CN114586978A - 一种葛根口服液的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药加工技术领域，具体涉及一种葛根口服液的制备方法，包括：(1)初级提取、(2)活性蛋白沉淀、(3)酸性处理、(4)蛋白提取、(5)制作口服液。本发明通过优化葛根细度、提取乙醇的体积分数、提取温度等参数，有效促进葛根中葛根素和葛根总黄酮的释放，提高了整体的提取率，使得口服液中葛根素和总黄酮的含量显著升高，为生理细胞提供丰富的葛根素、总黄酮、蛋白和铁元素，提高葛根对生物体的肝保护功能。
Description
技术领域
本发明涉及中药加工技术领域，具体涉及一种葛根口服液的制备方法。
背景技术
葛根为豆科多年生藤本植物野葛的根，性凉，味甘、辛，是卫生部认定的药食两用资源。葛根富含淀粉、葛根素、葛根素-7-木糖甙、大豆黄酮、大豆黄酮甙、花生酸等物质，有“亚洲人参”之美誉。现代医学研究发现，葛根素具有降血压、降血脂、降血糖、扩张血管、增加脑及冠状动脉血流量，对高血压、心绞痛及冠心病有显著的辅助治疗效果。目前，基于葛根加工的产品有很多，充分发挥葛根的特性是产品研发人员最为重要的努力方向之一。
但是当前的葛根加工多是简单原料处理，并未针对特殊营养物质如铁蛋白等进行专门优化，提高产品效果。比如专利号为CN201710685282.7的一种多酶葛根口服液及其制备方法，该多酶葛根口服液的制备包括：1)将葛根粉与水混合，制备混合液A；2)向混合液A中加入淀粉酶和活化剂，在60～85℃下酶解20min～30min，得到混合液B；3)调整混合液B的pH值为8～12，向混合液B中加入碱性纤维素酶和蛋白酶，在40～50℃下酶解4～5h，得到混合液C；4)向混合液C中加入啤酒复合酶和酒曲，在35～40℃下进行厌氧发酵，得到发酵液；向发酵液中加入果胶酶，搅拌反应，过滤即得，该多酶葛根口服液的制备只是针对制作过程优化，并未确定最终提取物的物质特征，导致产品的进一步升级强化不明确。又如专利号为CN201410827524.8的一种葛根芩连口服液，它由以下重量份数的各原料药制备而成：葛根40-60份、黄芪15-25份、黄连15-25份、炙甘草10-20份。制备方法如下：先加水煎煮二次，合并煎液，过滤；取滤液浓缩至密度1.10-1.25g/cm3，进行梯度醇沉，含醇量分别为30-55％和60-85％；取上清液加配制量的甜菊糖、苯甲酸钠、尼泊金乙酯、EDTA-2Na和蜂蜜，加水适量，调pH至2.0-5.0，静置；取上清液加水适量，调pH至5.5-7.0，静置，取上清液加配制量0.05-0.15％的焦亚硫酸钠，混匀，灌装，灭菌，即可，该葛根芩连口服液得到的复合体是多种物质的混合，并没有针对性的研究葛根具体成分特征，没有体现葛根成分的特殊性，导致对成品的系统化研究不够，功能强化方向不明晰。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种葛根口服液的制备方法，以针对性的提取葛根中的铁蛋白，强化葛根口服液的营养特性。具体技术方案为：
一种葛根口服液的制备方法，包括：
(1)葛根素和总黄酮提取物
将晒干的葛根粉碎为100-200目的粉末，将粉末与其质量4-5倍的清水混合，在60-65℃下浸泡90-120min，将温度降低至25-28℃，加入米曲霉、紫薯粉，混合均匀在26-29℃下培养30-35h，将培养物用微波加热至55-60℃保温2-4h，在50-53℃下烘干，在30-35℃下，将干燥物超微粉碎用乙醇-水-酸溶液回流提取4-6次，将提取液混合浓缩干燥得到葛根素和总黄酮提取物；所述米曲霉接种量为葛根质量5-8％，所述紫薯粉质量为葛根粉末质量的8-12％；乙醇-水-酸溶液由乙醇和水、琥珀酸混合而成，其中，乙醇和水、琥珀酸的体积比为10:1-2.8:0.3-1；
(2)初级提取
将新鲜采集的葛根洗净沥干，切成长宽高均为1-1.5cm的小块，加入其质量2-3倍的清水混合，在零下20-30℃下冷冻10-15h，用碎冰机加工为粒度1-3mm的碎末，升高温度至18-23℃，用弱碱性缓冲液稀释3-5倍，静置到冰晶完全溶解，以80-100r/min搅拌1-2h，过滤得到滤渣和滤液；
(3)活性蛋白沉淀
将上一步的滤液放置到3-5℃的环境中，静置2-3h，加入盐析沉淀液快速搅拌20-30min，静置30-50min；收集沉淀，放置到透析袋中透析5-8h得到提取蛋白A；
(4)酸性处理
将步骤(1)所得滤渣调节至含水量78-83％，用醋酸将pH调至5-6.3，加入醋酸菌液，在30-33℃的摇床培养80-90h，搜集所得发酵物用胶磨机胶磨2-3次，在800-900W、25-28℃超声波作用下处理20-23min；
(5)蛋白提取
将上一步骤得到的溶液与酸性缓冲液按照质量比1:3-4.3混合，溶液以5-10mL/min的流速通过电场处理，将所得提取液离心5-7min，取下层液体，再次与酸性缓冲液混合均匀，加入其质量2-3倍的步骤(1)中的盐析沉淀液，静置后将所得沉淀透析3-5h，与步骤(2)所得提取蛋白A混合干燥得到葛根铁蛋白；
(6)制作口服液
将葛根的根、叶按照质量比1:0.1-0.15混合，加入其质量10-13倍的清水加热到120-130℃，维持10-15s，立即停止加热，将温度降低至40-45℃，浸泡10-15h，每隔20-25min用微波处理1-3min，过滤，按照质量比100-120:15-18:9-13:1在所得溶液中加入步骤(1)中的葛根素和总黄酮提取物、上一步骤制得的葛根铁蛋白、木糖醇混合均匀灌装即可。
进一步的，步骤(2)中，所述弱碱性缓冲液为柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液，pH为7.1-7.3。
进一步的，步骤(2)中，所述过滤使用80-100目滤布。
进一步的，步骤(3)中，所述盐析沉淀液由质量比为1:0.12-0.28:0.03-0.1的硫酸铵、乳酸、乙酸钾混合溶解制成的饱和溶液。
进一步的，步骤(3)中，所述盐析沉淀液和滤液的质量比为1:2-2.5。
进一步的，步骤(4)中，所述醋酸菌液的制作方法为：以质量份计，取20-30份甜菜粉碎成浆体，加入5-8份蔗糖、1-2份蜂蜜、磷酸二氢钾0.5-0.8份、硫酸镁0.1-0.2份、1000份水混合均匀，在100-120℃下灭菌8-10h，接种混合物质量3-5％的醋酸菌，在30-33℃培养40-40h即可。
进一步的，所述醋酸菌为巴氏醋酸菌。
进一步的，步骤(4)中，所述醋酸菌液和滤渣质量比为1:5-7。
进一步的，步骤(5)中，所述酸性缓冲液为pH为6.5-6.8的磷酸二氢钾-醋酸钾-柠檬酸溶液，其中添加了乙二胺四乙酸0.5-0.8mg/L、0.3-0.44mg/L卵磷脂。
进一步的，步骤(5)中，所述电场处理的脉冲数为7-9个，电场强度17-20kV/cm。
有益效果
本发明通过优化葛根细度、提取乙醇的体积分数、提取温度等参数，有效促进葛根中葛根素和葛根总黄酮的释放，有效提高了整体的提取率，使得口服液中葛根素和总黄酮的含量显著升高，提高口服液的肝保护功能。
本发明通过将葛根冷冻后连冰一起粉碎，有效破解葛根细胞，避免使用大量化学试剂带来的干扰，减少葛根蛋白变性，最大化保证葛根蛋白的活性，然后使用柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液充分浸泡出蛋白，经硫酸铵、乳酸、乙酸钾混合盐的沉淀，利用沉淀液在较低温度下的溶液性大量破解蛋白质的电平衡，促进蛋白的絮凝，最大化将铁蛋白提取出来，然后透析除去杂质，使得得到的蛋白完整性好，提取率高。
本发明中通过将初级提取的滤渣使用醋酸菌发酵，产生大量酸性物质和酶活性，充分分解葛根细胞组织，将残余的可吸收组分重组成蛋白，然后使用酸性缓冲液充分促进组织蛋白的释放，利用通过电场脉冲作用，最大化提取出铁蛋白，使得得到的葛根铁蛋白的类型多样，配合葛根低温提取液，为生理细胞提供丰富的蛋白和铁元素，有效提高葛根的肝保护功能。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定，但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
实施例1
一种葛根口服液的制备方法，包括：
(1)葛根素和总黄酮提取物
将晒干的葛根粉碎为100目的粉末，将粉末与其质量4倍的清水混合，在60℃下浸泡90min，将温度降低至25℃，加入米曲霉、紫薯粉，混合均匀在26℃下培养30h，将培养物用微波加热至55℃保温2h，在50℃下烘干，在30℃下，将干燥物超微粉碎用乙醇-水-酸溶液回流提取4次，将提取液混合浓缩干燥得到葛根素和总黄酮提取物；所述米曲霉接种量为葛根质量5％，所述紫薯粉质量为葛根粉末质量的8％；乙醇-水-酸溶液由乙醇和水、琥珀酸混合而成，其中，乙醇和水、琥珀酸的体积比为10:2.8:0.3；
(2)初级提取
将新鲜采集的葛根洗净沥干，切成长宽高均为1cm的小块，加入其质量2倍的清水混合，在零下20℃下冷冻10h，用碎冰机加工为粒度1mm的碎末，升高温度至18℃，用弱碱性缓冲液稀释3倍，静置到冰晶完全溶解，以80r/min搅拌1h，过滤得到滤渣和滤液；
所述弱碱性缓冲液为柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液，pH为7.1，由上海远慕生物科技有限公司提供用盐酸滴定为pH＝7.1；所述过滤使用80目滤布；
(3)活性蛋白沉淀
将上一步的滤液放置到3℃的环境中，静置2h，加入盐析沉淀液快速搅拌20min，静置30min；收集沉淀，放置到透析袋中透析5h得到提取蛋白A；所述盐析沉淀液由质量比为1:0.12:0.03的硫酸铵、乳酸、乙酸钾混合溶解制成的饱和溶液；所述盐析沉淀液和滤液的质量比为1:2；
(4)酸性处理
将步骤(1)所得滤渣调节至含水量78％，用醋酸将pH调至5，加入醋酸菌液，在30℃的摇床培养80h，搜集所得发酵物用胶磨机胶磨2次，在800W、25℃超声波作用下处理20min；
所述醋酸菌液的制作方法为：以质量份计，取20份甜菜粉碎成浆体，加入5份蔗糖、1份蜂蜜、磷酸二氢钾0.5份、硫酸镁0.1份、1000份水混合均匀，在100℃下灭菌8h，接种混合物质量3％的醋酸菌，在30℃培养40h即可；所述醋酸菌为巴氏醋酸菌；所述醋酸菌液和滤渣质量比为1:5；
(5)蛋白提取
将上一步骤得到的溶液与酸性缓冲液按照质量比1:3混合，溶液以5mL/min的流速通过电场处理，将所得提取液离心5min，取下层液体，再次与酸性缓冲液混合均匀，加入其质量2-3倍的步骤(1)中的盐析沉淀液，静置后将所得沉淀透析3h，与步骤(2)所得提取蛋白A混合干燥得到葛根铁蛋白；所述酸性缓冲液为pH为6.5的磷酸二氢钾-醋酸钾-柠檬酸溶液，其中添加了乙二胺四乙酸0.5mg/L、0.3mg/L卵磷脂；所述电场处理的脉冲数为7个，电场强度17kV/cm；
所述酸性缓冲溶液的制作方法为：将磷酸二氢钾、醋酸钾按照质量比1:0.12-0.18混合，稀释500-800倍，加入二胺四乙酸、0.3mg/L卵磷脂充分混合，用柠檬酸滴定为pH为6.5即可；
(6)制作口服液
将葛根的根、叶按照质量比1:0.1混合，加入其质量10倍的清水加热到120℃，维持10s，立即停止加热，将温度降低至40℃，浸泡10h，每隔20min用微波处理1min，过滤，按照质量比100:15:9:1在所得溶液中加入步骤(1)中的葛根素和总黄酮提取物、上一步骤制得的葛根铁蛋白、木糖醇混合均匀灌装即可。
实施例2
一种葛根口服液的制备方法，包括：
(1)葛根素和总黄酮提取物
将晒干的葛根粉碎为200目的粉末，将粉末与其质量5倍的清水混合，在65℃下浸泡120min，将温度降低至28℃，加入米曲霉、紫薯粉，混合均匀在29℃下培养35h，将培养物用微波加热至60℃保温4h，在53℃下烘干，在35℃下，将干燥物超微粉碎用乙醇-水-酸溶液回流提取6次，将提取液混合浓缩干燥得到葛根素和总黄酮提取物；所述米曲霉接种量为葛根质量8％，所述紫薯粉质量为葛根粉末质量的12％；乙醇-水-酸溶液由乙醇和水、琥珀酸混合而成，其中，乙醇和水、琥珀酸的体积比为10:2.8:1；
(2)初级提取
将新鲜采集的葛根洗净沥干，切成长宽高均为1.5cm的小块，加入其质量3倍的清水混合，在零下30℃下冷冻15h，用碎冰机加工为粒度3mm的碎末，升高温度至23℃，用弱碱性缓冲液稀释5倍，静置到冰晶完全溶解，以100r/min搅拌2h，过滤得到滤渣和滤液；
所述弱碱性缓冲液为柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液，pH为7.3；所述过滤使用100目滤布；
(3)活性蛋白沉淀
将上一步的滤液放置到5℃的环境中，静置3h，加入盐析沉淀液快速搅拌30min，静置50min；收集沉淀，放置到透析袋中透析8h得到提取蛋白A；所述盐析沉淀液由质量比为1:0.28:0.1的硫酸铵、乳酸、乙酸钾混合溶解制成的饱和溶液；所述盐析沉淀液和滤液的质量比为1:2.5；
(4)酸性处理
将步骤(1)所得滤渣调节至含水量83％，用醋酸将pH调至6.3，加入醋酸菌液，在33℃的摇床培养90h，搜集所得发酵物用胶磨机胶磨3次，在900W、28℃超声波作用下处理23min；
所述醋酸菌液的制作方法为：以质量份计，取30份甜菜粉碎成浆体，加入8份蔗糖、2份蜂蜜、磷酸二氢钾0.8份、硫酸镁0.2份、1000份水混合均匀，在120℃下灭菌10h，接种混合物质量5％的醋酸菌，在33℃培养40h即可；所述醋酸菌为巴氏醋酸菌；所述醋酸菌液和滤渣质量比为1:7；
(5)蛋白提取
将上一步骤得到的溶液与酸性缓冲液按照质量比1:4.3混合，溶液以10mL/min的流速通过电场处理，将所得提取液离心7min，取下层液体，再次与酸性缓冲液混合均匀，加入其质量3倍的步骤(1)中的盐析沉淀液，静置后将所得沉淀透析5h，与步骤(2)所得提取蛋白A混合干燥得到葛根铁蛋白；所述酸性缓冲液为pH为6.8的磷酸二氢钾-醋酸钾-柠檬酸溶液，其中添加了乙二胺四乙酸0.8mg/L、0.44mg/L卵磷脂；所述电场处理的脉冲数为9个，电场强度20kV/cm；
(6)制作口服液
将葛根的根、叶按照质量比1:0.15混合，加入其质量13倍的清水加热到130℃，维持15s，立即停止加热，将温度降低至45℃，浸泡15h，每隔25min用微波处理3min，过滤，按照质量比120:18:13:1在所得溶液中加入步骤(1)中的葛根素和总黄酮提取物、上一步骤制得的葛根铁蛋白、木糖醇混合均匀灌装即可。
实施例3
一种葛根口服液的制备方法，包括：
(1)葛根素和总黄酮提取物
将晒干的葛根粉碎为200目的粉末，将粉末与其质量5倍的清水混合，在65℃下浸泡90min，将温度降低至28℃，加入米曲霉、紫薯粉，混合均匀在29℃下培养35h，将培养物用微波加热至60℃保温4h，在53℃下烘干，在35℃下，将干燥物超微粉碎用乙醇-水-酸溶液回流提取6次，将提取液混合浓缩干燥得到葛根素和总黄酮提取物；所述米曲霉接种量为葛根质量8％，所述紫薯粉质量为葛根粉末质量的8％；乙醇-水-酸溶液由乙醇和水、琥珀酸混合而成，其中，乙醇和水、琥珀酸的体积比为10:2.8:0.3；
(2)初级提取
将新鲜采集的葛根洗净沥干，切成长宽高均为1.3cm的小块，加入其质量2.3倍的清水混合，在零下25℃下冷冻13h，用碎冰机加工为粒度1.3mm的碎末，升高温度至19℃，用弱碱性缓冲液稀释5倍，静置到冰晶完全溶解，以80r/min搅拌2h，过滤得到滤渣和滤液；
所述弱碱性缓冲液为柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液，pH为7.3；所述过滤使用80目滤布；
(3)活性蛋白沉淀
将上一步的滤液放置到5℃的环境中，静置3h，加入盐析沉淀液快速搅拌20min，静置50min；收集沉淀，放置到透析袋中透析8h得到提取蛋白A；所述盐析沉淀液由质量比为1:0.28:0.03的硫酸铵、乳酸、乙酸钾混合溶解制成的饱和溶液；所述盐析沉淀液和滤液的质量比为1:2；
(4)酸性处理
将步骤(1)所得滤渣调节至含水量83％，用醋酸将pH调至5，加入醋酸菌液，在33℃的摇床培养90h，搜集所得发酵物用胶磨机胶磨2次，在900W、25℃超声波作用下处理23min；
所述醋酸菌液的制作方法为：以质量份计，取30份甜菜粉碎成浆体，加入5份蔗糖、2份蜂蜜、磷酸二氢钾0.5份、硫酸镁0.2份、1000份水混合均匀，在120℃下灭菌8h，接种混合物质量5％的醋酸菌，在30℃培养40h即可；所述醋酸菌为巴氏醋酸菌；所述醋酸菌液和滤渣质量比为1:7；
(5)蛋白提取
将上一步骤得到的溶液与酸性缓冲液按照质量比1:4.3混合，溶液以10mL/min的流速通过电场处理，将所得提取液离心5min，取下层液体，再次与酸性缓冲液混合均匀，加入其质量3倍的步骤(1)中的盐析沉淀液，静置后将所得沉淀透析5h，与步骤(2)所得提取蛋白A混合干燥得到葛根铁蛋白；所述酸性缓冲液为pH为6.5的磷酸二氢钾-醋酸钾-柠檬酸溶液，其中添加了乙二胺四乙酸0.8mg/L、0.3mg/L卵磷脂；所述电场处理的脉冲数为9个，电场强度17kV/cm；
(6)制作口服液
将葛根的根、叶按照质量比1:0.15混合，加入其质量10倍的清水加热到130℃，维持10s，立即停止加热，将温度降低至45℃，浸泡15h，每隔20min用微波处理3min，过滤，按照质量比100:15:13:1在所得溶液中加入步骤(1)中的葛根素和总黄酮提取物、上一步骤制得的葛根铁蛋白、木糖醇混合均匀灌装即可。
试验例
1.本发明葛根素检测
为说明本发明的葛根素提取效果，设计如下验证组别：
分别按照实施例1-3和上述A-C制作口服液，检测其中步骤(1)提取葛根素和总黄酮，用高效液相色谱检测结果如表1：
表1葛根素和总黄酮提取率表
| 葛根素提取率 | 总黄酮提取率 | |
| 实施例1 | 23.35mg/g | 1033.45ug/g |
| 实施例2 | 21.29mg/g | 1084.61ug/g |
| 实施例3 | 22.06mg/g | 1091.28ug/g |
| A | 15.33mg/g | 836.09ug/g |
| B | 18.97mg/g | 901.21ug/g |
| C | 16.42mg/g | 862.39ug/g |
由表可以看出，使用本发明方法有效提高了葛根素和总黄酮的提取率，对于口服液有效物质的含量提高带来显著效果。
2.本发明效果对比实验设计：
对比例1，与实施例1的区别是步骤(1)中所用弱碱性缓冲溶液换成Tris-盐酸缓冲液，其他操作不变；
对比例2，与实施例1的区别是步骤(2)中所用盐析沉淀液中不加乳酸，即所用盐析沉淀液由质量比为1:0.03的硫酸铵、乙酸钾混合溶解制成的饱和溶液；其他操作不变；
对比例3，与实施例1的区别是步骤(2)中所用盐析沉淀液中不加乙酸钾，即所述盐析沉淀液由质量比为1:0.12的硫酸铵、乳酸混合溶解制成的饱和溶液；其他操作不变；
对比例4，与实施例1的区别是步骤(4)中未经电场处理；其他操作不变；
对比例5，与实施例1的区别是步骤(4)中所述酸性缓冲液中未添加乙二胺四乙酸；其他操作不变；
对比例6，与实施例1的区别是步骤(4)中所述酸性缓冲液中未添加卵磷脂，其他操作不变；
对比例7，与实施例1的区别是步骤(3)中所述酸处理接种的是乳酸菌，其他操作不变。
3.本发明口服液检测试验例
分别按照实施例1、对比例1-7、试验例1中A-C组制作口服液，先检测实施例1、对比例1-7的步骤(5)中铁蛋白的含量，对各组进行小鼠实验。选择130只体重190±15g的雄性大鼠用全营养饲料喂养一周，常规养殖管理，随机选择10只为空白组，继续常规饲养，剩余小鼠在饲料中增加18％猪油、5％奶油喂养一周，将小鼠随机分为12组，对应实施例1组、对比例1-7组、模型组、A-C组。空白组、模型组按照常规喂养用蒸馏水灌胃，实施例1组、对比例1-7组、试验例1中A-C组分别使用各对应口服液灌胃，剂量为0.98g/kg(以生药材计算)，各种灌胃用量一致，连续喂养50天，取大鼠静脉血，用离心机分离血清，测定肝功能ALT、TP指标，测定仪器为全自动生化仪。
其中，铁蛋白的检测方法为：将各组提取的葛根铁蛋白分别加水稀释成饱和溶液，取10uL葛根铁蛋白饱和溶液注入酶标板中，加入20uL水混合、滴入30uL20％连二亚硫酸钠溶液，继续加入40uL邻菲咯啉溶液摇匀，静置300s检测其吸光度，根据标准曲线方程计算亚铁离子浓度，即为铁蛋白含量。结果见表
表2：口服液检测结果表
| 组别 | 铁蛋白含量(×10<sup>-4</sup>) | ALT(U/L) | TP(g/L) |
| 实施例1 | 14.57％ | 109.32 | 57.23 |
| 对比例1 | 11.23％ | 135.70 | 65.38 |
| 对比例2 | 9.13％ | 143.32 | 63.07 |
| 对比例3 | 10.36％ | 141.02 | 61.91 |
| 对比例4 | 8.25％ | 132.87 | 66.41 |
| 对比例5 | 8.33％ | 151.23 | 64.18 |
| 对比例6 | 9.86％ | 140.47 | 62.29 |
| 对比例7 | 8.27％ | 153.21 | 65.12 |
| A | - | 142.06 | 63.07 |
| B | - | 151.79 | 65.16 |
| C | - | 133.04 | 65.92 |
| 空白组 | - | 148.22 | 61.78 |
| 模型组 | - | 181.09 | 75.12 |
由表可以看出，使用本发明方法的实施例1铁蛋白含量高，检测的ALT、TP指标均低，可见本发明口服液通过提取出葛根中的铁蛋白，有效保证本发明口服液的肝保护功能，带来了显著效果。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种葛根口服液的制备方法，其特征在于，包括：
(1)葛根素和总黄酮提取物
将晒干的葛根粉碎为100-200目的粉末，将粉末与其质量4-5倍的清水混合，在60-65℃下浸泡90-120min，将温度降低至25-28℃，加入米曲霉、紫薯粉，混合均匀在26-29℃下培养30-35h，将培养物用微波加热至55-60℃保温2-4h，在50-53℃下烘干，在30-35℃下，将干燥物超微粉碎用乙醇-水-酸溶液回流提取4-6次，将提取液混合浓缩干燥得到葛根素和总黄酮提取物；所述米曲霉接种量为葛根质量5-8％，所述紫薯粉质量为葛根粉末质量的8-12％；乙醇-水-酸溶液由乙醇和水、琥珀酸混合而成，其中，乙醇和水、琥珀酸的体积比为10:1-2.8:0.3-1；
(2)蛋白初级提取
将新鲜采集的葛根洗净沥干，切成长宽高均为1-1.5cm的小块，加入其质量2-3倍的清水混合，在零下20-30℃下冷冻10-15h，用碎冰机加工为粒度1-3mm的碎末，升高温度至18-23℃，用弱碱性缓冲液稀释3-5倍，静置到冰晶完全溶解，以80-100r/min搅拌1-2h，过滤得到滤渣和滤液；
(3)活性蛋白沉淀
将上一步的滤液放置到3-5℃的环境中，静置2-3h，加入盐析沉淀液快速搅拌20-30min，静置30-50min；收集沉淀，放置到透析袋中透析5-8h得到提取蛋白A；
(4)酸性处理
将步骤(1)所得滤渣调节至含水量78-83％，用醋酸将pH调至5-6.3，加入醋酸菌液，在30-33℃的摇床培养80-90h，搜集所得发酵物用胶磨机胶磨2-3次，在800-900W、25-28℃超声波作用下处理20-23min；
(5)蛋白提取
将上一步骤得到的溶液与酸性缓冲液按照质量比1:3-4.3混合，溶液以5-10mL/min的流速通过电场处理，将所得提取液离心5-7min，取下层液体，再次与酸性缓冲液混合均匀，加入其质量2-3倍的步骤(1)中的盐析沉淀液，静置后将所得沉淀透析3-5h，与步骤(2)所得提取蛋白A混合干燥得到葛根铁蛋白；
(6)制作口服液
将葛根的根、叶按照质量比1:0.1-0.15混合，加入其质量10-13倍的清水加热到120-130℃，维持10-15s，立即停止加热，将温度降低至40-45℃，浸泡10-15h，每隔20-25min用微波处理1-3min，过滤，按照质量比100-120:15-18:9-13:1在所得溶液中加入步骤(1)中的葛根素和总黄酮提取物、上一步骤制得的葛根铁蛋白、木糖醇混合均匀灌装即可。
2.根据权利要求1所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述弱碱性缓冲液为柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液，pH为7.1-7.3。
3.根据权利要求1所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述过滤使用80-100目滤布。
4.根据权利要求1所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述盐析沉淀液由质量比为1:0.12-0.28:0.03-0.1的硫酸铵、乳酸、乙酸钾混合溶解制成的饱和溶液。
5.根据权利要求1所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述盐析沉淀液和滤液的质量比为1:2-2.5。
6.根据权利要求1所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述醋酸菌液的制作方法为：以质量份计，取20-30份甜菜粉碎成浆体，加入5-8份蔗糖、1-2份蜂蜜、磷酸二氢钾0.5-0.8份、硫酸镁0.1-0.2份、1000份水混合均匀，在100-120℃下灭菌8-10h，接种混合物质量3-5％的醋酸菌，在30-33℃培养40-40h即可。
7.根据权利要求6所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，所述醋酸菌为巴氏醋酸菌。
8.根据权利要求1所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述醋酸菌液和滤渣质量比为1:5-7。
9.根据权利要求1所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述酸性缓冲液pH为6.5-6.8的磷酸二氢钾-醋酸钾-柠檬酸溶液，其中添加了乙二胺四乙酸0.5-0.8mg/L、0.3-0.44mg/L卵磷脂。
10.根据权利要求1所述葛根口服液的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述电场处理的脉冲数为7-9个，电场强度17-20kV/cm。
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