CN114507201A - 一种水黄皮籽素衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种水黄皮籽素衍生物及其制备方法和应用，水黄皮籽素衍生物的结构式为
Figure DDA0003479825580000011
式中R1为H、CH3或Cl。本发明提供的水黄皮籽素衍生物，对细胞无毒副作用，且相比于水黄皮籽素具有更好的抗神经损伤效果，具备治疗阿尔兹海默症等老年痴呆性疾病的潜力。

Description

一种水黄皮籽素衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种水黄皮籽素衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
现有技术中有关于水黄皮籽素的介绍，化学名为1-(4-甲氧基-5苯并呋喃)-3-苯基-1，3-丙二酮，属于查尔酮类化合物，从水黄皮中分离得到，具有抗菌、抗癌、抗氧化、抗糖尿病的生物活性，具有较高的研究价值。中国专利文献(申请号为201910456743.2)公开了水黄皮籽素的制备方法和应用。以1，3-环己二酮(6)为起始原料，经成环反应得6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(7)，(7)经酰化反应得5-乙酰基-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(8)，(8)经脱氢反应得1-(4-羟基-5-苯并呋喃基)乙酮(3)，(3)经甲基化反应得1-(4-甲氧基-5-苯并呋喃基)乙酮(4)，最后(4)与苯甲酰氯缩合得水黄皮籽素。
发明内容
为了克服现有技术中的缺陷，本发明提出一种水黄皮籽素衍生物及其制备方法。
为了实现本发明技术方案，所采用的技术方案为：
一种水黄皮籽素衍生物，结构式如式Ⅰ所示：
Figure BDA0003479825560000011
式(I)中R1为H、CH3或卤素(经验证当R1为卤素时，以Cl最优，生物活性最高)。
上述水黄皮籽素衍生物的制备方法，当R1为H或CH3时，包括如下步骤：
步骤1，以6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮和N-溴代琥珀酰亚胺为反应单体，制备
Figure BDA0003479825560000012
步骤2，以
Figure BDA0003479825560000013
为反应单体，制备
Figure BDA0003479825560000014
步骤3，以
Figure BDA0003479825560000015
和溴化苄为反应单体，制备
Figure BDA0003479825560000016
步骤4，以
Figure BDA0003479825560000021
和乙酸乙酯为反应单体，制备
Figure BDA0003479825560000022
步骤5，在反应瓶中加入
Figure BDA0003479825560000023
用1，4-二氧六环将其溶解，搅拌下加入DDQ，加毕，回流反应制得
Figure BDA0003479825560000024
步骤6，在反应瓶中加入
Figure BDA0003479825560000025
用丙酮将其溶解，搅拌下加入CH3I和碳酸钾，回流反应制得
Figure BDA0003479825560000026
步骤7，以
Figure BDA0003479825560000027
和苯甲酸甲酯为反应单体，制得
Figure BDA0003479825560000028
步骤8，以
Figure BDA0003479825560000029
为反应单体，制得水黄皮籽素衍生物
Figure BDA00034798255600000210
但R为Cl时，包括如下步骤：
步骤1，以
Figure BDA00034798255600000211
为反应单体，制备
Figure BDA00034798255600000212
步骤2，以
Figure BDA0003479825560000031
和乙酸乙酯为反应单体制备
Figure BDA0003479825560000032
步骤3，在反应瓶中加入
Figure BDA0003479825560000033
用1，4-二氧六环将其溶解，搅拌下加入DDQ，回流反应制得
Figure BDA0003479825560000034
步骤4，以
Figure BDA0003479825560000035
和CH3I为反应单体，制备
Figure BDA0003479825560000036
步骤5，以
Figure BDA0003479825560000037
和苯甲酸甲酯为反应单体，制备
Figure BDA0003479825560000038
步骤6，以
Figure BDA0003479825560000039
为反应单体，制备水黄皮籽素衍生物
Figure BDA00034798255600000310
本发明提供的水黄皮籽素衍生物可用于制备药物，所述药物用于治疗老年痴呆性疾病，例如阿尔兹海默症。
与现有技术相比，本发明取得了如下技术优势：本发明提供的水黄皮籽素衍生物，对细胞无毒副作用，且相比于水黄皮籽素具有更好的抗神经损伤效果，具备治疗阿尔兹海默症等老年痴呆性疾病的潜力。
附图说明
图1为本发明实施例中1a、1b的合成工艺。
图2为本发明实施例中1c的合成工艺。
图3为本发明实施例中制备的衍生物1a的1H NMR。
图4为本发明实施例中制备的衍生物1a的13C NMR。
图5为本发明实施例中制备的衍生物1b的1H NMR。
图6为本发明实施例中制备的衍生物1b的13C NMR。
图7为本发明实施例中制备的衍生物1c的1H NMR。
图8为本发明实施例中制备的衍生物1c的13C NMR。
图9为水黄皮籽素(Pongamol)及其衍生物在24h对BV-2细胞存活率的影响柱状图。
图10为水黄皮籽素(Pongamol)及其衍生物对LPS诱导的NO产生的影响柱状图。
图11为水黄皮籽素(Pongamol)及其衍生物对PC12细胞毒性的影响柱状图。
图12为水黄皮籽素(Pongamol)及其衍生物对H2O2诱导的PC12细胞存活率的影响柱状图。
具体实施方式
本发明不局限于下列具体实施方式，本领域一般技术人员根据本发明公开的内容，可以采用其他多种具体实施方式实施本发明的，或者凡是采用本发明的设计结构和思路，做简单变化或更改的，都落入本发明的保护范围。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
本发明下面结合实施例作进一步详述：
1.1.2实验步骤
1.1.2.1中间体6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的3)的制备
在250ml的圆底烧瓶中加入1，3-环己二酮，加水将其溶解，冰浴下加入20％的氢氧化钾溶液和KI，搅拌5min后缓慢加入40％的氯乙醛溶液，加毕，室温反应。12h后经TLC检测，原料基本反应完全。用2M HCl调节溶液的PH＝4左右，加入100ml水，用石油醚萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(100ml×3)，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂得淡黄色油状物，即6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的3)。
其中，1，3-环己二酮和氢氧化钾，碘化钾、氯乙醛的摩尔比为1:1.5:1.5:1.5，1，3-环己二酮与水的质量体积比为1:2-10(g/ml)(质量体积比是指溶质的质量：溶剂的体积，也即1，3-环己二酮作为溶质在溶剂水中的质量浓度为0.1～0.5g/ml)。
6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的3)：淡黄色油状物，收率30.55％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.33(d,J＝2.0Hz,1H),6.68(d,J＝2.1Hz,1H),2.90(t,J＝6.3Hz,2H),2.58–2.44(m,2H),2.19(p,J＝6.4Hz,2H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ194.63,167.16,142.58,121.09,106.43,37.66,23.34,22.61.
1.1.2.2中间体2-溴-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的4)的制备
在250ml的圆底烧瓶中加入6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的3)，加冰醋酸使其溶解，搅拌下加入N-溴代琥珀酰亚胺，加毕，60℃反应，5h后经TLC检测，原料基本反应完全。加入100ml水淬灭反应，用二氯甲烷萃取(100ml×4)，合并有机相，依次用水(100ml×3)，10％NaOH溶液(100ml×3)，饱和NaCl溶液(100ml×3)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂的棕色油状物，棕色油状物经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1：50)得白色固体即为2-溴-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的4)，收率为54.44％，1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ6.61(s,1H),2.89(t,J＝6.3Hz,2H),2.55–2.48(m,2H),2.20(p,J＝6.4Hz,2H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ193.11,167.85,123.41,123.38,108.10,37.43,23.23,22.38.
其中，6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的3)和N-溴代琥珀酰亚胺的摩尔比为1:1.5，6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的3)与冰醋酸的质量体积比为1:20-40(g/ml)
1.1.2.3中间体4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(合成工艺图中12a)和2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(合成工艺图中12b)的合成
在250ml的圆底烧瓶中加入4-溴苯酚(合成工艺图中11a)或4-溴-2-甲基苯酚(合成工艺图中的11b)，用1，4-二氧六环将其溶解，搅拌下加入联硼酸频哪醇酯，醋酸钯，PCy3和AcOK，加毕，氮气保护，100℃反应，3h后经TLC监测反应结束。将反应液抽滤，向滤液中加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(100ml×3)，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂得淡黄色油状物，即合成工艺图中的12a或12b。
当为合成工艺图中的12a时收率97.58％，1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.62(d,J＝8.4Hz,2H),6.74(d,J＝8.4Hz,2H),1.26(s,12H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ158.62,136.80,114.94,83.79,24.83.
当为合成工艺图中的12b时收率98.88％，1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.62(s,1H),7.58(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.29(s,1H),6.79(d,J＝7.9Hz,1H),2.27(s,3H),1.36(s,12H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ171.68,157.08,137.91,134.22,123.45,114.45,83.62,24.83,21.10.
其中合成工艺图中的11a或11b、联硼酸频哪醇酯、醋酸钯、PCy3和AcOK的摩尔比为1:1.2:0.02:0.04:2.5，合成工艺图中的11a或11b和1，4-二氧六环的质量体积比为1:40-60(g/ml)。
1.1.2.4中间体2-(4-羟基苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(5a)和2-(4-羟基-3-甲基苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的5b)的制备
在250ml的圆底烧瓶中加入合成工艺图中的4和合成工艺图中的12a或12b，用四氢呋喃将其溶解，搅拌下加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2和碳酸铯，加毕，氮气保护，100℃反应。5h经TLC检测反应结束。将反应液抽滤，向滤液中加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl洗涤(100ml×4)，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得棕色颗粒油状固体。经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:20-1:10)得纯品即合成工艺图中的5a或5b。
当产物为2-(4-羟基苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的5a)时：白色固体，收率51.89％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.75(s,1H),7.61–7.52(m,2H),6.88(s,1H),6.82(d,J＝8.7Hz,2H),2.94(t,J＝6.2Hz,2H),2.46–2.39(m,2H),2.11(p,J＝6.2Hz,2H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ193.67,157.57,156.17,153.82,125.37,122.15,120.57,115.67,102.22,37.15,22.69,22.09.
当产物为2-(4-羟基-3-甲基苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的5b)时：浅粉色固体，收率42.18％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.64(s,1H),7.47(d,J＝2.2Hz,1H),7.38(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),6.88–6.79(m,2H),2.93(t,J＝6.2Hz,2H),2.46–2.38(m,2H),2.16(s,3H),2.11(p,J＝6.3Hz,2H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ194.15,166.55,156.23,154.51,126.81,124.93,123.15,122.65,120.90,115.36,98.90,37.65,23.19,22.60,16.43.
其中合成工艺图中的4、合成工艺图中的12a或12b、Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2、及碳酸铯的摩尔比为1:1.5:0.05:2.5，合成工艺图中的4和四氢呋喃的质量体积比为1：20-40(g/ml)。
1.1.2.5中间体2-(4-(苄氧基)苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(6a)和2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的6b)的合成
在250ml的圆底烧瓶中加入合成工艺图中的5a或5b，用丙酮将其溶解，搅拌下加入溴化苄和碳酸钾，加毕，70℃回流反应。3h后经TLC检测反应结束，加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，有机相依次用饱和NaHCO3溶液(100ml×4)，饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色油状物。经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:40-1:20)得白色固体即合成工艺图中6a或6b。
当产物为2-(4-(苄氧基)苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的6a)时：白色固体，收率69.87％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.61(d,J＝8.8Hz,2H),7.50–7.33(m,6H),7.03(d,J＝8.9Hz,2H),5.12(s,2H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.57–2.51(m,2H),2.24(p,J＝6.4Hz,2H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ194.71,166.29,158.75,154.28,136.68,128.64,128.09,127.49,125.49,122.99,122.92,115.19,99.29,70.08,37.63,23.45,22.61.
当产物为2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的6b)：白色固体，收率47.00％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65–7.28(m,7H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),6.97(s,1H),5.17(s,2H),2.94(t,J＝6.2Hz,2H),2.44(t,J＝6.4Hz,2H),2.25(s,3H),2.12(p,J＝6.3Hz,2H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ194.70,166.19,156.96,154.52,137.13,128.59,127.89,127.62,127.11,126.64,122.94,122.81,122.54,111.56,99.13,69.94,37.66,23.47,22.64,16.55.
其中，合成工艺图中5a或5b、溴化苄、及碳酸钾的摩尔比为1:1.0:2.0，合成工艺图中5a或5b与丙酮的质量体积比为1:40-60(g/ml)。
1.1.2.6中间体5-乙酰基-2-(4-(苄氧基)苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的7a)和5-乙酰基-2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的7b)的制备
在封管中加入NaH后抽真空营造无氧环境，用无水THF将其溶解，冰浴下加入用无水THF溶解的6a-6b，冰浴下搅拌4h后加入乙酸乙酯。12h后经TLC检测反应结束。用2MHCl淬灭反应，加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色油状颗粒即合成工艺图中的7a或7b。
当产物为5-乙酰基-2-(4-(苄氧基)苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的7a)时：收率68.49％，1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.48–7.34(m,8H),7.03(d,J＝8.9Hz,2H),5.12(s,2H),3.67–3.58(m,1H),2.99–2.88(m,2H),2.66–2.55(m,1H),2.40–2.22(m,4H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ204.67,190.05,186.41,163.65,158.91,136.63,128.64,128.11,128.08,127.48,125.59,125.40,115.21,103.32,70.09,60.36,29.51,26.72,25.02.
但产物为5-乙酰基-2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的7b)：收率70.80％，1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ7.58(s,1H),7.54(dd,J＝8.5,2.3Hz,1H),7.48(d,J＝7.6Hz,3H),7.41(t,J＝7.5Hz,3H),7.34(t,J＝7.4Hz,1H),5.16(s,2H),3.81(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),3.02–2.94(m,2H),2.45–2.33(m,1H),2.24(d,J＝3.2Hz,7H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ204.76,186.46,163.60,156.90,154.98,137.13,128.62,128.59,127.61,127.11,126.55,122.91,122.71,122.00,111.56,103.35,69.93,60.38,29.93,23.07,22.77,16.56.
其中，合成工艺图中6a或6b、NaH及乙酸乙酯的摩尔比为1:5.0:3.0，合成工艺图中6a或6b与无水THF的质量体积比为1:40-60(g/ml)
1.1.2.7中间体1-(2-(4-(苄氧基)苯基)-4-羟基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的8a)和1-(2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-4-羟基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的8b)的合成
在250ml圆底烧瓶中加入7a-7b，用1，4-二氧六环将其溶解，搅拌下加入DDQ，加毕，105℃回流反应。3h后经TLC检测反应结束，用硅藻土进行抽滤，向滤液加入100ml水，用二氯甲烷萃取(100ml×4)，合并有机相，用10％NaOH洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干得黄色固体即合成工艺图中的8a或8b。
其中，合成工艺图中的7a或7b与DDQ的摩尔比为1:1.2，合成工艺图中的7a或7b与1，4-二氧六环的质量体积比为1:60-80(g/ml)。
1-(2-(4-(苄氧基)苯基)-4-羟基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(8a)：黄色固体，收率98.41％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ13.26(s,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,2H),7.65(d,J＝8.8Hz,1H),7.51–7.34(m,5H),7.13–7.05(m,4H),5.15(s,2H),2.69(s,3H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ199.64,174.67,170.30,158.45,158.06,152.16,136.86,128.40,128.25,127.83,127.69,125.35,123.20,117.54,115.25,100.24,97.77,69.26,29.48。
1-(2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-4-羟基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(8b)：黄色固体，收率79.36％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ13.25(s,1H),7.74(d,J＝2.4Hz,1H),7.65(dd,J＝8.6,4.4Hz,2H),7.55(dd,J＝5.7,3.3Hz,2H),7.49(d,J＝7.1Hz,2H),7.43(t,J＝7.6Hz,2H),7.10(s,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),5.17(s,2H),2.69(s,3H),2.38(s,3H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ204.15,159.35,158.21,157.51,156.18,137.04,128.84,128.58,127.91,127.41,127.10,126.50,123.71,122.42,119.54,114.47,111.57,103.47,97.61,69.94,26.93,16.55.
1.1.2.8中间体1-(2-(4-(苄氧基)苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的9a)和1-(2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的9b)的合成
在250ml圆底烧瓶中加入8a-8b，用丙酮将其溶解，搅拌下加入CH3I和碳酸钾，加毕，70℃回流反应。3h经TLC检测检测反应结束，加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色固体即合成工艺图中的9a或9b。
其中，合成工艺图中的8a或8b、CH3I及碳酸钾的摩尔比为1:2.0:3.0，合成工艺图中的8a或8b与丙酮的质量体积比为1:50-100(g/ml)。
1-(2-(4-(苄氧基)苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的9a)：黄色固体，收率64.52％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.81(d,J＝8.9Hz,2H),7.72(d,J＝8.6Hz,1H),7.51–7.34(m,5H),7.25(d,J＝8.6Hz,1H),7.09(d,J＝8.7Hz,3H),5.16(s,2H),4.22(s,3H),2.70(s,3H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ198.29,158.42,157.74,154.94,152.90,135.50,127.62,127.10,126.45,125.42,125.25,124.05,121.67,119.72,114.23,105.23,97.27,69.06,59.59,30.57.
1-(2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的9b)：黄色固体，收率82.76％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.76–7.62(m,3H),7.49(d,J＝7.1Hz,2H),7.43(t,J＝7.5Hz,2H),7.37(t,J＝7.2Hz,1H),7.24(d,J＝8.6Hz,1H),7.08(s,1H),6.98(d,J＝8.3Hz,1H),5.17(s,2H),4.22(s,3H),2.70(s,3H),2.39(s,3H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ199.41,158.81,157.68,156.26,153.93,136.98,128.60,127.94,127.76,127.49,127.11,126.19,125.04,123.85,122.21,111.56,106.25,98.12,69.95,60.62,29.73,16.55.
1.1.2.9中间体(Z)-1-(2-(4-(苄氧基)苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的10a)和(Z)-1-(2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的10b)的合成
在封管中加入NaH后抽真空营造无氧环境，用无水THF将其溶解，冰浴下加入用无水THF溶解的合成工艺图中的9a或9b，冰浴下搅拌6h后加入苯甲酸甲酯。12h后经TLC检测原料基本反应结束。用2MHCl淬灭反应，加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色固体即合成工艺图中的10a或10b。
其中，合成工艺图中的9a或9b、NaH及苯甲酸甲酯的摩尔比为1:5.0:3.0，合成工艺图中的9a或9b与无水THF的质量体积比为1:40-60(g/ml)。
(Z)-1-(2-(4-(苄氧基)苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的10a)：黄色固体，收率45.45％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ8.02(d,J＝7.2Hz,2H),7.86–7.81(m,2H),7.57(d,J＝7.4Hz,1H),7.52(d,J＝7.8Hz,2H),7.51–7.47(m,3H),7.44(t,J＝7.6Hz,2H),7.39(d,J＝7.1Hz,1H),7.34(d,J＝8.6Hz,1H),7.22(s,1H),7.12–7.07(m,3H),5.16(s,2H),4.18(s,3H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ186.13,184.33,159.51,158.38,156.18,153.23,136.58,135.74,132.17,128.70,128.66,128.18,127.53,127.16,126.55,125.98,122.78,122.51,121.96,115.31,106.89,97.94,97.89,70.14,61.30.
(Z)-1-(2-(4-(苄氧基)-3-甲基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的10b)：黄色固体，收率63.49％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ8.02(d,J＝7.2Hz,2H),7.86(d,J＝8.6Hz,1H),7.70(d,J＝11.1Hz,2H),7.57(d,J＝7.3Hz,1H),7.51(dd,J＝14.2,7.3Hz,4H),7.44(t,J＝7.5Hz,2H),7.36(dd,J＝21.9,8.0Hz,2H),7.22(s,1H),7.09(s,1H),6.99(d,J＝8.4Hz,1H),5.18(s,2H),4.19(s,3H),2.40(s,3H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ186.13,184.30,158.38,157.70,156.44,153.18,136.99,135.75,132.11,130.91,128.63,128.60,127.93,127.54,127.13,127.11,125.85,123.90,122.45,122.27,122.00,111.56,106.83,97.86,97.72,69.96,61.24,16.55.
1.1.2.10(Z)-3-羟基-1-(2-(4-羟基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的1a)和(Z)-3-羟基-1-(2-(4-羟基-3-甲基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的1b)的合成
在250ml的圆底烧瓶中加入合成工艺图中的10a或10b，用无水甲醇将其溶解，搅拌下加入钯碳和甲酸铵，加毕，75℃反应。0.5h后经TLC检测反应结束，将反应液进行抽滤，滤液加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色固体，黄色固体经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:50-1:20)得黄色固体即合成工艺图中的1a或1b。
其中合成工艺图中的10a或10b、钯碳及酸铵的摩尔比为1:0.1:2.5，合成工艺图中的10a或10b与无水甲醇的质量体积比为1:50-80(g/ml)。
当产物为(Z)-3-羟基-1-(2-(4-羟基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的1a)：黄色固体，收率47.62％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.96(s,1H),8.03(d,J＝7.3Hz,2H),7.82(d,J＝8.6Hz,2H),7.77(dd,J＝8.6,4.3Hz,2H),7.64(s,1H),7.62–7.55(m,3H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),7.24(s,1H),6.91(d,J＝8.7Hz,2H),4.26(s,3H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ186.49,184.16,159.02,158.30,156.34,153.55,135.20,133.22,129.49,127.45,127.05,125.92,121.35,121.07,120.65,116.34,106.56,98.88,98.07,61.21.
当产物为(Z)-3-羟基-1-(2-(4-羟基-3-甲基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的1b)：黄色固体，收率32.79％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.84(s,1H),7.75–7.65(m,2H),7.62(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),7.57(s,1H),7.45(d,J＝8.5Hz,1H),7.38(d,J＝6.8Hz,2H),7.33(t,J＝7.8Hz,3H),7.24(t,J＝7.2Hz,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),4.17(s,3H),2.21(s,3H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ199.96,158.13,157.13,156.41,153.21,146.06,131.98,129.12,128.53,127.89,127.29,126.28,126.00,125.31,125.16,124.23,120.54,120.51,115.45,106.13,98.77,60.93,16.43.
1.1.2.11中间体2-氯-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(合成工艺图中的12c)的合成
在250ml的圆底烧瓶中加入4-溴-2-氯苯酚(合成工艺图中的11c)，用1，4-二氧六环将其溶解，搅拌下加入联硼酸频哪醇酯，Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2，DPPF和AcOK，加毕，氮气保护，100℃反应，3h后经TLC监测反应结束。将反应液抽滤，向滤液中加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(100ml×3)，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干溶剂得淡黄色油状物，即合成工艺图中的12c。
其中合成工艺图中的11c和联硼酸频哪醇酯，Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2，DPPF，AcOK的摩尔比为1:1.2:0.05:0.05:2.5，11c和1，4-二氧六环的质量体积比为1:40-60(g/ml)。
2-氯-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)苯酚(合成工艺图中的12c)：淡黄色油状物，收率87.70％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.79(s,1H),7.64(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(d,J＝8.1Hz,1H),5.81(s,1H),1.35(s,12H).13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ153.85,135.59,135.14,131.40,117.68,115.79,83.96,24.85.
1.1.2.12中间体2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(合成工艺图中的13c)的合成
在250ml的圆底烧瓶中加入合成工艺图中的12c，用丙酮将其溶解，搅拌下加入溴化苄和碳酸钾，加毕，70℃回流反应。3h后经TLC检测反应结束，加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，有机相依次用饱和NaHCO3溶液(100ml×4)，饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色油状物。经柱层析(纯石油醚)得澄清油状物即合成工艺图中的13c。
其中，合成工艺图中的12c和溴化苄和碳酸钾的摩尔比为1:1.0:2.0，合成工艺图中的12c和丙酮的质量体积比为1:40-60(g/ml)。
2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(合成工艺图中的13c)：澄清油状物，收率47.34％。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.88(d,J＝1.5Hz,1H),7.67(dd,J＝8.2,1.5Hz,1H),7.49(d,J＝7.2Hz,2H),7.42(t,J＝7.6Hz,2H),7.35(t,J＝7.1Hz,1H),6.99(d,J＝8.2Hz,1H),5.22(s,2H),1.37(s,12H).13C NMR(126MHz,Chloroform-d)δ156.48,153.50,136.68,136.31,134.58,128.62,128.01,127.03,122.86,113.09,83.94,70.48,24.87.
1.1.2.13中间体2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的5c)的合成
在250ml的圆底烧瓶中加入合成工艺图中的4和合成工艺图中的13c，用四氢呋喃将其溶解，搅拌下加入Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2和碳酸铯，加毕，氮气保护，100℃反应。5h经TLC检测反应结束。将反应液抽滤，向滤液中加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl洗涤(100ml×4)，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得棕色固体。经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:40-1:20)得白色固体即合成工艺图中的5c。
其中合成工艺图中的4：合成工艺图中的13c：Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2：碳酸铯的摩尔比为1:1.5:0.05:2.5，4和四氢呋喃的质量体积比为1:40-60(g/ml)。
2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的5c)：白色固体，收率46.75％。
1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ7.72(d,J＝2.2Hz,1H),7.52–7.45(m,3H),7.42(t,J＝7.5Hz,2H),7.36(t,J＝7.3Hz,1H),7.01(d,J＝8.6Hz,1H),6.79(s,1H),5.22(s,2H),2.97(t,J＝6.3Hz,2H),2.58–2.51(m,2H),2.24(p,J＝6.3Hz,2H).
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ194.48,166.58,153.96,152.86,136.21,128.68,128.13,127.08,126.05,123.88,123.80,123.43,114.16,100.32,70.90,37.63,23.44,22.56.1.1.2.14中间体5-乙酰基-2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-苯并呋喃酮(合成工艺图中的6c)的合成
在封管中加入NaH后抽真空营造无氧环境，用无水THF将其溶解，冰浴下加入用无水THF溶解的5c，冰浴下搅拌4h后加入乙酸乙酯。12h后经TLC检测反应结束。用2MHCl淬灭反应，加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色油状颗粒即合成工艺图中的6c。
其中，合成工艺图中的5c：NaH：乙酸乙酯的摩尔比为1:5.0:3.0，合成工艺图中的5c和无水THF的质量体积比为1:40-60(g/ml)
5-乙酰基-2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-6,7-二氢苯并呋喃-4(5H)-酮(合成工艺图中的6c)：黄色油状颗粒，收率89.28％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.41–7.31(m,8H),6.89(d,J＝8.6Hz,1H),5.10(s,2H),3.52(dd,J＝6.5,4.8Hz,1H),3.12(ddd,J＝17.8,8.0,5.5Hz,1H),2.80(dd,J＝11.9,6.1Hz,1H),2.50(dq,J＝12.2,5.9Hz,1H),2.24(s,4H).
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ204.60,186.13,163.96,154.12,153.88,136.17,128.68,128.14,128.12,127.08,126.13,125.94,123.96,123.33,122.24,122.01,114.12,103.29,70.89,60.33,29.95,24.28,21.71.
1.1.2.15中间体1-(2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-4-羟基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的7c)的合成
在250ml圆底烧瓶中加入6c，用1，4-二氧六环将其溶解，搅拌下加入DDQ，加毕，105℃回流反应。3h后经TLC检测反应结束，用硅藻土进行抽滤，向滤液加入100ml水，用二氯甲烷萃取(100ml×4)，合并有机相，用10％NaOH洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干得黄色固体即合成工艺图中的7c。
其中，合成工艺图中的6c和DDQ的摩尔比为1:1.2，合成工艺图中的7c和1，4-二氧六环的质量体积比为1:80-100(g/ml)。
1-(2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-4-羟基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的7c)：黄色固体，收率63.64％。1
H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ13.28(s,1H),7.91(d,J＝2.2Hz,1H),7.67(dd,J＝8.7,2.4Hz,2H),7.55–7.35(m,5H),7.14(s,1H),7.07(t,J＝7.9Hz,2H),5.25(s,2H),2.70(s,3H).
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ204.20,162.57,159.37,158.35,154.47,136.11,128.70,128.16,127.09,127.03,126.82,124.28,123.85,123.78,119.30,114.56,114.07,103.50,98.80,70.88,26.97.
1.1.2.16中间体1-(2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的8c)的合成
在250ml圆底烧瓶中加入合成工艺图中的7c，用丙酮将其溶解，搅拌下加入CH3I和碳酸钾，加毕，70℃回流反应。3h经TLC检测检测反应结束，加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色固体即8c。
其中，7c和CH3I，碳酸钾的摩尔比为1:2.0:3.0，7c和丙酮的质量体积比为1:50-100(g/ml)。
1-(2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)乙烷-1-酮(合成工艺图中的8c)：黄色固体，收率48.08％。1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.91(d,J＝2.2Hz,1H),7.76–7.66(m,2H),7.54–7.34(m,5H),7.24(d,J＝8.7Hz,1H),7.12(s,1H),7.06(d,J＝8.6Hz,1H),5.25(s,2H),4.21(s,3H),2.69(s,3H).13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ198.58,158.52,154.51,154.26,154.07,136.75,128.99,128.52,128.03,126.73,126.62,125.11,124.87,123.46,122.84,120.21,115.09,106.17,101.34,70.66,60.87,32.02.
1.1.2.17中间体(Z)-1-(2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的9c)的合成
在封管中加入NaH后抽真空营造无氧环境，用无水THF将其溶解，冰浴下加入用无水THF溶解的8c，冰浴下搅拌6h后加入苯甲酸甲酯。12h后经TLC检测原料基本反应结束。用2MHCl淬灭反应，加入100ml水，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，用饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色固体即合成工艺图中的9c。
其中，8c和NaH，苯甲酸甲酯的摩尔比为1:5.0:3.0，8c和无水THF的质量体积比为1:40-60(g/ml)。
(Z)-1-(2-(4-(苄氧基)-3-氯苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的9c)：黄色固体，收率66.44％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.01(d,J＝7.5Hz,2H),7.96–7.82(m,2H),7.77–7.64(m,1H),7.61–7.30(m,9H),7.20(s,1H),7.18–7.10(m,1H),7.07(d,J＝8.3Hz,1H),5.25(s,2H),4.18(s,3H).
13C NMR(101MHz,Chloroform-d)δ184.92,183.31,170.19,157.32,153.62,152.29,135.05,134.62,132.63,131.14,129.13,127.64,127.60,127.42,127.12,126.09,126.03,125.94,125.35,123.38,122.87,122.58,120.60,112.98,105.82,97.88,96.82,69.83,59.40.1.1.2.18中间体(Z)-1-(2-(3-氯-4-羟基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-酮(合成工艺图中的1c)的合成
在250ml圆底烧瓶中加入9c，加入TFA，加毕，80℃反应。5h后经TLC检测反应不完全，且不再继续反应。加入100ml 5％Na2CO3溶液，，用乙酸乙酯萃取(100ml×4)，合并有机相，依次用5％Na2CO3溶液(100ml×4)，饱和NaCl溶液(100ml×4)洗涤，最后用无水硫酸钠干燥，减压旋干有机溶剂得黄色固体，黄色固体经柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:25-1:10)得黄色固体即合成工艺图中的1c。
其中，9c与TFA的质量体积比为1:20-50(g/ml)。
(Z)-1-(2-(3-氯-4-羟基苯基)-4-甲氧基苯并呋喃-5-基)-3-羟基-3-苯基丙-2-烯-1-酮(1c)：黄色固体，收率63.41％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.81(s,1H),8.46–6.83(m,13H),4.35(s,3H).
13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ185.92,183.73,157.93,154.25,154.01,153.28,139.02,132.77,129.01,127.01,126.49,125.88,124.75,122.68,121.47,120.55,120.23,117.07,106.07,99.84,97.65,60.72.
应用例
1.1抗炎
1.1.1 MTT检测细胞活力
(1)细胞处理
首先使用显微镜观察BV-2细胞形态和细胞密度，当细胞状态良好并且长满大皿底部的80％即可进行操作。打开水浴锅，将完全培养基和1×PBS溶液37℃预热10min后取出，在其表面喷完酒精后放入照过紫外灯的超净工作台中。然后使用真空泵吸弃大皿中的细胞上清液，加入2mL的1×PBS溶液，前后左右晃动大皿后吸弃上清液，重复此步骤一次以洗去未贴壁的细胞，由于BV-2细胞贴壁不牢所以不需要用到胰酶消化液，直接用5mL完全培养基将大皿中的细胞缓慢冲洗下来，慢慢打入15mL离心管中。接着使用台式离心机离心(800rpm，3min)，离心后回到超净工作台中，使用真空泵吸弃细胞上清液只保留底部白色沉淀，加4mL培养基，再稀释成3×105个/mL，取出96孔板，每孔加入180μL的种板体积。
(2)加药
首先使用显微镜观察BV-2细胞形态和细胞密度，当细胞状态良好且完全贴壁后即可对其进行给药。配药需要准备完全培养基和储备液为100mM的水黄皮籽素、1a、1b和1c，使用梯度稀释法将药物稀释成5μM、10μM、20μM、40μM、80μM，每个浓度设置3个副孔，每孔加入10μL配好的药物。给药1h后加LPS刺激，加刺激需要准备完全培养基和储备液为1mg/mL的LPS，每孔加入10μL配好的LPS溶液，确保最后各孔内LPS浓度为200ng/mL，每个浓度设置3个副孔。
(3)细胞增殖活力检测
给完药24h后使用MTT法检测细胞存活率。首先从-20℃冰箱中拿出MTT溶液，室温放置使其融化，每孔加10μL的MTT溶液，4h后将真空泵吸管贴着孔板的孔壁，缓慢吸弃每孔中的细胞上清液，继续在每孔中加入100μL的DMSO，使用酶标仪在570nm和630nm波长范围内测量每孔的吸光度值。最后三个副孔的均值与空白孔均值的比值即为细胞存活率。
1.1.2 Griess试剂法检测亚硝酸盐浓度
(1)细胞处理
首先使用显微镜观察BV-2细胞形态和细胞密度，当细胞状态良好并且长满大皿底部的80％即可进行操作。打开水浴锅，将完全培养基和1×PBS溶液37℃预热10min后取出，在其表面喷完酒精后放入照过紫外灯的超净工作台中。然后使用真空泵吸弃大皿中的细胞上清液，加入2mL的1×PBS溶液，前后左右晃动大皿后吸弃上清液，重复此步骤一次以洗去未贴壁的细胞，由于BV-2细胞贴壁不牢所以不需要用到胰酶消化液，直接用5mL完全培养基将大皿中的细胞缓慢冲洗下来，慢慢打入15mL离心管中。接着使用台式离心机离心(800rpm，3min)，离心后回到超净工作台中，使用真空泵吸弃细胞上清液只保留底部白色沉淀，加4mL培养基，再稀释成3×105个/mL，取出96孔板，每孔加入180μL的种板体积。
(2)加药
首先使用显微镜观察BV-2细胞形态和细胞密度，当细胞状态良好且完全贴壁后即可对其进行给药。配药需要准备完全培养基和储备液为100mM的水黄皮籽素、1a、1b和1c，使用梯度稀释法将药物稀释成5μM、10μM、20μM、40μM、80μM，每个浓度设置3个副孔，每孔加入10μL配好的药物。给药1h后加LPS刺激，加刺激需要准备完全培养基和储备液为1mg/mL的LPS，每孔加入10μL配好的LPS溶液，确保最后各孔内LPS浓度为200ng/mL，每个浓度设置2个副孔。
(3)亚硝酸盐浓度检测
首先需要绘制NO标准曲线，取出Griess试剂盒，室温平衡20min，取出试剂盒中1M的NaNO2溶液，使用梯度稀释法将NaNO2溶液稀释成100、60、40、20、10、5、2、1μM的各个浓度，每个浓度设置2个副孔，拿出一个干净的96孔板，每孔内加入50μL配好的NaNO2稀释液，再向各孔内分别加入25μL的GriessⅠ和GriessⅡ试剂。最后540nm波长处测量吸光度，数据处理后得到NO标准曲线。给完药24h后使用上述的Griess试剂法检测细胞上清液中的NO含量。
1.2抗神经损伤
1.2.1 MTT检测细胞毒性检测
(1)细胞处理
当PC12细胞汇合至90％时，遵从细胞传代操作方法获取细胞悬液，离心吸弃培养基，加入4mL完全培养基后，用移液枪轻轻吹打均匀，用台酚蓝对细胞进行染色，染色后对细胞计数，在96孔板中均匀接种细胞，每个孔接种的密度是8×104个/mL，加的体积是80μL。然后将96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中，培养过夜。
(2)加药
根据实验要求用完全培养基配制2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM的药物，每组设置三个平行复孔。加药结束后将96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中，继续培养24h。
(3)检测
给药培养24h后，把MTT溶液按顺序加到96孔板中，每孔加入的体积是10μL，之后将96孔板放入培养箱中继续孵育4h。4h后用真空泵吸弃上清液体，每孔依次DMSO，加入的体积是100μL。立即使用酶标仪，检测96孔板在570nm和630nm处的吸光度值。
1.2.2 MTT检测细胞活性检测
(1)细胞处理
当PC12细胞汇合至90％时，遵从细胞传代操作方法获取细胞悬液，离心吸弃培养基，加入4mL完全培养基后，用移液枪轻轻吹打均匀，用台酚蓝对细胞进行染色，染色后对细胞计数，在96孔板中均匀接种细胞，每个孔接种的密度是8×104个/mL，加的体积是80μL。然后将96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中，培养过夜。
(2)加药
根据实验要求用完全培养基配制2.5μM、5μM、10μM、20μM、40μM的药物以及500μM的H2O2，每组设置三个平行复孔。加药结束后将96孔板置于37℃，5％CO2培养箱中，继续培养24h。
(3)检测
给药培养24h后，把MTT溶液按顺序加到96孔板中，每孔加入的体积是10μL，之后将96孔板放入培养箱中继续孵育4h。4h后用真空泵吸弃上清液体，每孔依次DMSO，加入的体积是100μL。立即使用酶标仪，检测96孔板在570nm和630nm处的吸光度值。
抗炎实验结果
(1)MTT法检测Pongamol及其衍生物的细胞毒性
分别用不同浓度的Pongamol、1a、1b、1c(5、10、20、40、80μM)作用于小鼠小胶质细胞BV-2细胞24h，通过MTT法对细胞的存活率进行检测。由图9可以发现，在5-40μM浓度范围内，Pongamol及其衍生物均未对BV-2细胞的增殖产生抑制作用，即未产生细胞毒性。
(2)Pongamol及其衍生物的抗炎活性测试
已证实一氧化氮(NO)是判定炎症程度的有效分子，为了初步探究Pongamol及其衍生物的抗炎活性，我们用不同浓度的Pongamol、1a、1b、1c(5、10、20、40μM)与LPS(200ng/mL)共同处理BV-2细胞24h后，使用Griess试剂检测其上清液中NO的含量。从图10可以看出，与空白对照组相比，LPS处理引起NO的释放显著增加，经过Pongamol及其衍生物的处理后，BV-2细胞中LPS诱导的NO释放的增加被显著抑制，且1a、1b、1c的抑制效果优于Pongamol，并以1c效果最佳。同时，我们可以得到Pongamol对NO的半数抑制率为196.48μM，1a、1b、1c的半数抑制率分别为62.19、43.63、42.83μM。
抗神经损伤实验结果
(1)MTT法检测Pongamol及其衍生物的细胞毒性
分别用不同浓度的Pongamol、1a、1b、1c(2.5、5、10、20、40μM)作用于大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC细胞24h，通过MTT法对细胞的存活率进行检测。由图11可以发现，在2.5-20μM浓度范围内，Pongamol及其衍生物均未对BV-2细胞的增殖产生抑制作用，即未产生细胞毒性。
(2)MTT法检测Pongamol及其衍生物对H2O2诱导的神经损伤的保护作用
在本实验处理中将不同浓度梯度的Pongamol、1a、1b、1c(2.5、5、10、20μM)作用于PC12细胞培养基中，预处理2h，再加入500μM的H2O2处理24h，以检测Pongamol及其衍生物对H2O2诱导的PC12细胞神经损伤的保护作用。如图12所示，加入H2O2的细胞存活率相对于空白对照组明显的降低，而加入Pongamol及其衍生物后，细胞存活率明显的上升，说明Pongamol及其衍生物对H2O2诱导的PC12细胞损伤作用有一定的保护作用，且衍生物的抗神经损伤效果优于Pongamol。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种水黄皮籽素衍生物，其特征在于：结构式如式Ⅰ所示：
Figure FDA0003479825550000011
式(I)中R1为H、CH3或Cl。
2.根据权利要求1所述的水黄皮籽素衍生物的制备方法，其特征在于：
R1为H或CH3时，包括如下步骤：
步骤1，以6,7-二氢-4(5H)-苯并呋喃酮和N-溴代琥珀酰亚胺为反应单体，制备
Figure FDA0003479825550000012
步骤2，以
Figure FDA0003479825550000013
为反应单体，制备
Figure FDA0003479825550000014
步骤3，以
Figure FDA0003479825550000015
和溴化苄为反应单体，制备
Figure FDA0003479825550000016
步骤4，以
Figure FDA0003479825550000017
和乙酸乙酯为反应单体，制备
Figure FDA0003479825550000018
步骤5，在反应瓶中加入
Figure FDA0003479825550000019
用1，4-二氧六环将其溶解，搅拌下加入DDQ，加毕，回流反应制得
Figure FDA00034798255500000110
步骤6，在反应瓶中加入
Figure FDA00034798255500000111
用丙酮将其溶解，搅拌下加入CH3I和碳酸钾，回流反应制得
Figure FDA00034798255500000112
步骤7，以
Figure FDA00034798255500000113
和苯甲酸甲酯为反应单体，制得
Figure FDA00034798255500000114
步骤8，以
Figure FDA0003479825550000021
为反应单体，制得水黄皮籽素衍生物
Figure FDA0003479825550000022
但R为Cl时，包括如下步骤：
步骤1，以
Figure FDA0003479825550000023
为反应单体，制备
Figure FDA0003479825550000024
步骤2，以
Figure FDA0003479825550000025
和乙酸乙酯为反应单体制备
Figure FDA0003479825550000026
步骤3，在反应瓶中加入
Figure FDA0003479825550000027
用1，4-二氧六环将其溶解，搅拌下加入DDQ，回流反应制得
Figure FDA0003479825550000028
步骤4，以
Figure FDA0003479825550000029
和CH3I为反应单体，制备
Figure FDA00034798255500000210
步骤5，以
Figure FDA00034798255500000211
和苯甲酸甲酯为反应单体，制备
Figure FDA00034798255500000212
步骤6，以
Figure FDA00034798255500000213
为反应单体，制备水黄皮籽素衍生物
Figure FDA0003479825550000031
3.根据权利要求1所述的水黄皮籽素衍生物的应用，其特征在于：用于制备药物，所述药物用于治疗老年痴呆性疾病。
4.根据权利要求1所述的水黄皮籽素衍生物的应用，其特征在于：老年痴呆性疾病为阿尔兹海默症。
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SE01 Entry into force of request for substantive examination
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GR01 Patent grant
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