CN114480563A - 一种检测腺苷脱氨酶活性的组合物及试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于检测腺苷脱氨酶活性的组合物及试剂盒。所述组合物含有组分1和组分2，所述组分1含有缓冲液1、稳定剂1、抗坏血酸氧化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、次黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶；所述组分2含有缓冲液2、稳定剂2、色原、腺苷、表面活性剂所述色原为N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐、N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3,5‑二甲基苯胺钠盐和/或DA‑67中的一种。本发明的试剂盒含有彼此独立的组合物1、组合物2，在现有方法的基础上，通过在腺苷脱氨酶检测试剂盒中添加超氧化物歧化酶，在原有反应的基础上进一步增加催化反应，并添加新型色原DA‑67，显著提高检测腺苷脱氨酶活性的灵敏度。本发明的试剂盒具有灵敏度高、准确性好、操作便捷的优点，可用于大范围群体样本的检测。

Description

一种检测腺苷脱氨酶活性的组合物及试剂盒
技术领域
本发明涉及医学检验技术领域，具体地，涉及一种检测腺苷脱氨酶活性的组合物及试剂盒。
背景技术
腺苷脱氨酶(ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于巯基酶，每分子至少含2个活性巯基，其活性能对氯汞甲酸完全抑制。ADA能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸。ADA广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞，其活性约为血清的40～70倍，T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。临床上常通过检测腺苷脱氨酶的含量进行肝胆疾病、结核性胸膜炎、结核性腹膜炎等疾病的评判。
以往，本领域技术人员采用吲哚酚法检测腺苷脱氨酶活性，使用腺苷作为底物，通过吲哚酚反应对生成的氨进行定量。这种检测方法不仅受内源性氨的影响，还需要分别进行腺苷脱氨酶的酶促反应和吲哚酚反应，操作复杂，耗时长。此外，由于样品中存在如苯酚衍生物等引起吲哚酚反应的成分，因此存在检测不准确的风险。本领域技术人员还通过在α-酮戊二酸和还原型烟酰胺腺嘌呤磷酸(以下简称为NADPH)的存在下使氨与谷氨酸脱氢酶反应，在340nm波长处测定NADPH的减少量。但该方法与吲哚酚法一样，受体液中内源性氨的影响较大，因此在准确度上存在问题。
现有技术中，检测腺苷脱氨酶活性的主流方法是用腺苷脱氨酶(ADA)催化腺嘌呤核苷脱氨转变为次黄嘌呤核苷，次黄嘌呤核苷再经嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)作用生成次黄嘌呤，次黄嘌呤经次黄嘌呤氧化酶(XOD)作用转变为尿酸和过氧化氢(H2O2)和超氧阴离子(O2 -)。H2O2在过氧化物酶(POD)存在的情况下，可与色原生成有色物，有色物生成速率与ADA含量相关。具体反应过程如下：
Figure BDA0003471257290000021
Figure BDA0003471257290000022
Figure BDA0003471257290000023
Figure BDA0003471257290000024
该方法虽然避免了内源性氨测定的影响，相对于其他方法学检测灵敏度有明显的提高，但由于健康人的血清或血浆中腺苷脱氨酶含量较低，该方法难以进行准确定量。
发明内容
为了解决现有腺苷脱氨酶检测方法灵敏度低的问题，本发明的一个目的是提供一种用于检测腺苷脱氨酶活性的组合物。
本发明的另一个目的是提供一种检测腺苷脱氨酶活性的试剂盒。
为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
一种用于检测腺苷脱氨酶活性的组合物，所述组合物含有组分1和组分2，所述组分1含有缓冲液1、稳定剂1、4-氨基安替比林、抗坏血酸氧化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、次黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶；所述缓冲液1为pH 7.0～8.0的缓冲液；所述稳定剂1为牛血清白蛋白、甘露醇、海藻糖和/或蔗糖中的一种或几种；
所述组分2含有缓冲液2、稳定剂2、色原、腺苷、表面活性剂；所述缓冲液2为pH 3.0～4.0的缓冲液；所述稳定剂2为甘油、1,2-丙二醇和/或乙二醇中的一种或几种；所述表面活性剂为月桂基羟丙基磺基甜菜碱、月桂酰胺羟基丙基磺基甜菜碱、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚和/或月桂基二甲基氧化胺中的一种或几种；
所述色原为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐或DA-67；所述色原为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐和/或N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐，则组分1还含有4-氨基安替比林。
优选地，所述组分1中的缓冲液1为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。
更优选地，所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的pH＝7.5。
更优选地，所述磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的浓度为100mM。
优选地，所述组分1中过氧化物酶的浓度为1.2×104～1.5×104U/L。
更优选地，所述组分1中过氧化物酶的浓度为1.2×104U/L
优选地，所述组分1中超氧化物歧化酶的浓度为1.5×104～2×104U/L。
更优选地，所述组分1中超氧化物歧化酶的浓度为1.5×104U/L。
优选地，嘌呤核苷磷酸化酶的浓度为2×104～4×104U/L；次黄嘌呤氧化酶的浓度为3×104～4×104U/L。
更优选地，嘌呤核苷磷酸化酶的浓度为2×103U/L；次黄嘌呤氧化酶的浓度为3×103U/L。
优选地，所述组分1中抗坏血酸氧化酶的浓度为4×103U/L。
优选地，所述组分1还含有防腐剂1，所述防腐剂1为叠氮钠和/或Proclin-300中的一种或几种。
更优选地，所述防腐剂1为叠氮钠。
更优选地，所述叠氮钠的浓度为1g/L。
优选地，所述组分2中的缓冲液2为甘氨酸缓冲液、乙酸缓冲液和/或马来酸缓冲液中的一种或几种。
更优选地，所述缓冲液2为甘氨酸缓冲液。
更优选地，所述甘氨酸缓冲液的pH＝3.5。
更优选地，所述甘氨酸缓冲液的浓度为50mM。
优选地，所述组分2中色原的浓度为4mM～5mM。
更优选地，所述组分2中的色原为DA-67。
优选地，所述组分2中腺苷的浓度为10mM～50mM。
更优选地，所述组分2中腺苷的浓度为10mM。
优选地，所述组分2还含有防腐剂2，所述防腐剂2为苯甲酸钠和/或山梨酸钾中的一种或几种。
更优选地，所述防腐剂2为苯甲酸钠。
更优选地，所述苯甲酸钠的浓度为3g/L。
上述组合物的组分1各成分处于同一体系；上述组合物的组分2各成分处于同一体系。
一种检测腺苷脱氨酶活性的试剂盒，所述试剂盒由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成，所述试剂R1含有上述组合物中的组分1，所述试剂R2含有上述组合物中的组分2。
本发明提供的检测腺苷脱氨酶的试剂盒所采用的技术原理为：用腺苷脱氨酶(ADA)催化腺嘌呤核苷脱氨转变为次黄嘌呤核苷，再经嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)作用生成次黄嘌呤。次黄嘌呤经次黄嘌呤氧化酶(XOD)作用转变为尿酸和过氧化氢(H2O2)和超氧阴离子(O2 -)。同时超氧阴离子(O2 -)在超氧化物歧化酶(SOD)催化下生成H2O2，H2O2在过氧化物酶(POD)存在的情况下，可与色原和4-氨基安替比林(4-AAP)生成醌染料，醌染料生成速率与ADA含量相关，反应路线如下：
Figure BDA0003471257290000041
Figure BDA0003471257290000042
Figure BDA0003471257290000043
Figure BDA0003471257290000044
Figure BDA0003471257290000045
应用本发明试剂盒检测样本中腺苷脱氨酶活性的方法包括手工测量方法和自动测量方法。
手工测量方法为：
S1.取5μL乳酸校准品与180μL试剂R1混匀，37℃孵育5min，再加入60μL试剂R2混匀，37℃孵育1.5min，作为标准样品；取5μL纯水与180μL试剂R1混匀，37℃孵育5min，再加入60μL试剂R2混匀，37℃孵育1.5min，作为空白样品；取5μL样品与180μL试剂R1混匀，37℃孵育5min，再加入60μL试剂R2混匀，37℃孵育1.5min，作为待测样品；
S2.孵育结束后，将各样品转移至光径为1.0cm的比色杯；放入分光光度计，设定检测主波长为600nm或660nm，副波长为700nm，连续2～3min监测吸光度的变化率，读取标准样品的吸光度A标准、空白样品的吸光度A空白和样品的吸光度A待测，计算△A标准、△A空白和△A待测；
S3.按照公式：
Figure BDA0003471257290000051
进行计算，即得到待测样品的腺苷脱氨酶活性。
自动测量方法为：
按照手工测量方法的反应时间和测量波长、样本量、试剂量等参数，在日立7600/7180、迈瑞BS800、迪瑞CS600、东芝TBA40FR、奥林巴斯AU2700、贝克曼680/5800、西门子ADVIA2400、罗氏P800等全自动生化分析仪设置相应参数，进行校准及测量。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的试剂盒含有彼此独立的组合物1、组合物2，在现有方法的基础上，通过在腺苷脱氨酶检测试剂盒中添加超氧化物歧化酶，在原有反应的基础上进一步增加催化反应，并添加新型色原DA-67，显著提高检测腺苷脱氨酶活性的灵敏度。本发明的试剂盒具有灵敏度高、准确性好、操作便捷的优点，可用于大范围群体样本的检测。
附图说明
图1为实施例1和对比例1试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
图2为实施例2和对比例1试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
图3为实施例9和对比例1试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
图4为实施例10和对比例1试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
图5为实施例1和对比例2试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
图6为实施例2和对比例2试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
图7为实施例9和对比例2试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
图8为实施例10和对比例2试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
图9为对比例1和对比例2试剂盒腺苷脱氨酶浓度检测结果的线性回归分析图。
具体实施方式
下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表1所示。
表1一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000061
2、使用方法
样品无需前处理，可直接用于检测。
(1)手工测量方法
S1.取5μL乳酸校准品与180μL试剂R1混匀，37℃孵育5min，再加入60μL试剂R2混匀，37℃孵育1.5min，作为标准样品；取5μL纯水与180μL试剂R1混匀，37℃孵育5min，再加入60μL试剂R2混匀，37℃孵育1.5min，作为空白样品；取5μL样品与180μL试剂R1混匀，37℃孵育5min，再加入60μL试剂R2混匀，37℃孵育1.5min，作为待测样品；
S2.孵育结束后，将各样品转移至光径为1.0cm的比色杯；放入分光光度计，设定检测主波长为600nm或660nm，副波长为700nm，连续2～3min监测吸光度的变化率，读取标准样品的吸光度A标准、空白样品的吸光度A空白和样品的吸光度A待测，计算△A标准、△A空白和△A待测；
S3.按照公式：
Figure BDA0003471257290000071
进行计算，即得到待测样品的腺苷脱氨酶活性。
(2)自动测量方法
按照与手工测量方法相同的反应时间和测量波长、样本量、试剂量等参数，在日立7600/7180、迈瑞BS800、迪瑞CS600、东芝TBA40FR、奥林巴斯AU2700、贝克曼680/5800、西门子ADVIA2400、罗氏P800等全自动生化分析仪设置对应参数，进行校准及测量。
实施例2一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表2所示。
表2一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000072
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例3一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表3所示。
表3一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000081
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例4一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表4所示。
表4一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000082
Figure BDA0003471257290000091
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例5一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表5所示。
表5一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000092
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例6一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表6所示。
表6一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000093
Figure BDA0003471257290000101
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例7一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表7所示。
表7一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000102
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例8一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表8所示。
表8一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000111
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例9一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表9所示。
表9一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000112
Figure BDA0003471257290000121
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例10一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表10所示。
表10一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000122
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例11一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表11所示。
表11一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000123
Figure BDA0003471257290000131
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例12一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表12所示。
表12一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000132
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例13一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表13所示。
表13一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000141
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例14一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表14所示。
表14一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000142
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
实施例15一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表15所示。
表15一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000151
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
对比例1一种腺苷脱氨酶检测试剂盒
1、组成成分
所述试剂盒的组成成分如表16所示。
表16一种高灵敏腺苷脱氨酶检测试剂盒
Figure BDA0003471257290000152
Figure BDA0003471257290000161
对比例1试剂盒成分相对实施例1缺少了超氧化物歧化酶。
2、使用方法
具体步骤同实施例1。
对比例2一种腺苷脱氨酶检测试剂盒
采购自宁波医杰生物技术有限公司的腺苷脱氨酶检测试剂盒(过氧化物酶法)。
应用例1
1、实验方法
(1)收集来源于医院的30例临床血清样本。
(2)使用实施例1～2、实施例9～10和对比例1～2试剂盒分别检测30例样本，记录反应速率的检测结果△A/min值。
2、实验结果
30例样本的△A/min值统计结果如表17所示。
表17实施例1～2、实施例9～10和对比例1～2试剂盒检测30例临床样本的△A/min值
Figure BDA0003471257290000162
Figure BDA0003471257290000171
表17的结果表明，使用实施例1～2、实施例9～10试剂盒测得的△A/min值均是对比例1～2的2倍以上，说明本发明的腺苷脱氨酶活性检测试剂盒的灵敏度显著提高。
应用例2
1、实验方法
(1)收集来源于医院的20例临床血清样本。
(2)使用实施例1～15试剂盒分别检测20例样本，记录检测结果△A/min值。
2、实验结果
20例样本的△A/min值统计结果如表18～19所示。
表18实施例1～8试剂盒检测20例临床样本的△A/min值
Figure BDA0003471257290000172
Figure BDA0003471257290000181
表19实施例9～15试剂盒检测20例临床样本的△A/min值
Figure BDA0003471257290000182
从表18～19的结果中可以看出，使用实施例1～8试剂盒检测20例样本腺苷脱氨酶活性的△A/min值无明显差别；使用实施例9～15试剂盒检测20例样本腺苷脱氨酶活性的△A/min值无明显差别。表明R1保护剂可以是牛血清白蛋白、蔗糖或海藻糖，R1防腐剂可以是叠氮钠或Proclin-300；R2保护剂可以是甘油、1,2-丙二醇或乙二醇，R2防腐剂可以是苯甲酸钠或山梨酸钾，R2的缓冲液可以是甘氨酸缓冲液(pH3.5)、乙酸缓冲液(pH3.5)或马来酸缓冲液(pH4.0)，R2色原可以是TOOS(N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐)、MAOS(N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐)、DA-67，R2的表面活性剂可以是月桂基羟丙基磺基甜菜碱、月桂酰胺羟基丙基磺基甜菜碱、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚或月桂基二甲基氧化胺。
应用例3
1、实验方法
(1)收集来源于医院的40例临床血清样本。
(2)使用实施例1～15和对比例1～2试剂盒分别检测40例样本，按照参数分别在日立7180生化仪上上机进行校准，记录腺苷脱氨酶浓度(U/L)的检测结果值。
2、实验结果
实施例1～15和对比例1～2试剂盒检测40例样本的腺苷脱氨酶浓度(U/L)检测结果的部分结果如表20所示，实施例3～8试剂盒的检测结果与实施例1～2试剂盒的检测结果相近，实施例11～15试剂盒的检测结果与实施例9～10试剂盒的检测结果相近。
表20实施例1～2、实施例9～10和对比例1～2试剂盒检测40例临床样本的结果
Figure BDA0003471257290000191
Figure BDA0003471257290000201
根据表20的数据，构建实施例1～2、实施例9～10和对比例1～2试剂盒检测结果的线性回归方程如图1～9所示。
表20及图1～9的结果显示，实施例1～2、实施例9～10试剂盒与对比例1试剂盒的检测结果的线性关系较差；实施例1～2、实施例9～10试剂盒与对比例2试剂盒(已上市的商品化试剂盒)的检测结果具有良好的线性关系；对比例1试剂盒和对比例2试剂盒(已上市的商品化试剂盒)的检测结果的线性关系较差。
实施例3～8试剂盒、实施例11～15试剂盒与对比例1试剂盒的检测结果的线性关系较差，而与对比例2试剂盒(已上市的商品化试剂盒)的检测结果具有良好的线性关系。
说明本发明实施例1～15的腺苷脱氨酶活性检测试剂盒的检测准确度好，满足临床要求。
应用例4
1、功能灵敏度分析实验
(1)将腺苷脱氨酶活性为4U/L的血清样本与生理盐水按比例进行稀释，稀释为腺苷脱氨酶活性为0.4U/L、0.8U/L、1.6U/L、2.4U/L、3.2U/L、4U/L的待测样本。
(2)使用实施例1～15和对比例1～2试剂盒分别检测腺苷脱氨酶活性不同的待测样本，按照参数分别在日立7180生化仪上上机进行校准，每个待测样本检测10次，记录检测结果，并计算平均值、标准差SD及变异系数CV。测定值的变异系数CV≤20％对应的最低值为功能灵敏度。
2、实验结果
实施例1～15和对比例1～2试剂盒的功能灵敏度分析结果的部分结果如表21～26所示，实施例3～8试剂盒的检测结果与实施例1～2试剂盒的检测结果相近，实施例11～15试剂盒的检测结果与实施例9～10试剂盒的检测结果相近。
表21实施例1试剂盒的功能灵敏度分析结果
Figure BDA0003471257290000211
表22实施例2试剂盒的功能灵敏度分析结果
Figure BDA0003471257290000212
Figure BDA0003471257290000221
表23实施例9试剂盒的功能灵敏度分析结果
Figure BDA0003471257290000222
表24实施例10试剂盒的功能灵敏度分析结果
Figure BDA0003471257290000223
表25对比例1试剂盒的功能灵敏度分析结果
Figure BDA0003471257290000224
Figure BDA0003471257290000231
表26对比例2试剂盒的功能灵敏度分析结果
Figure BDA0003471257290000232
表21～26的结果显示，实施例1和实施例2试剂盒的功能灵敏度为2.4U/L，实施例9和实施例10试剂盒的功能灵敏度为0.8U/L，对比例1和对比例2试剂盒的功能灵敏度仅为4.0U/L。
表明加入超氧化物歧化酶的实施例1～15试剂盒，相对于未加超氧化物歧化酶的对比例2试剂盒，灵敏度有显著提高。而实施例9～15试剂盒在加入了超氧化物歧化酶的基础上，还使用了新型色原DA-67，试剂盒的灵敏度得到进一步的提升。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于检测腺苷脱氨酶活性的组合物，其特征在于，所述组合物含有组分1和组分2，所述组分1含有缓冲液1、稳定剂1、抗坏血酸氧化酶、嘌呤核苷磷酸化酶、次黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶；所述缓冲液1为pH 7.0～8.0的缓冲液；所述稳定剂1为牛血清白蛋白、甘露醇、海藻糖和/或蔗糖中的一种或几种；
所述组分2含有缓冲液2、稳定剂2、色原、腺苷、表面活性剂；所述缓冲液2为pH 3.0～4.0的缓冲液；所述稳定剂2为甘油、1,2-丙二醇和/或乙二醇中的一种或几种；所述表面活性剂为月桂基羟丙基磺基甜菜碱、月桂酰胺羟基丙基磺基甜菜碱、脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚和/或月桂基二甲基氧化胺中的一种或几种；
所述色原为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐或DA-67；所述色原为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐和/或N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐，则组分1还含有4-氨基安替比林。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分1中的缓冲液1为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分1中过氧化物酶的浓度为1.2×104～1.5×104U/L。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分1中超氧化物歧化酶的浓度为1.5×104～2×104U/L。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分1中嘌呤核苷磷酸化酶的浓度为2×104～4×104U/L；次黄嘌呤氧化酶的浓度为3×104～4×104U/L。
6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分2中的缓冲液2为甘氨酸缓冲液、乙酸缓冲液和/或马来酸缓冲液中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分2中色原的浓度为4mM～5mM。
8.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分2中色原为DA-67。
9.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组分2中腺苷的浓度为10mM～50mM。
10.一种检测腺苷脱氨酶活性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒由彼此独立的试剂R1和试剂R2组成，所述试剂R1含有权利要求1～9任一所述的组合物中的组分1，所述试剂R2含有权利要求1～9任一所述的组合物中的组分2。
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