CN114568601A - 一种肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种改善肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法，包括混合菌液、氨基酸混合液以及复合载体，所述混合菌液为以贝莱斯芽孢杆菌、醋酸钙不动杆菌、乳酸菌、肠球菌按照一定比例混合的菌液，所述氨基酸包括粮赖氨酸、蛋氨酸、胱氨酸及苏氨酸，所述复合载体为沸石粉与膜发酵菠萝渣粉的混合物。总体制备方法包括：将混合菌液先与膨化玉米粉混合，再与氨基酸混合，最后与复合载体混合。饲料混合比例与肉鸭成长所处的时期有关。与当前普遍采用的技术相比，该益生菌剂在肉鸭的饲养中，具有调节肉鸭肠道微生态平衡、促消化吸收、提高免疫力等功能，且针对不同生长周期的肉鸭采用不同的饲料混合比例，提高了饲料利用率。

Description

一种肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及的是一种微生物制剂，尤其涉及的是一种改善肉鸭肠道功能的复合益生菌剂及其制备方法

背景技术

在我国经济产业的高速发展中，畜牧行业占了极大的比重，而在畜牧业中，肉鸭养殖在其中起了重要支撑作用。但是由于部分农户盲目为提高家畜的抗病性而滥用抗生素，导致一些病原体耐药性不断增强，抗生素效果不断降低，此外，家禽类产品间抗生素、激素的残留对人们的身体健康产生了巨大危害。因此，人们更倾向于购买更加绿色的无抗生素、无激素产品。在此发明中，这些益生菌包括贝莱斯芽孢杆菌及其辅助菌种可以恰到好处地解决这个问题。

芽孢杆菌(Bacillus)，属于细菌中的一科，在逆境条件时能产生芽孢，抗逆性强，广泛存在于环境及动物肠道内。目前，大量国内外学者正着力研究其的抗菌机制，并将其用于生物防治、治疗动物肠道疾病等。经试验研究表明，贝莱斯芽孢杆菌对于大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等具有拮抗效果，因此，该益生菌可用于提高家禽的抗病性，以达到减抗甚至替抗的效果，此外，其的次生代谢产物如天竺葵素－3－槐糖苷等抗氧化物可以潜在降低各类肠道炎症。

醋酸钙不动杆菌，广泛分布于环境中，胃肠道是其优良的生存场所，现在国内外对于其抗生素耐药性研究颇为深入，然而对于其在动物饲料中的研究与应用尚未见报道，我们发现，在经过筛选培养后的特定菌株不但可以促进家禽发育生长，而且可以在一定程度上讲解其体内的有害物质。

乳酸菌，是益生菌的一种，是一类能利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称，其能产生乳酸致使肠道内pH下降，从而抑制其他有害微生物的生长，并且能分泌细菌素等抗菌物质，降低胺和氨的产生，对于改善肠道环境具有重要意义。

肠球菌，为G⁺菌，是需氧或兼性厌氧菌，是维持动物肠道微生态平衡的重要组成部分，对于某些菌种具有条件致病性，但是我们所使用的菌株经过选育，不仅具有出色的生物学特性，而且能够有效抑制有害微生物的繁殖，增强免疫力，促消化吸收，降低腹泻率。

在肉鸭的基础日粮中，以玉米为主的饲粮缺少蛋氨酸、赖氨酸和苏氨酸等，因此，额外提供足够水平的氨基酸是非常有必要的，可以显著增加肉鸭肌肉生长的重量。在肉鸭生长早期，其对氨基酸需求量大，所以在本发明中，针对早期肉鸭的氨基酸含量较高，而蛋白质氨基酸是成本的重要组成之一，因此针对于生长后期的肉鸭，我们将减少氨基酸的添加。

膜发酵菠萝渣粉或其他水果渣粉，是将菠萝或其他无法销售的水果作为发酵基质，添加益生菌发酵剂进行发酵处理而形成的饲料，可以变废为宝，大大降低成本，而且发酵后的果渣益生菌含量高，粗纤维、碳水化合物含量高，促进生长，提高饲料利用率。但是，果渣粗纤维含量较高，生长前期的肉鸭对于粗纤维利用有限，过度添加会降低其营养吸收能力，因此，在前期雏鸭的饲料中，我们将减少果渣的含量比例，而在后期，粗纤维可促进肉鸭食物排空，因此可以加大用量。果渣相对于麸皮等虽然粗纤维含量有所上升，但是粗蛋白含量有所下降，因此本产品中添加氨基酸可一定程度上达到补齐所短的效果。

发明内容

本发明的目的在于弥补当下技术的漏洞，更新优化饲料的制作方法，提供了一种改善肉鸭肠道功能的饲用益生菌剂及其制备方法，以改善肉鸭生长发育状况。

本发明是通过前文所述的技术方案实现的：

将混合菌液先与膨化玉米粉混合，再与氨基酸混合，最后与复合载体混合。

具体步骤如下：

1.生长前期的鸭

(1)将贝莱斯芽孢杆菌、醋酸钙不动杆菌、肠球菌和乳酸菌的种子菌液接种在LB液体培养基中，在37℃、120r/min条件下震荡扩大培养至贝莱斯芽孢杆菌、以肠球菌和乳酸菌的浓度分别为5.5-7.6×10¹²CFU/mL、1.2-4.6×10¹⁰CFU/mL、6.1-8.6×10¹²CFU/mL、3.8-6.2×10¹²CFU/mL，并将扩大后的菌液按体积4-5：1：1：1混合制成混合菌液；

(2)将沸石粉与膜发酵菠萝渣粉按质量比4：1混合，制成复合载体；

(3)将(1)所制的混合菌液与膨化玉米粉混合，再混入一定比例的氨基酸，最后将混合的膨化玉米粉与(2)所制的复合载体混合，获得所述益生菌剂。

(2)中，膜发酵菠萝渣粉质量占总益生菌剂的2％

(3)中，1kg膨化玉米粉加入100ml混合菌液，所加入氨基酸为赖氨酸盐酸盐、DL-蛋氨酸和L-苏氨酸，使赖氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苏氨酸水平分别为1.10％、0.90％和0.85％。混合的膨化玉米粉与复合载体的质量比为1:100。

2.生长后期的鸭

其余步骤相同，但膜发酵菠萝渣粉质量占总益生菌剂的6％，控制赖氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苏氨酸水平分别为0.85％、0.72％、0.65％

本发明原理为：贝莱斯芽孢杆菌可有效抑制其他肠道有害菌的生长，提高肉鸭抗病性，维持肠道微生态平衡。经过选育的肠球菌同样具有提高免疫力的效果，并且能够与乳酸菌一起防止因贝莱斯芽孢杆菌引起的肉鸭粪便固化，此外，乳酸菌亦可降低肠道pH，分泌抗菌物质，降低胺和氨的产生，对于肉鸭的生长同样具有巨大的裨益。在肉鸭的生长早期，其对于氨基酸需求量大，适量添加氨基酸可显著增加其日增重，但因其嗉囊发育不完善，无法消化过量的粗纤维，因此膜发酵菠萝渣粉不宜过多添加；而在肉鸭的生长后期，其对于氨基酸的需求减少，无法像早期一样显著增加日增重，为节约成本，故减少氨基酸的添加，但后期肉鸭发育逐渐完善，对于粗纤维消化功能增强，且由于膜发酵菠萝渣粉或其他水果渣粉的诸多益处，故增加其添加量。

本发明相比现有技术具有以下优点：本发明提供了一种肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法，该复合益生菌剂应用在肉鸭饲料添加剂中，具有助消化、绿色、减抗甚至替抗的效果，增加肉鸭免疫力，降低成本。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，用于肉鸭生长前期，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

实施例

1.材料

本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。

2.方法

2.1制备混合菌液

称取25克LB培养基，溶解1000m L自来水中，充分混匀，均分两份，121℃高压蒸汽灭菌20分钟，接种5m L贝莱斯芽孢杆菌、醋酸钙不动杆菌、肠球菌和乳酸菌种子菌液，在37℃、120r/min条件下进行震荡扩大培养,调节至贝莱斯芽孢杆菌、醋酸钙不动杆菌、肠球菌和乳酸菌的浓度分别为5.5-7.6×10¹²CFU/mL、1.2-4.6×1010CFU/mL、6.1-8.6×10¹²CFU/mL、3.8-6.2×10¹²CFU/mLLB培养基的配方为：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g。

将经过扩大培养的贝莱斯芽孢杆菌和肠球菌菌液按照体积比4-5：1：1：1混合制成混合菌液。

2.2制备复合载体

将沸石粉和膜发酵菠萝渣粉按质量比为4：1混合，获得复合载体。

2.3制备复合益生菌剂

取100ml混合菌液，加入1.0kg的膨化玉米粉中，搅拌混合均匀，再在含菌的膨化玉米粉中加入100kg的复合载体中加入赖氨酸盐酸盐、DL-蛋氨酸和L-苏氨酸，使赖氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苏氨酸水平分别为1.10％、0.90％和0.85％，最后将混合的膨化玉米粉加入100kg的复合载体中，搅拌混合均匀，获得所述复合益生菌剂。

2.4益生菌剂耐受性鉴定

2.4.1人工胃液耐受性

将步骤2.1的混合菌液和步骤2.3的复合益生菌剂分别接入pH为2、3、4的人工胃液中，37℃、140r/min摇床摇动，在0h、2h、4h、6h时分别取样，测量活菌数，计算存活率。

人工胃液：取质量分数为10％的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释，使pH值分别为2、3、4，每100mL溶液中加1g胃蛋白酶，充分溶解后用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。

2.4.2胆盐耐受性

将步骤2.1的混合菌液和步骤2.3的复合益生菌剂分别接入到含禽胆盐分别为0.1％、0.3％、0.5％的人工肠液中，37℃,140r/min摇床摇动,在0h、2h、4h、8h时分别取样,测量活菌数,计算存活率。

人工肠液:取KH2PO46.8g，加蒸馏水500mL溶解，用0.4％(w/v)的NaOH溶液调节pH值至6.8，加水至1000mL，每100mL溶液中加入1g胰蛋白酶，充分溶解后用0.22μm的微孔滤膜过滤除菌。用时每100mL加入质量浓度为10％的禽胆盐溶液1mL、3mL、5mL即为含禽胆盐0.1％、0.3％、0.5％的人工肠液。

2.4.3耐受性检测结果及结论

结果如下表1-2所示

表1：人工胃液耐受性鉴定结果

表2：胆盐耐受性鉴定结果

表1-2可以看出，利用本发明制备获得的复合益生菌剂因为有载体和膨化玉米粉的保护，其耐受性大大提高，说明载体可保持益生菌菌体活性，提高了益生菌的有效利用效率。

2.5益生菌剂对肉鸭营养物质代谢及生长性能的影响

2.5.1饲养管理

试验开始前对鸭舍进行消毒，并平均划分成4个区块，饲养采取平养方式，选取120只1日龄的雏鸭，随机分为4组，不分公母，每组各30只，进行为期42天的饲养试验。试验期间让种鸭自由活动、取食、饮水，其他方式均以按常规程序进行饲养、防疫。饲喂期间每日观察鸭群健康情况、吃料、饮水、运动及病亡率。

CK组：空白对照组，不添加任何菌剂、氨基酸和膜发酵菠萝渣粉，只饲喂全价饲料；

Ⅰ组：在CK组饲养管理的基础上添加贝莱斯芽孢杆菌，使饲料中的活菌含量为5×10⁶CFU/g；

Ⅱ组：在CK组饲养管理的基础上添加复合益生菌剂的普通饲料，使饲料中的活菌含量为5×10⁶CFU/g。

2.5.2益生菌对鸭粪便及其营养物质残留量的影响

试验期每晚清除剩余饲料，在每个试验组的笼下放置洁净的瓷盘，在第3、7、14、21、28、35、42天清晨收集粪便，按组混合均匀，每组取二份，其中：一份50g/组鲜粪，置于烧杯中，加入5mL质量浓度为10％的硫酸搅拌均匀(进行固氮)，放于65～70℃的烘箱中烘干，供用于粗蛋白含量测定；另一份200g/组鲜粪置于65～70℃烘箱中烘干用于测定粪样中的钙、磷的百分含量。

粗蛋白含量测定依据GB/T 6432-1994饲料中粗蛋白测定方法进行检测；

磷含量的测定依据GB/T 6437-2002饲料中总磷的测定(分光光度法)；

钙含量的测定依据GB/T 6436-2002饲料中钙的测定。

在试验的第3、7、14、21、28、35、42天全天观察鸭的排便状态，标记方法为：10％及以上大便发生干结的记为“++”，正常记为“+”，10％以上大便过稀(腹泻)记为“-”。

2.5.4结果与结论

结果如下表3所示

表3：益生菌对鸭粪便及其营养物质残留量的影响结果

表3中可以看出，无论是贝莱斯芽孢杆菌单独添加，还是添加所述复合益生菌剂，各类营养物质在粪便中的残留相比对照都有一定减少，说明贝莱斯芽孢杆菌和肠球菌均有促进营养物质分解、促进吸收的作用。但单独添加贝莱斯芽孢杆菌时，鸭粪便出现干结固化的情况，这对肠道功能尚未发育完全的雏鸭的肠道带来了一定的不利影响。而贝莱斯芽孢杆菌与其他菌种配合后，该现象被显著缓解，且相比较单独添加，其营养物质在粪便中的残留更少，说明两者结合，可进一步促进营养物质的分解和吸收。

2.6益生菌剂对鸭免疫性能的影响

家禽免疫器官中评价家禽免疫力的重要指标是法氏囊、脾和胸腺等的重量，家禽机体内产生抗体的主要器官为脾脏；机体中用来诱导B细胞分化和成熟的场所则是法氏囊，经法氏囊诱导分化和成熟后的B细胞经过淋巴血液循环到外周淋巴器官并参与体液免疫；而胸腺则是对T细胞的成熟和分化起着决定性的作用，它对诱导T细胞成熟起着决定性的作用。而免疫器官指数的提高就意味着机体的免疫系统成熟速度较快。

2.6.1饲养管理

同上述步骤2.5.1的饲养管理和分组方法。

2.6.2免疫器官指数的测定

试验第21天和42天清晨，每组随机抽取三只鸭(体重相近，以减少个体差异)屠宰，分别采摘脾脏、两侧胸腺、法氏囊，将血液清除干净，剔除脂肪后精密称量鲜重，以免疫器官的克数占千克体重的份额(g/Kg)表示免疫器官指数。

计算公式：免疫器官指数(g/Kg)＝免疫器官鲜重/宰前空腹活重

2.6.3结果与结论

结果如下表4所示：

表4：益生菌剂对鸭免疫性能的影响结果

表4中可以看出，贝莱斯芽孢杆菌具有免疫调节作用，可促进动物免疫器官的生长发育，提高鸭的免疫器官指数，而贝莱斯芽孢杆菌和醋酸钙不动杆菌、肠球菌和乳酸菌配合使用，免疫促进效果更加显著。

2.7益生菌剂对鸭生长性能的影响

2.7.1饲养管理

同上述步骤2.5.1的饲养管理和分组方法。

2.7.2鸭死亡情况

全程试验中，除了组Ⅰ有2只鸭死亡外，其余组无死亡病例。

2.7.3平均日增重

试验第1、21、42天清晨，对各组进行称重(g)，取平均值。

平均日增重＝(阶段末重-阶段初重)/阶段天数

结果如下表5所示：

表5：益生菌剂对鸭平均日增重的影响结果

表5中可以看出，添加益生菌的组与对照组相比，平均日增重显著升高。而添加复合益生菌剂的组Ⅲ升高幅度最大，说明本发明的复合益生菌剂对鸭生长性能具有显著提高。

2.8氨基酸和膜发酵菠萝渣粉对肉鸭生长性能的影响

2.8.1饲养管理

同上述步骤2.5.1的饲养管理，分组方法如下：

CK组：空白对照组，不添加任何菌剂，只饲喂全价饲料；

Ⅰ组：在CK组饲养管理的基础上1-42d控制赖氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苏氨酸水平分别为0.95％、0.80％和0.70％，膜发酵菠萝渣粉控制在4％；

Ⅱ组：在CK组饲养管理的基础上1-21d控制赖氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苏氨酸水平分别为1.10％、0.90％和0.85％，膜发酵菠萝渣粉控制在2％，22-42d控制赖氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苏氨酸水平分别为0.85％、0.72％、0.65％，膜发酵菠萝渣粉控制在6％。

2.8.2平均日增重

试验第1、21、42天清晨，对各组进行称重(g)，取平均值。

结果如下表6所示：

表6：氨基酸和膜发酵菠萝渣粉对鸭平均日增重的影响结果

表6中可以看出，添加了氨基酸和膜发酵菠萝渣粉的组与对照组相比，平均日增重显著升高。在1-21天期间，组Ⅰ相对于组Ⅱ增重较不明显，说明在鸭的生长前期合理搭配比例较为重要，而到了21-42天期间，即鸭生长后期，搭配比例的重要性下降，出于节约成本的考虑，可适当减少氨基酸的添加。

以上为本发明一种详细的实施方式和具体的操作过程，是以本发明技术方案为前提下进行实施，但本发明的保护范围不限于上述的实施例。

Claims (6)

1.一种肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法，其特征在于，所述饲用益生菌剂由混合菌液和复合载体组成，其中针对于生长前期的肉鸭，所述混合菌液为5.5-7.6×10¹²CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌、1.2-4.6×10¹⁰CFU/mL醋酸钙不动杆菌、6.1-8.6×10¹²CFU/mL肠球菌和3.8-6.2×10¹²CFU/mL乳酸菌按照体积比4-5：1：1：1混合所得，所述氨基酸额外来源于赖氨酸盐酸盐、DL-蛋氨酸和L-苏氨酸，所述复合载体为沸石粉与膜发酵菠萝渣粉的混合物，按照质量比4：1混合所得。

2.一种如权利要求1所述的肉鸭生长前期饲用益生菌剂及其制备方法，包括以下步骤：

(1)分别将贝莱斯芽孢杆菌、醋酸钙不动杆菌、肠球菌和乳酸菌种子菌液接种在LB液体培养基中，在37℃、120r/min条件下进行震荡扩大培养并调节至贝莱斯芽孢杆菌、醋酸钙不动杆菌、肠球菌和乳酸菌的浓度分别为5.5-7.6×10¹²CFU/mL、1.2-4.6×1010CFU/mL、6.1-8.6×10¹²CFU/mL、3.8-6.2×10¹²CFU/mL；将经过扩大培养的贝莱斯芽孢杆菌、肠球菌和乳酸菌菌液按

照体积比4-5：1：1：1混合制成混合菌液；

(2)将沸石粉和膜发酵菠萝渣粉按照质量比为4：1混合，获得复合载体；

(3)先将步骤(1)的混合菌液与膨化玉米粉混合，再将含菌的膨化玉米粉与赖氨酸盐酸盐、DL-蛋氨酸和L-苏氨酸混合，最后再与复合载体混合，获得所述饲用益生菌剂。

3.根据权利要求2所述的一种肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法，所述步骤(3)中，每1.0kg的膨化玉米粉中加入100ml混合菌液。

4.根据权利要求2所述的一种肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法，所述步骤(3)中，赖氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苏氨酸水平分别为1.10％、0.90％和0.85％。

5.根据权利要求2所述的一种肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法，所述步骤(3)中，含菌的膨化玉米粉与复合载体的用量的质量比为1：100，其中膜发酵菠萝渣粉占总饲用益生菌剂的2％。

6.一种肉鸭饲用益生菌剂及其制备方法，针对于生长后期的肉鸭，其余步骤相同，但赖氨酸、蛋氨酸+胱氨酸、苏氨酸水平分别为0.85％、0.72％、0.65％，膜发酵菠萝渣粉占总饲用益生菌剂的6％。