CN114486835B - 胆甾类手性分子钳用于食品中色氨酸的快速检测方法 - Google Patents
胆甾类手性分子钳用于食品中色氨酸的快速检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114486835B CN114486835B CN202210116878.6A CN202210116878A CN114486835B CN 114486835 B CN114486835 B CN 114486835B CN 202210116878 A CN202210116878 A CN 202210116878A CN 114486835 B CN114486835 B CN 114486835B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tryptophan
- fluorescence
- sample
- mol
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 title claims abstract description 129
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 127
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims abstract description 18
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 29
- 230000003098 cholesteric effect Effects 0.000 title description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 42
- VUDZSIYXZUYWSC-DBRKOABJSA-N (4r)-1-[(2r,4r,5r)-3,3-difluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-4-hydroxy-1,3-diazinan-2-one Chemical compound FC1(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N[C@H](O)CC1 VUDZSIYXZUYWSC-DBRKOABJSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 238000004448 titration Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 36
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 22
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 9
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims description 6
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims description 5
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 4
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims description 3
- 230000001546 nitrifying effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 239000003513 alkali Substances 0.000 claims description 2
- 230000003113 alkalizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 claims description 2
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 118
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 16
- 230000008859 change Effects 0.000 description 15
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 14
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 14
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 7
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 6
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 6
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- -1 cholesterol compound Chemical class 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 3
- 210000000080 chela (arthropods) Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Natural products C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 3
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 3
- CFNMUZCFSDMZPQ-GHXNOFRVSA-N 7-[(z)-3-methyl-4-(4-methyl-5-oxo-2h-furan-2-yl)but-2-enoxy]chromen-2-one Chemical compound C=1C=C2C=CC(=O)OC2=CC=1OC/C=C(/C)CC1OC(=O)C(C)=C1 CFNMUZCFSDMZPQ-GHXNOFRVSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108010031480 Artificial Receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 2
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)benzaldehyde Chemical compound CN(C)C1=CC=C(C=O)C=C1 BGNGWHSBYQYVRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- 229930182827 D-tryptophan Natural products 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 206010012239 Delusion Diseases 0.000 description 1
- ZHUOOEGSSFNTNP-JMKDMENQSA-N Deoxycholic acid methyl ester Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCC(=O)OC)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 ZHUOOEGSSFNTNP-JMKDMENQSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004547 Hallucinations Diseases 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- DSRXQXXHDIAVJT-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;n,n-dimethylformamide Chemical compound CC#N.CN(C)C=O DSRXQXXHDIAVJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- VTJUKNSKBAOEHE-UHFFFAOYSA-N calixarene Chemical class COC(=O)COC1=C(CC=2C(=C(CC=3C(=C(C4)C=C(C=3)C(C)(C)C)OCC(=O)OC)C=C(C=2)C(C)(C)C)OCC(=O)OC)C=C(C(C)(C)C)C=C1CC1=C(OCC(=O)OC)C4=CC(C(C)(C)C)=C1 VTJUKNSKBAOEHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 231100000868 delusion Toxicity 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000002848 electrochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- KUGLDBMQKZTXPW-JEDNCBNOSA-N methyl (2s)-2-amino-3-methylbutanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)C(C)C KUGLDBMQKZTXPW-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000000191 radiation effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 238000003375 selectivity assay Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004729 solvothermal method Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N tetrabutylammonium Chemical class CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC DZLFLBLQUQXARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N triphosgene Chemical compound ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
- G01N2021/6443—Fluorimetric titration
Abstract
本发明提供了从食品种检测色氨酸的方法，它包括使用化合物7a对待检样品进行荧光滴定，排除Ag+干扰后，即可得到色氨酸含量。
Description
技术领域
本发明涉及检测领域。
背景技术
氨基酸作为蛋白质与多肽的基本结构单元，是人体生长不可或缺的营养物质，同时在维持 新陈代谢、调节神经系统以及免疫反应等生理过程中具有至关重要的作用。因此，任何一种氨 基酸及其代谢物的缺失或者过量都将影响人体健康。已知基本氨基酸有二十种，其中色氨酸是人类和动物体内重要的必需氨基酸之一，因其具有调节肠道菌群、参与细胞免疫等功能，在食 品、医药、生化等领域得到广泛的应用。根据世界卫生组织(WHO)规定，机体内色氨酸正常 水平应控制在4mg/kg，然而一旦摄入过量，便会导致妄想和幻觉障碍，从而增加精神分裂症 和神经性疾病的风险。除此之外，内源性色氨酸也是肝细胞疾病诊断的重要信号因子。因此， 色氨酸的快速检测及分离在生命科学研究和食品营养分析中越来越受到人们的关注。
目前，色氨酸的检测主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法、毛细管电泳、电化学法等，然而这些方法不仅依赖大型精密仪器与专业技术人员，且操作繁琐、耗时长，严重阻碍了检测的效率。近年来，基于分子识别形成的氨基酸特异性受体的种类逐年被大量报 道。Lu课题组报道了新颖的杯芳烃衍生物，通过紫外-可见光谱和荧光光谱在DMF-乙腈体系 中实现对左旋色氨酸的识别；张艳以香豆素为原料合成了香豆素衍生物荧光探针，并将其成功用于活细胞内色氨酸的含量检测。牛建丽等采用溶剂热法合成了发光性能和水溶性良好的 纳米探针，建立了基于该纳米探针内滤效应测定色氨酸含量的方法，并将其应用于酱油中色 氨酸的检测。胆甾类化合物因其具有刚性的凹面，是构筑人工受体的理想结构单元，本研究 拟以胆甾类化合物为隔离基，连接芳环为手臂形成刚性钳形结构，用于氨基酸的识别研究，并建立快速检测色氨酸的新方法。
发明内容
本发明以脱氧胆酸为原料合成了一种胆甾类手性分子钳7a，考察了其对多种氨基酸荧光 光谱变化的影响，发现该手性分子钳7a在Ethanol/Tris(1∶1,v/v,pH 7.0)缓冲液中 对色氨酸具有特异性识别能力，检出限低至0.17μmol/L，同时考察了化合物7a对色氨酸识别过程中常见金属阳离子及阴离子的干扰行为，在排除阴阳离子干扰作用基础上，建立了 快速测定食品样品中色氨酸的新方法。
具体的是，本发明提供了从食品种检测色氨酸的方法，其特征在于：它包括使用化合物7a对 待检样品进行荧光滴定，排除Ag+干扰后，即可得到色氨酸含量；化合物7a结构式如下：
色氨酸含量m＝m1-(m2/MAg+)×M色氨酸；m1为未排除Ag+干扰的待检样品的色氨酸含量，m2 为待检样品中的Ag+含量，M色氨酸＝204.23g/mol,MAg+＝107.87g/mol。
其中，荧光检测中，主要以约270nm为发射波长，在约268nm波长处测量其荧光强度。
其中，m1的测定方法包括：
(1)样品预处理：取待检样品，乙醇超声提取，再加入碱，水解；水解液上离子交换树 脂，采用氨水洗脱，收集氨水洗脱液；
(2)通过荧光分光光度计进行检测，并通过标准曲线计算m1。
其中，乙醇体积分数选自30～50％。
其中，洗脱用氨水体积分数为1～2％。
其中，m1测定方法包括：采用超声辅助碱水解法提取总氨基酸,超声温度50-60℃、乙醇 体积分数为40％，加入氢氧化钾溶液,于35-45℃水解；再用离子交换树脂对氨基酸进行初步 纯化，上样液pH 4.66，氨水洗脱液体积分数1.5％，洗脱流速1.50mL/min，洗脱液体积61.67 mL，通过荧光分光光度计进行检测，并通过标准曲线计算m1。
其中，m2的测定方法为：取待检样品，在消解管中400℃条件下硝化55min，取上清液 测定荧光光度值，通过标准曲线计算m2。
其中，荧光滴定的步骤包括：取浓度1×10-4mol/L的化合物7a溶液0.5mL，加入2.5mL 预处理后的氨水洗脱液，充分混合后量取2.5mL在室温测定其268nm处的荧光强度值，通 过标准曲线计算m1、m2。
将分子钳7a用于实际样品中色氨酸的检测，建立了排除金属银离子干扰的检测方法，并将该 方法用于婴幼儿乳粉、小麦面粉等食品样品中色氨酸的测定，结果表明新方法准确、可靠， 灵敏度高，且检测限优于许多报道的检测方法。
附图说明
图1.主体化合物7a(1.6×10-5mol/L)加入各类氨基酸(8.3×10-4mol/L)的荧光变化图(A. 色谱图B.柱形图)
图2.主体化合物7a(1.6×10-5mol/L)对色氨酸(8.3×10-4mol/L)的荧光强度变化随时间 变化
图3.主体化合物7a(1×10-4mol/L)在不同浓度色氨酸(0～36μmol/L)的荧光光谱
图4.主体化合物7a(1×10-4mol/L)对色氨酸(0～36μmol/L)的标准曲线
图5.干扰离子(4.5×10-4mol/L)对探针7a(9×10-6mol/L)识别色氨酸紫外-可见光谱的 影响(A为加入金属离子图谱变化，B为加入阴离子图谱变化)
图6.干扰离子(4.5×10-4mol/L)对探针7a(9×10-6mol/L)识别色氨酸荧光光谱的影响(C 为加入金属离子图谱变化，D为加入阴离子图谱变化)
图7.主体化合物7a(1×10-4mol/L)与色氨酸(1×10-3mol/L)的配合体系中加入不同Ag+浓度(0～32μmol/L)的荧光光谱
图8.主体化合物7a(1×10-4mol/L)与色氨酸(1×10-3mol/L)的配合体系荧光强度对Ag+(0～32μmol/L)浓度的标准曲线
具体实施方式
实施例1
1材料与方法
1.1材料与试剂
三羟甲基氨基甲烷(≥99.9％)广州赛国生物科技有限公司；盐酸(分析纯)天津市河 东区红岩试剂厂；无水乙醇天津市富宇精细化工有限公司；D-色氨酸、L-(99％)南京奥多 福尼生物科技有限公司；二甲基亚砜(分析纯)天津市富宇精细化工有限公司；4-(二甲氨 基)苯甲醛(≥99.0％)国药集团化学试剂有限公司；干扰金属离子为硝酸盐或乙酸盐、干扰 阴离子为四丁基铵盐阿拉丁试剂(上海)有限公司。实验用水均为超纯水。
1.2仪器与设备
UV-2600紫外-可见分光光度计、RF-6000荧光分光光度计、高效液相色谱日本岛津公司； SH220F型石墨消解仪山东海能科学仪器公司；MCR-3微波化学反应器郑州泰远仪器设备有限公司；AVANCE NEO核磁共振波谱仪德国布鲁克公司。
1.3胆甾类分子钳7a的合成
主体分子钳7a的合成路线如方案1所示，根据先前文献报道的方法合成了中间体3和中 间体5，将中间体5(0.5mmol/L)、无水二氯甲烷(10mL)、无水吡啶(0.5mL)和三光气(0.18mmol/L)置于50mL圆底烧瓶中，在300W微波辐射下加热回流反应10min，待反 应完全后再加入L-缬氨酸甲酯盐酸盐(1mmol/L)、无水吡啶(0.5mL)，相同条件下继续反 应10min，待反应完全后减压蒸去溶剂，残余物经柱层析分离纯化得白色固体(C41H61N3O10)， 目标物的质谱、氢谱、碳谱等数据与文献报道的一致。
1.4氨基酸识别性能研究
1.4.1荧光选择性试验
选取0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷与盐酸，以二者体积比25:21定量混合，配成Tris-HCl (pH 7.4)缓冲液。准确称取适量的分子钳人工受体7a于25mL容量瓶，用5mL DMSO将其 溶解完全后加入Ethanol/Tris(V/V＝1/1，pH 7.0)溶液定容，得到0.1mmol/L的分子钳 储备液。在浓度1×10-4mol/L的主体分子钳7a溶液中取0.5mL，分别加入50倍物质量的1×10-3mol/L氨基酸(甘氨酸(Gly)、天门冬酰胺氨酸(Asn)、缬氨酸(Val)、丝氨酸(Ser)、 异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、亮氨酸(Leu)、精氨酸(Arg)、蛋氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)、 组氨酸(His)、色氨酸(Trp))，观察荧光发射光谱变化。保持激发和发射狭缝宽度都为5nm， 以270nm为发射波长。
1.4.2动力学试验研究
为了测定主体化合物7a对色氨酸的荧光响应时间，向主体分子钳7a(1×10-4mol/L) 中加入一定量色氨酸，每20s测定一次荧光强度，直到荧光强度趋于稳定。保持激发和发射 狭缝宽度都为5nm，以270nm为发射波长，在268nm波长处测量其荧光强度。
1.4.3分子钳7a识别色氨酸的荧光滴定及检出限试验
在浓度为1.0×10-4mol/L的主体分子钳7a溶液中逐渐滴加色氨酸(0～36μmol/L)，测定不同色氨酸浓度下各组配合物溶液的荧光光谱变化，以配合物形成过程中色氨酸浓度对 荧光光度值作图，得标准曲线方程①，再根据公式LOD＝3σ/k，计算荧光探针7a对色氨酸的检出限。其中σ为标准偏差，k为线性拟合的斜率。保持激发和发射狭缝宽度都为5nm， 以270nm为发射波长，在268nm波长处测量其荧光强度。
1.4.4识别色氨酸中阴、阳离子干扰行为的研究
1.4.4.1干扰因子的选择试验
将主体化合物7a(1×10-4mol/L)与色氨酸(1×10-3mol/L)混合后分别加入一定量的 (1×10-3mol/L)金属离子(Ag+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Na+、K+、Pb2+、Mn2+、Zn2+)溶液及阴离子(F-、Cl-、Br-、I-、HSO4 -、NO3 -、H2PO4 -、Ac-)溶液，测定其紫外光谱和荧光光谱的变化。保持 激发和发射狭缝宽度都为5nm，以270nm为发射波长。
1.4.4.2荧光滴定及干扰离子检出限试验
向主体化合物7a(1×10-4mol/L)与色氨酸(1×10-3mol/L)的配合物中逐渐滴加不同 体积Ag+标准溶液(5×10-4mol/L)，测定荧光光谱变化，同时以7a+色氨酸配合物形成过程中 Ag+离子浓度对荧光光度值作图，得标准曲线方程②，再根据公式LOD＝3σ/k，计算干扰离 子的检出限浓度。其中σ为标准偏差，k为线性拟合的斜率。
1.4.5核磁滴定试验
在3支核磁样品管中，分别加入一定量的主体化合物7a、7a+色氨酸(1:1)配合物、7a+ 色氨酸+Ag+(1:1:1)的配合溶液，DMSO-d6溶解，在同一条件下分别测定其1H NMR谱，观察 相关质子的化学位移变化。
1.4.6食品样品中色氨酸检测方法的建立
在前期试验的基础上，采用超声辅助碱水解法提取总氨基酸(周虹,毛建霏,罗玲,等. 微波碱水解法测定农产品中色氨酸含量[J].食品与发酵科技,2014,50(03):79-81+89.)， 并用001*7离子交换树脂对食品中氨基酸进行初步纯化(应锐,张朝辉,段筱杉,等.紫菜中 类菌孢素氨基酸纯化工艺的优化及其抗紫外辐射作用研究[J].海洋科学,2017,41(02): 71-80.)，利用胆甾类分子钳7a进行色氨酸含量测定，根据上述所得标准曲线方程①计算婴幼 儿乳粉、小麦面粉、鸡肉样品中色氨酸含量m1(未排除银离子干扰)。
排除银离子干扰：分别取婴幼儿乳粉、小麦面粉、鸡肉样品2g，移入干燥的消解管中， 在400℃条件下硝化55min，取上清液测定荧光光度值(吴刚,张兆法,宋凡,等.石墨消解仪-自动定氮法测定植物果实中的全氮[J].岩矿测试,2020,39(02):311-317.)，根据标准曲线方程②计算样品中Ag+的含量m2，样品中实际色氨酸含量m＝m1-(m2/MAg+)×M色氨酸；M色氨酸＝204.23g/mol,MAg+＝107.87g/mol。
2.结果与分析
2.1胆甾类化合物7a对氨基酸的识别
2.1.1胆甾类化合物7a对氨基酸的荧光选择性研究
由图1可知，在主体分子钳7a中加入甘氨酸(Gly)、天门冬酰胺氨酸(Asn)、缬氨酸(Val)、 丝氨酸(Ser)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、亮氨酸(Leu)、精氨酸(Arg)、蛋氨酸(Met)、 赖氨酸(Lys)、组氨酸(His)时，荧光强度变化甚微，而加入色氨酸(Trp)时，体系的荧光 强度显著上升，增强了26％。因此，在所有测试的氨基酸中，主体分子钳7a对色氨酸有积极的 响应，说明主体分子钳7a对色氨酸表现出良好的选择性，该结果与文献报道[24]的识别色氨酸结 果是一致的。
2.1.2主体分子钳7a对色氨酸的响应时间研究
响应速度是评价识别效果的一个关键因素，因此对主体化合物7a进行了动力学研究，结果 如图2所示。当主体分子钳7a加入色氨酸，268nm处的荧光强度迅速增强，随着化学反应的 进行，在80s时荧光强度增加至最高且保持平衡，说明主体化合物7a可以快速检测色氨酸。 2.1.3主体分子钳7a识别色氨酸的灵敏性
为了进一步探究主体分子钳7a对色氨酸的灵敏性，进行了荧光滴定试验。由图3可知，当固定 主体分子钳7a浓度为1×10-4mol/L，逐渐滴加色氨酸后，发现随着色氨酸浓度的不断增大，主 体分子钳7a在268nm处的荧光强度逐渐增加，表明主体分子钳7a与色氨酸存在良好的络合作 用。利用荧光滴定数据，以色氨酸浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，进行线性拟合。由图4 可知，在0～36μmol/L浓度范围内，主体化合物7a荧光强度与色氨酸浓度有良好的线性关 系，得标准曲线方程①y＝2065x+25259(R2＝0.996)，说明主体分子钳7a能在较宽的线性范围内 定量检测色氨酸。根据检测限计算公式：LOD＝3σ/K，计算出主体分子钳7a对色氨酸的检出 限为0.17μmol/L，通过与目前所报道的色氨酸传感器进行比较，在检出限或者线性范围方 面，均优于大多数色氨酸传感器(表1)，表明主体分子钳7a在该溶液体系中对色氨酸具有很 高的荧光选择性和灵敏度。
表1色氨酸传感器的性能对比
2.2胆甾类荧光探针在识别色氨酸中其他离子的干扰行为研究
2.2.1干扰离子的选择性研究
为了提高主体分子钳7a识别色氨酸的环境适应性，研究了主体分子钳7a识别色氨酸过程 中其他离子存在的影响。从紫外光谱图中可以看出(图5)，当加入干扰金属离子及阴离子时， 只有银离子的图谱表现出特异之处，不仅使主体化合物7a与色氨酸在280nm处的吸收峰形发 生变化，而且该处吸收峰强度显著降低，而加入其它金属阳离子及阴离子并未引起分子钳7a+ 色氨酸配合物的吸收光谱发生明显改变。为进一步考察阴、阳离子对主体化合物7a识别色氨 酸的干扰影响，采用荧光光谱法对上述干扰离子进行发射性能的探究。如图6所示，在主体 分子钳7a+色氨酸的配合体系中分别加入同等浓度的不同阳离子及阴离子时，只有加入Ag+后 荧光发射光谱强度增加，而其他干扰离子对其荧光响应值未引起明显变化，同时从表2也可 以看出，Ag+对识别色氨酸过程干扰程度达到729.89％，而其他干扰离子对色氨酸的识别效果 影响甚微(相对误差＜±10％)。因此，荧光光谱与紫外光谱变化结果均表明，金属Ag+的存在 对主体分子钳7a识别色氨酸具有一定干扰能力，其主要原因可能是在该体系下，过量的主体 分子钳7a与Ag+同样产生了识别作用，从而对其识别色氨酸过程产生干扰。
表2干扰离子对色氨酸测定的干扰
2.2.2化合物7a识别色氨酸中Ag+的干扰试验结果
如图7所示，随着Ag+含量的增加，荧光强度呈现规律性上升趋势。以Ag+浓度为横坐标， 荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线，发现在2×10-6～32×10-5mol·L-1浓度范围内，Ag+的浓度 与荧光强度呈现良好的线性关系，标准曲线方程②为y＝33864x+46023，线性相关系数为0.992 (图8)。根据公式LOD＝3σ/k，得主体化合物7a与色氨酸的配合体系中干扰Ag+的检出限为 1.6×10-7mol·L-1。
2.2.3主体化合物7a识别色氨酸中Ag+干扰的机理探究
为了深入探究Ag+对主体化合物7a识别色氨酸过程的影响机理，在DMSO-d6中进行了核 磁滴定实验，通过氢质子化学位移变化进一步说明原因。
在未加入色氨酸时，主体分子钳7a中CH3O-PhCONH、ArH、12α-OCONH基团上氢质子化 学位移分别为9.69、7.58、7.03ppm。当加入1.0equiv的色氨酸作用后，主体分子钳7a 在9.69ppm处酰胺NH信号峰向高场移动到10.95ppm，位于7.58ppm处的峰强度明显增加 且向低场区移动了0.04ppm。与此同时，7.02ppm处脱氧胆酸甲酸甲酯12α部分上的酰胺 NH向低场移动至6.95ppm，推测主体化合物7a的酰胺NH和苯环可能与色氨酸发生识别作用， 从而引起了相邻氢质子的化学位移变化。
随后在主体化合物7a+色氨酸的配合物中加入1.0equiv的Ag+，主体化合物7a中的-OCH3活 泼氢信号Ha(ArOCH3)、Hb(12α-COOCH3)和Hc(COOCH3)化学位移分别在3.43、3.29、2.95 ppm，在加入Ag+后，7a+色氨酸配合物中位于3.29ppm处的12α-COOCH3质子信号峰向低场位 移至3.27ppm，此外，Ha、Hc的化学位移分别向高场区发生明显移动(△δ0.29、0.1ppm)，推测当加入Ag+后，甲氧基基团上的氧原子给Ag+提供电子，导致其与主体化合物7a产生络合作用，从而对色氨酸识别过程产生干扰。
2.3实际样品中色氨酸的定量检测
为了验证手性分子钳7a在实际样品中色氨酸的检测能力，随机选取了三种不同的食品样 本，根据标准曲线①、②分别测定了色氨酸(m1)及干扰Ag+(m2)的含量，根据公式m＝m1-(m2/MAg+) ×M色氨酸计算样品中实际色氨酸含量。其中婴幼儿乳粉、小麦面粉、鸡肉样品中Ag+干扰的色 氨酸含量为36.45、58.87、48.26μg/g，婴幼儿乳粉、小麦面粉、鸡肉样品中实际色氨酸 含量分别为2.029、1.844、3.306mg/g，与现有文献中测定婴幼儿乳粉(2.180mg/g)、小 麦面粉(1.810mg/g)、鸡肉(2.930mg/g)样品中色氨酸的结果较为相近。此外，为了进一步验证实验结果的准确性，采用标准加入法对该食品样品中色氨酸含量进行回收率测试试验， 通过向其中加入不同浓度的色氨酸标准溶液(1mg/g、3mg/g)，测定其荧光强度值，结果表 明，该方法回收率在97.53％～107.35％范围内，相对标准偏差在0.204％～0.825％范围内，表 明该方法准确度高，且能定量检测食品样品中色氨酸的含量，在实际生活中具有较高的潜在 应用价值。
表3.食品样品中色氨酸加标回收试验(n＝3)
结论
论文利用去氧胆酸为原料合成了手性分子钳7a，采用荧光滴定的方法考察分子钳7a对 氨基酸的识别性能，研究发现，加入色氨酸可引起分子钳7a的荧光光谱呈规律性增强趋势， 加入其他氨基酸对分子钳7a的荧光光谱影响不大，说明化合物7a对色氨酸具有选择性识别 能力，其结合常数为1.5×104L/mol，检出限为0.17μmol/L，灵敏度与已报道的诸多方法 相比要高。
离子干扰性试验研究发现，除金属Ag+离子外，所考察的其他金属离子和阴离子对分子钳7a 识别色氨酸的过程影响甚微，Ag+的加入可导致7a+色氨酸配合物的荧光光谱发生较大的变化。
为进一步明确分子钳7a与色氨酸及银离子之间的作用机制，通过核磁滴定考察了分子钳 7a、7a+色氨酸、7a+色氨酸+Ag+的1H NMR变化，研究发现主体分子钳7a中酰胺NH和苯环基 团为识别色氨酸的主要结合位点，识别推动作用力主要为π–π堆叠作用和氢键。7a+色氨酸的配合物中加入银离子后，过量的分子钳7a可与Ag+发生络合作用，且7a+色氨酸配合物 中-OCH3上的氧原子为Ag+提供电子，因此对化合物7a识别色氨酸的过程产生干扰。
将分子钳7a用于实际样品中色氨酸的检测，建立了排除金属银离子干扰的检测方法，并将该 方法用于婴幼儿乳粉、小麦面粉等食品样品中色氨酸的测定，结果表明新方法准确、可靠， 灵敏度高，且检测限优于许多报道的检测方法。
本发明具体实施方式中，m1的测定方法为：采用超声辅助碱水解法提取总氨基酸,超声 时间30min、料液比1∶35(g∶mL)、超声温度55℃、超声功率300W、乙醇浓度40％(体 积分数)、提取次数2次，试样置于50mL容量瓶中,加入25mL 10％氢氧化钾溶液(m/V),于 40℃水解18h并用001*7离子交换树脂对氨基酸进行初步纯化，其工艺参数为试样氨基酸质 量浓度0.025g/mL，上样液流速0.9mL/min，上样液pH 4.66，氨水洗脱液体积分数1.54％， 洗脱流速1.50mL/min，洗脱液体积61.67mL，通过荧光分光光度计进行检测，并通过标准 曲线计算m1。
荧光滴定的方法：取浓度1×10-4mol/L的主体分子钳7a溶液0.5mL，加入2.5mL预处理样品溶液，充分混合后量取2.5mL在室温(25℃)测定其268nm处的荧光强度值，分 别通过标准曲线①y＝2065x+25259(0-36μmol/L)及标准曲线②y＝33864x+46023(2×10-6～32×10-5mol·L-1)计算即得m1、m2。样品中实际色氨酸含量m＝m1-(m2/MAg+)×M色氨酸；M色氨酸＝204.23 g/mol,MAg+＝107.87g/mol。
Claims (8)
1.从食品中检测色氨酸的方法，其特征在于：它包括使用化合物7a对待检样品进行荧光滴定，排除Ag+干扰后，即可得到色氨酸含量；化合物7a结构式如下：
色氨酸含量m＝m1-(m2/MAg+)×M色氨酸；m1为未排除Ag+干扰的待检样品的色氨酸含量，m2为待检样品中的Ag+含量，M色氨酸＝204.23g/mol,MAg+＝107.87g/mol。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：荧光检测中，以270nm为发射波长，在268nm波长处测量其荧光强度。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：m1的测定方法包括：
(1)样品预处理：取待检样品，乙醇超声提取，再加入碱，水解；水解液通过离子交换树脂，采用氨水洗脱，收集氨水洗脱液；
(2)通过荧光分光光度计进行检测，并通过标准曲线计算m1。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：乙醇体积分数选自30～50％。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：洗脱用氨水体积分数为1～2％。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：m1测定方法包括：采用超声辅助碱水解法提取总氨基酸,超声温度50-60℃、乙醇体积分数为40％，加入氢氧化钾溶液,于35-45℃水解；再用离子交换树脂对氨基酸进行初步纯化，上样液pH 4.66，氨水洗脱液体积分数1.5％，洗脱流速1.50mL/min，洗脱液体积61.67mL，通过荧光分光光度计进行检测，并通过标准曲线计算m1。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：m2的测定方法为：取待检样品，在消解管中400℃条件下硝化55min，取上清液测定荧光光度值，通过标准曲线计算m2。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：荧光滴定的步骤包括：取浓度1×10-4mol/L的化合物7a溶液0.5mL，加入2.5mL预处理后的氨水洗脱液，充分混合后量取2.5mL在室温测定其268nm处的荧光强度值，通过标准曲线计算m1、m2。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210116878.6A CN114486835B (zh) | 2022-02-07 | 2022-02-07 | 胆甾类手性分子钳用于食品中色氨酸的快速检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210116878.6A CN114486835B (zh) | 2022-02-07 | 2022-02-07 | 胆甾类手性分子钳用于食品中色氨酸的快速检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114486835A CN114486835A (zh) | 2022-05-13 |
| CN114486835B true CN114486835B (zh) | 2024-01-12 |
Family
ID=81478192
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210116878.6A Active CN114486835B (zh) | 2022-02-07 | 2022-02-07 | 胆甾类手性分子钳用于食品中色氨酸的快速检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114486835B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114292308B (zh) * | 2021-12-08 | 2023-08-08 | 青海大学 | 手性胆甾类荧光探针及其用途 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105349609A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-24 | 浙江理工大学 | 一种提高有机相中脂肪酶对氨基酸酯手性拆分性能的方法 |
-
2022
- 2022-02-07 CN CN202210116878.6A patent/CN114486835B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105349609A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-24 | 浙江理工大学 | 一种提高有机相中脂肪酶对氨基酸酯手性拆分性能的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Cholesteric Molecular Tweezer Artificial Receptor for Rapid and Highly Selective Detection of Ag+ in Food Samples;Zhe Liu, Ying Ye, Hong Wang, Li-xia Luo;MOLECULES;第26卷(第22期);6919 * |
| 胆甾类分子钳对氨基酸衍生物的对映选择性识别;薛翠花，胡蓉，牟其明，李方，陈淑华，吕丁，甘亚;化学学报;第58卷(第6期);717-721 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114486835A (zh) | 2022-05-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109735328B (zh) | 一种检测细胞内硫化氢的荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN110684014B (zh) | 可用于卵巢癌的一种具有聚集诱导发射效应的水溶性荧光探针和纳米粒及其制备方法和应用 | |
| CN114486835B (zh) | 胆甾类手性分子钳用于食品中色氨酸的快速检测方法 | |
| CN108101793B (zh) | 一种化合物及其应用于金刚烷胺类化合物的竞争荧光检测方法 | |
| CN110964042B (zh) | 一种n，n-二(2-吡啶甲基)胺基bodipy类镍离子荧光探针的制备方法及其应用 | |
| CN111217798A (zh) | 一种香豆素-喹啉衍生物及其合成方法与应用 | |
| CN111521593B (zh) | 一种基于水溶性苝酰亚胺衍生物的快速可视化检测方法 | |
| CN110627737B (zh) | 一种检测锌离子的水溶性苯并恶唑类荧光探针及制备方法和应用 | |
| CN108794369B (zh) | 含醛基的手性胺识别探针及其制备方法和应用 | |
| CN109053626B (zh) | 一种荧光探针及其制备方法和其在二价钯检测中的应用 | |
| CN108373464A (zh) | 一类基于甲醛诱导催化琥珀酰亚胺水解的甲醛荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN109134483B (zh) | 一种硫化氢荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN110563609B (zh) | 一种检测亚硒酸根的近红外荧光探针的制备方法及应用 | |
| CN114409594B (zh) | 靶向高尔基体的谷胱甘肽比率荧光探针、制备方法与应用 | |
| CN114163423B (zh) | 可实现癌细胞筛选的谷胱甘肽比率可逆荧光探针、制备方法与应用 | |
| CN109096203B (zh) | 一种基于蒽醌衍生物的汞离子荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN112409261A (zh) | 一种用于检测Pd浓度和pH值的双功能荧光探针及其制备与应用 | |
| CN108276360B (zh) | 一种检测铅离子的新型荧光分子探针pp的合成方法 | |
| CN112110913A (zh) | 一种可用于水合肼检测的新型荧光探针及试纸的制备和应用 | |
| CN112028810B (zh) | 一种汞离子探针的制备方法及应用 | |
| CN113008845B (zh) | 基于偶联反应的荧光共振能量转移探针的甲醛检测方法 | |
| CN112759532B (zh) | 一种可视化快速、灵敏检测炭疽杆菌的试剂及其检测方法 | |
| Li et al. | Chiral cholesteric molecular tweezer artificial receptors 7a for the rapid detection of tryptophan and the chiral resolution of D-/L-tryptophan | |
| CN114394986B (zh) | 一种比率型过氧亚硝酰荧光探针、制备方法与应用 | |
| CN114790202B (zh) | 生物硫醇激活的沉淀染料类高效诊疗一体化探针的制备与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |