CN114467746B - 一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的快速增殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物组培快繁技术领域，公开了一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的快速增殖方法，具体包括以下步骤：(a)增殖培养基的配置（pH的调整、水苔的使用方法及其与培养液配比）、(b)培养基激素的调整、(c)增殖培养方法。本发明优点在于：提供了一种降低樱桃组培试管苗玻璃化的增殖方法，有效降低樱桃组培试管苗玻璃化的比率，同时增大增殖系数，为樱桃组织培养过程中玻璃化效应的控制和规模化生产提供一定的参考依据。

Description

一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的快速增殖方法
技术领域
本发明属于樱桃组培技术领域，具体涉及一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的增殖方法。
背景技术
甜樱桃的产业化发展与樱桃砧木产业化之间关系密切。随着樱桃砧木品种的选育与应用，砧木优良品种的无性繁育已成为影响甜樱桃产业发展的制约因素。目前国外樱桃砧木的无性系繁育可以通过组织培养方法实现。
近年来，国内植物生物技术领域快速发展，对樱桃砧木的组织培养技术进行了研究，主要是对组培技术中涉及增殖快繁培养基及其激素配比的优化，但在组培过程中，即使调整优化了培养基及其激素配比，部分樱桃砧木品种仍然容易出现组培苗玻璃化现象，严重影响了该品种组培苗的质量和规模化生产。
玻璃化现象指在培养过程中组培苗叶片呈半透明、肿胀、卷曲、易碎等状态，组织结构发育畸形的现象。目前对植物组织培养技术的普遍研究认为培养温度、瓶内湿度、细胞分裂素含量、培养基的胺态氮（NH4 +）浓度和琼脂用量等都是影响玻璃化现象的成因，由此可见造成组培苗玻璃化的因素很多，而解决方法就是调整培养基组分及其培养条件。因此一种适宜的培养基配方对解决樱桃组培苗玻璃化的问题具有重要的意义，并且可以实现樱桃发展的产业化和规模化，满足生产的需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化率的增殖方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为解决本发明的技术问题采用如下技术方案：
一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化率的增殖方法，具体包括组培增殖培养基的配置（pH的调整、水苔的使用方法及其与培养液配比）、培养基激素的调整、增殖培养方法步骤：
a、增殖培养基的配置：以MS为基本培养基，在其中加入蔗糖30 g/L、6-BA 2 mg/L、NAA 0.1 mg/L，琼脂7 g/L或泡发水苔。含水苔培养基配制同琼脂培养基，只是将琼脂用水苔替换。水苔使用前用蒸馏水泡发，然后捏干水分打散装入培养瓶中，每瓶装入量为干水苔2.0-2.5 g，培养基每瓶分装50 ml（容积250-300 ml培养瓶），pH 6.4，灭菌后以漠过水苔1-2 mm为宜，更利于茎尖增殖。所用水苔规格为8-10厘米长，质地柔软，杂质少，无病菌的泥炭藓。使用后灭菌，清洗，可重复利用。
b、培养基激素的调整：以步骤（a）培养基进行增殖培养，水苔培养基明显降低组培苗玻璃化率，但增殖不明显，如表1。在步骤（a）基础上调整6-BA的浓度，4 mg/L和6 mg/L。
c、增殖培养：当芽长至1.5~3 cm，有3-5片真叶时，将苗转入步骤(b)培养基中，于光照培养箱中进行增殖培养，培养箱条件：光照时间16 h/d、温度25±3 ℃、湿度不超过40％，光强3000~4000 LX。
表1不同培养基支撑物对樱桃组培苗玻璃化的影响
支撑物 接种数 玻璃化数 玻璃化率
琼脂 68 50 73.5
水苔 48 3 0.06
作为一种优选方案，所述步骤(b)中增殖培养基为6-BA浓度6 mg/L、NAA浓度0.1mg/ L的MS培养基。培养效果如表2。
表2不同6-BA浓度对樱桃增殖的影响
6-BA（mg/L） 接种数 玻璃化数 玻璃化率 增殖率
2 17 1 0.06 1.7
4 12 0 0 大于5
6 19 2 0.1 大于10
本发明优点在于：提供了一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的快速增殖方法，有效降低樱桃砧木组培苗玻璃化的比率，能够较好地提高樱桃砧木组培苗增殖率和质量，方法简便易行，可推广性强。
具体实施方式
下面用具体实施例说明本发明，并不是对本发明的限制。
实施例1
一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的增殖方法，具体包括培养基的配置、培养基激素的调整、增殖培养方法步骤：
a、增殖培养基的配置：以MS为基本培养基，在其中加入蔗糖30 g/L、6-BA 2 mg/L、NAA 0.1 mg/L，泡发水苔。水苔使用前用蒸馏水泡发，然后捏掉水分打散装入培养瓶中，每瓶装入量为干水苔2.0-2.5 g，培养基每瓶分装50 ml，pH 6.4，灭菌后以漠过水苔1-2 mm为宜，更利于茎尖增殖。
b、培养基激素的调整：以步骤（a）培养基进行增殖培养，水苔培养基明显降低组培苗玻璃化率。在步骤（a）基础上调整6-BA的浓度为4 mg/L。
c、增殖培养：当樱桃砧木‘马哈利’芽长至1.5~3 cm，有3-5片真叶时，将苗转入步骤(b)培养基中，于光照培养箱中进行增殖培养，培养箱条件：光照时间16 h/d、温度25±3℃、湿度不超过40％，光强3000~4000 LX。
实施例2
一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的增殖方法，具体包括培养基的配置、培养基激素的调整、增殖培养方法步骤：
a、增殖培养基的配置：以MS为基本培养基，在其中加入蔗糖30 g/L、6-BA 2 mg/L、NAA 0.1 mg/L，泡发水苔。水苔使用前用蒸馏水泡发，然后捏掉水分打散装入培养瓶中，每瓶装入量为干水苔2.0-2.5 g，培养基每瓶分装50 ml，pH 6.4，灭菌后以漠过水苔1-2 mm为宜，更利于茎尖增殖。
b、培养基激素的调整：以步骤（a）培养基进行增殖培养，水苔培养基明显降低组培苗玻璃化率。在步骤（a）基础上调整6-BA的浓度为6 mg/L。
c、增殖培养：当樱桃砧木‘马哈利’芽长至1.5~3 cm，有3-5片真叶时，将苗转入步骤(b)培养基中，于光照培养箱中进行增殖培养，培养箱条件：光照时间16 h/d、温度25±3℃、湿度不超过40％，光强3000~4000 LX。
实施例3
一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的增殖方法，具体包括培养基的配置、培养基激素的调整、增殖培养方法步骤：
a、增殖培养基的配置：以MS为基本培养基，在其中加入蔗糖30 g/L、6-BA 2 mg/L、NAA 0.1 mg/L，泡发水苔。水苔使用前用蒸馏水泡发，然后捏掉水分打散装入培养瓶中，每瓶装入量为干水苔2.0-2.5 g，培养基每瓶分装50 ml，pH 6.4，灭菌后以漠过水苔1-2 mm为宜，更利于茎尖增殖。
b、培养基激素的调整：以步骤（a）培养基进行增殖培养，水苔培养基明显降低组培苗玻璃化率。在步骤（a）基础上调整6-BA的浓度为4 mg/L。
c、增殖培养：当樱桃砧木‘吉塞拉6号’芽长至1.5~3 cm，有3-5片真叶时，将苗转入步骤(b)培养基中，于光照培养箱中进行增殖培养，培养箱条件：光照时间16 h/d、温度25±3 ℃、湿度不超过40％，光强3000~4000 LX。
实施例4
一种降低樱桃砧木组培苗玻璃化的增殖方法，具体包括培养基的配置、培养基激素的调整、增殖培养方法步骤：
a、增殖培养基的配置：以MS为基本培养基，在其中加入蔗糖30 g/L、6-BA 2 mg/L、NAA 0.1 mg/L，泡发水苔。水苔使用前用蒸馏水泡发，然后捏掉水分打散装入培养瓶中，装入量为瓶高的1/5~1/4，培养基分装入培养瓶，以漠过水苔1-2 mm为宜，灭菌后备用。
b、培养基激素的调整：以步骤（a）培养基进行增殖培养，水苔培养基明显降低组培苗玻璃化率。在步骤（a）基础上调整6-BA的浓度为6 mg/L。
c、增殖培养：当樱桃砧木‘吉塞拉6号’芽长至1.5~3 cm，有3-5片真叶时，将苗转入步骤(b)培养基中，于光照培养箱中进行增殖培养，培养箱条件：光照时间16 h/d、温度25±3 ℃、湿度不超过40％，光强3000~4000 LX。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种降低樱桃组培苗玻璃化的快速增殖方法，其特征在于，由培养液和水苔组成。培养液组成为MS基本培养基、6-苄氨基嘌呤(6-BA)4-6mg/L、萘乙酸(NAA)0.1mg/L、蔗糖30g/L；以水苔代替琼脂作为固定物质，水苔的使用方法是先用蒸馏水浸泡，泡发后挤干水分，并打散装入培养瓶中备用，水苔的装入量为：以干水苔/培养液计为20-25g/L，培养瓶中培养液装入量为，高压灭菌后没过水苔5mm。
2.根据权利要求1所述的降低樱桃组培苗玻璃化的快速增殖方法，其特征在于，调节pH值为6.2-6.4。
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