CN114594182B

CN114594182B - 一种化妆品中5种禁用组分的检测方法

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Publication number: CN114594182B
Application number: CN202210225287.2A
Authority: CN
Inventors: 郦明浩; 陈海燕; 李聪; 綦艳; 伍志航; 刘辉; 唐穗平; 万春艳; 罗美芬; 霍丽斯; 罗敏婷; 陈启镌; 许庆鹏; 胡腾鑫
Priority date: 2022-03-09
Filing date: 2022-03-09
Publication date: 2023-05-30
Anticipated expiration: 2042-03-09
Also published as: CN114594182A

Abstract

本发明涉及一种化妆品中5种禁用成分的检测方法，该方法采用液相色谱法可高效快速的检测出化妆品中的4‑甲基间苯二胺、甲苯2.6二胺、3,3’‑二邻甲苯胺、2‑甲氧基‑5‑甲基苯胺、4‑羟基吲哚五种禁用物质，该检测方法适用于染发类、美容修饰类化妆品中4‑甲基间苯二胺等5种组分的测定。

Description

一种化妆品中5种禁用组分的检测方法

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体为一种化妆品中5中禁用组分的检测方法。

背景技术

2021年9月30日，《化妆品监督管理规定》通过，自2022年1月1日起施行，《化妆品监督管理规定》规定化妆品配方设计应当遵循安全优先原则、功效必需原则、配方极简原则，并规定化妆品应当从原料的安全、稳定、功能、配伍等方面，结合生理特点，评估所用原料的科学性和必要性，激素、抗感染类药物等禁用原料或者其他可能危害人体健康的物质不得添加。

4-甲基间苯二胺、甲苯2.6二胺、3,3’-二邻甲苯胺、2-甲氧基-5-甲基苯胺、4-羟基吲哚加入染色产品中可使皮毛、头发直接氧化成黑色，且在化妆品安全技术规范中无检验方法。目前尚未见到有采用液相色谱质谱联用法同时检测化妆品中4-甲基间苯二胺、甲苯2.6二胺、3,3’-二邻甲苯胺、2-甲氧基-5-甲基苯胺、4-羟基吲哚5种禁用组成的检测方法。

发明内容

本发明针对目前相关检测方法的空白，提供了一种针对性强，灵敏度高，检测种类多的检测方法，该方法采用液相色谱质谱联用法，可同时检测化妆品中4-甲基间苯二胺、甲苯2.6二胺、3,3’-二邻甲苯胺、2-甲氧基-5-甲基苯胺、4-羟基吲哚5种禁用成分。

为了解决上述问题，实现本发明的发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种化妆品中5种禁用成分的检测方法，包括如下步骤：

S1、准备工作：配制标准储备溶液、混合标准工作溶液备用；

S2、样品处理：称取样品 1.0 g（精确到 0.001 g），置于 10 mL 比色管中，加入5mL乙醇水溶液（1+1）涡旋 30 s，用乙醇水（1+1）溶液定容至刻度，超声提取15 min，以10000 r/min 转速离心 5 min，吸取上清液经 0.22μm 滤膜过滤后备用；

S3、液相色谱法测定，其中色谱条件：色谱柱：C16 柱（150 mm×3.0mm，3 μm），或等效色谱柱；

；

流动相比例：B为甲醇、 C为乙腈、 A为含庚烷磺酸钠的磷酸盐缓冲液；流速：1.0mL/min；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；检测波长：230nm；

S4、根据测量结果进行定性和定量判定；所述定性判定方法为：在相同试验条件下测定供试品溶液和筛查用混合标准溶液，记录供试品溶液和标准溶液中待测组分的色谱保留时间；若试样中检出与筛查用混合标准溶液中待测组分保留时间一致的色谱峰，偏差不超过规定的范围，则可以确定试样中检出对应的成分；所述定量判定方法为：取基质混合标准工作溶液依次测定，以待测组分的系列浓度为横坐标，待测组分的峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制基质标准曲线，其线性相关系数应大于 0.99；取供试品溶液测定，将对应的定量离子色谱峰面积代入线性回归方程；按计算公式计算样品中待测组分的含量。

进一步的，所述色谱检测时5种组分检出限、定量限等设定如下：4-甲基间苯二胺等5种组分的检出限、定量限、检出浓度、定量浓度

；

进一步的，所述定量判定的计算公式为：

式中：

；式中：

ω—样品中4-甲基间苯二胺等 5 种组分的质量分数，mg/kg；

ρ—供试品溶液中4-甲基间苯二胺等 5 种组分质量浓度，μg/L；

V—样品定容体积，mL；

m—样品取样量，g；

D—稀释倍数（如未稀释则为 1）。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

进一步的，所述液相色谱方法中检出结果存在不确定因素，可采用液相色谱-质谱法进行确证。在相同的试验条件下，如样品中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中对应成分一致，所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过规定范围，则可判断样品中存在对应的待测成分。

进一步的，所述液相色谱方法中确证的最大允许偏差如下：

；

质谱确证色谱及质谱条件：色谱条件：色谱柱：C18柱（1.7 μm，2.1×100 mm），或等效色谱柱；流动相：A：10m mol/L乙酸铵；B：乙腈；梯度洗脱程序

；

流速：0.30mL/min；柱温：40℃；进样量：2μL；质谱条件：离子源：电喷雾离子源（ESI）；

监测模式：正离子多反应监测模式；离子雾电压（IS）：5500 V 气帘气流速（CUR）：35L/min；

雾化气流速（GS1）：45L/min；辅助气流速（GS2）：45 L/min；离子源温度（TEM）：500℃；

进一步的，所述检测方法中，质谱监测离子对及相关电压参数设定

；

本发明样品经超声提取后，用高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，根据保留时间和紫外光谱定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法适用于染发类、美容修饰类化妆品中4-甲基间苯二胺、甲苯2.6二胺、3,3’-二邻甲苯胺、2-甲氧基-5-甲基苯胺、4-羟基吲哚等5 种组分的测定。

附图说明

图1 4-甲基间苯二胺等 5 种组分的提取离子流图

图2 4-甲基间苯二胺等5种组分色谱图

具体实施方式

结合实施例和附图对本发明作进一步说明，不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

1 试剂材料

除另有规定外，本方法种所用试剂均为分析纯，水为符

合 GB/T6682 的一级水。

1.1乙醇水溶液（1+1），无水乙醇分析纯。

1.2 乙腈，色谱纯。

1.3亚硫酸钠，分析纯。

1.4磷酸溶液：量取10mL磷酸，加水90mL，混匀。

1.5磷酸盐混合溶液：称取十二水合磷酸氢二钠1.8g、磷酸二氢钾2.8 g和庚烷磺酸钠1.0g，用水稀释至1L，混匀，用磷酸溶液（3.4）调pH至6，经0.45μm 滤膜过滤后备用

1.6标准品：4-甲基间苯二胺、甲苯2.6二胺、3,3’-二甲基联苯胺、2-甲氧基-5-甲基苯胺、4-羟基吲哚的标准品均≥98%。标准品的中文名称、英文名称、CAS 登入号、分子式、相对分子质量详见附录 A 中的表 A.1.

1.7标准储备溶液：称取4-甲基间苯二胺、甲苯2.6二胺、3,3’-二甲基联苯胺、2-甲氧基-5-甲基苯胺、4-羟基吲哚标准品各 0.1g（精确到 0.0001g），分别置于 10mL 棕色容量瓶中，加0.1g亚硫酸钠，用5mL无水乙醇溶解，用水定容至刻度。标准储备溶液于0℃-4℃冰箱中避光保存，应于2天内使用。

1.8混合标准工作溶液：分别准确量取标准储备液（3.6）适量，用无水乙醇配制得混合标准工作溶液，各组分浓度见表 1（浓度范围可根据实际情况进行调整）。基质混合标准系列浓度应现用现配。

表1 4-甲基间苯二胺等5种组分的混合标准工作溶液浓度

；

2 仪器和设备

2.1 高效液相色谱仪，二极管阵列器。

2.2 分析天平：感量 0.001 g。

2.3 超声波清洗器。

2.4 PH计。

2.5 高速离心机。

2.6涡旋振荡器。

3分析步骤

3.1 样品处理

称取样品 1.0 g（精确到 0.001 g），置于 10 mL 比色管中，加入5 mL乙醇水溶液（1+1）涡旋 30 s，用乙醇水（1+1）溶液定容至刻度，超声提取15 min，以 10000 r/min 转速离心 5 min，吸取上清液经 0.22μm 滤膜过滤后备用。

3.2参考色谱条件

色谱柱：C16 柱（150 mm×3.0mm，3 μm），或等效色谱柱；

流动相：梯度洗脱程序见表2。

流速：1.0 mL/min；

柱温：40 ℃；

检测波长：230nm；

进样量：10 μL。

表2梯度洗脱程序

；

流动相比例：B为甲醇、 C为乙腈、 A为含庚烷磺酸钠的磷酸盐缓冲液。

3.3 定量测定

取混合标准工作溶液（3.8）依次测定，以待测组分的系列浓度为横坐标，待测组分的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其线性相关系数应大于 0.99。取试样（5.1）测定，将对应的色谱峰面积代入标准曲线。按“6”计算样品中待测组分的含量。

3.4 平行试验

按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。

3.5 空白试验

除不加试样外，按上述步骤完成测定。

4 结果计算

结果按式（1）计算：

；式中：

ω—样品中4-甲基间苯二胺等 5 种组分的质量分数，mg/kg；

V—样品定容体积，mL；

m—样品取样量，g；

D—稀释倍数（如未稀释则为 1）。

5 精密度和回收率

在添加浓度 1 mg/kg～20mg/kg 浓度范围内，回收率为80%～110%，相对标准偏差小于 10%（n=6），其他浓度回收率为 90%～110%，相对标准偏差小于 8.5%（n=6）。

6 检出限和定量限

本方法中各组分的检出限、定量下限和取样量为 1.0 g

时的检出浓度、最低定量浓度见表 3。

表3 4-甲基间苯二胺等5种组分的检出限、定量限、

检出浓度、定量浓度

；

附录 A

4-甲基间苯二胺5 种组分的相关信息

；

附录 B

(规范性附录)

4-甲基间苯二胺等5种组分阳性结果的确证

如液相色谱方法中检出结果存在不确定因素，可采用液相色谱-质谱法进行确证。在相同的试验条件下，如样品中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中对应成分一致，所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过表1规定范围，则可判断样品中存在对应的待测成分。

表1 结果确证时相对离子丰度比的最大允许偏差

；

A.1参考色谱条件

色谱柱：C18柱（1.7 μm，2.1×100 mm），或等效色谱柱；

流动相：A：10m mol/L乙酸铵；B：乙腈

表2 梯度洗脱程序

；

流速：0.30mL/min；

柱温：40℃；

进样量：2μL

A.2参考质谱条件

离子源：电喷雾离子源（ESI）；

监测模式：正离子多反应监测模式；

离子雾电压（IS）：5500 V

气帘气流速（CUR）：35L/min

雾化气流速（GS1）：45L/min

辅助气流速（GS2）：45 L/min

离子源温度（TEM）：500℃

表3 质谱监测离子对及相关电压参数设定表

；

A.3检出限

本确证方法中，取样量为1.0g，定容体积为10mL,4-羟基吲哚的检出浓度为1μg/g，其余各组分的检出浓度为0.1μg/g。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，本发明的专利保护范围以权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种化妆品中5种禁用成分的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S2、样品处理：称取样品 1.0 g，置于 10 mL 比色管中，加入5 mL乙醇水溶液涡旋 30s，用乙醇水溶液定容至刻度，超声提取15 min，以 10000r/min 转速离心 5 min，吸取上清液经 0.22μm 滤膜过滤后备用；其中，所述乙醇水溶液中乙醇与水的体积比为1:1；

S3、液相色谱法测定，其中，色谱条件：色谱柱：C16 柱，色谱柱的规格为150mm×3.0mm，3μm；梯度洗脱程序：

；

流动相B为甲醇、流动相C为乙腈、流动相A为含庚烷磺酸钠的磷酸盐缓冲液；流速：1.0mL/min；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；检测波长：230 nm；

S4、根据测量结果进行定性和定量判定；定性判定方法为：在相同试验条件下测定供试品溶液和筛查用混合标准溶液，记录供试品溶液和标准溶液中待测组分的色谱保留时间；若试样中检出与筛查用混合标准溶液中待测组分保留时间一致的色谱峰，偏差不超过规定的范围，则可以确定试样中检出对应的成分；定量判定方法为：取基质混合标准工作溶液依次测定，以待测组分的系列浓度为横坐标，待测组分的峰面积为纵坐标，进行线性回归，绘制基质标准曲线，其线性相关系数应大于 0.99；取供试品溶液测定，将对应的色谱峰面积代入线性回归方程；按计算公式计算样品中待测组分的含量；

所述5种禁用成分为4-甲基间苯二胺、甲苯-2,6-二胺、4-羟基吲哚、2-甲氧基-5-甲基苯胺、3,3’-二甲基联苯胺。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱检测时5种组分检出限、定量限、检出浓度、定量浓度如下：

。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，定量判定的计算公式为：

式中：

；/>

式中：

ω—样品中5种禁用成分的质量分数，mg/kg；

ρ—供试品溶液中5种禁用成分的质量浓度，μg/L；

V—样品定容体积，mL；

m—样品取样量，g；

D—稀释倍数;

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字;

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，如液相色谱方法中检出结果存在不确定因素，可采用液相色谱-质谱法进行确证；在相同的试验条件下，如样品中检出的色谱峰的保留时间与标准溶液中对应成分一致，所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过规定范围，则可判断样品中存在对应的待测成分。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，确证的最大允许偏差如下：

；

质谱确证色谱及质谱条件：色谱条件：色谱柱为C18柱，色谱柱规格为1.7μm，2.1×100mm；流动相：A：10 mmol/L乙酸铵；B：乙腈；梯度洗脱程序：

；

流速：0.30mL/min；柱温：40℃；进样量：2μL；质谱条件：离子源：电喷雾离子源；

监测模式：正离子多反应监测模式；离子雾电压：5500 V；气帘气流速：35L/min；

雾化气流速：45L/min；辅助气流速：45 L/min；离子源温度：500℃。

6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，质谱监测离子对及相关电压参数如下：

。/>