酸钠0.05mg/ml、氨磷汀2.5mg/ml、右雷佐生0.05mg/ml，其余为水。
实施例3
一种细胞运输保存液，按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖2.5mg/ml、氯化钠0.05mg/ml、氯化钾3mg/ml、氯化钙0.05mg/ml、乳酸钠20mg/ml、氨磷汀0.05mg/ml、右雷佐生3.0mg/ml，甲硫氨酸0.1mg/ml、缬氨酸30mg/ml、赖氨酸0.2mg/ml、异亮氨酸40mg/ml、苯丙氨酸0.1mg/ml、亮氨酸30mg/ml、色氨酸0.05mg/ml、苏氨酸30mg/ml，甘氨酸0.05mg/ml、丙氨酸30mg/ml、丝氨酸0.05mg/ml、天冬氨酸20mg/ml、谷氨酸（及其胺）0.05mg/ml、脯氨酸30mg/ml、精氨酸0.05mg/ml、组氨酸30mg/ml、酪氨酸0.05mg/ml、胱氨酸50mg/ml，其余为水。
实施例4
一种细胞运输保存液，按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.01mg/ml、氯化钠10mg/ml、氯化钾0.05mg/ml、氯化钙1mg/ml、乳酸钠0.05mg/ml、氨磷汀2.5mg/ml、右雷佐生0.05mg/ml，甲硫氨酸20mg/ml、缬氨酸0.05mg/ml、赖氨酸20mg/ml、异亮氨酸0.05mg/ml、苯丙氨酸20mg/ml、亮氨酸0.2mg/ml、色氨酸20mg/ml、苏氨酸0.05mg/ml，甘氨酸30mg/ml、丙氨酸0.05mg/ml、丝氨酸30mg/ml、天冬氨酸0.05mg/ml、谷氨酸（及其胺）20mg/ml、脯氨酸0.05mg/ml、精氨酸40mg/ml、组氨酸0.05mg/ml、酪氨酸30mg/ml、胱氨酸0.05mg/ml，其余为水。
实施例5
一种细胞运输保存液，按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.2mg/ml、氯化钠3mg/ml、氯化钾1mg/ml、氯化钙0.8mg/ml、乳酸钠8mg/ml、氨磷汀0.1mg/ml、右雷佐生0.1mg/ml、甲硫氨酸2.5mg/ml、缬氨酸3mg/ml、赖氨酸5mg/ml、异亮氨酸2mg/ml、苯丙氨酸3.5mg/ml、亮氨酸2mg/ml、色氨酸2mg/ml、苏氨酸4mg/ml、甘氨酸3mg/ml、丙氨酸3.5mg/ml、丝氨酸1.5mg/ml、天冬氨酸2mg/ml、谷氨酸（及其胺）5.5mg/ml、脯氨酸2.2mg/ml、精氨酸4.6mg/ml、组氨酸2.5mg/ml、酪氨酸3.5mg/ml、胱氨酸8.5mg/ml、维生素A 1.25IU/ml、维生素B2 2.5ug/ml、维生素D 10IU/ml、维生素E 7.5ug/ml、维生素C 25ug/ml，其余为水。
实施例7
一种细胞运输保存液，按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖2.5mg/ml、氯化钠0.05mg/ml、氯化钾3mg/ml、氯化钙0.05mg/ml、乳酸钠20mg/ml、氨磷汀0.05mg/ml、右雷佐生3.0mg/ml，甲硫氨酸0.1mg/ml、缬氨酸30mg/ml、赖氨酸0.2mg/ml、异亮氨酸40mg/ml、苯丙氨酸0.1mg/ml、亮氨酸30mg/ml、色氨酸0.05mg/ml、苏氨酸30mg/ml，甘氨酸0.05mg/ml、丙氨酸30mg/ml、丝氨酸0.05mg/ml、天冬氨酸20mg/ml、谷氨酸（及其胺）0.05mg/ml、脯氨酸30mg/ml、精氨酸0.05mg/ml、组氨酸30mg/ml、酪氨酸0.05mg/ml、胱氨酸50mg/ml、维生素A0.05IU/ml、维生素B2 25ug/ml、维生素D 0.05IU/ml、维生素E 30ug/ml、维生素C 0.5ug/ml，其余为水。
实施例8
一种细胞运输保存液，按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.01mg/ml、氯化钠10mg/ml、氯化钾0.05mg/ml、氯化钙1mg/ml、乳酸钠0.05mg/ml、氨磷汀2.5mg/ml、右雷佐生0.05mg/ml，甲硫氨酸20mg/ml、缬氨酸0.05mg/ml、赖氨酸20mg/ml、异亮氨酸0.05mg/ml、苯丙氨酸20mg/ml、亮氨酸0.2mg/ml、色氨酸20mg/ml、苏氨酸0.05mg/ml，甘氨酸30mg/ml、丙氨酸0.05mg/ml、丝氨酸30mg/ml、天冬氨酸0.05mg/ml、谷氨酸（及其胺）20mg/ml、脯氨酸0.05mg/ml、精氨酸40mg/ml、组氨酸0.05mg/ml、酪氨酸30mg/ml、胱氨酸0.05mg/ml、维生素A150IU/ml、维生素B2 0.05ug/ml、维生素D 500IU/ml、维生素E 0.05~30ug/ml、维生素C 0.5~300ug/ml，其余为水。
实施例1-8所述细胞运输保存液的使用方法主要是把细胞收取后，计数，然后用所述细胞运输保存液重悬细胞，以5ml冻存管为例，0.83ml运输保存液中细胞个数1×102~1×106，并保持细胞悬液和空气的比例为1:0.2~30（最佳1:5），然后保存于2~15℃（最佳12℃）的保温盒中，在需要临床应用时（有效期7天之内），直接从保温盒中取出细胞悬液并加入100ml生理盐水中静脉或其他方式直接输入人体即可。该方案的形成是通过对多种细胞如间充质干细胞、成纤维细胞运输保存的重复实验获得。所述细胞运输保存液中所有成分均为临床常用，输入后对人体无任何不良影响，这样就保证了临床治疗用的细胞不会接触动物源成分，如血清和成分来源不明的蛋白和氨基酸，另外也不需要专业人员在专门的细胞室进行酶消化和使用离心机、超净台等设备，对临床治疗用细胞向药品化方向发展有较大的作用。
实施例9
MSC组：将骨髓来源的间充质干细胞，从培养瓶中消化下来，经过1000转/分钟离心5分钟，用生理盐水重悬，重复洗涤三次后，计数，然后用实施例5所述细胞运输保存液重悬细胞，得到细胞悬液，0.83ml所述细胞运输保存液中细胞个数为1×102~1×106，并保持细胞悬液和空气的比例为1:5，这样保证了细胞在低代谢下的氧需求，然后在12℃分别保存第0天（也就是细胞加入细胞运输保存液之前的状态）、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天，温度的保证主要通过日常用于胰岛素保存的保温盒得到。由于在常温环境中，细胞内各种酶和其他生物大分子反应、代谢旺盛，耗氧高，分泌物也可能较大。这些生理过程会产生的大量氧自由基和脂质过氧化物。它们必须及时被清除，否则引起环境pH和渗透压变化，造成细胞溶胀和死亡。而在低温下，细胞代谢较低，这些问题可以得到很大的缓解。如图1所示：MSC组结果从0d开始，细胞收取过程中因为酶消化损伤的原因，细胞活率在98.83%左右，在7d的时候，细胞活率逐渐降低到96%左右。
Sham组：使用间充质干细胞常温运输液，其按原料质量百分比计由25～40％的海藻糖溶液、20～40％的红细胞储存液、1～10％的肝素钙和20～45％的人血白蛋白注射液组成，其余步骤均与MSC组相同。如图1所示：Sham组结果从0d开始，细胞活率在98.12%左右，在7d的时候，细胞活率逐渐降低到43.41%左右。
另外，我们对用实施例1-8所述的细胞运输保存液运输保存后的细胞进行一定的流式检测显示细胞分型并无变化，状态影响较小，对一些分泌能力较强的细胞如内皮细胞进行检测，结果表明细胞在保存液中，血管内皮生长因子的分泌较正常状态下分泌明显减少，考虑为细胞在该保存液中低温保存的情况下产物分泌较少，对保存液内部基本成分维持的负面影响较小。
综上所述，借助于本发明的上述技术方案，本发明的细胞运输保存液对多种细胞的活力维持在7天左右，与其他保存液相比在维持时间方面有一定的优势；本发明的细胞运输保存液为人体细胞（尤其是贴壁培养的细胞）在运输过程中使用的液体，成分较为简易，均为可正常输入人体的成分，无任何人源、动物源成分，对临床治疗用细胞向药品化方向发展有较大的作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种细胞运输保存液，其特征在于，所述细胞运输保存液按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.01~2.5mg/ml、氯化钠0.05~10mg/ml、氯化钾0.05~3mg/ml、氯化钙0.05~1mg/ml、乳酸钠0.05~20mg/ml、氨磷汀0.05~2.5mg/ml、右雷佐生0.05~3.0mg/ml，其余为水。
2.根据权利要求1所述的细胞运输保存液，其特征在于，所述细胞运输保存液按质量浓度计包括以下组分：葡萄糖0.2mg/ml、氯化钠3mg/ml、氯化钾1mg/ml、氯化钙0.8mg/ml、乳酸钠8mg/ml、氨磷汀0.1mg/ml、右雷佐生0.1mg/ml，其余为水。
3.根据权利要求1所述的细胞运输保存液，其特征在于，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：甲硫氨酸0.1~20mg/ml、缬氨酸0.05~30mg/ml、赖氨酸0.2~20mg/ml、异亮氨酸0.05~40mg/ml、苯丙氨酸0.1~20mg/ml、亮氨酸0.2~30mg/ml、色氨酸0.05~20mg/ml、苏氨酸0.05~30mg/ml。
4.根据权利要求3所述的细胞运输保存液，其特征在于，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：甲硫氨酸2.5mg/ml、缬氨酸3mg/ml、赖氨酸5mg/ml、异亮氨酸2mg/ml、苯丙氨酸3.5mg/ml、亮氨酸2mg/ml、色氨酸2mg/ml、苏氨酸4mg/ml。
5.根据权利要求1所述的细胞运输保存液，其特征在于，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：甘氨酸0.05~30mg/ml、丙氨酸0.05~30mg/ml、丝氨酸0.05~30mg/ml、天冬氨酸0.05~20mg/ml、谷氨酸0.05~20mg/ml、脯氨酸0.05~30mg/ml、精氨酸0.05~40mg/ml、组氨酸0.05~30mg/ml、酪氨酸0.05~30mg/ml、胱氨酸0.05~50mg/ml。
6.根据权利要求5所述的细胞运输保存液，其特征在于，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：甘氨酸3mg/ml、丙氨酸3.5mg/ml、丝氨酸1.5mg/ml、天冬氨酸2mg/ml、谷氨酸5.5mg/ml、脯氨酸2.2mg/ml、精氨酸4.6mg/ml、组氨酸2.5mg/ml、酪氨酸3.5mg/ml、胱氨酸8.5mg/ml。
7. 根据权利要求1所述的细胞运输保存液，其特征在于，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：维生素A 0.05~150IU/ml、维生素B2 0.05~25ug/ml、维生素D0.05~500IU/ml、维生素E 0.05~30ug/ml、维生素C 0.5~300ug/ml。
8. 根据权利要求7所述的细胞运输保存液，其特征在于，所述细胞运输保存液还包括以下组分中的一种或多种：维生素A 1.25IU/ml、维生素B2 2.5ug/ml、维生素D 10IU/ml、维生素E 7.5ug/ml、维生素C 25ug/ml。
9.一种如权利要求1-8任意一项所述的细胞运输保存液的应用，其特征在于，收取细胞后计数，然后用所述细胞运输保存液重悬细胞，得到细胞悬液，0.83ml所述细胞运输保存液中细胞个数为1×102~1×106，并保持细胞悬液和空气的比例为1:0.2~30，然后保存于2~15℃。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，将所述细胞悬液加入到生理盐水中，通过注射方式直接输入人体。
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