CN108398499B - 一种化妆品中贝美格及其盐类的测定方法 - Google Patents

一种化妆品中贝美格及其盐类的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，包括如下步骤：(1)样品前处理：对化妆品样品进行前处理，得到滤液；(2)将得到的滤液采用高效液相色谱法进行测定；(3)绘制标准曲线，计算样品中贝美格及其盐类的含量。本发明采用高效液相色谱法测定化妆品中贝美格及其盐类，并采用液相色谱‑质谱联用对阳性样品进行确证。方法准确、快速、灵敏度高，检测限、回收率和精密度均符合要求，对于化妆品质量安全监测具有重要意义。

Description

一种化妆品中贝美格及其盐类的测定方法
技术领域
本发明涉及一种化学物质的检测方法，特别是涉及一种化妆品中贝美格及其盐类的测定方法。
背景技术
贝美格及其盐类作为一种中枢兴奋药，可直接兴奋呼吸中枢及血管运动中枢，在医学方面具有较为广泛的研究及应用。但贝美格及其盐类具有迟发毒性，会引起情绪不安，精神错乱、幻觉幻视等，在化妆品中添加会对人体健康造成潜在危害，我国《化妆品安全技术规范》(2015年版)中明确规定化妆品中不得添加贝美格及其盐类。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种结构简单、成本低、操作简便的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法。
一种化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，包括如下步骤：
(1)样品前处理：对化妆品样品进行前处理，得到滤液；
(2)将得到的滤液采用高效液相色谱法进行测定；
(3)绘制标准曲线，计算样品中贝美格及其盐类的含量。
本发明所述的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，还包括步骤(4)：对步骤(3)中检测出的阳性样品，采用液相色谱-质谱联用方法进行定性确证。
本发明所述的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，其中，步骤(2)中的高效液相色谱条件为：
色谱柱：C18，4.6mm×250mm，5μm；
流速：1.0mL/min；
流动相：体积比为50:50的甲醇和水，等度洗脱；
检测波长：210nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL。
本发明所述的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，其中，所述步骤(4)中的液相色谱-质谱联用条件如下：
液相色谱条件：
色谱柱：XBridge C18，150mm×2.1mm，3.5μm；
流动相：体积比为80:20的0.3％氨水溶液和乙腈；
流速：0.3mL/min；
柱温：30℃；
进样量：5μL；
质谱条件：
离子源：电喷雾电离源；
离子化模式：负离子模式；
毛细管电压：2.5kV；
萃取电压：3V；
离子源温度：150℃；
脱溶剂气温度：350℃；
数据采集方式：选择离子监测；
进行试样测定时，将样液适当稀释，按液相色谱-质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致，允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中含有贝美格及其盐类。
表1贝美格质谱分析参数
Figure BDA0001582168450000021
本发明所述的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，其中，所述化妆品为水剂类及洗面奶类，样品前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL离心管中，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声辅助提取20min后，以8000r/min转速离心15min后，取上清液过0.45μm有机系尼龙微孔滤膜，滤液上机测定。
本发明所述的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，其中，所述化妆品为乳液类，样品前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL离心管中，加入2g氯化钠，加入10mL甲醇，充分混匀，超声辅助提取20min后，以8000r/min转速离心15min后，取上清液过0.45μm有机系尼龙微孔滤膜，滤液上机测定。
本发明化妆品中贝美格及其盐类的测定方法与现有技术不同之处在于：本发明采用高效液相色谱法测定化妆品中贝美格及其盐类，并采用液相色谱-质谱联用对阳性样品进行确证。方法准确、快速、灵敏度高，检测限、回收率和精密度均符合要求，对于化妆品质量安全监测具有重要意义。
下面结合附图对本发明的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法作进一步说明。
附图说明
图1为本发明中贝美格的紫外吸收光谱图；
图2为本发明中贝美格的高效液相色谱图(100mg/L)；
图3为本发明中贝美格的高效液相色谱图(0.5mg/L)；
图4为本发明中贝美格的多反应监测色谱图(1mg/L)；
本发明附图中出现的所有英文的中文对照如下：
Abs：吸收度；wavelength/nm：波长/纳米；mAU：毫吸收度；t/min：时间/分钟。
具体实施方式
一、试剂和材料
甲醇：色谱纯。
氯化钠：分析纯。
贝美格标准储备液：称取适量贝美格标准品(精确至0.0001g)，用甲醇溶液配制成1000mg/L的标准储备液。
贝美格标准工作溶液：用甲醇溶液将贝美格标准储备液配制成浓度为0.2、0.5、1、2、5、10、20、50mg/L标准工作溶液。
二、仪器和设备
高效液相色谱仪：配有紫外检测器。
分析天平：感量为0.0001g。
离心机：转速不低于8000r/min。
超声波水浴。
注射器：5mL。
微孔滤膜：0.45μm，有机系尼龙膜。
三、分析步骤
1.样品前处理
(1)水剂类及洗面奶样品
取1g样品置于10mL离心管中，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声辅助提取20min后，以8000r/min转速离心15min后，取上清液过0.45μm有机系尼龙微孔滤膜，滤液上机测定。
(2)乳液类样品
取1g样品置于10mL离心管中，加入2g氯化钠，加入10mL甲醇，充分混匀，超声辅助提取20min后，以8000r/min转速离心15min后，取上清液过0.45μm有机系尼龙微孔滤膜，滤液上机测定。
2.测定条件
色谱柱：C18，4.6mm×250mm，5μm；
流速：1.0mL/min；
流动相：体积比为50:50的甲醇和水，等度洗脱；
检测波长：210nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL。
3.标准曲线的绘制
贝美格标准工作液按测定条件依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，得到标准回归方程，绘制标准工作曲线。
4.测定
对待测样品进行测定，用外标法定量。待测样液中贝美格含量应该标准曲线之内，超出线性范围则应稀释后在进行分析。对于有检出的样品，应进行质谱确证实验。
5.空白试验
除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。
6.结果计算
Figure BDA0001582168450000041
式中：
W———样品中贝美格的含量，mg/kg；
c———从标准工作曲线上查出的试样溶液中贝美格的浓度，mg/L；
V———样液最终定容体积，mL；
m———试样的质量，g。
注：测定结果以贝美格含量计算
7.检出限和定量限
贝美格及其盐类的检出限为0.2mg/kg，定量限为0.5mg/kg。
8.回收率和精密度
在添加浓度0.5mg/kg～50mg/kg浓度范围内，测得回收率85.11～107.40％，精密度试验测得相对标准偏差为3.7～9.3％。
9.允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10％。
10.液相色谱-质谱确证
对于高效液相色谱法检测出的阳性样品，采用液相色谱-质谱联用方法进行定性确证。
液相色谱-质谱联用条件如下：
液相色谱条件：
色谱柱：XBridge C18，150mm×2.1mm，3.5μm；
流动相：体积比为80:20的0.3％氨水溶液和乙腈；
流速：0.3mL/min；
柱温：30℃；
进样量：5μL；
质谱条件：
离子源：电喷雾电离源；
离子化模式：负离子模式；
毛细管电压：2.5kV；
萃取电压：3V；
离子源温度：150℃；
脱溶剂气温度：350℃；
数据采集方式：选择离子监测。
进行试样测定时，将样液适当稀释，按液相色谱-质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致，允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中含有贝美格及其盐类。
表1贝美格质谱分析参数
Figure BDA0001582168450000061
四、结果与分析
1.检测波长的选择
测定贝美格的最大吸收波长，扫描范围为200～400nm。经测定，贝美格在210nm处有最大吸收，因此设定它们的最大吸收波长为210nm，测量结果如图1所示。
2.色谱柱的选择
分别考察了XBridge C18(4.6mm×250mm,5μm)、XTerra C18(4.6mm×250mm,5μm)、Kromasil C18(4.6mm×250mm,5μm)和XBridge phenyl(4.6mm×250mm,5μm)对贝美格及其盐类色谱行为的影响。结果表明，各色谱柱对贝美格及其盐类色谱行为无明显差异，因此选择通用型C18(4.6mm×250mm,5μm)为本方法所选色谱柱，贝美格标准溶液高效液相色谱图如图2所示。
3.流动相的优化
分别选择甲醇-水、乙腈-水作为流动性，比较不同流动性对贝美格色谱行为的影响。结果表明，采用甲醇-水作为流动性，贝美格的色谱峰峰型较好。在此基础上，选择甲醇:水(40:60、45:55、50:50、55:45:、60:40)不同流动相比例等度洗脱，考察不同流动相比例对贝美格及其盐类的色谱保留时间的影响。结果表明，当甲醇所在流动性比例大于50％时，贝美格及其盐类保留时间较弱，这样会导致在实际检测中，受到严重的基质干扰现象。因此，流动相最终优化结果为甲醇：水＝50:50。
4.色谱柱温度选择
考察色谱柱温度对贝美格及其盐类出峰的影响。分别选择25℃、30℃、35℃条件下，结果表明，在各温度下，贝美格的色谱行为无明显差异。根据各地区及各不同实验室条件及实际温度的差异，柱温选择设定为30℃。
5.前处理提取溶剂的选择
比较甲醇和乙腈对贝美格及其盐类提取效果的影响。筛选经测定不含贝美格及其盐类的水剂类、洗面奶类和乳液类样品作为空白样品，向其中加入一定量贝美格标准溶液，充分混匀后进行提取。结果表明，用甲醇或乙腈进行提取，两者提取率均可达到95％，提取效果无明显差异。考虑到乙腈毒性较大，成本较高，因此，选择甲醇为提取溶剂。
五、方法的线性关系和定量限
1.线性关系
在本标准方法所确定的实验条件下，配制1000mg/L的贝美格标准储备液，以甲醇将其稀释至0.2、0.5、1、2、5、10、20、50mg/L不同浓度标准工作液；以峰面积为纵坐标，相应贝美格浓度为横坐标作图，在以上浓度范围内，贝美格及其盐类线性方程为y＝41.52x+2.387，相关系数r2＝0.999，呈良好的线性关系。
2.方法的检出限和定量限
经过检验方法的室内实验，结果表明，方法的检出限为0.2mg/kg，定量限为0.5mg/kg，贝美格及其盐类在定量限浓度的高效液相色谱图如图3所示。
六、方法的回收率和精密度
本标准方法对于贝美格及其盐类加标回收实验设定了0.5mg/kg、5mg/kg、50mg/kg三个添加浓度。待测样液中贝美格及其盐类含量应该标准曲线之内，超出线性范围则应稀释后在进行分析。按本检验方法所确定的实验条件，对每个添加浓度在水剂类、洗面奶类和乳液类样品均进行了6次试验，测得回收率85.11～107.40％，精密度试验测得相对标准偏差为3.7～9.3％。结果汇总于表2-4。
表2水剂类样品回收率和精密度试验结果
Figure BDA0001582168450000071
表3洗面奶类样品回收率和精密度试验结果
Figure BDA0001582168450000072
Figure BDA0001582168450000081
表4乳液类样品回收率和精密度试验结果
Figure BDA0001582168450000082
七、确证试验
对于高效液相色谱法检测出的阳性样品，采用本发明的液相色谱-质谱联用方法进行定性确证，贝美格的多反应监测色谱图如图4所示。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (3)

1.一种化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)样品前处理：对化妆品样品进行前处理，得到滤液；
(2)将得到的滤液采用高效液相色谱法进行测定；
高效液相色谱条件为：
色谱柱：C18，4.6mm×250mm，5μm；
流速：1.0mL/min；
流动相：体积比为50:50的甲醇和水，等度洗脱；
检测波长：210nm；
柱温：30℃；
进样量：10μL；
(3)绘制标准曲线，计算样品中贝美格及其盐类的含量；
所述化妆品为水剂类及洗面奶类样品时，样品前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL离心管中，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声辅助提取20min后，以8000r/min转速离心15min后，取上清液过0.45μm有机系尼龙微孔滤膜，滤液上机测定；
所述化妆品为乳液类时，样品前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL离心管中，加入2g氯化钠，加入10mL甲醇，充分混匀，超声辅助提取20min后，以8000r/min转速离心15min后，取上清液过0.45μm有机系尼龙微孔滤膜，滤液上机测定。
2.根据权利要求1所述的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，其特征在于：还包括步骤(4)：对步骤(3)中检测出的阳性样品，采用液相色谱-质谱联用方法进行定性确证。
3.根据权利要求2所述的化妆品中贝美格及其盐类的测定方法，其特征在于：所述步骤(4)中的液相色谱-质谱联用条件如下：
液相色谱条件：
色谱柱：XBridge C18色谱柱，150mm×2.1mm，3.5μm；
流动相：体积比为80:20的0.3％氨水溶液和乙腈；
流速：0.3mL/min；
柱温：30℃；
进样量：5μL；
质谱条件：
离子源：电喷雾电离源；
离子化模式：负离子模式；
毛细管电压：2.5kV；
萃取电压：3V；
离子源温度：150℃；
脱溶剂气温度：350℃；
数据采集方式：选择离子监测；
表1 贝美格质谱分析参数
Figure FDA0002775743560000021
进行试样测定时，将样液适当稀释，按液相色谱-质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致，允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中含有贝美格及其盐类。
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