CN114507276B - 黄瓜CsANT基因在调控裂叶形成中的应用 - Google Patents

黄瓜CsANT基因在调控裂叶形成中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种调控黄瓜裂叶性状相关蛋白及其编码基因与应用。所述黄瓜基因CsANT的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，CsANT全长2091bp；其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码696个氨基酸；QRT‑PCR分析可知CsANT基因在裂叶黄瓜叶片中的表达量显著低于正常叶黄瓜；系统发育树分析，CsANT与拟南芥AtANT进化关系较近，属于AP2‑like亚家族，亚细胞定位于细胞核，是典型的转录因子。具有该基因突变的植株会导致叶片边缘开裂，叶面积减少，可以为黄瓜叶型改良、合理密植、提高产量以及理想株型培育提供基础。

Description

黄瓜CsANT基因在调控裂叶形成中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体的说，涉及一种黄瓜CsANT基因调控裂叶性状与应用。
背景技术
黄瓜(Cucumis sativus L.)又被称为王瓜、胡瓜、青瓜，属于葫芦科甜瓜属作物，双子叶蔓生草本植物，是中国以及全世界范围内栽培面积大，种植范围广的蔬菜作物之一。黄瓜子叶对生，长椭圆形；其真叶互生，成株叶片一般呈五角掌状，叶片大而相对较薄、上有刺毛，易衰老。叶片作为黄瓜光合作用、呼吸作用以及蒸腾作用的主要场所和重要器官，直接影响糖分的积累，与植株生长势、营养供应、产量、品质、抗性等密切相关。目前研究已发现黄瓜叶片主要分为6种形状，包括掌状五角、心状五角、近圆、长五角、长三角、心状三角。不同黄瓜叶片形状的突变体也已被研究报道，如心形叶片突变体(cor-1、cor-2)、裂叶突变体(dvl)、卷叶突变体(cr)等。
黄瓜叶片大而密，生长后期严重影响植株间通风透光，导致光合效率下降，病虫害严重，影响黄瓜果实的产量与品质。通过对黄瓜叶型和叶面积进行适度的改良，可以有效的减少田间郁闭现象的发生，有利于建立源库平衡，提高产量。裂叶是植物重要的农艺性状之一，根据叶片边缘的开裂程度不同，可分为浅裂、深裂和全裂。叶片不同程度的裂叶可减少自我遮蔽的现象，改善叶片的热传递，从而降低叶片温度，防止叶片晒伤，增加栽培密度并提高产量。但是目前，有关黄瓜叶片发育和形态建成的研究鲜有报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种调控黄瓜裂叶性状的相关基因与应用。从裂叶黄瓜及其近等基因系中分离、克隆得到影响裂叶性状的AINTEGUMENTA(ANT)基因，该基因是植物所特有的AP2/EREBP(APETALA2/ethylene-responsive element binding proteins)家族中的成员之一。并通过基因家族分析、亚细胞定位以及部位表达模式初步分析该基因的进化关系、定位以及表达分析。
本发明提供一种CsANT蛋白在调控植物裂叶情况中的应用，所述CsANT蛋白的序列为如下A1)-A5)任意一种：
A1)序列表中序列2所示的蛋白质；
A2)在A1)所述蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白；
A3)在A1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失、和/或添加得到的具有调控植物裂叶情况性能的蛋白质；
A4)与A1)所述蛋白质具有90％以上同一性且具有调控植物裂叶情况性能的蛋白质。
所述的CsANT蛋白相关的生物材料在调控植物裂叶情况中的应用也应在本发明的保护范围之内，所述CsANT蛋白相关的生物材料如下B1)至B9)中任意一种：
B1)编码所述CsANT蛋白的核酸分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；
B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；
B5)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；
B6)含有B1)所述核酸分子的转基因植物组织、或含有B2)所述表达盒的转基因植物组织；
B7)含有B1)所述核酸分子的转基因植物器官、或含有B2)所述表达盒的转基因植物器官；
B8)降低所述蛋白质表达量的核酸分子；
B9)敲除或突变所述蛋白质表达的核酸分子；
B10)含有B8)或B9)所述核酸分子的表达盒、重组载体、重组微生物、转基因植物细胞系、转基因植物组织或转基因植物器官。
其中，B1)所述核酸分子为如下b11)或b12)或b13)或b14)：
b11)编码序列是序列表中序列1的cDNA分子或DNA分子；
b12)序列表中序列1所示的cDNA分子或DNA分子；
b13)与b11)或b12)限定的核苷酸序列具有90％或90％以上同一性，且编码权利要求1所述CsANT蛋白的cDNA分子或DNA分子；
b14)在严格条件下与b11)或b12)或b13)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1所述CsANT蛋白的cDNA分子或DNA分子。
b15)在严格条件下与SEQ ID No.1所示序列杂交且编码所述裂叶相关蛋白质的核苷酸序列，所述严格条件为在含有0.1％SDS的0.1×SSPE或含有0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。
本发明还提供一种调控植物叶片的叶裂程度的方法，通过调控受体是植物中CsANT蛋白的活性，实现对植物叶片的叶裂程度的调控，所述CsANT蛋白为。
本发明还提供一种培育叶片的叶裂程度降低的植物的方法，包括受体植物中表达所述蛋白质，或提高受体植物中所述蛋白质的表达量，或提高受体植物中所述蛋白质的活性，得到与所述受体植物相比叶片的叶裂程度降低的植物。
本发明还提供一种培育叶片的叶裂程度增加的植物的方法，包括降低受体植物中所述蛋白质的表达量，或降低受体植物中所述蛋白质的活性，得到与所述受体植物相比叶片的叶裂程度增加的植物。
上述方法中，所述植物为双子叶植物，所述植物为葫芦科黄瓜属，所述植物为黄瓜。
本发明的优点在于前期利用裂叶黄瓜及其近等基因系亲本为材料，筛选并定位出影响裂叶性状基因CsANT，具体可表现为叶片边缘深裂。本研究初步明确了黄瓜CsANT基因相关信息，为改变黄瓜种植方式和提高产量提供参考，也为确定黄瓜理想株型研究奠定了基础。
附图说明
图1：黄瓜裂叶突变体与野生型叶片表型比对图。
图2：黄瓜CsANT基因在不同叶片发育阶段的表达量。
图3：黄瓜CsANT基因系统发育进化树分析图。
图4：黄瓜CsANT基因亚细胞定位荧光示意图，图中Nuclear Marker为细胞核定位Marker，GFP为绿色荧光，Merged为叠加结果。
图5:CsANT在三种野生型(9930、GY14、Hardwickii)中蛋白序列比对。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的黄瓜品种(9930、GY14、Hardwickii、金童等)在文献Shen J.J.,Zhang Y.Q.,Ge D.F.,et al..CsBRC1 inhibits axillary bud outgrowth by directlyrepressing the auxin efflux carrier CsPIN3 in cucumber.Proc Natl Acad Sci U SA.2019 Aug 20；116(34):17105–17114.及文献Liu B.,Guan D.L.,Zhai X.L.,etal..Selection footprints reflect genomic changes associated with breedingefforts in 56cucumber inbred lines.Hortic Res.2019(15)；6:127.doi:10.1038/s41438-019-0209-4.中均有公开，公众可以从中国农业大学获得，用以重复本实验。
下述实施例中的GFP标签载体pSUPER1300在文献Luo C,Wang S.L.,Ning K.etal..LsAP2 regulates leaf morphology by inhibiting CIN-like TCP transcriptionfactors and repressing LsKAN2 in lettuce.Horticulture Research(2021)8:184中公开，，公众可以从中国农业大学获得，用以重复本实验。
实施例1：裂叶突变体及其正常叶的叶片表型分析
通过对“金童”裂叶黄瓜(以裂叶黄瓜为亲本，利用正常叶黄瓜自交系为父系轮回亲本，保持每年回交育种，不断进行染色体片段置换，不断回交，构建并最终获得裂叶水果型黄瓜近等基因系)及正常叶黄瓜(“金童”黄瓜)的不同发育时期的叶片进行观察，发现裂叶黄瓜全部真叶表现为深裂性状，并且可以看出裂叶黄瓜叶面积明显的小于同时期正常叶的黄瓜。
对两种黄瓜的基因型进行比对，发现裂叶黄瓜的CsANT基因第二外显子发生突变，产生终止密码子，使CsANT蛋白翻译提前终止。
实施例2：黄瓜CsANT基因克隆和鉴定
对黄瓜“金童”叶片总RNA提取并采用HiPure Plant RNA Mini Kit(Magen公司)方法，从总RNA中吸取2mg为模板采用Vazyme公司的反转录试剂盒HiScript III RT SuperMixfor qPCR合成第一链cDNA。以此cDNA为模板，用引物CsANT-F：(5’-ATGAAGTCCATGAGTGATAAT-3’)和引物CsANT-R：(5’-TTAAGTGTCATTCCATGTTGC-3’)，采用TaKaRa公司高保真PrimeSTAR Max DNA Polymerase进行PCR扩增反应，反应条件如下：
反应体积(20ul):其中含有
模板(cDNA) 1ul
PrimeSTAR MAX 7ul
F/R 1ul
用ddH2O补足至20ul
反应程序如下：95℃变性3分钟，95℃变性30秒，58℃退火30秒，72℃延伸30秒，扩增34个循环，最后在72℃下延伸5分钟。经过1.0％的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物为一条约为2000bp的片段。
扩增片段采用Vazyme有限公司DNA凝胶回收试剂盒，回收后克隆到pMD19-T载体上进行克隆鉴定和测序。测序结果表明，扩增到的片段的核苷酸序列如序列SEQ ID No.1所示，将该片段命名为CsANT基因，CsANT基因全长2091bp,其编码的氨基酸序列见序列SEQ IDNo.2所示。
使用MEGA X软件构建拟南芥和黄瓜中AP2蛋白的系统进化树(ML法)，如图3所示，结果显示黄瓜CsANT与拟南芥中的AtANT蛋白亲缘关系最近，属于ANT蛋白亚家族。
为了进一步的明确CsANT基因在其他野生型正常叶黄瓜中的保守性，对3种不同的野生型正常叶黄瓜叶片(9930、GY14、Hardwickii)进行RNA提取、反转录和克隆。结果如图5所示，结果表明不同的野生型黄瓜中CsANT基因翻译出蛋白质序列无差异。
实施例3：CsANT基因在正常叶和裂叶不同发育阶段的叶片中的表达量
以正常叶和裂叶黄瓜叶片为模板，分别提取RNA并反转录cDNA，用Taq ProUniversal SYBR qPCR Master Mix酶(Vazyme公司)进行CsANT在不同节点叶片的QRT-PCR表达量分析正常叶和裂叶黄瓜在不同叶片发育阶段(即当苗子长到10节位时，从生长点处向下取第一、第三、第五节位的叶片)的CsANT基因的mRNA转录水平，结果如图2所示，从图2可以看出。结果表明CsANT基因在裂叶黄瓜叶片中表达量显著低于正常叶黄瓜。
实施例4 CsANT基因在烟草叶片表皮细胞中的亚细胞定位分析
将CsANT基因(序列1所示的核苷酸序列)插入到GFP标签载体pSUPER1300中的PstI位点和KpnI位点之间并保持载体的其他序列不变，得到重组载体GFP-CsANT。将重组载体GFP-CsANT转入根癌农杆菌GV3101(上海唯地生物有限公司)。使用农杆菌-CsANT侵染烟草叶片，室温培养3天后，对侵染后的烟草叶片和未侵染的烟草叶片使用激光共聚焦显微镜进行GFP荧光(488nm)信号检测检测，检测结果如图4所示，图中Nuclear Marker为核定位Marker，GFP为绿色荧光，Merged为叠加结果，CsANT定位于细胞核。
本发明的CsANT基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，CsANT全长cDNA序列2091bp；其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码696个氨基酸；QRT-PCR分析可知CsANT基因在裂叶黄瓜叶片中的表达量显著低于正常叶黄瓜。系统发育树分析，CsANT与拟南芥AtANT进化关系较近，属于AP2-like亚家族；亚细胞定位于细胞核，是典型的转录因子。具有该基因突变的黄瓜植株会导致叶片边缘开裂，叶面积减少，可以为黄瓜叶型改良、合理密植、提高产量以及理想株型培育提供基础。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
序列表
<110> 中国农业大学
<120> 黄瓜CsANT基因在调控裂叶形成中的应用
<150> 202110667702.5
<151> 2021-06-16
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2091
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgaagtcca tgagtgataa tgaggatagt aacaacaata ataacaataa caataatagt 60
tggttaggat tctctctttc tccccacatg aaaatggagg tttcttcttc tgatcatcca 120
tataatcaac accattctct tcactctgct tcaaatcctt tctacttatc tcctcatttc 180
aacaacaata acactgaaat cttttatggg attcctgata attcctctct tcatcatcac 240
tctgctgctg cttccctctc ggtaatgcct ctcaaatccg atggttcact ctgtattatg 300
gaagcccttt caagatctca aactgaaggg atggtgccga gttcttcacc gaaacttgag 360
gattttcttg gtggtgcaac aatgggaggt cgaggaggct attttaatca aaatgctgaa 420
tctgaatccg acagggaaca ttctttcgac cttcttcaaa gacccattag acaaaatcaa 480
caaattttaa ttcaaaattc caatcaatat tattctgggt tacttccttc ttccattgga 540
attggaactt gtgatcccca aattcttcct cctgatgacg acggaatccc ttgctttaga 600
aactgggtct ctcgctctca ctactccgcc actcataata ctctcgagca ccacattacc 660
ggcggcgatg gcggcggcgg cggcactctt atgaatgaaa gtaatggtgg tggttctgct 720
tccattggcg gaatgagctg tggagaatta cagtcgttga gtttgtcgat gagtccaggt 780
tctcaatcga gctcgttcac gacttccggc cagatctccc ctactggagg cgacggcacc 840
gccgtggaaa ctaaaaaaag aggccccgga aaactctgcc agaaacaacc cgttcatcgt 900
aaatccatcg atacttttgg ccaaagaacc tctcaatatc gtggcgtcac caggcataga 960
tggacgggga gatatgaagc tcatctgtgg gataacagtt gcaagaaaga aggacaaacc 1020
agaaaaggaa gacaagtgta tcttggagga tatgatatgg aagaaaaagc tgcgagagct 1080
tacgatcttg ccgccctcaa gtattgggga ccctctactc atataaactt tccgttggaa 1140
aattatcaga ctgaactaga agaaatgaag aatatgagcc gccaagaata tgttgcccac 1200
ttgagaagga aaagcagtgg cttttcaagg ggcgcttcag ttttccgtgg tgtcacaaga 1260
catcaccaac atggacgatg gcaagctaga attgggagag ttgctggaaa caaagatctt 1320
tatcttggga catttagcac gcaagaggaa gcggctgagg cttatgacat agcagcaatc 1380
aaattccgcg gtgtaaatgc agtcaccaac tttgacattt ccagatatga tgtcgagaaa 1440
atcatggcta gtaatactct actggcaggc gagctggcta gaaggaacaa ggatgtcgaa 1500
ccaagcaacg attcctcaat cgttccctac gactcctcca ttgtgtcaaa caacaatggt 1560
gggattggga ttgggatgga aataaatccc gacgccaaca ccgcaaatgg gaacgctaat 1620
gattggaaaa tggcattgta tcaaaatcca tcacaccacc agcaacaggc agctgccgct 1680
acttgtgttg ctgactcttt ggataatcat caaaacaagt cgatggctgt gtcgggcggt 1740
tatcgaaaca cgtcgttttc gatggcattg caggatttga ttgggatcga atcgttaagc 1800
gctaatactc atgggattga agatgatgtg agcaaacagg tgacacattt ttcaaattca 1860
tcatcgttgg tgacgagttt aagtagctcg agagaaggta gtcctgacaa aacgaatgtg 1920
tcaatgccgt ttggaaaggc cccaccctta atggcatcaa agctaatcgg tgcaacaaac 1980
ggtgttggag tcgggtcttg gtatccatcc ccacagcagc tgaggccaac agcagcagca 2040
gccatttcca tggcacattt gcctgttttt gcaacatgga atgacactta a 2091
<210> 2
<211> 696
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Lys Ser Met Ser Asp Asn Glu Asp Ser Asn Asn Asn Asn Asn Asn
1 5 10 15
Asn Asn Asn Ser Trp Leu Gly Phe Ser Leu Ser Pro His Met Lys Met
20 25 30
Glu Val Ser Ser Ser Asp His Pro Tyr Asn Gln His His Ser Leu His
35 40 45
Ser Ala Ser Asn Pro Phe Tyr Leu Ser Pro His Phe Asn Asn Asn Asn
50 55 60
Thr Glu Ile Phe Tyr Gly Ile Pro Asp Asn Ser Ser Leu His His His
65 70 75 80
Ser Ala Ala Ala Ser Leu Ser Val Met Pro Leu Lys Ser Asp Gly Ser
85 90 95
Leu Cys Ile Met Glu Ala Leu Ser Arg Ser Gln Thr Glu Gly Met Val
100 105 110
Pro Ser Ser Ser Pro Lys Leu Glu Asp Phe Leu Gly Gly Ala Thr Met
115 120 125
Gly Gly Arg Gly Gly Tyr Phe Asn Gln Asn Ala Glu Ser Glu Ser Asp
130 135 140
Arg Glu His Ser Phe Asp Leu Leu Gln Arg Pro Ile Arg Gln Asn Gln
145 150 155 160
Gln Ile Leu Ile Gln Asn Ser Asn Gln Tyr Tyr Ser Gly Leu Leu Pro
165 170 175
Ser Ser Ile Gly Ile Gly Thr Cys Asp Pro Gln Ile Leu Pro Pro Asp
180 185 190
Asp Asp Gly Ile Pro Cys Phe Arg Asn Trp Val Ser Arg Ser His Tyr
195 200 205
Ser Ala Thr His Asn Thr Leu Glu His His Ile Thr Gly Gly Asp Gly
210 215 220
Gly Gly Gly Gly Thr Leu Met Asn Glu Ser Asn Gly Gly Gly Ser Ala
225 230 235 240
Ser Ile Gly Gly Met Ser Cys Gly Glu Leu Gln Ser Leu Ser Leu Ser
245 250 255
Met Ser Pro Gly Ser Gln Ser Ser Ser Phe Thr Thr Ser Gly Gln Ile
260 265 270
Ser Pro Thr Gly Gly Asp Gly Thr Ala Val Glu Thr Lys Lys Arg Gly
275 280 285
Pro Gly Lys Leu Cys Gln Lys Gln Pro Val His Arg Lys Ser Ile Asp
290 295 300
Thr Phe Gly Gln Arg Thr Ser Gln Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg
305 310 315 320
Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Asn Ser Cys Lys Lys
325 330 335
Glu Gly Gln Thr Arg Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp
340 345 350
Met Glu Glu Lys Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr
355 360 365
Trp Gly Pro Ser Thr His Ile Asn Phe Pro Leu Glu Asn Tyr Gln Thr
370 375 380
Glu Leu Glu Glu Met Lys Asn Met Ser Arg Gln Glu Tyr Val Ala His
385 390 395 400
Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ala Ser Val Phe Arg
405 410 415
Gly Val Thr Arg His His Gln His Gly Arg Trp Gln Ala Arg Ile Gly
420 425 430
Arg Val Ala Gly Asn Lys Asp Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Ser Thr Gln
435 440 445
Glu Glu Ala Ala Glu Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Lys Phe Arg Gly
450 455 460
Val Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser Arg Tyr Asp Val Glu Lys
465 470 475 480
Ile Met Ala Ser Asn Thr Leu Leu Ala Gly Glu Leu Ala Arg Arg Asn
485 490 495
Lys Asp Val Glu Pro Ser Asn Asp Ser Ser Ile Val Pro Tyr Asp Ser
500 505 510
Ser Ile Val Ser Asn Asn Asn Gly Gly Ile Gly Ile Gly Met Glu Ile
515 520 525
Asn Pro Asp Ala Asn Thr Ala Asn Gly Asn Ala Asn Asp Trp Lys Met
530 535 540
Ala Leu Tyr Gln Asn Pro Ser His His Gln Gln Gln Ala Ala Ala Ala
545 550 555 560
Thr Cys Val Ala Asp Ser Leu Asp Asn His Gln Asn Lys Ser Met Ala
565 570 575
Val Ser Gly Gly Tyr Arg Asn Thr Ser Phe Ser Met Ala Leu Gln Asp
580 585 590
Leu Ile Gly Ile Glu Ser Leu Ser Ala Asn Thr His Gly Ile Glu Asp
595 600 605
Asp Val Ser Lys Gln Val Thr His Phe Ser Asn Ser Ser Ser Leu Val
610 615 620
Thr Ser Leu Ser Ser Ser Arg Glu Gly Ser Pro Asp Lys Thr Asn Val
625 630 635 640
Ser Met Pro Phe Gly Lys Ala Pro Pro Leu Met Ala Ser Lys Leu Ile
645 650 655
Gly Ala Thr Asn Gly Val Gly Val Gly Ser Trp Tyr Pro Ser Pro Gln
660 665 670
Gln Leu Arg Pro Thr Ala Ala Ala Ala Ile Ser Met Ala His Leu Pro
675 680 685
Val Phe Ala Thr Trp Asn Asp Thr
690 695

Claims (3)

1. CsANT蛋白在鉴定或者辅助鉴定黄瓜裂叶情况中的应用，其特征在于，所述CsANT蛋白的序列为序列表中序列2所示的蛋白质；所述裂叶情况是指叶片边缘的开裂程度；所述CsANT蛋白表达量低的黄瓜的叶片边缘的开裂程度大于CsANT蛋白表达量高的黄瓜。
2.与权利要求1中所述的CsANT蛋白相关的生物材料在鉴定或者辅助鉴定黄瓜裂叶情况中的应用，其特征在于，所述CsANT蛋白相关的生物材料如下B1)至B4)中任意一种：
B1)序列表中序列1的cDNA分子或DNA分子；
B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；
B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；
B4)含有B1)所述核酸分子的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；
所述裂叶情况是指叶片边缘的开裂程度。
3.一种鉴定或者辅助鉴定黄瓜叶片叶裂程度的方法，其特征在于，检测待测黄瓜中CsANT蛋白的表达量，所述CsANT蛋白表达量低的黄瓜的叶片边缘的开裂程度大于CsANT蛋白表达量高的黄瓜，所述CsANT蛋白的序列为序列表中序列2所示的蛋白质。
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