CN102747134B - 一种5'-核糖核苷酸水解酶检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
一种5'-核糖核苷酸水解酶检测试剂盒及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种5'-核糖核苷酸水解酶的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括：甘氨酸缓冲液、3-甲基-N，N-二丙磺酸钠苯胺配制的显色剂、嘌呤核苷磷酸化酶、黄嘌呤氧化酶、过氧化物酶、5'-次黄嘌呤核苷酸、4-氨基安替比林溶液。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长550nm处吸光度变化的速度，从而测算出5'-核糖核苷酸水解酶的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人5’-核糖核苷酸水解酶的检测试剂盒。
背景技术
5’-核糖核苷酸水解酶是5’-次黄嘌呤核苷酸分解代谢过程中关键作用的酶，它能催化5’-次黄嘌呤核苷酸降解为次黄嘌呤核苷，而后经核苷磷酸化酶催化成次黄嘌呤，最终氧化成代谢产物尿酸。
5’-核糖核苷酸水解酶是一种特殊的水解酶，能特异性的水解5’-核苷酸连接于戊糖的5’-磷酸，生成核苷和磷酸。广泛存在于肝脏和各种组织中，其活性增高主要见于肝胆系统疾病，如阻塞性黄疸、原发及继发性肝癌等。
正常成人血清5’-核糖核苷酸水解酶活性无男女区别，但在老年人随年龄的增加而增加，尤其以女性增加最为明显，儿童期血清5’-核糖核苷酸水解酶活性与成年人一致。5’-核糖核苷酸水解酶增高主要见于肝胆疾病，尤其是阻塞性黄疸，也可见于肝癌和肝炎。
5’-核糖核苷酸水解酶测定的方法很多，但大多都不稳定，反应易受外源性干扰，不适于常规检验。
发明内容
本发明的目的是提供一种5’-核糖核苷酸水解酶的检测试剂盒。该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。
本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。
为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为：
1.甘氨酸缓冲液、2.显色剂、3.嘌呤核苷磷酸化酶、4.黄嘌呤氧化酶、5.过氧化物酶、6. 5’-次黄嘌呤核苷酸、7. 4-氨基安替比林溶液。
本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下：
（a）按下列比例配制好试剂：
甘氨酸缓冲液 80mmol/L
显色剂 10mmol/L
嘌呤核苷磷酸化酶 0.5-1KU/L
黄嘌呤氧化酶 0.8-1KU/L
过氧化物酶 0.6-1KU/L
5’-次黄嘌呤核苷酸 30mmol/L
4-氨基安替比林溶液 10mmol/L
（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；
（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中5’-核糖核苷酸水解酶的浓度。
本发明试剂盒的独特性在于，显色剂为含有3-甲基-N，N-二丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液，4-氨基安替比林溶液为含有4-氨基安替比林的氯仿溶液。经过一系列反应后，可形成醌类化合物，具有显色效果好、反应迅速、稳定的有点。
具体实施方式
下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。
实施例1：
本发明的试剂盒举例可以是双试剂，其中：
试剂1：
甘氨酸缓冲液 80mmol/L
显色剂 10mmol/L
嘌呤核苷磷酸化酶 0.5KU/L
黄嘌呤氧化酶 0.8KU/L
过氧化物酶 0.6KU/L
试剂2：
5’-次黄嘌呤核苷酸 30mmol/L
4-氨基安替比林溶液 10mmol/L
其中：
（1）甘氨酸缓冲液为35mM甘氨酸，0.05%吐温-20, 10mM乙二胺四乙酸二钠，0.05%硫柳汞，0.4M NaCl，pH6.5-10；
（2）显色剂为含有20mM 3-甲基-N，N-二丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液；
（3）4-氨基安替比林溶液为含有25mM 4-氨基安替比林的氯仿溶液。
实施例2：试剂盒使用方法
1.试剂准备，试剂可为液体双试剂，开瓶即用，其中：
试剂1：
甘氨酸缓冲液 80mmol/L
显色剂 10mmol/L
嘌呤核苷磷酸化酶 0.5KU/L
黄嘌呤氧化酶 0.8KU/L
过氧化物酶 0.6KU/L
试剂2：
5’-次黄嘌呤核苷酸 30mmol/L
4-氨基安替比林溶液 10mmol/L
2.全自动生化仪参数设置
(a)检测温度：37℃
(b)检测波长：主波长为550nm；副波长为700 nm；
(c)反应时间：10分钟，其中，温育时间5分钟，反应时间3分钟，检测时间2分钟。
3.检测步骤（全部在全自动生化分析仪中完成）
(a)取225μL 试剂1和6μL血清样本混匀。
(b)将混匀后的溶液在37℃温育5分钟。
(c)添加75μL 试剂2，反应3分钟后，在550nm条件下检测2分钟的吸光度变化。
4.通过吸光度变化的计算出5’-核糖核苷酸水解酶的浓度。
本发明具有的优点：
该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器（生化分析仪）在各大医院和检测中心普遍使用。
Claims (7)
1.一种5’-核糖核苷酸水解酶检测试剂盒，其组成为：
甘氨酸缓冲液 80mmol/L；
显色剂 10mmol/L；
嘌呤核苷磷酸化酶 0.5KU/L；
黄嘌呤氧化酶 0.8KU/L；
过氧化物酶 0.6KU/L；
5’-次黄嘌呤核苷酸 30mmol/L；
4-氨基安替比林溶液 10mmol/L；
其中，甘氨酸缓冲液为35mM甘氨酸，0.05%吐温-20, 10mM乙二胺四乙酸二钠，0.05%硫柳汞，0.4M NaCl，pH6.5-10；显色剂为含有20mM 3-甲基-N，N-二丙磺酸钠苯胺的磷酸盐缓冲液；4-氨基安替比林溶液为含有25mM 4-氨基安替比林的氯仿溶液。
2.一种根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于其操作方法：
（a）按权利要求1配制好试剂；
（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；
（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；
（d）根据吸光度变化值计算出样本中5’-核糖核苷酸水解酶的浓度。
3.一种根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在1：45到1：60之间。
4.一种根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，反应温度为37±1℃。
5.一种根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，反应时间为10-15分钟。
6.一种根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的主波长为550nm，副波长为700 nm。
7.一种根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，试剂配置成单试剂、双试剂或三试剂。
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