CN114533780B - 肉桂精油在制备抑菌药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及肉桂精油在制备抑菌药物中的用途，属于医药技术领域。所述的菌种为：类鼻疽伯克霍尔德菌、洋葱伯克霍尔德菌。肉桂精油作为一种特效的抑菌剂，能够有效地抑制类鼻疽伯克霍尔德菌和洋葱伯克霍尔德菌，本发明将肉桂精油作为抑菌剂使用，必将减轻人类对于抗生素的依赖，为中草药的研究开发奠定一定的基础，具有临床应用意义。是一种高效、毒副作用小甚至是无毒副作用的临床治疗药物。

Description

肉桂精油在制备抑菌药物中的用途

技术领域

本发明涉及肉桂精油在制备抑菌药物中的用途，属于医药技术领域。

背景技术

在现有技术中，抗生素的滥用现象屡见不鲜，滥用抗生素所产生的副作用也日趋严重。

类鼻疽伯克霍尔德菌、洋葱伯克霍尔德菌，均属于与人类疾病有关的病原体，严重危害人类的健康和生命安全，且抗药性在逐步增强。此类病菌广泛流行于我国的南方，而且病死率较高。

因此，急切需要寻找一种安全有效、副作用小的药物替代传统抗生素，用以解决上述技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肉桂精油在制备抑菌药物中的用途。提供一种植物新用途。

本发明采用如下技术方案：肉桂精油在制备抑菌药物中的用途。

所述的菌种为：类鼻疽伯克霍尔德菌、洋葱伯克霍尔德菌。

所述的肉桂精油的浓度≥12.5mg/ml。

药物剂型不限于此，按上述肉桂精油与制药上常用的药用载体，如赋形剂或辅料可以混合制成片剂、口服剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、注射剂、喷剂、外用制剂等液体制剂、固体制剂或其它常规制剂。

本发明的优点是：

1、病菌感染在临床中极为常见，临床治疗的传统方法主要采用生物药品（如青、链霉素等）和化学药品（如磺胺类等），但传统方法往往会产生一定的耐药性、有副作用等不良反应。本发明为中草药抗菌提供了依据、奠定了基础。

2、肉桂精油作为一种特效的抗菌剂，能够有效地抑制类鼻疽伯克霍尔德菌和洋葱伯克霍尔德菌，本发明将肉桂精油作为抑菌剂使用，必将减轻人类对于抗生素的依赖，为中草药的研究开发奠定一定的基础，具有临床应用意义。

3、本发明有助于广大医务工作者去寻找一种高效、毒副作用小甚至是无毒副作用的临床治疗药物。

附图说明

附图1：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验琼脂稀释法－肉桂精油稀释500mg/ml无细菌生长。

附图2：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验琼脂稀释法－肉桂精油稀释250mg/ml无细菌生长。

附图3：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验琼脂稀释法－肉桂精油稀释125mg/ml无细菌生长。

附图4: 肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验琼脂稀释法－肉桂精油稀释62.5mg/ml无细菌生长。

附图5: 肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验琼脂稀释法－肉桂精油稀释31mg/ml无细菌生长。

附图6: 肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油稀释16mg/ml无细菌生长。

附图7: 肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油稀释8mg/ml无细菌生长。

附图8: 肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油稀释4mg/ml无细菌生长。

附图9：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油含量1000mg/ml。

附图10：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油含量500mg/ml 。

附图11：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油含量250mg/ml。

附图12：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油含量125mg/ml。

附图13：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油含量62.5mg/ml。

附图14：肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法－肉桂精油含量31mg/ml。

附图15：肉桂精油原液体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验及肉桂精油配制抑菌膏对类鼻疽伯克霍尔德菌抑菌实验，纸片扩散法。

附图16: 肉桂精油体外抑制洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法-肉桂精油原浓度。

附图17：肉桂精油体外抑制洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法-肉桂精油稀释100mg/ml。

附图18：肉桂精油体外抑制洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法-肉桂精油稀释50mg/ml 。

附图19：肉桂精油体外抑制洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法-肉桂精油稀释25mg/ml 。

附图20：肉桂精油体外抑制洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法-肉桂精油稀释12.5mg/ml。

附图21：阳性对照注射用头孢他定对洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌抑菌实验纸片扩散法-头孢他啶稀释2%。

附图22：阳性对照注射用头孢他定对洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌抑菌实验纸片扩散法-头孢他啶稀释1% 。

附图23：阳性对照注射用头孢他定对洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌抑菌实验纸片扩散法-头孢他啶稀释0.7% 。

附图24：阳性对照注射用头孢他定对洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌抑菌实验纸片扩散法-头孢他啶稀释0.5%。

附图25：阳性对照注射用头孢他定对洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌抑菌实验纸片扩散法-头孢他啶稀释0.2% 。

附图26：阳性对照注射用头孢他定对洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌抑菌实验纸片扩散法-头孢他啶稀释0.1% 。

附图27：肉桂精油体外抑制白色念珠菌实验纸片扩散法-肉桂精油100mg/ml及阳性对照伊曲康唑100mg/ml 。

附图28：肉桂精油体外抑制白色念珠菌实验纸片扩散法-肉桂精油50mg/ml及阳性对照伊曲康唑50mg/ml 。

 附图29：肉桂精油体外抑制白色念珠菌实验纸片扩散法-肉桂精油25mg/ml及阳性对照伊曲康唑25mg/ml 。

附图30：肉桂精油体外抑制白色念珠菌实验纸片扩散法-肉桂精油12.5mg/ml及阳性对照伊曲康唑12.5mg/ml 。

附图31：肉桂精油体外抑制白色念珠菌实验纸片扩散法。

附图32：肉桂精油体外抑制金黄色葡萄球菌实验纸片扩散法-肉桂精油100mg/ml及阳性对照头孢拉啶浓度及100mg/ml。

附图33：肉桂精油体外抑制金黄色葡萄球菌实验纸片扩散法-肉桂精油50mg/ml及阳性对照头孢拉啶浓度及50mg/ml。

附图34：肉桂精油体外抑制金黄色葡萄球菌实验纸片扩散法-肉桂精油25mg/ml及阳性对照头孢拉啶浓度及25mg/ml。

附图35：肉桂精油体外抑制金黄色葡萄球菌实验纸片扩散法-肉桂精油12.5mg/ml及阳性对照头孢拉啶浓度及12.5mg/ml。

附图36：肉桂精油体外抑制大肠杆菌实验纸片扩散法-肉桂精油100mg/ml及阳性对照硫酸庆大霉素浓度100mg/ml。

附图37：肉桂精油体外抑制大肠杆菌实验纸片扩散法-肉桂精油50mg/ml及阳性对照硫酸庆大霉素浓度50mg/ml。

附图38：肉桂精油体外抑制大肠杆菌实验纸片扩散法-肉桂精油25mg/ml及阳性对照硫酸庆大霉素浓度25mg/ml。

附图39：肉桂精油体外抑制大肠杆菌实验纸片扩散法-肉桂精油12.5mg/ml及阳性对照硫酸庆大霉素浓度12.5mg/ml。

附图40：是肉桂精油色谱图。

具体实施方式

实施例1

肉桂精油在制备抑菌药物中的用途。所述的菌种为类鼻疽伯克霍尔德菌、鼻疽伯克霍尔德菌或洋葱伯克霍尔德菌。

实施例2

肉桂精油制备方法：

肉桂精油的提取方法很多，如微波辅助水蒸气蒸馏、超声波辅助提取、超临界二氧化碳萃取、分子蒸馏等等，不限于此。

以超声波辅助蒸馏法为例，其提取工艺简述如下：

（1）将桂皮粉碎，过50目筛，取50g粉末置于烧瓶内，加入500mL水，置于超声波仪中处理10min。

（2）蒸馏，馏出液经过水冷凝管收集于锥形瓶中。

（3）将上述液体转移至分液漏斗中充分静置分层，分液，弃去下层，得到金黄色液体，即为肉桂精油粗品。

（4）将上述粗品转移至锥形瓶中加入15g无水硫酸钠干燥30min，滤出结晶硫酸钠，即得肉桂精油。

实施例3

肉桂精油技术指标如下（实施例2得到）：

肉桂精油是一种黄色至红褐色澄清液体，微溶于水，易溶于乙醇、冰醋酸，难溶于甘油和矿物油。

肉桂精油含有多种活性成分。肉桂原料的产地、采集时间、提取部位、提取方法及检测方法等因素对肉桂精油的化学成分有一定的影响。

肉桂精油检测结果如下表七（见附图40）：

表七

实验例

实验目的：为了验证肉桂精油的抑菌效果及最低抑菌浓度，做了肉桂精油（实施例2产品）体外抑制针对类鼻疽伯克霍尔德菌实验，共做了2个实验。第一个肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌琼脂稀释法：（见表一），第二个实验肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验纸片扩散法（见表二），肉桂精油体外抑制洋葱伯克霍尔德菌实验（见表三），肉桂精油体外抑制白色念珠菌实验（见表四），肉桂精油体外抑制金黄色葡萄球菌实验（见表五），肉桂精油体外抑制大肠杆菌实验（见表六）。

实验证明：肉桂精油对供试5种菌均有较高抑菌活性，数据显示对类鼻疽伯克霍尔德菌抑制活性强，琼脂稀释法结果最低抑菌浓度4mg/ml。

实验方法：

一、纸片扩散法

第一步：把以灭菌的营养琼脂溶解后倒入8个培养皿中等凝固后标记；1～8号。

第二步：把无菌水倒入试管中，刮取类鼻疽伯克霍尔德菌菌种到试管中，浓度近似0.5#麦氏比浊管相近的溶液（1.5x10CFu/ml），用棉签蘸取菌液涂抹到凝固后的培养皿表面。

第三步：把精油8管（原液，100%， 910mg/ml、50%， 500mg/ml

、25%， 250mg/ml、 12.5%， 125mg/ml、6.25%，62.5mg/ml

、3.1%，31mg/ml、 1.6%，16mg/ml）摇匀，倒入离心管中盖上盖，取6mm纸片放入盛有不同浓度的精油中，使其精油药液浸泡到，取蘸有精油的1个纸片放入划好菌和标记好培养皿上，同时做阴性对照及阳性对照。

第四步：放入36℃培养，24h后观察并记录抑菌圈大小，拍照。

二、最低抑菌浓度

第一步：把营养琼脂溶解后等冷却到55℃左右。

第二步：把无菌水倒入试管中，刮取菌种到试管中，浓度近似0.5#麦氏比浊管相近的溶液（1.5x10CFu/ml），用棉签蘸取菌液涂抹到凝固后的培养基表面。

第三步：分别取精油药液（100%、50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、1.5625%、0.78125%）2 mL分别加入到无菌平皿，倾入55 ℃左右灭菌营养琼脂18 mL，充分混匀，待培养基凝固后，用移液枪吸取菌悬液100µl于含不同浓度挥发油的培养基上涂布均匀。取2mL1%吐温-80蒸馏水溶液加入平皿，混匀18 mL营养琼脂,涂布100µl为阴性对照，取2 mL1.无菌水溶液加入平皿，混匀18 mL营养琼脂,涂布100µl为空白对照。(36+1) ℃下培养24h后。

第四步：培养24h后因为比较难观察，分别将每个平板上的在菌落划线接种于琼脂平板上，置于37℃条件恒温培养18至24h，以完全无菌生长的最低精油稀释浓度为精油对类鼻疽伯克霍尔德菌的最低抑菌浓度(MIC)。

实验仪器及试剂：

显微镜，南京江南永新光学有限公司，BM2000。

立式压力蒸汽灭菌器，重庆雅马拓科技有限公司，Model No。

电冰箱，青岛海尔股份有限公司，BCD-206TS。

电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司，DHG-9030A。

电子天平,常州万得天平仪器有限公司，FA12D4G。

数显恒温水浴锅，金坛市盛蓝仪器有限公司，KW-1000DC。

精密可编程热风循环烘箱，立德泰勀（上海）科学仪器有限公司。

KQ-B电子调温万用炉，天津市泰斯特仪器有限公司。

DK-98-11恒温水槽，重庆雅马拓科技有限公司。

PGX-280A-12HM超纯水机，四川优普超纯科技有限公司。

UPT-1-10T净化台,苏州净化设备有限公司。

挥发油提取装置：

实验用品：接种环、平皿、酒精灯、称量皿、玻璃棒、三角烧杯、无菌水、吸管，吸球、无菌棉签、已高压灭菌的6mm滤纸片45度烘干、革兰氏染色液、营养琼脂（广东环凯微生物科技有限公司）、莎堡琼脂培养基（实验室自制）、阳性对照：头孢拉定胶囊：海南三叶制药厂有限公司批号：210501、硫酸庆大霉素注射液河南天致药业有限公司批号：21053111、伊曲康唑胶囊：西安杨森制药有限公司批号：lhj2465 以上三种药品在三亚陈宏媚诊所购买。

一、肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验

1、琼脂稀释法（见表一）

实验机构：三亚中心医院。

负责人：王玉丰。

实验员：陈如寿。

方法：琼脂稀释法。

菌株：类鼻疽伯克霍尔德菌（由海南省三亚中心医院检验科提供）。

实验时间：2021年8月23日。

表一

结论：表一琼脂稀释法实验表明，当肉桂精油的浓度≥4.00mg/ml时，均有抑菌作用，肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌琼脂稀释法实验图片见附图1-附图8。

、纸片扩散法（见表二）

实验机构：三亚中心医院。

负责人：王玉丰。

实验员：陈如寿。

方法：纸片扩散法。

菌株：类鼻疽伯克霍尔德菌（由海南省三亚中心医院检验科提供）。

亚胺培南纸片：购自温州市康泰生物科技有限公司，含量IPM 10ug,批号UF0312Z1。

实验时间：2021年8月23日。

表二

结论：表二中纸片扩散法实验表明，当肉桂精油的浓度为31mg/ml时，仍有较强的抑菌作用，抑菌圈直径为20mm。

肉桂精油体外抑制类鼻疽伯克霍尔德菌实验图见附图9-附图15。

二、肉桂精油体外抑制洋葱伯克霍尔德菌实验纸片扩散法

实验机构：海南启星生物科技有限公司。

负责人：王玉丰。

实验员：邓一鸣、邓成儒、靳成达、肖培富。

菌种：洋葱伯克霍尔德菌（购于广东省微生物菌种保藏中心）。

菌种号：GDMCC编号1.450；其他编号ATCC25416。

实验方法：纸片扩散法。

抑菌剂：肉桂精油（本公司自提）。

阳性对照品：注射用头孢他啶。

阴性对照品：无菌水。

实验时间：2021年7月15日。

实验结果：表三：肉桂精油体外抑制洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌实验。

表三

实验结论：

1.当肉桂精油的浓度≥12.5mg/ml时，均有较强的抑菌作用。

2. 头孢他啶的浓度稀释0.1%时，均有抑菌作用。

3.无菌水没有抑菌作用。

肉桂精油体外抑制洋葱类鼻疽伯克霍尔德菌实验图见附图16-附图26。

三、肉桂精油体外抑制白色念珠菌实验

实验机构：海南启星生物科技有限公司。

负责人：王玉丰。

实验员：邓一鸣、邓成儒、靳成达、肖培富。

菌种：白色念珠菌（海南热带海洋学院食品科学工程实验中心提供）。

抑菌剂：肉桂精油（本公司自提）。

阳性对照品：伊曲康唑。

阴性对照品：无菌水。

实验方法：纸片扩散法。

实验时间：2021年7月20日。

实验结果见表四：肉桂精油体外抑制白色念珠菌实验。

表四

实验结论：

1.当肉桂精油的浓度≥12.5mg/ml时，均有较强的抑菌作用。

2. 伊曲康唑的浓度≥5mg/ml时，均有较强的抑菌作用。

3.无菌水没有抑菌作用。见附图27-附图31。

四、肉桂精油体外抑制金黄色葡萄球菌实验

实验机构：海南启星生物科技有限公司。

负责人：王玉丰。

实验员：邓一鸣、邓成儒、靳成达、肖培富。

菌种：金黄色葡萄球菌（由海南热带海洋学院食品科学工程实验中心提供）。

抑菌剂：肉桂精油（本公司自提）。

阳性对照品：头孢拉啶。

阴性对照品：无菌水。

实验方法：纸片扩散法。

实验时间：2021年7月22日。

实验结果见表五：肉桂精油体外抑制金黄色葡萄球菌实验。

表五

实验结论：

1当肉桂精油的浓度≥12.5mg/ml时，均有较强的抑菌作用。

2. 头孢拉啶的浓度≥5mg/ml时，均有较强的抑菌作用。

3.无菌水没有抑菌作用。见附图32-附图35。

五、肉桂精油体外抑制大肠杆菌实验

实验机构：海南启星生物科技有限公司。

负责人：王玉丰。

实验员：邓一鸣、邓成儒、靳成达、肖培富。

菌种：大肠杆菌（由海南热带海洋学院食品科学工程实验中心提供）。

抑菌剂：肉桂精油（本公司自提）。

阳性对照品：硫酸庆大霉素。

阴性对照品：无菌水。

实验方法：纸片扩散法。

实验时间：2021年7月25日。

实验结果见表六：肉桂精油体外抑制大肠杆菌实验。

表六

实验结论：

1.当肉桂精油的浓度≥12.5mg/ml时，均有较强的抑菌作用。

2. 硫酸庆大霉素的浓度≥5mg/ml时，均有较强的抑菌作用。

3.无菌水没有抑菌作用。见附图36-附图39。

上面描述，只是本发明的具体实施方式，各种举例说明不对本发明的实质内容构成限制。

Claims (1)

1.肉桂精油在制备抑菌药物中的用途；所述的菌种为：类鼻疽伯克霍尔德菌、洋葱伯克霍尔德菌；所述的肉桂精油的浓度≥12.5mg/ml。

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