CN114504601A - 灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用 - Google Patents

灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114504601A
CN114504601A CN202210292019.2A CN202210292019A CN114504601A CN 114504601 A CN114504601 A CN 114504601A CN 202210292019 A CN202210292019 A CN 202210292019A CN 114504601 A CN114504601 A CN 114504601A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ganoderma lucidum
ganoderma
powder
tabletting
product
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210292019.2A
Other languages
English (en)
Inventor
杨勇
李光荣
黄群英
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chongqing Chunzhi Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Chongqing Chunzhi Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chongqing Chunzhi Biotechnology Co ltd filed Critical Chongqing Chunzhi Biotechnology Co ltd
Publication of CN114504601A publication Critical patent/CN114504601A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A61K36/074—Ganoderma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明涉及一种灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用，本发明制备的灵芝制品具有益气血、安心神，健脾胃以及抗病毒的作用，本发明的灵芝制品的制备方法简单，可以大规模推广，利用本发明制备的灵芝制品抗新型冠状病毒效果显著，无副作用。

Description

灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用。
背景技术
灵芝，味甘，性平，归心、肺、肝、肾经，具有扶正固本、补气安神的功效。灵芝作为一种名贵中药用于临床已有悠久的历史，《神农本草经》记载“益心气”、“安精魂”、“补肝益气”、“坚筋骨”等并列为上品。主要含有灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、氨基酸、蛋白质、核苷类、有机酸及微量元素等多种活性物质。现代药理研究证实，灵芝具有抗肿瘤、提升免疫力等多种功能，能提高肝糖原水平，降低大强度负荷运动后血乳酸及血尿氮水平，具有抗疲劳、提供机体运动能力的功效。可以增强树突状细胞、单核吞噬细胞系、中性粒细胞与NK细胞功能；增强体液免疫功能；增强细胞免疫功能；促进免疫细胞因子的产生；延缓衰老所导致的免疫功能衰退；灵芝增强免疫力的功能就是其“扶正固本”作用，即加强机体的稳态调节能力，维持内环境稳定。首先是增强机体重要器官功能，如强心、保肝、促进造血、增强免疫功能等，其次是通过神经系统，内分泌系统和免疫系统的调节作用以及他们直径的相互调节，协调急停的功能活动，使之能适应内环境的变化，减轻各种治病因素对机体的损害，提高机体的抗病能力。
冠状病毒是一种直径为80nm～120nm的具有包膜的单股正链RNA病毒，广泛存在于人类、哺乳动物和鸟类宿主，可以导致呼吸道、肠道、肝脏和神经系统疾病。新型冠状病毒(COVID-19)属于Beta冠状病毒。
中医认为本病属于“疫”病范畴，病因为感受“疫戾”之气。中国早在商代的甲骨文中就有“疫”的记载，至少已有3500年以上的疫情历史。在我国最早的医学典籍《黄帝内经》中即有关于疫病的论述，《素问·剌法论》说:"五疫之至，皆相染易，无问大小，病状相似。“正气存内，邪不可干，避其毒气”。
新冠病毒“COVID-19”感染肺炎患者以发热、乏力、干咳为主要表现，少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状，重型病例多在1周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍，部分轻型患者并无肺炎表现。血常规提示白细胞计数正常或减少，淋巴细胞减少，病毒核酸检测阳性。CT表现多为双肺多发磨玻璃密度影(GGO)，以双肺胸膜下分布为主，可伴空气支气管征、小叶间隔增厚和胸膜增厚，极少数或少数伴胸腔积液或淋巴结肿大。相关研究推断其自然宿主可能是蝙蝠。通过S-蛋白与人体内血管紧张素转化酶(ACE2)结合并II型跨膜丝氨酸蛋白酶(TMPRSS2)激活的分子机制，来感染人的呼吸道上皮细胞。
在中国临床试验注册中心已注册的新冠肺炎相关临床研究超过200项。治疗性临床试验既有伦地西韦(Remdesivir)为代表的新药，也有磷酸氯喹、阿达木单抗等已上市药物的新适应证研究。与中医药相关的临床研究多数为中西医结合疗效评价研究，也有已上市药物如血必净、痰热清等的新适应证研究。目前还没有公开灵芝在抗新型冠状病毒方面的应用。
鉴于以上原因，特提出本发明。
发明内容
为了解决现有技术存在的以上问题，本发明提供了一种灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用，本发明的灵芝对于新型冠状病毒具抗感染能力，本发明的制品制备过程中不需要添加赋形剂、润滑剂等各种辅料。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用。
进一步的，所述的灵芝由单一的灵芝子实体组成，所述的制品剂型为片剂或胶囊。
本发明提供了灵芝制品的配方，由单味灵芝子实体组成，无任何辅料。市售灵芝产品剂型多为片剂、胶囊、颗粒、口服液，大多以灵芝孢子粉、灵芝菌丝体粉末(赵云财，李娜，赵姗姗，谭毅.一种灵芝口嚼片.申请号： 201310570469.4)、灵芝超微细粉[张苏锋等申请的“铁皮石斛、蛹虫草、灵芝和茶叶的复方咀嚼片及加工工艺”的专利(申请号为201410159981.4)中灵芝超微细粉为灵芝植株全粉且粒径低于300目]做为原料，且大多数产品辅料占比高、种类繁多如胡海燕申请的“灵芝咖啡”的专利(申请号201410310150.2)配方为0.2％食盐，0.2％磷酸钙，0.2％卡拉胶，0.4％咖啡粉末香精，9％速溶咖啡粉，10％全脂乳粉，20％植脂末，35％灵芝颗粒，25％白砂糖、冯鹏等申请的“灵芝孢子粉片及其制备工艺”的专利(申请号为200610040558.8)中灵芝孢子粉占20％。本发明配方中原料含量100％，且经小试、中试、大试工艺都很稳定，人体服食更安全。
本发明灵芝制品包括了灵芝所有的营养成分供吸收，营养更加全面，没有营养的流失，即营养保留率高；纯灵芝粉片的服用量准确，同时克服了灵芝粉剂过口会有腥味且会染成黑色的弊端。
进一步的，所述的制品的制备方法，包括如下步骤：
(1)灵芝超微细粉制备，将净灵芝粗粉碎后再过筛，得到灵芝粗粉，将灵芝粗粉用高能纳米冲击磨进行超微粉碎，得灵芝超微细粉，其中灵芝粗粉与磨介质量比为1：2～5；温度为10～30℃，粉碎5～8小时，使灵芝超微细粉大部分的粒径达140nm～300nm；
在上述参数条件下，有利于灵芝子实体成片，能够得到性能更优的纯灵芝粉片，其中第一灵芝子实体粉粒径需严格控制在一定范围内才能压成粉片，如果灵芝粒径大于1μm，采用二次压片方法也不能压制成片，其中第一灵芝子实体粉大部分粒径为140nm～300nm。
(2)将灵芝超微细粉制剂。
灵芝子实体(整个灵芝菌体)由皮壳、菌肉和菌管组成，性质非常坚、韧，先组粉再细粉，才能充分提取出有效成分，最大化的发挥其功效作用。
中药材的细胞尺度一般在10um～100um，经过细胞级微粉碎工艺作业，粉碎后得到的微粉可以达到纳米级。而病毒细胞尺度一般在100nm左右。
细胞级微粉后中药的作用和特点：
(1)提高生物利用度：细胞破壁后，破壁细胞中的内容物可直接接触溶媒，其有效成份可以全部直接进入溶媒被人体吸收。细胞级粉碎中药的有效成份释出量和释出速度，单位时间内人体吸收制品有效成份的量都会比普通粉碎方法所获得的中药粉末高，其释出的制品有效成份的种类也要比普通粉碎方法全。制品起效时间会显著缩短，对人体的作用更全面，作用强度更高。
(2)匀化作用：细胞破壁后，细胞内的水份及油份迁出，使微粒子表面呈现出湿润状态，粒子和粒子之间会形成稳定的粒子团，每一个粒子团都包含相同比例的中药成份。该粒子团的物理结构随组份中个成份的HLB值(亲水、亲油平衡值)、延展性、破碎性、含水(油)率、比重等不同组合和不同的相互作用而不同。这种结构会使中药材各有效成份均匀化，使各种成份均匀地被人体吸收，这也可以增强药物的作用效果。
(3)提高有效成份的工业提取率。由于细胞破壁，溶出阻力减小，药物有效成份明显提高。提高率在20％以上。
(4)减少口服颗粒粒感：巧克力研究表明，物料平均粒度25um左右，且其中大部分颗粒的粒度在15～20um，吃起来就会有很好的细腻滑润的口感特性，当平均粒度超过40um时就能明显感到粗糙感。粉碎作业后的平均粒度在 20u以下，并达到75％以上，其颗粒度已低于口腔颗粒感阀值，服用时无粗糙感。咱们的灵芝细度150nm～400nm，大大低于20u。其口感非常好。
(5)杀死虫卵：细胞级粉碎，与细胞尺度相当的虫卵也会被杀死。从而减轻虫害对中药材的危害。颗粒小，对肠壁的黏附作用加强，在肠内停留时间也会增长，有利于提高吸收度。
综上，细胞级微粉中药直接服用会明显使人体吸收的成分更全面、吸收强度会提高，吸收量会增加，从而提高生物利用度。
进一步的，所述的制品为片剂时，步骤(2)具体如下：
第一次压片，将灵芝超微细粉调节压力为60kN～80kN，加料转速为 70rpm～100rpm，压辊转速为8.0rpm～10rpm进行压片；
粉碎和整粒，将第一次压好的片进行粉碎，过20目～40目筛整粒；在上述参数的相互配合作用下能得到各方面性能佳的纯灵芝粉片；
第二次压片，将过20目～40目的颗粒用浅凹型冲模，压片的充填深度为 10mm～11mm，充填压力为35kN～50kN，压片的转台速度为25r/min～30r/min 进行压片，即得片剂。
采用上述方案的有益效果是在上述参数的相互配合作用下能得到各方面性能佳的纯灵芝片剂，本发明第二次压片采用浅凹型冲模，避免平凹型冲模会出现松片、硬度差的问题，避免深凹型冲模会出现裂片，易掉粉，质量不稳定的情况。
进一步的，步骤(2)中第二次压片时，将过20目～40目的颗粒用10.5mm～ 12.5mm浅凹型冲模压片。
进一步的，在步骤(1)之前，还需要进行预处理，具体为将灵芝子实体净选，清洗，干燥，得到净灵芝。
进一步的，所述预处理过程中的干燥温度为40～50℃，含水量为6～10％。
进一步的，所述步骤(1)中，将净灵芝用10目筛进行筛选、粉碎后，再过4mm筛得到灵芝粗粉。
进一步的，所述的制品为胶囊时，步骤(2)具体如下：将步骤(1)制得的灵芝超微细粉填充至胶囊壳内制成胶囊制剂。
本发明中的灵芝采用单一的灵芝子实体组成，所述灵芝子实体为经低温物理超微粉碎后制成的灵芝超微细粉，所获得灵芝超微细粉大部分粒径达 140nm～300nm。
本发明对灵芝有效成分保留进行了工艺革新。灵芝主要成分为灵芝多糖和灵芝三萜，常规生产工艺为水提，或不同浓度的乙醇提取[刘佳，王勇.灵芝多糖的研究进展.现代药物与临床.2012，27(6)]、[蒋婷婷，王勇.灵芝三萜类成分的研究进展.海峡药学.2014，24(1)]。但是这些方法都未对灵芝进行充分提取。[张嫚，张兰.灵芝多糖的分离纯化和药理活性及在功能食品中的应用.食品研究与开发，2005，2(26):118-120]，且灵芝的其主要成分还有生物碱、长链烯酸、内脂、香豆精、水溶性蛋白质、麦角甾醇、树脂等[马青云，罗应，华燕等.紫芝化学成分及药理活性的研究进展.国际中医中药杂志.2012.34(11)]。本发明提供了纯灵芝制品的制备技术，采用纯物理式制备技术，全程不受热，使灵芝具有各种生物活性成分不被破坏，全部保留，保持资源最大化利用，既节省材料资源，又提高了灵芝药效，完全区别于其他发明的水提、醇提加热带来的生物活性成分破坏和资源的丢弃，且工艺符合了超微粉的标准，粒径范围更小，相对均匀，有效成分的药效更均衡。
本发明中灵芝均采用野生灵芝，因为天然野生灵芝形体大，质地坚硬致密，为更充分的提取其成分和便于储存及防蛀，需将野生灵芝进行前处理，具体用塑料衣刷刷除灵芝菌盖上下面的残余苔藓、泥沙、老化部分及菌柄。
野生灵芝由于生长在植被丰富的森林中，生长环境的草、树枝、落叶、苔癣等会穿过或落在菌体上，故使用前需表面的杂质去掉。
本发明的有益效果为：
(1)本发明制备的灵芝制品具有益气血、安心神，健脾胃以及抗病毒的作用，且本发明的灵芝制品对于新型冠状病毒具有一定的抗感染能力，通过试验发现含有灵芝制品可以影响新冠假病毒对过表达ACE2的细胞的感染效率；
(2)本发明所述的灵芝制品可以增强人体的特异性免疫功能，促进树突细胞的增殖、分化及其功能，增强单核巨噬细胞与自然杀伤细胞的吞噬活性，促进免疫球蛋白(抗体)IgM、IgG生成，增加T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应，促进细胞因子白细胞介素-1、白细胞介素-2以及干扰素y的产生，进一步的缓解人体疲劳，抵抗力增强，抵抗病毒、细菌感染的纵深防线，能锁定特定目标，进一步防御和消灭侵入体内的病毒和细菌，从而起到一定的抗新型冠状病毒的作用；
(3)本发明的灵芝制品的制备方法简单，可以大规模推广，以及提取率高，利用本发明制备的灵芝制品抗新型冠状病毒效果显著，无副作用；
(4)本发明的灵芝制品具有与化学药品的不尽相同的适度调节原理即通过适度调节(思路)、系统整合(方法)，达到纠偏求平之目的(结果)。表现为较为广泛的多药理活性和弱毒性作用，微小毒性，但长时间累积药物可达理想的最大药理效应(效能)而体现出临床应用价值，反映出较理想的内在活性和相对更髙的安全性。新冠肺炎目前尚没有有效的抗病毒药物，反而有很多抗病毒药物在临床上引起了很多副作用；
(5)本发明提供的胶囊、片剂制备工艺简单高效且无需加热无任何添加，并创造性的采用二次压片纯物理技术，无需加热无任何添加，将纤维性极强的灵芝细粉制成片剂，减少了制粒环节，保障了热敏性活性物质的不被热降解，以灵芝蛋白、三萜类化合物为代表的生物活性成分保留率高，以更好发挥其治疗、保健作用，同时填补了国内单方灵芝制成片剂的空白，在常温状态下完成，灵芝蛋白保留率高，无损失，极大的提升了灵芝生物利用率，生产节能减耗，低碳化环境无污染，易于实现工业化。
(6)本发明的方法制得的灵芝超微细粉粒径达140nm～300nm，相较于现有技术，比表面积增大，使之产生四大效应即小尺寸效应、量子效应、表面效应和界面效应，从而具备微米或毫米量级物质所不具备的物理化学性能，能极大提高产品的吸收，本发明生产工序简单，自动化程度高，具有资源节约，低碳环保，符合国家大力提倡的绿色智造。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是假病毒感染正常HEK293细胞图；
图2是假病毒感染HEK293-ACE2细胞图；
图3是假病毒感染含药血清预处理48h的HEK293-ACE2组图；
图4是假病毒感染10ug/mL实施例2制备的灵芝制品预处理48h的 HEK293-ACE2组图；
图5是假病毒感染正常BEAS-2B细胞图；
图6是假病毒感染BEAS-2B-ACE2细胞组图；
图7是假病毒感染含药血清预处理48h的BEAS-2B-ACE2组图；
图8是假病毒感染10ug/mL实施例2制备的灵芝制品预处理48h的 BEAS-2B-ACE2组图；
图9是本发明的蛋白浓度—吸光度线性曲线图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
实施例1
本实施例公开一种纯灵芝制品，纯灵芝制品由单一的灵芝子实体组成，灵芝子实体为经低温物理超微粉碎后制成的灵芝超微细粉，所获得灵芝超微细粉粒大部分径达140nm～300nm，片剂型式为素片，每片所述纯灵芝粉片重0.3g，其加工工艺具体步骤如下：
Ⅰ.灵芝子实体的预处理:
去除灵芝子实体全株附着的泥土、残余木质、苔癣、落叶等杂质，用高压喷枪吹洗，干燥后得到净灵芝；
所述的干燥温度为40℃，含水量为10％；
Ⅱ.净灵芝粗粉碎：
净灵芝用10目筛粗粉碎，粉碎后过4mm筛得到灵芝粗粉；
本工序是为超微粉碎提供基础，将灵芝子实体整朵初步粉碎即可。不需对工艺参数做筛选。
Ⅲ.灵芝超微细粉碎：
称取500g灵芝粗粉和磨介装入高能纳米冲击磨罐中，灵芝粗粉与磨介重量比为1：2；
设置并控制超微粉碎参数：夹套冷却液加循环冷却，控制罐体温度在10℃，粉碎5小时，并取样测灵芝细粉粒径，灵芝超微细粉粒74.7％径达140nm～ 300nm，详细见下表1：
超微粉碎5小时灵芝粉。
表1
Figure BDA0003561903550000091
将上述粉碎所得的灵芝超微细粉进行压片处理，具体步骤如下：
第一次压片，将灵芝超微细粉调节压力为60kN，加料转速为70rpm，压辊转速为8.0rpm进行压片；
粉碎和整粒，将第一次压好的片进行粉碎，过20目筛整粒；
第二次压片，将过20目的颗粒用10.5mm浅凹型冲模，压片的充填深度为 10mm，充填压力为35kN，压片的转台速度为30r/min进行压片，即得纯灵芝制品。
实施例2
本实施例公开一种纯灵芝制品及其加工工艺，纯灵芝制品由单一的灵芝子实体组成，灵芝子实体为经低温物理超微粉碎后制成的灵芝超微细粉，所获得灵芝超微细粉粒大部分径达140nm～300nm，片剂型式为素片，每片所述纯灵芝粉片重0.6g，其加工工艺具体步骤如下：
Ⅰ.灵芝子实体的预处理:
去除灵芝子实体全株附着的泥土、残余木质、苔癣、落叶等杂质，用高压喷枪吹洗，干燥后得到净灵芝；
所述的干燥温度为50℃，含水量为6％；
Ⅱ.净灵芝粗粉碎：
净灵芝用10目筛粗粉碎，粉碎后过4mm筛得到灵芝粗粉；
本工序是为超微粉碎提供基础，将灵芝子实体整朵初步粉碎即可。不需对工艺参数做筛选。
Ⅲ.灵芝超微细粉碎：
称取500g灵芝粗粉和磨介装入高能纳米冲击磨罐中，灵芝粗粉与磨介重量比为1：5；
设置并控制超微粉碎参数：夹套冷却液加循环冷却，控制罐体温度在30℃，粉碎6小时，并取样测灵芝细粉粒径，灵芝超微细粉粒68.8％径达140nm～ 300nm，详细见下表2：
超微粉碎6小时灵芝粉。
表2
Figure BDA0003561903550000111
将上述粉碎所得的灵芝超微细粉进行压片处理，具体步骤如下：
第一次压片，将灵芝超微细粉调节压力为80kN，加料转速为100rpm，压辊转速为10rpm进行压片；
粉碎和整粒，将第一次压好的片进行粉碎，过40目筛整粒；
第二次压片，将过40目的颗粒用12.5mm浅凹型冲模，压片的充填深度为 10mm，充填压力为50kN，压片的转台速度为30r/min进行压片，即得纯灵芝制品。
实施例3
本实施例公开一种纯灵芝制品及其加工工艺，纯灵芝制品由单一的灵芝子实体组成，灵芝子实体为经低温物理超微粉碎后制成的灵芝超微细粉，所获得灵芝超微细粉粒大部分径达140nm～300nm，片剂型式为素片，每片所述纯灵芝粉片重0.5g，其加工工艺具体步骤如下：
Ⅰ.灵芝子实体的预处理:
去除灵芝子实体全株附着的泥土、残余木质、苔癣、落叶等杂质，用高压喷枪吹洗，干燥后得到净灵芝；
所述的干燥温度为45℃，含水量为8％；
Ⅱ.净灵芝粗粉碎：
净灵芝用10目筛粗粉碎，粉碎后过4mm筛得到灵芝粗粉；
本工序是为超微粉碎提供基础，将灵芝子实体整朵初步粉碎即可。不需对工艺参数做筛选。
Ⅲ.灵芝超微细粉碎：
称取500g灵芝粗粉和磨介装入高能纳米冲击磨罐中，灵芝粗粉与磨介重量比为1：3；
设置并控制超微粉碎参数：夹套冷却液加循环冷却，控制罐体温度在20℃，粉碎7小时，并取样测灵芝细粉粒径，灵芝超微细粉粒68.5％径达140nm～ 300nm，详细见下表3：
超微粉碎7小时灵芝粉。
表3
Figure BDA0003561903550000121
将上述粉碎所得的灵芝超微细粉进行压片处理，具体步骤如下：
第一次压片，将灵芝超微细粉调节压力为70kN，加料转速为80rpm，压辊转速为9rpm进行压片；
粉碎和整粒，将第一次压好的片进行粉碎，过30目筛整粒；
第二次压片，将过30目的颗粒用11.5mm浅凹型冲模，压片的充填深度为 10mm，充填压力为40kN，压片的转台速度为27r/min进行压片，即得纯灵芝制品。
实施例4
本实施例公开一种纯灵芝制品及其加工工艺，纯灵芝制品由单一的灵芝子实体组成，灵芝子实体为经低温物理超微粉碎后制成的灵芝超微细粉，所获得灵芝超微细粉粒径达140nm～300nm，片剂型式为素片，每片所述纯灵芝粉片重0.5g，其加工工艺具体步骤如下：
Ⅰ.灵芝子实体的预处理:
去除灵芝子实体全株附着的泥土、残余木质、苔癣、落叶等杂质，用高压喷枪吹洗，干燥后得到净灵芝；
所述的干燥温度为48℃，含水量为7％；
Ⅱ.净灵芝粗粉碎：
净灵芝用10目筛粗粉碎，粉碎后过4mm筛得到灵芝粗粉；
本工序是为超微粉碎提供基础，将灵芝子实体整朵初步粉碎即可。不需对工艺参数做筛选。
Ⅲ.灵芝超微细粉碎：
称取500g灵芝粗粉和磨介装入高能纳米冲击磨罐中，灵芝粗粉与磨介重量比为1：4；
设置并控制超微粉碎参数：夹套冷却液加循环冷却，控制罐体温度在15℃，粉碎8小时，并取样测灵芝细粉粒径，灵芝超微细粉粒68.4％径达140nm～ 300nm，详细见表4：
超微粉碎8小时灵芝粉。
表4
Figure BDA0003561903550000141
将上述粉碎所得的灵芝超微细粉进行压片处理，具体步骤如下：
第一次压片，将灵芝超微细粉调节压力为65kN，加料转速为70rpm，压辊转速为8.0rpm进行压片；
粉碎和整粒，将第一次压好的片进行粉碎，过20目～40目筛整粒；
第二次压片，将过20目～40目的颗粒用11mm浅凹型冲模，压片的充填深度为10mm，充填压力为35kN，压片的转台速度为25r/min进行压片，即得纯灵芝制品。
Ⅰ.第一次压片：
通过考察压辊压力、加料转速、压辊转速进行正交试验，找到合适的参数，靠压缩力使分子间产生结合力，使灵芝超微细粉挤压成薄片。
Ⅲ.第二次压片：
通过考察冲模规格、充填深度、充填压力、转台速度进行正交试验，以片剂重量，外观性状、硬度和脆碎度为评价指标，从而验证粒径对产品质量的影响。
实施例5
与实施例1区别主要在于，将粉碎所得的灵芝超微细粉不进行压片制剂，而是直接填充至胶囊壳内制成胶囊制剂。
实施例6
与实施例2区别主要在于，将粉碎所得的灵芝超微细粉不进行压片制剂，而是直接填充至胶囊壳内制成胶囊制剂。
实施例7
与实施例3区别主要在于，将粉碎所得的灵芝超微细粉不进行压片制剂，而是直接填充至胶囊壳内制成胶囊制剂。
实施例8
与实施例4区别主要在于，将粉碎所得的灵芝超微细粉不进行压片制剂，而是直接填充至胶囊壳内制成胶囊制剂。
对比例1
取灵芝子实体500g，通过乙醇回流法对灵芝子实体进行浸提，加热温度为 85℃，加热时间为60分钟，对提取的营养成分进行测定。
对比例2
取灵芝子实体500g，加水煎煮，保持沸腾60分钟，对提取的营养成分进行测定。
对比例3
取灵芝子实体500g，通过乙醇回流法对灵芝子实体进行浸提，加热温度为 85℃，加热时间为60分钟，滤过，滤液备用；药渣加水煎煮，保持沸腾60分钟，滤过，滤液备用；合并两次滤液，对合并滤液的营养成分进行测定。
对比例4
将灵芝子实体打碎过200目筛，压片用9.5mm平凹型冲模，充填深度12mm, 充填压力为35kN，转台速度为20r/min，对在此条件下制得的粉片性能进行测定。
对比例5
将灵芝子实体打碎过300目筛，压片用12.5mm深凹型冲模，充填深度10mm, 充填压力为30kN，转台速度为25r/min，对在此条件下制得的粉片性能进行测定。
实施例和对比例4-5所得灵芝片质量比较如表5所示。
表5
Figure BDA0003561903550000161
由上述实验结果可知，实施例和对比例4及对比例5比较可知灵芝子实体粉经本发明二次压片技术得到了各方面性质优良的片剂。
温度对蛋白提取率的影响的实验：
灵芝蛋白的含量测定：
1、牛血清蛋白标准品溶液的制备
精确称量干燥至恒重的牛血清蛋白标准品12.50mg，置50ml容量瓶中，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作为标准品溶液。
2、灵芝供试品溶液制备
取灵芝供试品0.5g，精确称定，置具塞锥形瓶中，精密加水250ml，称定重量，低温超声处理10分钟，放冷，再用水补足减失的重量，摇匀，于离心管中8000r/min离心15min，取上清液1.0ml，照“标准曲线绘制”项下“加水至2ml”方法，在750nm处测定其吸光度，即得。
3、标准曲线绘制
如图9所示，精密吸取配制好的牛血清蛋白标准品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、 1.6、2.0ml，置试管中，加水至2ml，摇匀，取Folin-酚蛋白定量试剂盒，分别在试管中加入试剂盒中的试剂甲5ml，摇匀，于室温放置10min；加入试剂乙1.0ml，摇匀，静置30min，在750nm处测定其吸光度，以水代替样品作空白对照。以蛋白质浓度为横坐标(x)，吸光度值为纵坐标(y)绘制标准曲线，蛋白质含量回归方程为y＝1.8846x-0.01971r2＝0.9994(n＝6)，试验结果表明，标准品浓度在0.00625～0.0625mg/ml范围内呈良好的线性关系。
4、灵芝样品蛋白含量测定
取灵芝子实体样品0.5g，按照灵芝供试品溶液制备方法制备，经测定蛋白含量约为14.20％。
表6实施例和对比例主要营养物质留存率比较
Figure BDA0003561903550000181
上述营养留存率为通过实施例及对比例的方法所得成品的营养成分含量与纯灵芝子实体原料(500g)的营养成分含量的比值。上述灵芝蛋白留存率为通过实施例及对比例的方法所得成品的灵芝蛋白含量与灵芝子实体原料(500g) 的灵芝蛋白含量的比值。即本发明得到一种生物活性成分含量高且质量优良的灵芝制品。
鉴于此，本发明提出纯灵芝制剂，但是纯灵芝制剂如采用粉剂的形式具有一定的弊端，如生产纯灵芝粉剂，粉剂本身会造成服用量的不准确，且灵芝本身具有腥味，经口会变成黑色难以清除，故纯灵芝粉剂不适于生产；鉴于此，本发明提还提出出纯灵芝片制剂或胶囊制剂，克服上述问题。但是利用普通的现有压片技术(一次压片)，由于灵芝子实体粉含大量木质素以及纤维性,难以将纯灵芝粉压成片剂，本发明创造性的提出二次压片技术，将纯灵芝粉压成片剂，克服了本领域的技术难题。
试验例1新冠假病毒感染HEK293-ACE2与BEAS-2B-ACE2细胞及药物干预处理
1、实验材料
HEK293-ACE2细胞株，威斯腾生物构建；
培养条件：DMEM基础培养基加入10％FBS，按1％体积分数加入青霉素- 链霉素液；
气相：空气，95％；二氧化碳，5％；温度：37℃；
BEAS-2B-ACE2细胞株，威斯腾生物构建；
培养条件：DMEM基础培养基加入10％FBS，按1％体积分数加入青霉素- 链霉素液；
气相：空气，95％；二氧化碳，5％；温度：37℃；
SARS-Cov-2假病毒，由北京天坛生物提供。
2、主要试剂
DMEM培养基：Gibco，美国；
胎牛血清：Gibco，美国：
胰蛋白酶：Beyotime，中国；
青霉素-链霉素溶液(100X)：Beyotime，中国：
PBS：北京中杉；
主要试剂配制：
(1)PBS磷酸盐缓冲液：PBS粉剂每袋加ddH2O定容至1000mL，调pH7.2， 121℃，30min高压灭菌，4℃保存。
(2)DMEM培养基：临用在DMEM培养基中加入10％FBS，按1％体积分数加入青霉素-链霉素液，置于4℃冰箱保存。
(3)DMEM含药血清培养基：临用在DMEM培养基中加入10％小鼠含药血清，按1％体积分数加入青霉素-链霉素液，置于4℃冰箱保存。
(4)细胞冻存液：生长培养基(含20％胎牛血清)或100％胎牛血清，加入10％的DMSO混合均匀，置于4℃冰箱保存。
3、实验分组
含药血清制备
实验动物：SPF级成年健康昆明小鼠，6-8周龄，由重庆恩斯维尔生物技术有限公司提供。
SPF动物房12h-12h昼夜交替，保持动物自由饮水、进食，温度21-27℃，湿度40-70％，实验动物进入动物房适应性饲养一段时间后进入实验。经适应性喂养后的昆明小鼠称重，按照10ml/kg的剂量按分组给予80mg/kg的实施例2 制备的野生灵芝制品灌胃，对照组给予等量溶剂(纯水)灌胃处理，给药频率每天2次。实验鼠称重，摘眼球采血，然后开腹腔取出脾脏，新鲜脾脏称重后立即用于后续实验；取出的血液静置2h左右，离心(3000转/min，20min，4℃)，离心完成后吸取上层血清，血清经灭活(56℃水浴20min)待用。
HEK293细胞
(1)假病毒感染正常HEK293细胞
(2)假病毒感染HEK293-ACE2细胞组
(3)假病毒感染含药血清预处理48h的HEK293-ACE2组
(4)假病毒感染10ug/mL实施例2制备的灵芝制品预处理48h的 HEK293-ACE2组
BEAS-2B细胞
(1)假病毒感染正常BEAS-2B细胞
(2)假病毒感染BEAS-2B-ACE2细胞组
(3)假病毒感染含药血清预处理48h的BEAS-2B-ACE2组
(4)假病毒感染10ug/mL实施例2制备的灵芝制品预处理48h的BEAS-2B-ACE2组
4、假病毒颗粒感染目的细胞
第1d，准备细胞：收集药物预处理后的细胞，无血清培养基重悬，调整细胞密度为1～2×105/ml，每孔100ul细胞悬液接种于96孔板中，进行病毒感染时细胞的融合度约为50％左右。
第2d，观察细胞生长状态，使用假病毒感染细胞：
1.准备病毒：取出冻存在-80℃的病毒，先在冰上融化后使用。计算好的假病毒稀释到培养基中，并尽可能保证所获得的含有假病毒的培养基的总体积为最小体积，以期获得最佳的感染效率。
2.准确计算好每孔所需病毒原液量。假病毒使用量＝MOI*细胞数目/假病毒滴度，吸取病毒液加入细胞中，混匀后将96孔板放在37℃度培养箱中孵育。
第3d，更换培养液：一般在24h后将含有假病毒的培养液更换成正常培养液；在感染后观察细胞状态，如果假病毒对细胞有明显毒性作用而影响细胞生长状态，可以最短在加病毒4h后更换新鲜培养液后继续培养(在8-12h更换为宜)。第一次换液后，如果假病毒对细胞没有明显毒性作用，按照正常培养条件培养换液。第5d，感染48h后，荧光显微镜观察荧光表达情况，同时收集样本进行后续实验检测。
通过荧光显微镜观察假病毒感染效率，其中，假病毒感染正常HEK293细胞如图1所示，假病毒感染HEK293-ACE2细胞组如图2所示，假病毒感染含药血清预处理48h的HEK293-ACE2组如图3所示，假病毒感染10ug/mL实施例2制备的灵芝制品预处理48h的HEK293-ACE2组如图4所示，假病毒感染正常BEAS-2B细胞如图5所示，假病毒感染BEAS-2B-ACE2细胞组如图6所示，假病毒感染含药血清预处理48h的BEAS-2B-ACE2组如图7所示，假病毒感染10ug/mL实施例2制备的灵芝制品预处理48h的BEAS-2B-ACE2组如图8 所示。
通过图1-8可以看出，HEK293细胞：正常HEK293细胞几乎无法被新冠假病毒感染，过表达ACE2后的HEK293-ACE2细胞能够被新冠假病毒大量感染。BEAS-2B细胞：正常BEAS-2B细胞有少量细胞被新冠假病毒感染，过表达ACE2后的BEAS-2B-ACE2细胞能够被新冠假病毒大量感染。野生灵芝制品可以影响新冠假病毒对过表达ACE2的细胞的感染效率。
本发明人也对其他实施例制备的野生灵芝制品做了上述试验，结果基本一致，由于篇幅有限，不再一一列举。
试验例2SD大鼠灌胃野生灵芝制品重复给药毒性试验
本试验例采用实施例2制备的野生灵芝制品进行试验，具体的剂量设计如表7所示。
表7
Figure BDA0003561903550000221
经过试验证明，SD大鼠连续3个月(2次/天)灌胃给予野生灵芝制品4.2 生药/kg和2.1生药/kg，停药后恢复30天。结果显示未见与药物相关的明显毒性靶器官，其无毒性反应剂量(NOAEL)为4.2生药/kg，相当于人临床剂量的 51倍。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (9)

1.一种灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的灵芝由单一的灵芝子实体组成，所述的制品剂型为片剂或胶囊。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的制品的制备方法，包括如下步骤：
(1)灵芝超微细粉制备，将净灵芝粗粉碎后再过筛，得到灵芝粗粉，将灵芝粗粉用高能纳米冲击磨进行超微粉碎，得灵芝超微细粉，其中灵芝粗粉与磨介质量比为1：2～5；温度为10～30℃，粉碎5～8小时，使灵芝超微细粉大部分的粒径达140nm～300nm；
(2)将灵芝超微细粉制剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的制品为片剂时，步骤(2)具体如下：
第一次压片，将灵芝超微细粉调节压力为60kN～80kN，加料转速为70rpm～100rpm，压辊转速为8.0rpm～10rpm进行压片；
粉碎和整粒，将第一次压好的片进行粉碎，过20目～40目筛整粒；
第二次压片，将过20目～40目的颗粒用浅凹型冲模，压片的充填深度为10mm～11mm，充填压力为35kN～50kN，压片的转台速度为25r/min～30r/min进行压片，即得片剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)中第二次压片时，将过20目～40目的颗粒用10.5mm～12.5mm浅凹型冲模压片。
6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，在步骤(1)之前，还需要进行预处理，具体为将灵芝子实体净选，清洗，干燥，得到净灵芝。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述预处理过程中的干燥温度为40～50℃，含水量为6～10％。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，将净灵芝用10目筛进行筛选、粉碎后，再过4mm筛得到灵芝粗粉。
9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的制品为胶囊时，步骤(2)具体如下：将步骤(1)制得的灵芝超微细粉填充至胶囊壳内制成胶囊制剂。
CN202210292019.2A 2021-11-19 2022-03-24 灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用 Pending CN114504601A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111384456 2021-11-19
CN2021113844569 2021-11-19

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114504601A true CN114504601A (zh) 2022-05-17

Family

ID=81555575

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210292019.2A Pending CN114504601A (zh) 2021-11-19 2022-03-24 灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114504601A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116474006A (zh) * 2022-09-22 2023-07-25 浙江农林大学 灵芝提取物在制备抗SARS-CoV-2病毒药物中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104644697A (zh) * 2015-02-09 2015-05-27 江苏海王健康生物科技有限公司 灵芝超微粉的制备方法及其应用
CN111053793A (zh) * 2019-12-27 2020-04-24 重庆纯芝生物科技有限公司 一种纯灵芝粉片及其制备方法
CN112220898A (zh) * 2020-11-10 2021-01-15 贵州省金黔果生物科技有限责任公司 抗冠状病毒的组合物及其制备方法和用途
CN113208020A (zh) * 2021-03-16 2021-08-06 郭利峰 一种提高人体免疫力的植物保健饮料

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104644697A (zh) * 2015-02-09 2015-05-27 江苏海王健康生物科技有限公司 灵芝超微粉的制备方法及其应用
CN111053793A (zh) * 2019-12-27 2020-04-24 重庆纯芝生物科技有限公司 一种纯灵芝粉片及其制备方法
CN112220898A (zh) * 2020-11-10 2021-01-15 贵州省金黔果生物科技有限责任公司 抗冠状病毒的组合物及其制备方法和用途
CN113208020A (zh) * 2021-03-16 2021-08-06 郭利峰 一种提高人体免疫力的植物保健饮料

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘翰书: "重庆企业利用中医药预防新冠病毒感染取得新进展", 《HTTP://MSGC.CHINAREPORTS.ORG.CN/QYZJ/20200911/8139.HTML》 *
林志彬: "灵芝抗病毒感染的机制与疫情防控", 《中国药理学与毒理学杂志》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116474006A (zh) * 2022-09-22 2023-07-25 浙江农林大学 灵芝提取物在制备抗SARS-CoV-2病毒药物中的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8900639B2 (en) Process for obtaining a rabbit skin comprising biological active substances
KR100922311B1 (ko) 활성화된 당 관련 화합물을 함유하는 물질을 생성하는 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복식 배양 방법
US20120309710A1 (en) Compound sea cucumber preparation and manufacturing method thereof
CN104739888A (zh) 冠突散囊菌菌粉及其制备方法和应用
US20130225790A1 (en) Momordica charantia polypeptide, preparation method thereof and uses of the same
CN102994305B (zh) 用蛹虫草、茧提取物制备保健食(疗)品之营养露酒的方法
CN104644697B (zh) 灵芝超微粉的制备方法及其应用
CN101919875B (zh) 一种浒苔香菇多糖复合物的制备方法
CN111035649A (zh) 一种nmn+glp复配营养补充剂及其制备方法和应用
CN105535650A (zh) 具有抗肿瘤功能的益生菌组合物及其制备方法与应用
CN114504601A (zh) 灵芝在制备治疗抗新型冠状病毒制品中的应用
KR100918628B1 (ko) 쌍화탕 진균 발효물을 유효성분으로 함유하는 간 독성 예방또는 치료용 조성물
CN110664883B (zh) 一种具有生精作用的药物组合物
CN105796587B (zh) 竹茹多糖在免疫调节、抗肿瘤中的应用
KR20120069221A (ko) 봉독조성물
CN102670669A (zh) 抗癌抗病毒抗疲劳益肾富硒冬虫夏草菌粉及胶囊
CN100464755C (zh) 具有免疫调节作用的抗化学性肝损伤的中药制剂
CN109527583A (zh) 羊肚菌子实体多肽的新用途
CN110279717A (zh) 鳄鱼甲有效组分的制备及其抗氧化、抗肝纤维化的应用
WO2016082327A1 (zh) 一种虫草菌丝体的加工方法
CN104327993A (zh) 一种金蝉花米酒的制备方法
CN103230003B (zh) 一种具有增强免疫力功能的保健食品及其制备方法
KR20050051179A (ko) 밀리타리스동충하초 추출물을 유효성분으로 포함하는면역증진용 약학조성물
CN105250337A (zh) 一种纵条纹炭角菌的应用
JP2004277414A (ja) 食用キノコ由来のエストロゲン様活性物質

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20220517