CN114525334A - 一种用于检测维生素d易感基因多态性的引物组、探针组、试剂盒及方法 - Google Patents

一种用于检测维生素d易感基因多态性的引物组、探针组、试剂盒及方法 Download PDF

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Abstract

本申请提供了一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组、探针组、试剂盒及方法，易感基因选自GC rs4588、CYP2R1 rs10741675和CYP24A1 rs2209314，第一引物组用于GC rs4588的扩增，且碱基序列如SEQ ID No.1~2所示；第二引物组用于CYP2R1 rs10741675的扩增，且碱基序列如SEQ ID No.5~6所示；第三引物组用于CYP24A1 rs2209314的扩增，且碱基序列如SEQ ID No.9~10所示。本申请提供的用于检测维生素D易感基因多态性的引物组、探针组、试剂盒及方法，能够快速和准确的检测人体维生素D易感基因多态性。

Description

一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组、探针组、试 剂盒及方法
技术领域
本申请涉及基因检测技术领域，具体涉及一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组、探针组、试剂盒及方法。
背景技术
维生素D是一种脂溶性维生素，能够促进小肠黏膜对钙的吸收，促使钙沉着于新骨形成部位，促进骨钙化及成骨细胞功能和骨样组织成熟。人体主要通过饮食摄入和皮肤日光照射来获取维生素D，其中，由于天然食物中维生素D的含量很少，饮食仅能满足人体维生素D需求的10%左右，维生素D在体内经25羟化酶催化合成25-羟基维生素D（简称为25(OH)D），25(OH)D是维生素D在体内的主要贮存形式，且具有较长的半衰期，是目前大多数国内外专业专家认为的反映维生素D营养状态的最佳指标。即血浆25（OH）D的浓度小于30nmol/L表示维生素D缺乏，血浆25（OH）D的浓度范围在30nmol/L至49.9nmol/L内可表示维生素D不足，血浆25（OH）D的浓度范围在50nmol/L至150nmol/L可表示维生素D充足，血浆25（OH）D的浓度大于150nmol/L可表示维生素D过量。
然而，影响25(OH)D水平的因素多样，包括年龄、肤色、地理经纬度、季节、日照时间、饮食习惯、空气污染、肥胖以及影响维生素D代谢的药物等，且血浆25(OH)D的水平是一种状态量，同一个体不同时间点取样结果差异较大，若仅采用血浆25(OH)D的水平来检测人体内维生素D的营养状况，存在一定的局限性。
发明内容
本申请提供了一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组、探针组、试剂盒及方法，能够快速和准确的检测人体维生素D易感基因多态性，用于评估个体维生素D缺乏遗传风险。
第一方面，本申请提供了一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组，所述易感基因选自GC rs4588、CYP2R1 rs10741675和CYP24A1 rs2209314，所述引物组包括第一引物组、第二引物组和第三引物组；
所述第一引物组用于所述GC rs4588的扩增，所述第一引物组包括第一上游引物和第一下游引物，所述第一上游引物的碱基序列如SEQ ID No.1所示，所述第一下游引物的碱基序列如SEQ ID No.2所示；
所述第二引物组用于所述CYP2R1 rs10741675的扩增，所述第二引物组包括第二上游引物和第二下游引物，所述第二上游引物的碱基序列如SEQ ID No.5所示，所述第二下游引物的碱基序列如SEQ ID No.6所示；
所述第三引物组用于所述CYP24A1 rs2209314的扩增，所述第三引物组包括第三上游引物和第三下游引物，所述第三上游引物的碱基序列如SEQ ID No.9所示，所述第三下游引物的碱基序列如SEQ ID No.10所示。
本申请的技术方案中，通过上述引物组可以扩增得到维生素D代谢通路中易感基因的碱基序列，从而有助于方便快速及准确的检测到人体内维生素D的营养状况。
第二方面，本申请还提供了一种用于检测维生素D易感基因多态性的探针组，所述易感基因选自GC rs4588、CYP2R1 rs10741675和CYP24A1 rs2209314，所述探针组包括：如上述实施例中所述的引物组、第一探针组、第二探针组和第三探针组；
所述第一探针组用于与所述GC rs4588扩增的核酸序列进行杂交，所述第一探针组的序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；
所述第二探针组用于与所述CYP2R1 rs10741675扩增的核酸序列进行杂交，所述第二探针组的序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；
所述第三探针组用于与所述CYP24A1 rs2209314扩增的核酸序列进行杂交，所述第三探针组的序列如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示。
本申请的技术方案中，通过上述探针组能够快速检测得到维生素D代谢通路中易感基因的碱基序列，从而有助于方便快速及准确的检测到人体内维生素D易感基因多态性。
在本申请的一些实施例中，所述第一探针组的5’修饰有第一荧光报告基团，所述第一探针组的3’修饰有第一荧光淬灭基团，所述第一荧光报告基团选自FAM或VIC，所述第一荧光淬灭基团选自MGB；
所述第二探针组的5’修饰有第二荧光报告基团，所述第二探针组的3’修饰有第二荧光淬灭基团，所述第二荧光报告基团选自FAM或VIC，所述第二荧光淬灭基团选自MGB；
所述第三探针组的5’修饰有第三荧光报告基团，所述第三探针组的3’修饰有第三荧光淬灭基团，所述第三荧光报告基团选自FAM或VIC，所述第三荧光淬灭基团选自MGB。
第三方面，本申请还提供了一种用于检测维生素D易感基因多态性的试剂盒，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括上述实施例中所述的引物组、探针组、PCR缓冲液（含Mg2+）、dNTPs、DNA聚合酶和无核酸酶水。
本申请的技术方案中，通过该试剂盒，能够方便快速及准确的检测到人体内维生素D易感基因多态性。
在本申请的一些实施例中，所述试剂盒还包括：阳性对照和阴性对照。
在本申请的一些实施例中，所述阳性对照包括第一阳性对照、第二阳性对照和第三阳性对照，所述阴性对照为含有无核酸酶水；
其中，所述第一阳性对照包括所述GC rs4588基因位点的野生型质粒、所述CYP2R1rs10741675基因位点的野生型质粒和所述CYP24A1 rs2209314基因位点的野生型质粒；
所述第二阳性对照包括所述GC rs4588基因位点的杂合型质粒、所述CYP2R1rs10741675基因位点的杂合型质粒和所述CYP24A1 rs2209314基因位点的杂合型质粒；
所述第三阳性对照包括所述GC rs4588基因位点的突变型质粒、所述CYP2R1rs10741675基因位点的突变型质粒和所述CYP24A1 rs2209314基因位点的突变型质粒。
在本申请的一些实施例中，所述第一阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/μL；
所述第二阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/μL；
所述第三阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/μL。
在本申请的一些实施例中，所述PCR反应液中的第一引物组中的引物和第一探针组中的探针的浓度分别为0.4μM ~0.8μM；
所述PCR反应液中的第二引物组中的引物和第二探针组中的探针的浓度分别为0.4μM ~0.8μM；
所述PCR反应液中的第三引物组中的引物和第三探针组中的探针的浓度分别为0.4μM ~0.8μM。
第四方面，本申请还提供了一种用于检测维生素D易感基因多态性的方法，包括如下步骤：
对待测样品进行稀释处理；
取适量的PCR反应液与稀释后的待测样品混合，以进行实时荧光定量PCR；
根据实时荧光定量PCR所获取的荧光强度，以得到所述维生素D易感基因多态性的检测结果；
根据所述检测结果来判断目标对象的维生素D缺乏的遗传风险。
本申请的技术方案中，无需对样品进行核酸提取，即可对人体内维生素D的营养状况实现简便、快速及准确的检测，并且检测的成本较低。
在本申请的一些实施例中，所述实时荧光定量PCR的扩增程序包括：
预变性，95℃5min，共进行1个循环；
预扩增，95℃15s，60℃30s，共进行5个循环；
扩增，95℃15s，60℃30s，采集荧光，共进行45个循环。
上述说明仅是本申请技术方案的概述，为了能够更清楚了解本申请的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本申请的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举本申请的具体实施方式。
附图说明
通过阅读对下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本申请的限制。在附图中：
图1为本申请一些实施例提供的用于检测维生素D易感基因的方法的流程示意图；
图2(A)-2(C)为本申请一些实施例提供的维生素D易感基因GC的分型结果图；
图3(A)-3(C)为本申请一些实施例提供的维生素D易感基因CYP2R1的分型结果图；
图4(A)-4(C)为本申请一些实施例提供的维生素D易感基因CYP24A1的分型结果图。
通过上述附图，已示出本申请明确的实施例，后文中将有更详细的描述。这些附图和文字描述并不是为了通过任何方式限制本申请构思的范围，而是通过参考特定实施例为本领域技术人员说明本申请的概念。
具体实施方式
下面将结合附图对本申请技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本申请的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本申请的保护范围。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的技术领域的技术人员通常理解的含义相同；本文中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请；本申请的说明书和权利要求书及上述附图说明中的术语“包括”和“具有”以及它们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。
在本申请实施例的描述中，技术术语“第一”“第二”等仅用于区别不同对象，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量、特定顺序或主次关系。在本申请实施例的描述中，“多个”的含义是两个以上，除非另有明确具体的限定。
在本文中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本申请的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域技术人员显式地和隐式地理解的是，本文所描述的实施例可以与其它实施例相结合。
在本申请实施例的描述中，术语“和/或”仅仅是一种描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如A和/或B，可以表示：单独存在A，同时存在A和B，单独存在B这三种情况。另外，本文中字符“/”，一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
本申请提供了一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组，其中，易感基因选自GC rs4588、CYP2R1 rs10741675和CYP24A1 rs2209314，引物组包括第一引物组、第二引物组和第三引物组；第一引物组用于GC rs4588的扩增，第一引物组包括第一上游引物和第一下游引物，第一上游引物的碱基序列如SEQ ID No.1所示，第一下游引物的碱基序列如SEQ ID No.2所示；第二引物组用于CYP2R1 rs10741675的扩增，第二引物组包括第二上游引物和第二下游引物，第二上游引物的碱基序列如SEQ ID No.5所示，第二下游引物的碱基序列如SEQ ID No.6所示；第三引物组用于CYP24A1 rs2209314的扩增，第三引物组包括第三上游引物和第三下游引物，第三上游引物的碱基序列如SEQ ID No.9所示，第三下游引物的碱基序列如SEQ ID No.10所示。
血浆25(OH)D水平变异主要受到遗传和环境两方面因素影响，而基因多态性是人体产生不同遗传易感性的基础。血浆25(OH)D在血液中主要通过与维生素D结合蛋白（VDBP）结合并进行转运，其中，VDBP由GC基因编码，使得GC基因成为参与维生素D体内合成代谢过程最受关注的基因之一。肝脏中CYP2R1基因编码的25-羟化酶可将钙化醇和胆钙化醇（维生素D3）分别转化为25(OH)D2和25(OH)D3。由CYP24A1基因编码的24-羟化酶能够将25(OH)D与1，25(OH)2D转化为无活性的24，25(OH)2D。因此，维生素D代谢通路基因多态性可能改变个人对维生素D的敏感度。
以下对本申请的引物组、探针组、试剂盒及方法进行详细的说明。
用于检测维生素D易感基因GC rs4588（c.1307G＞T）、CYP2R1 rs10741675（c.1088T>C）、CYP24A1 rs2209314（g.16556T＞C）多态性的引物组、探针组如表1所示，根据NCBI(美国国立生物技术信息中心)公开的人类全基因组序列，使用Primer Premier3.0设计，引物组和探针组由安徽通用生物科技有限公司合成，该探针组包括第一上游引物（简写为GC-QF）、第一下游引物（简写为GC-QR）、第一探针组（简写为GC-WP和GC-MP）、第二上游引物（简写为CYP2R1-QF）、第二下游引物（简写为CYP2R1-QR）、第二探针组（简写为CYP2R1-WP和CYP2R1-MP）、第三上游引物（简写为CYP24A1-QF）、第三下游引物（简写为CYP24A1-QR）、第三探针组（简写为CYP24A1-WP和CYP24A1-MP），探针组中各组成的碱基序列可参见表1。
表1
Figure 322570DEST_PATH_IMAGE001
检测维生素D易感基因多态性的试剂盒
试剂盒包括PCR反应液、阳性对照和空白对照，其中，PCR反应液包括GC PCR反应液、CYP2R1 PCR反应液和CYP24A1 PCR反应液。阳性对照包括第一阳性对照、第二阳性对照和第三阳性对照。阴性对照为无核酸酶水。
GC PCR反应液包括：GC-QF、GC-QR、GC-WP和GC-MP，其碱基序列分别如SEQ ID NO:1~4所示，并且GC-QF、GC-QR、GC-WP和GC-MP的终浓度均为0.4μM。
CYP2R1 PCR反应液包括：CYP2R1-QF、CYP2R1-QR、CYP2R1-WP和CYP2R1-MP，其碱基序列分别如SEQ ID NO:5~8所示。CYP2R1-QF、CYP2R1-QR、CYP2R1-WP和CYP2R1-MP的终浓度均为0.4μM。
CYP24A1 PCR反应液包括：CYP24A1-QF、CYP24A1-QR、CYP24A1-WP和CYP24A1-MP，其碱基序列分别如SEQ ID NO:9~12所示。CYP24A1-QF、CYP24A1-QR、CYP24A1-WP和CYP24A1-MP的终浓度均为0.4μM。
GC PCR反应液、CYP2R1 PCR反应液、CYP24A1 PCR反应液还包括：
2×PCR缓冲液（含Mg2+）、0.25mM的dNTPs、、1U的血液直扩DNA聚合酶和无核酸酶水。其中，血液直扩DNA聚合酶购自苏州白垩纪生物科技有限公司，货号：CRP02490S。无核酸酶水采用本领域的常规方法制备得到。
第一阳性对照包括GC rs4588基因位点的野生型质粒、CYP2R1 rs10741675基因位点的野生型质粒和CYP24A1 rs2209314基因位点的野生型质粒，其中，各质粒的浓度为105copies/μL。
第二阳性对照包括GC rs4588基因位点的杂合型质粒、CYP2R1 rs10741675基因位点的杂合型质粒和CYP24A1 rs2209314基因位点的杂合型质粒，其中，各质粒的浓度为105copies/μL。
第三阳性对照包括GC rs4588基因位点的突变型质粒、CYP2R1 rs10741675基因位点的突变型质粒和CYP24A1 rs2209314基因位点的突变型质粒，其中，各质粒的浓度为105copies/μL。
其中，各阳性对照组中的基因分型结果图可参见图2（A）-2（C）、3（A）-3（C）和4（A）-4（C）。
参照图1，维生素D易感基因的检测方法如下：
S10：对待测样品进行稀释处理：
具体的，将原始血液样本，用无核酸酶水稀释40倍，涡旋混匀后，待用；
S20：取适量的PCR反应液与稀释后的待测样品混合，以进行实时荧光定量PCR；
具体的，从试剂盒中取出所需数量PCR反应液（每检测位点的PCR管数=样本数+1个阴性对照+3个阳性对照）。PCR反应液室温融解后，顺时针离心，揭开管盖。从待测样品（或对照品）中取2.0μL加至PCR反应液中。振荡混匀后，顺时针离心10s，将其移至扩增区进行扩增；
S30：根据实时荧光定量PCR所获取的荧光强度，以得到维生素D易感基因多态性的检测结果；
其中，PCR扩增流程如下：
（1）使用的PCR仪器为ABI 7500，反应体系为20µL；
（2）PCR反应条件如下表2所示；
S40：根据检测结果来判断目标对象的维生素D缺乏的遗传风险。
表2
Figure 436019DEST_PATH_IMAGE002
实验结果
结果判读标准：划定阈值（荧光阈值应划定在扩增曲线的指数增长期，大于阴性和本地信号最大值）。
表3
Figure 361250DEST_PATH_IMAGE003
结果有效性判定：阴性对照结果为阴性（无Ct或Ct值≥38），阳性对照符合表4中的结果。
表4
Figure 506929DEST_PATH_IMAGE004
试剂盒在维生素D缺乏风险评估中的应用
生物样本来源
2021年6月~2021年12月期间在娄底市中心医院产前门诊收集的1076例孕早期妇女外周血，并收集受检者血清25（OH）D水平的检测结果信息。
实验方法
采用上述检测方法对收集的1076例孕早期妇女外周血样本进行检测，检测结果与血清25（OH）D水平进行比对，采用spss22.0统计学软件进行显著性分析，评估本试剂盒在维生素D缺乏风险评估中的效能。
临床样本验证结果分析
参照国际公认的维生素D缺乏标准：血清中25（OH）D小于30nmol/L为维生素D缺乏。1076例临床样本根据血清中25（OH）D水平进行分组，25（OH）D<30nmol/L为维生素D缺乏组，25（OH）D≥30nmol/L为维生素D不缺乏组，对照本试剂盒3基因检测结果进行验证，验证结果显示，GC rs4588（c.1307 G＞T）、CYP2R1 rs10741675（c.1088T>C）、CYP24A1 rs2209314（g.16556 T＞C）均显示出显著差异（见表5）。根据临床样本验证结果，构建遗传模型用于维生素D缺乏易感性预测，并建立了未见风险、低度风险、中度风险、次高度风险、高风险等5种遗传风险评估等级（见表5），可准确预测受检者维生素D缺乏风险，可为临床维生素D缺乏风险评估提供有用指导。
表5
Figure 568426DEST_PATH_IMAGE005
另注：1、维生素D代谢通路中的3个关键基因检测，每个基因均有纯合野生型、杂合突变型和纯合突变型等3种多态性，3基因组合共有3×3×3=27种基因型结果。
2、P值代表差异显著性，P值在0.01~0.05之间表示差异显著，P值小于0.01表示差异非常显著；
OR值代表差异的比值比，如：GC基因OR值为2.063表示与未发生该种变异的受检者相比，携带GC基因rs4588变异的受检者患维生素D缺乏风险为2.063倍。
95% Cl置信区间表示OR值可能存在区间（不同样本量OR值会出现浮动）。
3、遗传模型：采用未见风险、低度风险、中度风险、次高度风险、高风险等5个遗传风险等级来描述受检者可能出现的基因型。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本申请的权利要求和说明书的范围当中。尤其是，只要不存在结构冲突，各个实施例中所提到的各项技术特征均可以任意方式组合起来。本申请并不局限于文中公开的特定实施例，而是包括落入权利要求的范围内的所有技术方案。
序 列 表
<110> 长沙中南大学湘雅医学检验所
<120> 一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组、探针组、试剂盒及方法
<160> 15
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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<213> Artificial Sequence
<400> 6
agctgcagta cagcaaagga aac 23
<210> 7
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 7
cattttcttc cactcct 17
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<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
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<210> 10
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<213> Artificial Sequence
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<210> 11
<211> 16
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<213> Artificial Sequence
<400> 11
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<213> Artificial Sequence
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 13
ttaaggtgca tgaaatgttg gacttaggag gaggttagcg tgcgccactc ccatcacagc 60
tcgaactagt atccaagtca attaaaccta cctgaatgcc tatggcagga tttgtttggg 120
gttggtctca cttagtatct gctatctcct agggagtatc ggccacatca gagacagaat 180
tttggtcttt acaatgagct gttttgcttc agttaaaatc cacttgtccc agactctttg 240
ggactttgtt tacaattcta agcagataaa aatattattg gcttgaaaga gagtatgcct 300
tttttttttt tttttttttt tttttttttt tttacagtaa gtaacagcca cagttaggca 360
ctttggggta acatgtgcaa ctgaacaaaa tacttccaat tttgaaaaat ctggattctg 420
ttggtgtttt ccaacatagt gagttgagaa gtagataaat tgagggtgaa attatataaa 480
ttatgagagg aaaaaaaggc attaagctgg tatgaggtcc tgtaaaggaa atattcttta 540
aggaatttga aatttaaaac tgaagagaag gtgaaaggtt aggataaaat agaagaggta 600
ctcttccatt ttgaaataat gagcaaatga aagaagactg gacttccaat tcagcagcga 660
tttgtatgtt tatttttatg atctcgaaga ggcatgtttc actttctgat ctcaaattga 720
ctattctata ccacaggtat agaattttct tgagacaggc aagtatttct attttcattt 780
ttattgtaaa agatctgaaa tggctattat tttgcattag aaatttgtat aaaataaata 840
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tccaactgct gttccataaa ctcacctcct ctttactgtg attcagaggt aggaaaatgt 1020
aaccctccac ttaacatggc agaatctttt aagaacgtat gcactccaat ctactcattt 1080
ctttcctgtt attgagatgc cattatgtga caggcttttc ctggtgttat tgtaacttgg 1140
ctgtctttgc aatgaaagta agaaacataa ctgatttcat gctatgctca tttaaaagca 1200
agttgaggta gttgtaaaac ttaggaaatt ttatactttt tttaagaaac aaaagagtct 1260
gtgaacacag gcaacaaagt atgtgtagtg ttttacaaat tgtgagttgt aacctagtaa 1320
cagcctattt aaatgaaaaa gagaagaata agaatacagt gagaacatca gagttcatta 1380
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<210> 14
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<213> Artificial Sequence
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ttctttgggg aaatatctat tcaggccctt tgcccatttt aaatttttat ttatttttta 240
taccaacaag aatgagcttg aactttgttc atttttaatt gggctatttg ttttttttat 300
tatgggcttg tttgagctcc ttacgtattt tggatattaa ccccatatca gatgtgtgat 360
ttgtaaacat tttcttccat cctaggttgt ttcttcatta tgttgattgt ttcctttgct 420
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ccataaaatc attgtccaga ccaatgtcat ggcacttttc ccttatgctt tcttctagta 540
gttttacagt ttcaggtctt acatttaagt ctttaactta ttttgagttg atttttgtat 600
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序列表
<110> 长沙中南大学湘雅医学检验所
<120> 一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组、探针组、试剂盒及方法
<141> 2022-04-12
<160> 15
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Claims (10)

1.一种用于检测维生素D易感基因多态性的引物组，其特征在于，所述易感基因选自GCrs4588、CYP2R1 rs10741675和CYP24A1 rs2209314，所述引物组包括第一引物组、第二引物组和第三引物组；
所述第一引物组用于所述GC rs4588的扩增，所述第一引物组包括第一上游引物和第一下游引物，所述第一上游引物的碱基序列如SEQ ID No.1所示，所述第一下游引物的碱基序列如SEQ ID No.2所示；
所述第二引物组用于所述CYP2R1 rs10741675的扩增，所述第二引物组包括第二上游引物和第二下游引物，所述第二上游引物的碱基序列如SEQ ID No.5所示，所述第二下游引物的碱基序列如SEQ ID No.6所示；
所述第三引物组用于所述CYP24A1 rs2209314的扩增，所述第三引物组包括第三上游引物和第三下游引物，所述第三上游引物的碱基序列如SEQ ID No.9所示，所述第三下游引物的碱基序列如SEQ ID No.10所示。
2.一种用于检测维生素D易感基因多态性的探针组，其特征在于，所述易感基因选自GCrs4588、CYP2R1 rs10741675和CYP24A1 rs2209314，所述探针组包括：如权利要求1中所述的引物组、第一探针组、第二探针组和第三探针组；
所述第一探针组用于与所述GC rs4588扩增的核酸序列进行杂交，所述第一探针组的序列如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；
所述第二探针组用于与所述CYP2R1 rs10741675扩增的核酸序列进行杂交，所述第二探针组的序列如SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示；
所述第三探针组用于与所述CYP24A1 rs2209314扩增的核酸序列进行杂交，所述第三探针组的序列如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示。
3.根据权利要求2所述的探针组，其特征在于，所述第一探针组的5’修饰有第一荧光报告基团，所述第一探针组的3’修饰有第一荧光淬灭基团，所述第一荧光报告基团选自FAM或VIC，所述第一荧光淬灭基团选自MGB；
所述第二探针组的5’修饰有第二荧光报告基团，所述第二探针组的3’修饰有第二荧光淬灭基团，所述第二荧光报告基团选自FAM或VIC，所述第二荧光淬灭基团选自MGB；
所述第三探针组的5’修饰有第三荧光报告基团，所述第三探针组的3’修饰有第三荧光淬灭基团，所述第三荧光报告基团选自FAM或VIC，所述第三荧光淬灭基团选自MGB。
4.一种用于检测维生素D易感基因多态性的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液，所述PCR反应液包括权利要求1中所述引物组、权利要求2或3中所述的探针组、PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶和无核酸酶水。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：阳性对照和阴性对照。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照包括第一阳性对照、第二阳性对照和第三阳性对照，所述阴性对照为无核酸酶水；
其中，所述第一阳性对照包括所述GC rs4588基因位点的野生型质粒、所述CYP2R1rs10741675基因位点的野生型质粒和所述CYP24A1 rs2209314基因位点的野生型质粒；
所述第二阳性对照包括所述GC rs4588基因位点的杂合型质粒、所述CYP2R1rs10741675基因位点的杂合型质粒和所述CYP24A1 rs2209314基因位点的杂合型质粒；
所述第三阳性对照包括所述GC rs4588基因位点的突变型质粒、所述CYP2R1rs10741675基因位点的突变型质粒和所述CYP24A1 rs2209314基因位点的突变型质粒。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，
所述第一阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/μL；
所述第二阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/μL；
所述第三阳性对照中的各质粒的浓度为105copies/μL。
8.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液中的第一引物组中的引物和第一探针组中的探针的浓度分别为0.4μM ~0.8μM；
所述PCR反应液中的第二引物组中的引物和第二探针组中的探针的浓度分别为0.4μM~0.8μM；
所述PCR反应液中的第三引物组中的引物和第三探针组中的探针的浓度分别为0.4μM~0.8μM。
9.一种用于检测维生素D易感基因多态性的方法，其特征在于，包括如下步骤：
对待测样品进行稀释处理；
取适量的PCR反应液与稀释后的待测样品混合，以进行实时荧光定量PCR；
根据实时荧光定量PCR所获取的荧光强度，以得到所述维生素D易感基因多态性的检测结果；
根据所述检测结果来判断目标对象的维生素D缺乏的遗传风险。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述实时荧光定量PCR的扩增程序包括：
预变性，95℃5min，共进行1个循环；
预扩增，95℃15s，60℃30s，共进行5个循环；
扩增，95℃15s，60℃30s，采集荧光，共进行45个循环。
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Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106755352A (zh) * 2016-12-05 2017-05-31 武汉海吉力生物科技有限公司 用于快速检测abcb1基因c3435t多态性的核酸、试剂盒及方法
CN108467888A (zh) * 2017-02-22 2018-08-31 中国科学院上海生命科学研究院 关键维生素d代谢相关基因遗传多态组合及用途
CN110338762A (zh) * 2019-07-09 2019-10-18 上海宝藤生物医药科技股份有限公司 辅助补充维生素d的方法、装置、终端及服务器
CN110387408A (zh) * 2019-08-29 2019-10-29 无锡市申瑞生物制品有限公司 用于检测人cyp2c19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法
CN113502324A (zh) * 2021-07-02 2021-10-15 厦门市妇幼保健院（厦门市计划生育服务中心） 用于孕期维生素d缺乏风险评估检测试剂盒与应用方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106755352A (zh) * 2016-12-05 2017-05-31 武汉海吉力生物科技有限公司 用于快速检测abcb1基因c3435t多态性的核酸、试剂盒及方法
CN108467888A (zh) * 2017-02-22 2018-08-31 中国科学院上海生命科学研究院 关键维生素d代谢相关基因遗传多态组合及用途
CN110338762A (zh) * 2019-07-09 2019-10-18 上海宝藤生物医药科技股份有限公司 辅助补充维生素d的方法、装置、终端及服务器
CN110387408A (zh) * 2019-08-29 2019-10-29 无锡市申瑞生物制品有限公司 用于检测人cyp2c19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法
CN113502324A (zh) * 2021-07-02 2021-10-15 厦门市妇幼保健院（厦门市计划生育服务中心） 用于孕期维生素d缺乏风险评估检测试剂盒与应用方法

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