CN114591427A - 一种鼠抗mpt32蛋白杂交瘤细胞株13b12、基于其的单克隆抗体及其应用 - Google Patents

一种鼠抗mpt32蛋白杂交瘤细胞株13b12、基于其的单克隆抗体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12、基于其的单克隆抗体及其应用。该鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12，于2022年1月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021305。该细胞株分泌的鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体与MPT32蛋白反应效价高，使得鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体适合作为免疫诊断试剂以用于MPT32蛋白抗原的体外诊断。利用该鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体制备得到用于检测MPT32蛋白的试剂盒或微流体芯片，能够有效识别临床样本中的MPT32蛋白，并且具有较高的特异性，检测灵敏度高。本发明提供的鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体为结核病的体外诊断试剂提供了关键的原材料，以该单克隆抗体为原料开发的检测试剂盒或微流体芯片具备良好的临床应用价值。

Description

一种鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12、基于其的单克隆抗 体及其应用
技术领域
本发明涉及抗体制备技术领域，具体涉及一种鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞 株13B12、基于其的单克隆抗体及其应用。
背景技术
结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病，仍是当今全球范围内对人类最 具威胁性的感染性疾病之一。结核病的病原体是结核分枝杆菌，简称结合杆菌。 1882年，德国细菌学家郭霍首先发现并证明了结核分枝杆菌是结核病的病原菌。 该病原菌可侵入人体全身各种组织器官，但主要侵犯肺脏，因此结核病也称被为 肺结核病。结核病严重影响人类的健康和生命，人类与之已经进行了几个世纪的 斗争。在17～18世纪的欧洲，结核病被称为“白色瘟疫”，几乎100％的欧洲人 被感染，25％的欧洲人死于结核病。随着抗结核药物的不断发展和卫生生活状况 的改善，结核病的发病率和死亡率曾出现大幅度下降。20世纪90年代以来，由 于艾滋病和结核分枝杆菌耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困及人 口流动等因素，全球范围内结核病的疫情骤然恶化。目前，结核病成为首要的再 现传染病，也成为了全球尤其是发展中国家最为严重的全球性卫生问题。全世界 约有1/3的人感染结核分枝杆菌，每年有900万的新病例出现，有200万人死于 该疾病。
早期发现和早期诊断结核病病人，及时给予有效的治疗，是降低结核病发病 率，减少传播机会、控制结核病疫情的关键环节。目前结核病的主要实验诊断手 段包括结核菌素试验、结核菌γ干扰素释放试验、直接涂片镜检、分离培养、动 物试验等。然而，这些检测方法均存在耗时长、检测灵敏性低、特异性不高、成 本高和操作复杂等问题。
感染结核杆菌后，在感染阶段如结核杆菌的生长阶段会释放或分泌MPT32 蛋白，并且MPT32蛋白的免疫原性强。由此可见，MPT32蛋白可作为结核杆菌 诊断的特异性诊断靶点，因此亟需一种以MPT32蛋白为靶点的抗体为体外诊断 试剂提供关键原材料。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12、基于其 的单克隆抗体及其应用，该鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12分泌的鼠抗 MPT32蛋白单克隆抗体能够与MPT32蛋白特异性结合，能够特异性检测MPT32 蛋白，为结核病的体外诊断试剂提供了关键的原材料。
根据本发明的第一个方面，提供一种鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12， 该杂交瘤细胞株于2022年1月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址 为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2021305。
根据本发明的第二个方面，提供一种鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体，该单克 隆抗体由上述鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12分泌产生。
优选地，上述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体包括轻链可变区和重链可变区， 轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
SEQ ID NO:1
DIVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLGSGVPDRFTGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCWQGTHLPRTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:2
QVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGFTFTSYWINWVKQRPGQGLEWIGDLYPGRGITNYNEKFKPKATLTLDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCSTGPYWGQGTILTVSS
根据本发明的第三个方面，提供一种核酸分子，该核酸分子包含编码上述鼠 抗MPT32蛋白单克隆抗体的核苷酸序列。
优选地，上述核酸分子编码鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的轻链可变区的核 苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，编码鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的重链可变区 的核苷酸序列如SEQID NO:4所示。
SEQ ID NO:3
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGC CAGTCCCCAAAGCGCCTAATATATCTGGTGTCTAAACTGGGCTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGC AGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAACAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTAT TGCTGGCAAGGTACACATCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATAAAA
SEQ ID NO:4
CAGGTTCAGCTTCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAAATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTTCACCTTCACCAGCTACTGGATAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAG TGGATTGGAGATCTTTATCCTGGTAGAGGTATTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGCCCAAGGCCACA CTGACTCTAGACACATCTTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCG GTCTATTATTGTTCAACCGGGCCCTACTGGGGCCAAGGCACCATTCTCACAGTCTCCTCG
根据本发明的第四个方面，提供上述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体在制备用 于检测MPT32蛋白的试剂盒中的应用。
根据本发明的第五个方面，提供一种用于检测MPT32蛋白的试剂盒，该试 剂盒含有上述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体。
优选地，试剂盒为免疫层析检测试剂盒、酶联免疫试剂盒、化学发光试剂盒、 荧光免疫试剂盒或免疫比浊试剂盒。
根据本发明的第六个方面，提供上述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体在制备用 于检测MPT32蛋白的微流体芯片中的应用。
根据本发明的第七个方面，提供一种用于检测MPT32蛋白的微流体芯片， 该微流体芯片含有上述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体。
本发明的有益效果为：本发明提供了一种鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株 13B12，该细胞株分泌的鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体与MPT32蛋白反应效价高， 使得鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体适合作为免疫诊断试剂以用于体外诊断MPT32 蛋白抗原。利用鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体制备得到用于检测MPT32蛋白的 试剂盒或微流体芯片，能够有效识别临床样本中的MPT32蛋白，并且具有较高 的特异性，检测灵敏度高，检测速度快，操作简单。由此可见，本发明提供的鼠 抗MPT32蛋白单克隆抗体能够与MPT32蛋白特异性结合，为结核病的体外诊 断试剂提供了关键的原材料，以该单克隆抗体为原料开发的检测试剂盒或微流体 芯片具备良好的临床应用价值。
附图说明
图1为本发明提供的鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的纯化结果图。
图2为本发明采用间接ELISA方法对鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的效价检 测结果图。
图3为本发明采用免疫印迹技术对鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的效价检测 结果图。
图4为本发明利用鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体对临床样本进行检测的免疫 印迹实验结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明提供的技术方案中的技术特征作进一步清 楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全 部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前 提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株的筛选
(1)MPT32蛋白的制备和纯化
将含有MPT32基因片段的重组质粒转化到宿主大肠杆菌(BL21系列的 8Rosetta(DE3)菌)中，得到重组菌，利用含有卡那霉素抗性的LB液体培养基对 重组菌进行扩大培养，按照体积比1:100将菌液转接至上述培养基中进行诱导表 达，当菌液OD值在0.4～0.6之间时，加入异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)使IPTG 的终浓度为1mM，于30℃下培养4小时，离心，收集菌体。将湿重约2g的菌 体加入到30mL PBS缓冲液中进行重悬，然后置于冰水混合物中超声破碎(功率 为400W，超声3s，间隔5s)，直至菌液不黏稠且澄清后，离心去除菌体碎片， 利用0.45μm滤膜对上清进行过滤，经亲和层析镍柱纯化获得MPT32蛋白，用 于特异性单克隆抗体的筛选。
(2)小鼠免疫
利用上述经过纯化的MPT32蛋白对小鼠进行注射。首次免疫剂量为50μg MPT32蛋白/只小鼠，佐剂为弗氏完全佐剂，皮下多点注射。2周后进行二次免 疫，二次免疫的免疫剂量为50μg MPT32蛋白/只小鼠，佐剂为弗氏不完全佐剂， 腹腔注射。2周后进行三次免疫，三次及以后的免疫所采用的免疫剂量、佐剂、 注射方式与二次免疫相同，两次免疫之间的间隔时间均为2周，至第四次免疫为 止。
(3)细胞融合
对经过免疫的小鼠进行则进行细胞融合。融合前3天尾静脉取血，采用酶联 免疫吸附测定抗体效价，待效价达到1:8000以上对小鼠进行加强免疫，免疫剂 量为50μg MPT32蛋白/只小鼠，无需佐剂。小鼠眼球取血后，取成功免疫的小 鼠脾脏细胞与骨髓瘤SP2/0细胞按照数量比10:1混合后(融合时在37℃水浴的 环境下进行)，离心，弃去上清，将50％的PEG在1min之内加入上述融合体系 中混匀，37℃水浴震荡1min，静置1min，在2min之内加入10mL无血清1640 培养基，800rpm下离心6min，弃去上清，并用含有HAT的1640培养基重悬细胞，并移液入96孔板。在37℃、5％CO2条件下培养细胞。融合后第三天半换 液，第七天全换液。
融合板中克隆足够大时，每孔取100μL上清液进行检测，检测方法与上述 检测抗体效价的方法相同。检测OD值为阴性孔两倍以上的孔作为阳性孔，对阳 性孔中的细胞进行下一步克隆化培养。将筛选阳性的杂交瘤克隆从96孔板扩至 24孔板培养3～5天，再次进行培养上清筛选检测，检测阳性的克隆再进行下一 步的亚克隆培养，将剩余细胞冻存。收集24孔板中的杂交瘤细胞，细胞计数， 将细胞密度调整为10个/mL；将细胞铺到96孔板中，每孔100μL，于37℃、5％CO2孵箱培养；培养10天左右，可见克隆形成，选取只有单个克隆的孔，吸取培养 上清，检测方法同前，选取阳性克隆，扩至24孔板培养，再次对培养上清进行 检测后，选择阳性克隆进行第二轮的亚克隆培养，一般进行多轮亚克隆培养，直 至所有检测孔均为阳性为止，即获得能够稳定分泌鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体 的鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12，已于2022年1月9日保藏于中国典型 培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2021305。选取阳性杂交瘤培养上清， 采用抗体亚型检测试纸检测抗体的亚型。检测结果表明本发明制备得到的鼠抗 MPT32蛋白单克隆抗体为鼠源IgG1亚型。
实施例2鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的制备
(1)腹水制备和MPT32蛋白单克隆抗体的纯化
采用无菌PBS溶液对杂交瘤细胞进行洗涤，以5×106/0.5ml/只的细胞量腹腔 注射到液体石蜡预致敏的小鼠体内。7至10天后收集腹水，室温3000rpm离心 10min，收集上清。采用辛酸硫酸铵法对腹水中的抗体进行粗纯，粗纯后的抗 体按照GE公司提供的纯化手册，利用AKTA蛋白纯化系统，经1ml Protein G 纯化预装柱进行进一步的纯化。纯化所得的抗体纯品用于后续的抗体检测及功能 实验。
抗体纯化后的电泳结果如图1所示。由图1可知，将实施例1筛选得到的鼠 抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株注射入小鼠体内后，小鼠体内能够产生特异性抗体， 收集小鼠腹水后对抗体进行进行纯化能够得到鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体纯 品。
(2)单克隆抗体效价检测
采用间接ELISA方法对鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体效价进行测定。以浓度 为100ng/mL的MPT32蛋白作为抗原，将MPT32蛋白以100uL/孔的量加入到 96孔板中，4℃下放置过夜，倾去液体，洗涤；每孔加入100uL 5％BSA进行封 闭，室温放置0.5h，洗涤；将鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体从0.67mg/mL开始进 行倍比稀释，共稀释5个梯度，然后以100uL/孔的量加入到96孔板中；最后以 辣根果氧化酶标抗体作为二抗稀释后加入到96孔板中，加盖并于37℃恒温箱温 育1h，洗涤，显色，终止反应，并测定波长为450nm处的OD值，以鼠抗MPT32 蛋白单克隆抗体的浓度为横坐标，OD450为纵坐标作图，结果如图2所示。
采用免疫印迹技术对MPT32蛋白抗体进行效价检测，样本为5μg、0.5μg、 50ng、5ng四个梯度的MPT32蛋白，对样本进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)，电泳结束后利用蛋白转膜仪，将凝胶上的蛋白转移至醋酸纤维 素膜上，然后再进行后续的免疫印迹反应。转膜结束后，依次分别利用脱脂奶粉、 鼠抗MPT32单克隆抗体溶液和辣根果氧化酶标记的二抗溶液(兔抗鼠IgG)对 含有蛋白样品的醋酸纤维素膜进行封闭和孵育反应。二抗孵育反应结束后，利用 ECL化学发光仪检测膜上的检测信号，结果如图3所示。
实施例3鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的基因验证
本实施例以从杂交瘤细胞株13B12提取到的总RNA为模板，通过逆转录、 PCR扩增及测序的方式，获得杂交瘤细胞表达单克隆抗体重链和轻链的可变区 基因，再将可变区的基因与数据库中鼠源抗体恒定区基因拼接，得到重组单克隆 抗体的完整表达序列。
整个实验流程分为细胞培养、cDNA制备、抗体可变区基因的扩增测序分析 三步：(1)利用含10％FBS和1％青霉素-链霉素溶液的IMDM培养基对单克隆 细胞株13B12进行培养；(2)提取细胞样本中的总RNA，采用加尾法反转录得 到cDNA；(3)以单克隆细胞的cDNA为模板，通过聚合酶链式反应扩增重链和 轻链可变区的基因，将PCR产物连接至pEASY-T1质粒后，采用热激法将装载 成功的质粒转化至DH5α感受态细胞中，通过抗性平板对阳性菌株进行筛选后， 将筛选到的阳性克隆菌株送测序，测序结果采用VBASE2软件进行分析。
测序结果如下：
鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体包括轻链可变区和重链可变区，轻链可变区的 氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所 示。
SEQ ID NO:1
DIVMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLDSDGKTYLNWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLGSGVPDRFTGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCWQGTHLPRTFGGGTKLEIK
SEQ ID NO:2
QVQLQQSGAELVKPGASVKMSCKASGFTFTSYWINWVKQRPGQGLEWIGDLYPGRGITNYNEKFKPKATLTLDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCSTGPYWGQGTILTVSS
编码上述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，编码上述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序 列如SEQ ID NO:4所示。
SEQ ID NO:3
GATATTGTGATGACCCAGACTCCACTCACTTTGTCGGTTACCATTGGACAACCAGCCTCCATCTCTTGCAAGTCAAGTCAGAGCCTCTTAGATAGTGATGGAAAGACATATTTGAATTGGTTGTTACAGAGGCCAGGC CAGTCCCCAAAGCGCCTAATATATCTGGTGTCTAAACTGGGCTCTGGAGTCCCTGACAGGTTCACTGGC AGTGGATCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAACAGAGTGGAGGCTGAGGATTTGGGAGTTTATTAT TGCTGGCAAGGTACACATCTTCCTCGGACGTTCGGTGGAGGCACCAAGCTGGAAATAAAA
SEQ ID NO:4
CAGGTTCAGCTTCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTTGTGAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAAATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTTCACCTTCACCAGCTACTGGATAAACTGGGTGAAGCAGAGGCCTGGACAAGGCCTTGAG TGGATTGGAGATCTTTATCCTGGTAGAGGTATTACTAACTACAATGAGAAGTTCAAGCCCAAGGCCACA CTGACTCTAGACACATCTTCCAGCACAGCCTACATGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACTCTGCG GTCTATTATTGTTCAACCGGGCCCTACTGGGGCCAAGGCACCATTCTCACAGTCTCCTCG
实施例4结核分枝杆菌MPT32蛋白免疫印迹实验
基于上述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体，通过免疫印迹实验对实际临床样本 进行实验。整个检测实验分为两步进行：
(1)电泳和转膜：对临床样本中的蛋白提取物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE)，电泳结束后利用蛋白转膜仪，将凝胶上的蛋白转移至醋酸纤维 素膜上，然后再进行后续的免疫印迹反应；
(2)转膜结束后，依次分别利用脱脂奶粉、鼠抗MPT32单克隆抗体溶液和 辣根果氧化酶标记的二抗溶液(兔抗鼠IgG)对含有蛋白样品的醋酸纤维素膜进 行封闭和孵育反应。二抗孵育反应结束后，利用ECL化学发光仪检测膜上的检 测信号，实验结果如图4所示。
由图4可知，其中分组1(结核病患者样本)中4个样本均被检测出抗原阳 性，而其他两个分组2和3(正常样本)中均未检测到抗原蛋白，说明本发明提 供的鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12分泌的鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体 能够特异性结合MPT32蛋白，特异性和检测灵敏度高，对临床样本具有很好的 检测效果。
上述结果说明鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体为结核病的体外诊断试剂提供了 关键的原材料，以该单克隆抗体为原料开发的检测试剂盒或微流体芯片，适用于 临床应用场景，对结核病的临床诊断具有极其重要的意义。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽 管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理 解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，但这些修改或替换均在本 发明的保护范围之内。
序列表
<110> 深圳市光与生物科技有限公司
广东省人民医院
<120> 一种鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12、基于其的单克隆抗体及其应用
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Gly Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Asn Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Leu Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 2
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asp Leu Tyr Pro Gly Arg Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Pro Lys Ala Thr Leu Thr Leu Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Thr Gly Pro Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ile Leu Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 3
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gatattgtga tgacccagac tccactcact ttgtcggtta ccattggaca accagcctcc 60
atctcttgca agtcaagtca gagcctctta gatagtgatg gaaagacata tttgaattgg 120
ttgttacaga ggccaggcca gtccccaaag cgcctaatat atctggtgtc taaactgggc 180
tctggagtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actgaaaatc 240
aacagagtgg aggctgagga tttgggagtt tattattgct ggcaaggtac acatcttcct 300
cggacgttcg gtggaggcac caagctggaa ataaaa 336
<210> 4
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
caggttcagc ttcagcagtc tggggctgag cttgtgaagc ctggggcttc agtgaaaatg 60
tcctgcaagg cttctggctt caccttcacc agctactgga taaactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattggagat ctttatcctg gtagaggtat tactaactac 180
aatgagaagt tcaagcccaa ggccacactg actctagaca catcttccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attattgttc aaccgggccc 300
tactggggcc aaggcaccat tctcacagtc tcctcg 336

Claims (10)

1.一种鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12，于2022年1月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2021305。
2.一种鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体，其特征在于：由权利要求1所述鼠抗MPT32蛋白杂交瘤细胞株13B12分泌产生。
3.如权利要求2所述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体，其特征在于：包括轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
4.一种核酸分子，其特征在于：包含编码如权利要求2或3所述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的核苷酸序列。
5.如权利要求4所述核酸分子，其特征在于：所述核酸分子编码鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述核酸分子编码鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。
6.如权利要求2或3所述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体在制备用于检测MPT32蛋白的试剂盒中的应用。
7.一种用于检测MPT32蛋白的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒含有如权利要求2或3所述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体。
8.如权利要求7所述的用于检测MPT32蛋白的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为免疫层析检测试剂盒、酶联免疫试剂盒、化学发光试剂盒、荧光免疫试剂盒或免疫比浊试剂盒。
9.如权利要求2或3所述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体在制备用于检测MPT32蛋白的微流体芯片中的应用。
10.一种用于检测MPT32蛋白的微流体芯片，其特征在于：所述微流体芯片含有如权利要求2或3所述鼠抗MPT32蛋白单克隆抗体。
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