CN114466656A - 在治疗神经变性病症中的模拟肽化合物(r)-2-氨基-n-((s)-1-(((s)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺 - Google Patents

Abstract

本发明提供了治疗或预防肌萎缩侧索硬化(ALS)的新方法，延迟ALS相关神经症状的发作、提高患有ALS的受试者的生存率以及减轻有需要患者ALS相关肌肉力量下降的方法。本发明还提供了治疗或预防α‑共核蛋白病或TDP‑43蛋白病的方法。这些方法包括向受试者施用有效量的线粒体靶向模拟肽化合物，例如(R)‑2‑氨基‑N‑((S)‑1‑(((S)‑5‑氨基‑1‑(3‑苄基‑1,2,4‑噁二唑‑5‑基)戊基)氨基)‑3‑(4‑羟基‑2,6‑二甲苯基)‑1‑氧代丙‑2‑基)‑5‑胍基戊酰胺，或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

Description

在治疗神经变性病症中的模拟肽化合物(R)-2-氨基-N-((S)- 1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨 基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊 酰胺

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2019年7月24日提交的第62/878,272号美国专利申请和2020年6月30日提交的第63/046,292号美国专利申请的优先权权益，所述美国专利申请的全部内容通过本发明的整体引用，成为本发明的一部分。

技术领域

本发明技术一般涉及用于改善或治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)的组合物和方法。本发明技术一般还涉及用于改善或治疗其他神经变性病症(例如α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病，包括额颞叶变性(FTLD)、帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症)的组合物和方法。此外，本发明技术涉及向患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的受试者施用有效量的线粒体靶向模拟肽化合物，例如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺，或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

背景技术

以下描述是为了帮助读者理解。提供的信息或参考文献均不属于本发明所公开的组合物和方法的现有技术。

神经变性疾病和障碍影响身体活动，例如平衡、运动、说话、呼吸和/或心脏功能。神经变性疾病和病症通常无法治愈并使身体衰弱，从而导致神经细胞发生进行性变性和/或死亡。神经变性疾病和障碍的一些示例包括：肌萎缩侧索硬化(ALS)、额颞叶变性(FTLD)、帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症(MSA)。一些神经变性疾病可表现为α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。

肌萎缩侧索硬化(ALS)是一种进行性神经变性病症，会导致大脑和脊髓中的运动神经元死亡。这种障碍一般在中年发作，通常在诊断后三到五年会导致瘫痪和死亡。高达10％的ALS为家族性ALS，通常是常染色体显性遗传。已知几种致病基因，其中最常见的是突变体超氧化物歧化酶1(SOD1)和突变体C9orf72(即C9orf72基因中的G₄C₂六核苷酸重复序列)。TARDBP基因突变导致TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)发生修饰，也会导致家族性ALS(见Sreedharan等人，《科学》(2008)，319(5870)：1668-1672)。目前没有有效的ALS治疗方法。因此，本领域需要制定ALS的治疗方案。

发明内容

一方面，本发明提供了一种用于治疗或预防有需要受试者的肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的模拟肽，例如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

在某些实施例中，所述受试者确诊患有ALS或FTLD。在某些实施例中，所述ALS为家族性ALS。在某些实施例中，所述家族性ALS的病因是由于超氧化物歧化酶1(SOD1)基因突变或TARDBP基因突变导致的TAR DNA结合蛋白(TDP-43)修饰。

在某些实施例中，所述模拟肽每日给药，使用2周或以上。在某些实施例中，所述模拟肽每日给药，使用12周或以上。

在某些实施例中，所述治疗或预防包括治疗或预防ALS或FTLD中一种或多种体征或症状，所述体征或症状包括肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡和脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达提高中的一种或多种。在某些实施例中，所述治疗或预防包括治疗或预防神经丝轻链(NfL)的血浆积累。在某些实施例中，所述治疗或预防包括证明与未使用模拟肽的受试者相比，接受治疗的受试者神经突长度得到改善(例如，增加)。在某些实施例中，所述治疗或预防包括与未使用模拟肽治疗的受试者相比，延长接受治疗受试者的寿命。在某些实施例中，所述治疗或预防包括保护中枢神经系统(CNS)免受轴突损伤。在某些实施例中，所述治疗或预防包括与未使用模拟肽治疗的受试者相比，延迟接受治疗受试者的神经症状发作的进展。

在某些实施例中，所述受试者为人类。在某些实施例中，所述哺乳类受试者为人类。

在某些实施例中，所述模拟肽口服给药。在某些实施例中，所述受试者皮下给药。在某些实施例中，所述模拟肽可局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

在某些实施例中，所述方法进一步包括单独、按顺序或同时向受试者施用其他治疗。在某些实施例中，所述其他治疗包括施用治疗剂。在某些实施例中，所述治疗剂选自以下几项：利鲁唑

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平

或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

在某些实施例中，所述治疗剂为elamipretide(也称为SS-31或bendavia)。在某些实施例中，模拟肽和其他治疗的组合在预防或治疗ALS或FTLD中具有协同作用。

在某些实施例中，所述模拟肽的可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)。在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。在某些实施例中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

一方面，本发明提供了组合物在制备用于治疗或预防有需要受试者的肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)的药物中的用途，其中，所述组合物包括治疗有效量的模拟肽，例如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

在某些实施例中，所述受试者确诊患有ALS或FTLD。在某些实施例中，所述ALS为家族性ALS。在某些实施例中，所述家族性ALS的病因是由于超氧化物歧化酶1(SOD1)基因突变或TARDBP基因突变导致的TAR DNA结合蛋白(TDP-43)修饰。

在某些实施例中，所述模拟肽旨在每日给药，使用2周或以上。在某些实施例中，所述模拟肽旨在每日给药，使用12周或以上。

在某些实施例中，所述治疗或预防包括治疗或预防ALS或FTLD中一种或多种体征或症状，所述体征或症状包括肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡和脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达提高中的一种或多种。在某些实施例中，所述治疗或预防包括治疗或预防神经丝轻链(NfL)的血浆积累。在某些实施例中，治疗或预防包括证明与未使用模拟肽的受试者相比，接受治疗的受试者神经突长度得到改善(例如，增加)。在某些实施例中，所述治疗或预防包括与未使用模拟肽治疗的受试者相比，延长接受治疗受试者的寿命。在某些实施例中，所述治疗或预防包括保护中枢神经系统(CNS)免受轴突损伤。在某些实施例中，所述治疗或预防包括与未使用模拟肽治疗的受试者相比，延迟接受治疗受试者的神经症状发作的进展。

在某些实施例中，所述受试者为人类。在某些实施例中，所述哺乳类受试者为人类。

在某些实施例中，所述模拟肽配制为口服给药。在某些实施例中，所述模拟肽配制为皮下给药。在某些实施例中，所述模拟肽配制为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

在某些实施例中，所述模拟肽旨在单独、按顺序或同时与其他治疗一起使用。在某些实施例中，所述其他治疗包括使用治疗剂。在某些实施例中，所述治疗剂选自以下几项：利鲁唑

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平

或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

在某些实施例中，所述治疗剂为elamipretide(也称为SS-31或bendavia)。在某些实施例中，模拟肽和其他治疗的组合在预防或治疗ALS或FTLD中具有协同作用。

在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)。在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。在某些实施例中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

一方面，本发明提供了一种用于治疗或预防有需要受试者的肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)的模拟肽，例如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

在某些实施例中，所述受试者确诊患有ALS或FTLD。在某些实施例中，所述ALS为家族性ALS。在某些实施例中，所述家族性ALS的病因是由于超氧化物歧化酶1(SOD1)基因突变或TARDBP基因突变导致的TAR DNA结合蛋白(TDP-43)修饰。

在某些实施例中，所述模拟肽旨在每日给药，使用2周或以上。在某些实施例中，所述模拟肽旨在每日给药，使用12周或以上。

在某些实施例中，所述治疗或预防包括治疗或预防ALS或FTLD中一种或多种体征或症状，所述体征或症状包括肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡和脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达提高中的一种或多种。在某些实施例中，所述治疗或预防包括治疗或预防神经丝轻链(NfL)的血浆积累。在某些实施例中，所述治疗或预防包括证明与未使用模拟肽的受试者相比，接受治疗的受试者神经突长度得到改善(例如，增加)。在某些实施例中，所述治疗或预防包括与未使用模拟肽治疗的受试者相比，延长接受治疗受试者的寿命。在某些实施例中，所述治疗或预防包括保护中枢神经系统(CNS)免受轴突损伤。在某些实施例中，所述治疗或预防包括与未使用模拟肽治疗的受试者相比，延迟接受治疗受试者的神经症状发作的进展。

在某些实施例中，所述受试者为人类。在某些实施例中，所述哺乳类受试者为人类。

在某些实施例中，所述模拟肽配制为口服给药。在某些实施例中，所述模拟肽配制为皮下给药。在某些实施例中，所述模拟肽配制为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

在某些实施例中，所述模拟肽旨在单独、按顺序或同时与其他治疗一起使用。在某些实施例中，所述其他治疗包括使用治疗剂。在某些实施例中，所述治疗剂选自以下几项：利鲁唑(

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平

或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

在某些实施例中，所述治疗剂为elamipretide(也称为SS-31或bendavia)。在某些实施例中，模拟肽和其他治疗的组合在预防或治疗ALS或FTLD中具有协同作用。

在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)。在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。在某些实施例中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

一方面，本发明提供了一种用于治疗或预防有需要受试者的α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的模拟肽，例如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。在某些实施例中，所述受试者确诊患有α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。

在某些实施例中，所述α-共核蛋白病是帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症，所述TDP-43蛋白病是肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)。

在某些实施例中，所述模拟肽每日给药，使用2周或以上。在某些实施例中，所述模拟肽每日给药，使用12周或以上。

在某些实施例中，所述治疗或预防α-共核蛋白病包括与未经治疗的对照相比，减轻受试者的多巴胺能神经元的损失。在某些实施例中，所述治疗或预防TDP-43蛋白病包括与未经治疗的对照相比，受试者的神经突长度得到改善(例如，增加)。

在某些实施例中，所述受试者为人类。在某些实施例中，所述哺乳类受试者为人类。

在某些实施例中，所述模拟肽口服给药。在某些实施例中，所述受试者皮下给药。在某些实施例中，所述模拟肽可局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

在某些实施例中，所述方法进一步包括单独、按顺序或同时向所述受试者施用其他治疗。在某些实施例中，所述其他治疗包括施用治疗剂。在某些实施例中，所述治疗剂包括治疗α-共核蛋白病的左旋多巴，所述治疗剂包括治疗TDP-43蛋白病的选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)抗抑郁药。在某些实施例中，模拟肽和其他治疗性治疗的组合在预防或治疗α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病中具有协同作用。

在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)。在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。在某些实施例中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

一方面，本发明提供了组合物在制备用于治疗或预防有需要受试者的α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的药物中的用途，其中，所述组合物包括治疗有效量的模拟肽，例如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

在某些实施例中，所述受试者确诊患有α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。在某些实施例中，所述α-共核蛋白病是帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症，所述TDP-43蛋白病是肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)。

在某些实施例中，所述模拟肽旨在每日给药，使用2周或以上。在某些实施例中，所述模拟肽旨在每日给药，使用12周或以上。

在某些实施例中，所述治疗或预防α-共核蛋白病包括与未经治疗的对照相比，减轻受试者的多巴胺能神经元的损失。在某些实施例中，所述治疗或预防TDP-43蛋白病包括与未经治疗的对照相比，受试者的神经突长度得到改善(例如，增加)。

在某些实施例中，所述受试者为人类。在某些实施例中，所述哺乳类受试者为人类。

在某些实施例中，所述模拟肽配制为口服给药。在某些实施例中，所述模拟肽配制为皮下给药。在某些实施例中，所述模拟肽配制为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

在某些实施例中，所述用途进一步包括单独、按顺序或同时向所述受试者施用其他治疗。在某些实施例中，所述其他治疗包括施用治疗剂。在某些实施例中，所述治疗剂包括治疗α-共核蛋白病的左旋多巴，所述治疗剂包括治疗TDP-43蛋白病的选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)抗抑郁药。

在某些实施例中，模拟肽和其他治疗性治疗的组合在预防或治疗α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病中具有协同作用。

在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)。在某些实施例中，可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。在某些实施例中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

一方面，本发明提供了一种用于治疗或预防有需要受试者的α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的模拟肽，例如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺，或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

在某些实施例中，所述受试者确诊患有α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。在某些实施例中，所述α-共核蛋白病是帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症，所述TDP-43蛋白病是肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)。

在某些实施例中，所述模拟肽旨在每日给药，使用2周或以上。在某些实施例中，所述模拟肽旨在每日给药，使用12周或以上。

在某些实施例中，所述治疗或预防α-共核蛋白病包括与未经治疗的对照相比，减轻受试者的多巴胺能神经元的损失。在某些实施例中，所述治疗或预防TDP-43蛋白病包括与未经治疗的对照相比，受试者的神经突长度得到改善(例如，增加)。

在某些实施例中，所述受试者为人类。在某些实施例中，所述哺乳类受试者为人类。

在某些实施例中，所述模拟肽配制为口服给药。在某些实施例中，所述模拟肽配制为皮下给药。在某些实施例中，所述模拟肽配制为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

在某些实施例中，所述模拟肽旨在单独、按顺序或同时与其他治疗一起使用。在某些实施例中，所述其他治疗包括使用治疗剂。在某些实施例中，所述治疗剂包括治疗α-共核蛋白病的左旋多巴，所述治疗剂包括治疗TDP-43蛋白病的选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)抗抑郁药。在某些实施例中，模拟肽和其他治疗性治疗的组合在预防或治疗α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病中具有协同作用。

在某些实施例中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)。在某些实施例中，可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。在某些实施例中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

附图说明

图1A-1D：(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺，或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物的全身给药可以延迟雄性SOD1 G93A转基因小鼠的神经疾病症状发作并延长小鼠寿命。图1A和1B是雄性和雌性SOD1 G93A小鼠中神经症状发作进展的图表，与运载体治疗的对照组相比，这些小鼠接受(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺三盐酸盐(Ia)治疗，剂量为0.5mg/kg或5.0mg/kg。图1C和1D是雄性和雌性SOD1 G93A小鼠寿命的Kaplan-Meier生存曲线，与运载体治疗的对照组相比，这些小鼠接受(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺三盐酸盐(Ia)治疗，剂量为0.5mg/kg或5.0mg/kg。*(Ia)@5.0mg/kg，p<0.05。

图2A-2B：(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺三盐酸盐(Ia)的全身给药可以减弱雄性SOD1 G93A转基因小鼠的握力丧失。图2A和2B是与运载体治疗的对照组相比，每种接受0.5mg/kg或5.0mg/kg(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(式I)治疗的动物在基线(第8周)和生命结束时确定的握力图。

图3A-3B：(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺三盐酸盐(Ia)的全身给药可以降低雄性SOD1 G93A转基因小鼠血浆中神经丝轻链(NfL)的积累。图3A和3B是雄性和雌性SOD1 G93A小鼠在(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺和运载体对照品给药10周后NfL血浆水平的图表。

图4是雄性SOD1 G93A转基因小鼠血浆神经丝水平与动物生存之间相关性的图表。图中描绘了本研究中每只雄性小鼠的血浆NfL水平，作为其以人道方式结束生命时的年龄函数。

图5A是比较药物在Sprague Dawley大鼠大脑中积累36小时的图表，其中大鼠经皮下注射了(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺三盐酸盐(Ia)或elamipretide；两者的给药速率为5mg/kg。每个时间点n＝4。

图5B是比较从Sprague Dawley大鼠制备的脑匀浆中线粒体呼吸的呼吸控制率的图表，与未经治疗组和假手术组相比，其中大鼠接受(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺三盐酸盐(Ia)治疗，速率为5mg/kg。**p<0.01，单向ANOVA。

图6A是与未经治疗组和未向动物注射无A53T突变体α-突触核蛋白病毒颗粒的组相比，注射A53T突变体α-突触核蛋白病毒颗粒，然后用0.5mg/kg或5mg/kg的(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺三盐酸盐(Ia)来治疗C57BL/6小鼠的免疫染色多巴胺能神经元的图像。A ＝A53T AAV，无药物；B1＝A53T AAV，化合物Ia 0.5mg/kg；B2＝A53TAAV，化合物Ia 5.0mg/kg；C1＝无病毒，化合物Ia 0.5mg/kg；C2＝无病毒，化合物Ia 5.0mg/kg。

图6B是图6A中提到的实验所得数据的柱状图。A＝A53T AAV，无药物；B1＝A53TAAV，化合物Ia 0.5mg/kg；B2＝A53T AAV，化合物Ia 5.0mg/kg；C1＝无病毒，化合物Ia0.5mg/kg；C2＝无病毒，化合物Ia 5.0mg/kg。**p<0.01与A组；***p<0.001与A组；^OOp<0.001与C1组和C2组。

图6C是图6A和6B中每个动物组C57BL/6小鼠在注射A53T突变体α-突触核蛋白病毒颗粒后血浆神经丝分析数据的柱状图。A＝A53T AAV，无药物；B1＝A53T AAV，化合物Ia0.5mg/kg；B2＝A53T AAV，化合物Ia 5.0mg/kg；C1＝无病毒，化合物Ia 0.5mg/kg；C2＝无病毒，化合物Ia 5.0mg/kg。

图7是用于研究不同浓度化合物Ia对prp-TDP-43^A315T-UeGFP小鼠模型皮质脊髓运动神经元的影响的每个细胞平均神经突长度数据的柱状图。***p<0.001与运载体；****p<0.0001与运载体。

具体实施方式

应理解的是，为了提供对本发明技术的实质性了解，在下文中以不同详细程度描述本发明技术的某些方面、模式、实施例、变化和特征。本说明书中使用的某些术语定义如下。除非另有定义，否则本发明所用的所有技术和科学术语一般具有本发明技术所属领域普通技术人员公知的相同含义。

在实施本发明技术时，使用了分子生物学、蛋白生物化学、细胞生物学、免疫学、微生物学和重组DNA中的许多常规技术。这些技术众所周知，并分别在以下参考文献中进行了解释：《现代分子生物学实验指南》，第I-III卷，Ausubel编辑(1997年)；Sambrook等人，《分子克隆：实验室手册》(第2版)(冷泉港实验室出版社，纽约冷泉港，1989年)；《DNA克隆：实用方法》，第I和II卷，Glover编辑(1985年)；《寡核苷酸合成》，Gait编辑(1984年)；《核酸分子杂交》，Hames和Higgins编辑(1985年)；《转录和翻译》，Hames和Higgins编辑(1984年)；《动物细胞培养》，Freshney编辑(1986年)；《固定化细胞和酶》(IRL出版社，1986年)；Perbal，《分子克隆的实用指南》系列，《酶学方法杂志》，(学术出版社有限公司，1984年)；《哺乳动物细胞的基因转移载体》，Miller和Calos编辑，《冷泉港实验室，纽约，1987年)；以及《酶学方法》，第154和155卷，分别由Wu和Grossman编辑以及由Wu编辑。

定义

在本说明书及所附权利要求中，除非内容另有明确说明，否则单数形式“一个(a)”、“一个(an)”和“所述(the)”也包括复数指称对象。例如，提及的“细胞”包括两个或多个细胞的组合等。

在本发明中，向受试者“施用”药剂、药物、治疗剂、肽或模拟肽包括向受试者引入或递送化合物以实现预期功能的任何途径。可以通过任何途径给药，例如口服。可以皮下给药。可以静脉给药。可以眼内给药。可以全身给药。或者，可以通过局部、鼻内、腹腔内、皮内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。给药包括自行给药和由他人给药。

在本发明中，术语“氨基酸”同时包括天然氨基酸和非天然氨基酸。除非另有规定，否则术语“氨基酸”包括分离氨基酸分子(即，同时包括氨基连接氢和羰基碳连接羟基的分子)和氨基酸残基(即，一个或两个氨基连接氢或一个羰基碳连接羟基中被去除的分子)。氨基可以是α氨基、β氨基等。例如，术语“氨基酸丙氨酸”是指分离的丙氨酸H-Ala-OH，也可以指任何一种丙氨酸残基H-Ala-、-Ala-OH或-Ala-。除非另有说明，否则本发明所述的化合物中发现的所有氨基酸可以是D或L构型。D构型的氨基酸可写作在氨基酸缩写前添加“D”。例如，“D-Arg”表示D构型的精氨酸。术语“氨基酸”包括其盐，其中包括可药用盐。任何氨基酸可以得到保护或去保护。保护基可以连接到氨基(例如，α氨基)、主链羧基或侧链的任何官能团上。例如，在α氨基上由苄氧羰基(Z)保护的苯基丙氨酸可以表示为Z-Phe-OH。

除N端氨基酸外，本发明中所有氨基酸缩写(例如，Phe)均代表-NH-C(R)(R′)-CO-结构，其中，R和R′分别是氢或氨基酸的侧链(例如，对于Phe，R＝苄基，R'＝H)。因此，苯基丙氨酸为H-Phe-OH。这些氨基酸或肽(例如，Lys-Val-Leu-OH)的名称“OH”表示C末端是游离酸。例如，Phe-D-Arg-Phe-Lys-NH₂中的名称“NH₂”表示保护肽片段的C末端是酰胺化物。此外，单独或组合为环形结构的某些R和R’可包括在液相或固相合成过程中需要保护的官能团。

如果氨基酸具有异构形式，除非另外明确指出为D型(例如，D-Arg)，否则表示的是氨基酸的L型。值得注意的是，市面上提供许多D型和L型的氨基酸残基。例如，D-Arg是商用D-氨基酸。

与氨基酸缩写一起使用的大写字母“D”是指D型氨基酸残基。

术语“DMT”是指2,6-二(甲基)酪氨酸(例如，2,6-二甲基-L-酪氨酸；CAS 123715-02-6)。

在本发明中，短语“延迟发作”是指在统计样本中，与未经治疗的对照样本相比，推迟、阻碍或导致障碍、症状、病症或指征的一种或多种症状在治疗样本中的出现比正常情况要慢。

在本发明中，术语“有效量”是指足以达到预期治疗和/或预防效果的量，例如，能够部分或完全改善ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的一种或多种症状的含量。在治疗或预防应用方面，在某些实施例中，向受试者施用组合物的量取决于疾病的类型、程度和严重程度以及个人特定情况，例如总体健康状况、年龄、性别、体重和耐药性。本领域的技术人员将能够根据这些因素和其他因素确定适当的剂量。所述组合物还可以与一种或多种其他治疗化合物联合用药。在本发明所述方法中，可向具有ALS或FTLD一种或多种体征、症状或风险因素的受试者施用线粒体靶向模拟肽，例如，(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)，或其可药用盐(例如，(Ia)，例如，酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐(即，包含一种乙酸基的盐)、双乙酸盐(即，包含两种乙酸基的盐)、三乙酸盐(即，包含三种乙酸基的盐)、单三氟乙酸盐(即，包含一种三氟乙酸盐部分的盐)、双三氟乙酸盐(即，包含两种三氟乙酸盐部分的盐)、三氟乙酸盐(即，包含三种三氟乙酸盐部分的盐)、单盐酸盐(即，包含一个氯离子的盐，如由一个盐酸构成或被认为由一个盐酸构成；“单盐酸盐”)、双盐酸盐(即，包含两个氯离子的盐，如由两个盐酸构成或被认为由两个盐酸构成；“双盐酸盐”)、三盐酸盐(即，包含三个氯离子的盐，如由三个盐酸构成或被认为由三个盐酸构成；“三盐酸盐”)、单甲苯磺酸盐(即，包含一种甲苯磺酸盐部分的盐)、双甲苯磺酸盐(即，包含两种甲苯磺酸盐部分的盐)或三甲苯磺酸盐(即，包含三种甲苯磺酸盐部分的盐)，所述体征、症状或风险因素包括但不限于肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡、脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达水平提高以及神经丝轻链(NfL)在血浆中的积累。

在本发明中，术语“水合物”是指与水有关的化合物。化合物中水合物所含的水分子数量可以(也可以不)与水合物中的化合物分子数成一定比例。

在本发明中，术语“模拟肽”是指包含两个或多个氨基酸但也包含非肽样修饰的小肽样聚合物。可以通过修饰现有肽或通过设计模拟肽功能的类似分子来形成模拟肽。

在本发明中，术语“可药用载体”和“载体”是指用于给药或配制给药的稀释剂、佐剂、赋形剂或运载体。此类可药用载体的非限制性示例包括液体，例如水、盐水和油；固体，例如阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石粉、角蛋白、胶态氧化硅、尿素等。此外，可以使用助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂、调味剂和着色剂。在E.W.Martin的《雷明登氏药学全书》中描述可药用载体的其他示例，《雷明登氏药学全书》通过本发明的整体引用，成为本发明的一部分。

在本发明中，“预防(prevention)”或“预防(preventing)”障碍或病症是指在统计样本中，对未经治疗的对照样本相比，减少经治疗样本中障碍或病症的发生，或与未经处理的对照样本相比，延迟障碍或病症一种或多种症状的出现。在本发明中，预防ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病包括预防或延迟ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病症状的发病。在本发明中，预防ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病还包括预防或延迟ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的一种或多种体征或症状的复发。

在本发明中，术语“受试者”和“患者”可互换使用。

在治疗用途或给药方面，术语“分别(separate)”或“分别地(separately)”是指通过不同的途径、制剂和/或药物组合物施用两种活性成分。

术语“同时”治疗应用是指同时或基本上同时施用至少两种活性成分。在某些实施例中，同时给药包括但不限于施用包含至少一种活性成分的单一组合物或制剂，通过相同途径共同施用至少两种单独的活性成分，以及通过不同途径共同施用至少两种单独的活性成分。

在本发明中，术语“顺序”治疗应用是指在不同时间施用至少两种活性成分，施用途径相同或不同。更特别的是，顺序应用是指在开始施用另一种或其他活性成分之前，全部施用一种活性成分。因此，在施用其他活性成分前，可以在几分钟、几小时或几天内施用一种活性成分。在这种情况下不进行同时治疗。

在本发明中，术语“受试者”是指活的动物。在不同实施例中，所述受试者为哺乳动物。在某些实施例中，所述受试者为非人类哺乳动物，包括但不限于小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、家兔、绵羊、山羊、猫、狗、猪、迷你猪、马、牛或非人类灵长类动物。在某些实施例中，所述受试者为人类。

在本发明中，术语“溶剂化物”是指与溶剂相结合的化合物(例如，肽或模拟肽)的形式，通常通过溶剂分解反应。这种物理结合可能包括氢键。常规溶剂包括水、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸、乙酸乙酯、丙酮、己烷、二甲亚砜(DMSO)、四氢呋喃(THF)、乙醚等。

在本发明中，术语“互变异构体”是指一种特殊化合物结构的可互换形式，并且氢原子和电子位移不同的化合物。因此，两个结构可以通过π电子和一个原子(通常是H)的运动达到平衡。例如，烯醇和酮是互变异构体，因为它们通过酸或碱处理可以迅速转换。互变异构形式可能与获得目标化合物的最佳化学反应性和生物活性有关。

在本发明中，“协同治疗作用”是指由至少两种药剂组合而产生的大于加性治疗作用，并且超过了单独施用药剂所产生的效果。例如，低剂量的一种或多种药剂可用于治疗ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病，从而提高治疗效果并减少副作用。

在本发明中，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“缓解(alleviation)”是指治疗，其中，所述目的是减少、缓解或减缓目标病理状态或障碍的进展或发展，和/或逆转其进展。根据本发明所述方法，在接受治疗量的线粒体靶向模拟肽后，例如，(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)，或其可药用盐(例如，(Ia)，例如，酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐，受试者的ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的一种或多种体征和症状表现出可观察和/或可测量的减轻或完全消失，则受试者成功治疗了ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。例如，在ALS中，此类体征或症状包括但不限于肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡、脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达水平提高以及神经丝轻链(NfL)在血浆中的积累。在某些实施例中，所述治疗是指延迟ALS神经症状的发作(根据本发明所述的神经功能评分进行评估)。

应理解的是，本发明所述的各种治疗或预防疾病模式是指“基本上的”，包括全部或少于全部的治疗或预防，其中，实现了某些生物学或医学相关的结果。

在本发明中，术语“(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺”、“(D-Arg-DMT-NH((S))-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊烷-1-基)”、“(2R)-2-氨基-N-[(1S)-1-{[(1S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基]氨甲酰}-2-(4-羟基-2,6-二甲苯基)乙基]-5-亚氨基甲酰胺基”、“化合物7a”和“7a”是指在本发明中可互换使用的相同线粒体靶向模拟肽化合物，并指下式(I)的化合物：

(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1，2，4-噁二唑-5-基)

戊基)氨基)-3-(4-羟基-2，6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺。

术语“(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺”、“(2R)-2-氨基-N-[(1S)-1-{[(1S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基]氨甲酰}-2-(4-羟基-2,6-二甲苯基)乙基]-5-亚氨基甲酰胺基”、“(D-Arg-DMT-NH((S))-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊烷-1-基)”、“化合物7a”和“7a(如下图所示)”应包括其可药用盐形式，例如式(Ia)的三盐酸盐：

肌萎缩侧索硬化(ALS)

肌萎缩侧索硬化(ALS；也称为卢伽雷氏病)是一种进行性神经肌肉病，其特征为无力、肌肉消瘦、肌束震颤和反射增强。目前大约有3万美国人患有这种疾病。年发病率为每10万人1-2例。这种疾病常见于中年人群，男性的发病率高于女性。ALS的特征是成年发病，特发性，前角细胞和上下运动神经元的进行性变性，导致进行性肌无力、消瘦和束颤。前角细胞的萎缩和大型运动神经元由纤维状星形胶质细胞(神经胶质增生)取代，导致受影响的脊髓前柱和侧柱变硬，因此称为“侧索硬化”。ALS的典型体征或症状包括肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪和过早死亡。

高达10％的ALS为家族性ALS，通常是常染色体显性遗传。已知几种致病基因，其中在家族性ALS(fALS)和散发性ALS(sALS)中最常见的是突变体超氧化物歧化酶1(SOD1)和突变体C9orf72(即，C9orf72基因中的G₄C₂六核苷酸重复序列)。已知其他一些基因也是典型ALS的病因，尽管这些基因在病例中的比例低于突变体SOD1；这些基因包括突变体FUS(肉瘤融合)、突变体TARDBP基因导致TAR DNA结合蛋白43(TDP-43)的修饰以及视神经蛋白。

根据神经系统受损的区域和病理变化的进展，临床表现也有所不同。ALS的典型表现为隐匿性、进行性、不对称肌无力和萎缩，伴有神经系统体征，特别是束颤和反射亢进。通常表现为由肌无力导致的敏捷性或步态问题。说话或吞咽困难是延髓型疾病的最初症状。在几个月或几年的时间里，ALS患者会出现严重的进行性肌无力以及由上下运动神经元功能丧失引起的其他症状。但保留了括约肌控制、感觉功能、智能和皮肤完整性。患者完全残疾，通常需要呼吸支持和胃造口术。通常在诊断后五年内发生死亡，原因是呼吸衰竭或恶病质。对ALS的诊断是临床性的，其特征是影响身体多个区域的进行性无力、萎缩、束颤和反射亢进的体征。早期鉴别诊断可包括肌肉骨骼、神经或全身状况。疾病的病因尚不清楚。目前管理包括积极、个体化缓解症状和并发症。目前ALS没有治愈方法。

目前标记用于治疗ALS的唯一药剂是利鲁唑

和依达拉奉

美国食品和药物管理局正在考虑至少一种其他药物(美卡舍明)。可以使用不同的症状疗法，包括巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药，例如，卡马西平(Tegretol)或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

神经丝轻链(NfL)

反映ALS特点的生物标记物，不仅有助于疾病的诊断算法，而且在确定同质患者亚群方面也存在价值。它们还可帮助跟踪疾病进展和治疗反应。神经丝(NF)已在不同的神经系统病中得到广泛研究，可用作急性和慢性神经元损伤的标志物(Bacioglu等人，《神经元》，91:56-66(2016年))。神经丝是神经元中10nm的中间丝状体，由不同亚单位的杂聚物、神经丝轻链(NfL)、神经丝中链(NfM)和神经丝重链(NfH)组成(Lee，《神经科学年鉴》，19:187-217(1996))。神经丝轻链(NfL)是神经元细胞所特有，会脱落到脑脊液(CSF)中，在外周血中可检测到低浓度的神经丝轻链(NfL)。已证明CSF、血清和血浆NfL水平可用于通过高灵敏度和特异性来区分ALS患者与健康对照组，并与ALS患者的疾病进展或生存相关(Lu等人，《神经病学杂志》2015年6月2；84(22):2247-57)。在ALS的SOD1小鼠模型中，已证明运动细胞源的变性伴随着血液NF水平逐步上升，而这些水平能够捕捉治疗反应(Lu等人，《公共科学图书馆期刊》(PLoS ONE)，7:e40998(2012年)；Boylan等人，《神经化学杂志》，111:1182-1191(2009年))。

α-共核蛋白病

共核蛋白病或α-共核蛋白病是神经变性疾病，其特征是α-突触核蛋白在神经元、神经纤维或神经胶质细胞中异常聚集。这些疾病还与黑质多巴胺能神经元的丧失有关。这些疾病包括帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症。α-共核蛋白病的神经病理学诊断是基于对组织中α-突触核蛋白改变的检测以及对这种改变在大脑中的神经解剖分布的记录。

TDP-43蛋白病

TAR-DNA结合蛋白43(TDP-43)蛋白病包括ALS和额颞叶变性(FTLD)。FTLD是指临床上、遗传上和神经病理学上异质的神经变性病症组，是阿尔茨海默病(AD)和路易体痴呆之后的第三大常见痴呆形式。当前的研究标准将FTLD分为以下3个临床综合症：额颞叶痴呆、原发性进行性非流畅性失语症和词义性痴呆。额颞叶痴呆是最常见的临床形式，主要表现为人格和行为的变化，而原发性进行性非流畅性失语症和词义性痴呆主要表现为语言功能障碍。此外，患者可能出现运动异常，例如帕金森症和运动神经元疾病。

术语额颞叶变性反映了通过神经病理学检查在这些患者中发现的额叶和颞叶明显萎缩。大多数FTLD大脑的一个特征是在神经元和神经胶质细胞中形成异常蛋白包涵体。已确定TAR-DNA结合蛋白43(TDP-43)为FTLD中的疾病蛋白。已经发现突变体TDP-43会抑制神经突的生长，野生型(WT)和突变体TDP43的过表达会导致运动神经元毒性。

线粒体靶向模拟肽

在某些实施例中，本发明提供了式(II)化合物，或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物：

其中

AA₁选自

AA₂选自

R¹选自

R^2a选自

R^2b是H或Me；

R³和R⁴分别选自H和(C₁-C₆)烷基；

R⁵和R⁶是独立的H、甲基、乙基、丙基、环丙基或环丁基；或者R⁵和R⁶与它们所结合的N原子一起形成4-6元杂环基；

R⁷选自H、(C₁-C₆)烷基、环烷基和芳香基；

R⁸和R⁹分别选自H、(C₁-C₆)烷基、环烷基和芳香基；或者R⁸和R⁹与它们所结合的N原子一起形成4-6元杂环基；

n是1、2或3；

X选自

以及

*表示X与R¹连接的点。

在某些实施例中，AA₁是

在某些实施例中，AA₁是

在某些实施例中，AA₁是

在某些实施例中，AA₁是

在某些实施例中，AA₁是

在某些实施例中，AA₂是

在某些实施例中，AA₂是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R¹是

在某些实施例中，R^2a是

在某些实施例中，R^2a是

在某些实施例中，R^2a是

在某些实施例中，R^2a是

在某些实施例中，R^2a是

在某些实施例中，R^2a是

在某些实施例中，R^2a是

在某些实施例中，R^2a是

在某些实施例中，R^2b是H。在某些实施例中，R^2b是甲基。

在某些实施例中，R³是H。在某些实施例中，R³是(C₁-C₆)烷基。在某些实施例中，R³是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。在某些实施例中，R³是甲基。在某些实施例中，R³是乙基。

在某些实施例中，R⁴是H。在某些实施例中，R⁴是(C₁-C₆)烷基。在某些实施例中，R⁴是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。在某些实施例中，R⁴是甲基。在某些实施例中，R⁴是乙基。

在某些实施例中，R³和R⁴相同。在某些实施例中，R³和R⁴不同。

在某些实施例中，R⁵是H。在某些实施例中，R⁵是甲基。

在某些实施例中，R⁶是H。在某些实施例中，R⁶是甲基。

在某些实施例中，R⁵和R⁶相同。在某些实施例中，R⁵和R⁶不同。

在某些实施例中，R⁵和R⁶与它们所结合的N原子一起形成4-6元杂环基。在某些实施例中，所述杂环基是4-6元杂环基。在某些实施例中，所述杂环基是氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基。

在某些实施例中，R⁷是H。在某些实施例中，R⁷是(C₁-C₆)烷基。在某些实施例中，R⁷是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。在某些实施例中，R⁷是甲基。

在某些实施例中，R⁷是环烷基。在某些实施例中，R⁷是环丙基、环丁基、环丙基或环己基。在某些实施例中，R⁷是芳香基。在某些实施例中，R⁷是苯基。

在某些实施例中，R⁸是H。在某些实施例中，R⁸是(C₁-C₆)烷基。在某些实施例中，R⁸是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。在某些实施例中，R⁸是甲基。

在某些实施例中，R⁸是环烷基。在某些实施例中，R⁸是环丙基、环丁基、环丙基或环己基。在某些实施例中，R⁸是芳香基。在某些实施例中，R⁸是苯基。

在某些实施例中，R⁹是H。在某些实施例中，R⁹是(C₁-C₆)烷基。在某些实施例中，R⁹是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。在某些实施例中，R⁹是甲基。

在某些实施例中，R⁹是环烷基。在某些实施例中，R⁹是环丙基、环丁基、环丙基或环己基。在某些实施例中，R⁹是芳香基。在某些实施例中，R⁹是苯基。

在某些实施例中，R⁸和R⁹相同。在某些实施例中，R⁸和R⁹不同。

在某些实施例中，R⁸和R⁹与它们所结合的N原子一起形成4-6元杂环基。在某些实施例中，所述杂环基是4-6元杂环基。在某些实施例中，所述杂环基是氮杂环丁烷基、吡咯烷基或哌啶基。

在某些实施例中，X是

在某些实施例中，X是

在某些实施例中，X是

在某些实施例中，X是

在某些实施例中，X是

在某些实施例中，X是

在某些实施例中，n是1。在某些实施例中，n是2。在某些实施例中，n是3。

本发明公开的模拟肽的手性中心可以是下文详细讨论的R-或S-构型。

手性/立体化学方面的考虑因素

本发明所述的模拟肽可包括一个或多个不对称中心，因此可以各种异构体形式存在，例如，对映体和/或非对映体。例如，本发明所述的化合物可以是单个对映体、非对映异构体或几何异构体的形式，或者是立体异构体混合物的形式，包括外消旋混合物和富含一种或多种立体异构体的混合物。可通过本领域技术人员已知的方法从混合物中分离异构体，包括手性高压液相色谱法(HPLC)和手性盐的形成和结晶；或者通过不对称合成来制备优选异构体。例如，见Jacques等人，《对映体、外消旋体和拆分》(Wiley lnterscience出版社，纽约，1981年)；Wilen等人，《四面体》33:2725(1977年)；Eliel，《碳化合物的立体化学》，(McGraw-Hill公司，纽约，1962年)；以及Wilen，《拆分剂和光学拆分表》，第268页(E.L.Eliel编辑，美国圣母大学出版社，印第安纳州圣母院市，1972年)。此外，所述模拟肽还包括本发明所述的化合物，作为基本上不含其他异构体的独立异构体，或者作为各种异构体的混合物。

R(D表示氨基酸)或S(L表示氨基酸)

在本发明中，纯对映体模拟肽基本上不含化合物的其它对映体或立体异构体(即，对映体过量)。换句话说，“S”型化合物基本上不含“R”型化合物，因此是“R”型的对映体过量。就氨基酸(通常用“D”和“L”对映异构体描述)而言，应理解的是，对于“D”-氨基酸，构型是“R”，对于“L”-氨基酸，构型是“S”。在某些实施例中，“基本上不含”是指：(i)含有少于2％“S”型的“R”型化合物的等分部分；或(ii)含有少于2％“R”型的“S”型化合物的等分部分。术语“对映体纯”或“纯对映异构体”表示化合物包含大于90wt％(按重量计)、大于91wt％、大于92wt％、大于93wt％、大于94wt％、大于95wt％、大于96wt％、大于97wt％(按重量计)、大于98wt％、大于99wt％、大于99.5wt％、大于99.9wt％的对映异构体。在某些实施例中，重量基于化合物的所有对映异构体或立体异构体的总重量。

在本发明所述的某些实施例中，对映体纯化合物可与其他活性或非活性成分一起存在。例如，包含对映体纯“R”型化合物的药物组合物可包含约90％的赋形剂和10％的对映体纯“R”型化合物。在某些实施例中，在此类组合物中的对映体纯“R”型化合物可包含至少约95wt％的“R”型化合物和最多约5wt％的“S”型化合物(按化合物总重量计)。例如，包含对映体纯“S”型化合物的药物组合物可包括约90％的赋形剂和10％的对映体纯“S”型化合物。在某些实施例中，在此类组合物中的对映体纯“S”型化合物可包含至少约95wt％的“S”型化合物和最多约5wt％的“R”型化合物(按化合物总重量计)。在某些实施例中，可以用很少的赋形剂或载体或不用赋形剂或载体配制活性成分。

用于定义本发明所述肽化合物的命名法是本领域通常使用的命名法，其中N端的氨基出现在左侧，C端的羧基出现在右侧，前提是本发明公开的模拟肽在C端不包含羧酸基团或酰胺基团。

与氨基酸缩写一起使用的大写字母“D”是指D型氨基酸残基。例如，D-Arg是商用D-氨基酸。

本发明所述的模拟肽以非溶剂化形式和溶剂化形式存在，包括水合形式。例如，由于很难或不可能从模拟肽合成后去除所有溶剂，所以可以存在溶剂化形式。通常，溶剂化形式相当于非溶剂化形式，并包含在本发明申请范围内。本发明申请中的某些模拟肽可能以多晶或无定形形式存在。本发明申请中的某些模拟肽可能以互变异构体形式存在。本发明申请中的某些模拟肽可能以各种盐形式存在。通常，所有物理形式对于本发明申请所预期的用途都是等效的，并应在本发明申请的范围内。

在某些实施例中，本发明公开的线粒体靶向模拟肽，例如((R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)，或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)的组合物，可用于治疗或预防有需要受试者的ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。在某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。在某些实施例中，所述受试者确诊患有ALS，一种α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。

在其他实施例中，本发明公开的所述线粒体靶向模拟肽，例如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))，可用于改善患有ALS受试者的肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、生存、脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达水平提高以及神经丝轻链(NfL)在血浆中的积累。在某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。在某些实施例中，所述受试者确诊患有ALS。

在本发明技术的线粒体靶向模拟肽的某些实施例中，所述治疗或预防包括治疗或预防ALS中一种或多种体征或症状，包括肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡、脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达水平提高和NfL在血浆中积累中的一种或多种。在某些实施例中，治疗或预防是指延迟ALS神经症状的发作(根据本发明所述的神经功能评分进行评估)。

在本发明技术的模拟肽的某些实施例中，线粒体靶向模拟肽旨在或配制为单独、按顺序或同时向所述受试者施用其他治疗剂或其他治疗。在某些实施例中，所述其他治疗剂选自：利鲁唑

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平(Tegretol)或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

在某些实施例中，所述治疗剂为elamipretide(也称为SS-31或bendavia)。在某些实施例中，所述模拟肽用于模拟肽和其他治疗剂或治疗的组合在预防或治疗ALS中具有协同作用的情况。在某些实施例中，其他治疗剂为左旋多巴。在某些实施例中，所述模拟肽用于模拟肽和其他治疗剂或治疗的组合在预防或治疗α-共核蛋白病中具有协同作用的情况。在某些实施例中，所述其他治疗剂是抗抑郁剂，例如选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)，包括曲唑酮。在某些实施例中，所述模拟肽用于模拟肽和其他治疗剂或治疗的组合在预防或治疗TDP-43蛋白病中具有协同作用的情况。

线粒体靶向模拟肽的合成

可采用肽合成方法整体或部分制备本发明技术的模拟肽化合物，例如常规液相(也称为溶相)肽合成或固相肽合成，或通过自动肽合成器合成肽(Kelley等人，《遗传工程原理与方法》，Setlow，J.K.编辑，Plenum出版社，纽约，(1990年)，第12卷，第1-19页；Stewart等人，《固相肽合成》(1989年)W.H.；Houghten，《美国科学院院报》(1985年)82：第5132页)。可以通过常规方法收集或纯化由此产生的模拟肽，例如色谱法，其中包括凝胶过滤色谱法、离子交换柱色谱法、亲和色谱法、反相柱色谱法和HPLC、硫酸铵分级分离、超滤和免疫吸附。

在固相肽合成中，肽通常是从氨基酸链的羰基侧(C端)合成到氨基侧(N端)。在某些实施例中，氨基保护的氨基酸通过氨基酸的羧基共价结合到固相支持体材料上，一般通过酯键或酰胺键并选择性通过联结基。使用偶联剂将氨基去保护并与第二氨基保护的氨基酸的羰基反应(即，“偶联”)，产生结合到固体支持物上的二肽。偶联后，可选用封端剂处理树脂，从而封端(使对随后的偶联步骤无活性)任何未反应的氨基。可以重复这些步骤(即，去保护、偶联和选择性封端)以形成所需肽链。一旦所需要的肽链完成，就可以从固相支持体上分离肽。

在某些实施例中，(肽和/或模拟肽的)氨基酸残基上使用的保护基包括9-芴基甲氧基羰基保护基(Fmoc)和叔丁氧羰基(Boc)。用碱从氨基末端去除Fmoc基团，用酸去除Boc基团。在替代实施例中，氨基保护基可以是甲酸基、丙烯酰基(Acr)、苯甲酰基(Bz)、乙酰基(Ac)、三氟乙酰基、芳烷氧羰类的取代或未取代基，例如，苄氧羰基(Z)、p-氯苄氧基羰基、p-溴苄氧羰氧基、p-硝基苯基氧羰基、p-甲氧基苄氧基碳、二苯甲基氧基羰基、2(p-联二苯基)异丙基氧基羰基、2-(3,5-二甲氧基苯基)异丙基氧基羰基、p-苯基偶氮苄氧羰基、三苯基膦乙氧基羰基或9-芴基甲氧基羰基保护基(Fmoc)、芳烷氧羰类的取代或未取代基，例如，叔丁氧羰基(Boc)、特戊基氧基羰基、二异丙基甲氧基羰基、异丙基氧基羰基、乙基氧基羰基、烯丙基氧基羰基、2-甲基磺酰基乙氧基羰基或2,2,2-三氯乙基氧基羰基、烷基氧基羰基类基团，例如，三戊烷基氧基羰基、三己基氧基羰基、金刚烷基氧基羰基或异冰片基氧基羰基，以及含有杂原子的基团，例如，苯磺基、p-甲苯磺酰基、均三甲基苯磺酰基、甲氧基三甲基苯基磺酰基、2-硝基苯磺酰基、2-硝基苯氧硫基、4-硝基苯磺酰基或4-硝基苯氧硫基。

许多氨基酸的侧链上都有反应性官能团。在某些实施例中，对此类官能团进行保护，以防止官能团与进入的氨基酸反应。与这些官能团一起使用的保护基必须对肽和/或模拟肽合成的条件保持稳定，但可以在肽从固相支持体(如果支持体结合)上分裂之前、之后或同时去除，或者在溶相合成的情况下在最终去保护时去除。还可以进一步参考：Isidro-Llobet，A.，Alvarez，M.，Albericio，F.，“氨基酸保护基”；《化学综述》，109:2455-2504(2009年)作为对肽合成中常用的保护基团的综述(这些保护基可用于模拟肽合成，其中模拟肽包含在肽中发现的官能团)。

在某些实施例中，固相肽合成方法中使用的固相支持体材料是凝胶型支持体，如聚苯乙烯、聚丙烯酰胺或聚乙二醇。或者，如可控孔玻璃、纤维素纤维或聚苯乙烯等材料可以在其表面功能化，以提供用于肽合成的固相支持体。

本发明所述的固相(或溶相)肽合成中所使用的偶联剂一般为碳化二亚胺试剂。碳化二亚胺试剂的示例包括但不限于N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)及其盐酸盐(EDC.HCl)、N-环己基-N’-异丙基碳酰亚胺(CIC)、N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N-叔丁基-N’-甲基碳二亚胺(BMC)、N-叔丁基-N’-乙基碳二亚胺(BEC)、双[[4-(2,2-二甲基-1,3-二氧杂)]-甲基]碳化二亚胺(BDDC)和N,N-二环己基碳二亚胺。DCC是优选偶联剂。其他偶联剂包括HATU和HBTU，通常与有机碱(如DIEA)和受阻吡啶型碱(如二甲基吡啶或三甲吡啶)结合使用。

在某些实施例中，如Fuller等人，“氨基甲酸乙酯保护的α-氨基酸N羧酸内酸酐和肽合成”，《生物聚合物(肽科学)》，第40卷，183-205(1996年)和WO2018/034901中所述，可以通过形成N羧酸内酸酐来激活氨基酸与肽或模拟肽的偶联。

在某些示例性实施例中，根据图式1所示的固相合成，可通过会聚的方式合成本发明所述治疗方法中所使用的化合物。

在以下图式中，为供参考之用，

表示

其中，

表示固相支持体，可选表示连接基。

图式1

例如，可通过图式2中所示的方式合成下图所示的化合物。

图式2

在以下图式中，为供参考之用，

表示

其中，

表示固相支持体，可选表示连接基。

也可根据常规液相肽合成路线(例如，根据图式3)合成本发明技术所述的化合物。

图式3

例如，可通过图式4中所示的方式合成下图所示的化合物。

图式4

(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(D-Arg-DMT-NH((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊烷-1-基),7a)的合成

在某些实施例中，可根据以下图式5合成化合物7a(另参见WO2019/118878(通过本发明的引用，成为本发明的一部分))，其中，可根据以下图式6制备化合物12a。

化合物7a

图式5

步骤a：苄基(S)-2-((R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-胍基戊酰胺)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)丙酸(3a)的合成。在0℃温度下，在2,6-Dmt-OBn.HCl(2a，45.0g，134mmol)的ACN(800mL)悬浮液中加入NMM(32.7mL，298mmol)。搅拌反应混合物，直至反应混合物呈透明状。然后，在反应混合物中加入Boc-D-Arg-OH.HCl(1a，46.3g，149mmol)和HOBt.H₂O(9.11g，59.5mmol)，并搅拌15分钟。最后，加入EDC.HCl(38.5g，201mmol)，在0℃温度下将混合物搅拌4小时。然后，加入EtOAc(450mL)、1N HCl的卤水(300mL)溶液。用1N HCl的卤水(7×150mL)溶液、NaHCO₃/卤水(300mL，直至水层的pH值约为6-7)洗涤组合有机提取物，使用Na₂SO₄进行干燥，然后进行过滤和浓缩，产生86.0g(97％)Boc-D-Arg-DMT-OBn(3a)(无需进行进一步纯化，直接使用)。¹H-NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ7.33-7.18(m,5H),6.43(s,2H),5.06(s,2H)4.71(t,J＝7.8Hz,1H),4.07(t,J＝6.7Hz,1H),3.19-3.09(m,3H),3.03-2.97(m,1H),2.23(s,6H),1.72-1.65(m,1H),1.54-1.43(m,3H),1.45(s,9H)。

步骤b：(S)-2-((R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5-胍基戊酰胺)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)丙酸(4a)的合成。在Boc-D-Arg-DM-Tyr-OBn(3a，84.0g，142mmol)的MeOH(1000mL)溶液中加入Pd/C(10％w/w，14.0g)。在室温下，在反应混合物中吹扫氢气4小时。然后，通过滤纸过滤反应混合物，并用MeOH(150mL)进行洗涤。通过蒸发去除溶剂。获得并使用(无需进行进一步处理)白色泡沫产物4a(74.0g，93％)。¹H-NMR(400MHz,甲醇-d₄)δ6.44(s,2H),4.68(t,J＝7.2Hz,1H),4.04(t,J＝6.8Hz,1H),3.15–3.09(m,3H),3.02–2.94(m,1H),2.29(s,6H),1.74–1.59(m,1H),1.54–1.43(m,1H),1.45(s,9H)。

步骤c：叔丁基((6R,9S,12S)-1-氨基-12-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)-9-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-亚氨基-20,20-二甲基-7,10,18-三氧代-19-乙二酸-2,8,11,17-四氮杂二十一烷-6-基)氨基甲酸酯(6a)的合成。在4a(11.17g，24mmol)中加入DMF(200mL)，并在室温下搅拌15分钟，在所得悬浮液中加入12a(10.65g，20mmol)，并在室温下搅拌20分钟。加入HOBt(612mg，4.00mmol)后，在冰浴器上冷却悬浮液。加入一份EDC.HCl(5.38g，28mmol)，在冰浴器中冷却时将反应混合物搅拌2.5小时，然后在室温下搅拌2.5小时。使用EtOAc(1500mL)淬灭近均质反应混合物，并用卤水/0.5M HCl水溶液(1:1；400mL)洗涤10次所得溶液。在第6次和第9次洗涤时，在水相中形成凝胶。在加入iPrOH(40mL，在不同情况下)并反复摇晃后，再次清晰出现各层。此后，用卤水/饱和NaHCO₃水溶液(9:1；400mL)洗涤有机相6次。在第4次洗涤时，在水相中形成凝胶。在加入iPrOH(40mL)并反复摇晃后，轻松分离各层。用卤水(200mL)和水(100mL)洗涤有机相，在减压条件下去除溶剂。用水洗涤时，不要剧烈摇晃，以免面临相分离困难。因此，获得16.8g粗产物(6a，纯度：97.0％(通过HPLC)，白色非晶态固体)。¹H-NMR(300MHz,甲醇-d₄)ppm:δ＝7.33–7.16(m,5H),6.38(s,2H),5.18-5.07(m,1H),4.64-4.55(m,1H),4.10–3.92(m,3H),3.18-2.77(m,6H),2.20(s,6H),1.97-1.76(m,2H),1.75-1.14(m,8H),1.43(s,9H),1.41(s,9H)。

步骤d：(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(7a，但在本发明中也称为(Ia–化合物I的三盐酸盐))的合成。在DCM(100mL)中溶解6a(16.8g)并冷却至0℃后，滴加TFA(20mL)，在0℃温度下，将溶液搅拌10分钟，然后在室温下搅拌3小时(通过LC/MS证明，不含起始物料)。然后，使反应混合物蒸发(在0–5℃温度下)，再从DCM(100mL，在0–5℃温度下)中再次蒸发。通过反相(柱C-18，120G)快速色谱法对粗料(分为4部分)进行纯化。然后，在<40℃、减压条件下使所有溶剂蒸发。在异丙醇(100mL)中溶解白色泡沫，在0℃温度下，加入5mL HCl的异丙醇(5-6M)溶液，并在减压条件下蒸发。将此步骤重复三次。此外，加入100mL ACN，再一次使悬浮液蒸发。因此，获得7a白色粉末(即三盐酸盐)。¹H-NMR(300Mhz,甲醇-d₄)δ7.36–7.14(m,5H),6.40(s,2H),5.15(dd,J＝8.5,6.3Hz,1H),4.68(dd,J＝8.7,7.5Hz,1H),4.07(s,2H),3.97(t,J＝6.3Hz,1H),3.18(t,J＝6.9Hz,2H),3.11(dd,J＝14.2,8.8Hz,1H),2.95–2.84(m,3H),2.22(s,6H),2.02–1.59(m,6H),1.57–1.28(m,4H)。MS:EI-MS:m/z 608.4[M+1]。

(S)-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊烷-1-胺4-甲基苯磺酸酯(12a)的合成

图式6

步骤a：NH₂OH；步骤b：T₃P、NaHCO₃；步骤c：TEA；步骤d：PTSA

步骤a：N-羟基-2-苯乙脒(9a)的合成。在腈8a(1.0mol)的EtOH(1.2L)溶液中加入NH₂OH(50％水溶液，130g，2.0mol)。加热溶液，使其反流，并搅拌12小时。完成后，在减压条件下浓缩反应混合物。在EtOH(350mL)中重新溶解所得残留物，并在减压条件下再次进行浓缩(将此程序重复三次)。在己烷(350mL)中粉碎所得固体，进行过滤，并用己烷(100mL)进行洗涤，然后进行干燥，产生所需产物9a白色固体。(10.5kg；KF＝1295)，结果良好(通过HPLC确定，纯度>98.9A％；含量测定＝22.2w％，收率＝91％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ8.90(s,1H),7.28-7.18(m,5H),5.40(s,2H),3.25(s,2H)ppm。MS:(M+H)⁺:m/z＝151.1。

步骤b：(9H-芴-9-基)甲基叔丁基(1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊烷-1,5-二基)(S)-双氨基甲酸酯(11a)的合成。在受保护的光学纯N2-(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)-N6-(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸(10a，4.31kg，9.2mol)和羟基乙脒9a(1.1当量(“equiv.”或“eq.”))的乙酸乙酯溶液中加入NaHCO₃(3.0当量)。在25℃温度下，将混合物搅拌20分钟(min.)。然后，加入丙烷膦酸酐(T₃P，50％乙酸乙酯溶液，3.0当量(equiv.))，将反应混合物加热至80℃，并搅拌4小时(根据HPLC，化合物10a的转化率约为60％)。然后，加入化合物9a(1.1当量)，在80℃温度下，再将反应混合物搅拌20小时(剩余化合物10a的转化率约为10％)。将反应混合物冷却至室温，加入饱和NaHCO₃水溶液(2.0L)，然后，使用乙酸乙酯(3×1.0L)提取混合物。用卤水(1L)洗涤组合有机层，使用无水Na₂SO₄进行干燥，然后进行过滤和浓缩，产生粗残留物，通常通过硅胶柱色谱法对其进行纯化(石油醚(PE):EtOAc＝5：1)，产生粗产物、(9H-芴-9-基)甲基叔丁基(1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊烷-1,5-二基)(S)-双氨基甲酸酯(11a)、ACN溶液(19.7kg，含量测定＝20％，手性HPLC纯度＝99.12A％，收率＝73％)。¹H-NMR(300MHz,CDCl₃):δ7.78(d,J＝7.5Hz,2H),7.61(d,J＝6.3Hz,2H),7.42(t,J＝7.5Hz,2H),7.35-7.30(m,7H),5.52(br,1H),5.09-5.05(m,1H),4.56-4.37(m,3H),4.22(t,J＝6.6Hz,1H),4.08(s,2H),1.95-1.86(m,2H),1.48-1.42(m,11H)ppm。MS:(M-100+H)⁺:m/z＝483.2。

步骤c：叔丁基(S)-(5-氨基-5-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)-氨基甲酸酯(5a)的合成。在化合物(9H-芴-9-基)甲基叔丁基(1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊烷-1,5-二基)(S)-双氨基甲酸酯(11a)溶液中加入TEA(2.5当量)。在20～25℃温度下，使用机械搅拌器将混合物不断搅拌15小时。使用自来水和MTBE稀释反应混合物。使用MTBE提取分离水层一次。组合两个MTBE层，然后使用NH₄Cl进行洗涤。然后，加入无水Na₂SO₄，将溶液搅拌至少2小时，然后进行过滤并用MTBE进行洗涤，产生叔丁基(S)-(5-氨基-5-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)-氨基甲酸酯(5a)的MTBE溶液(32.9kg，含量测定＝6.5％，收率＝88％)。¹H-NMR(300MHz,DMSO-d₆):δ7.33-7.25(m,5H),6.78(br,1H),5.09-5.05(m,1H),4.56-4.37(m,3H),4.06(s,2H),3.98(t,J＝6.6Hz,1H),2.87-2.84(m,2H),2.10(s,2H),1.38-1.34(m,2H),1.24(s,9H),1.20-1.15(m,2H)ppm。MS:(M+H)⁺:m/z＝361.1。

步骤d：(S)-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊烷-1-胺4-甲基苯磺酸酯(12a)的合成。在粗叔丁基(S)-(5-氨基-5-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)-氨基甲酸酯(5a)的MTBE溶液中加入p-甲苯磺酸(PTSA)，产生(S)-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)-5-((叔丁氧基羰基)氨基)戊烷-1-胺4-甲基苯磺酸酯(12a)(2.7kg，收率＝85％，HPLC纯度>99％，ee>99％)白色固体。¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆):δ8.74(br,3H),7.48(d,J＝8.0Hz,2H),7.37-7.26(m,5H),7.11(d,J＝8.0Hz,2H),6.77(t,J＝5.2Hz,1H),4.82(t,J＝6.8Hz,1H),4,17(s,2H),2.90-2.86(m,2H),2.29(s,3H),1.39-1.36(m,11H),1.35-1.28(m,2H)ppm。MS:(M-172+H)⁺:m/z＝361.1。

治疗方法

以下讨论仅用作示例，并非进行限制。

本发明技术的一个方面包括在确诊患有、疑似患有或有可能患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的受试者中治疗ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的方法。在治疗应用中，向疑似患有或已患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的受试者施用包含线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))的组合物或药物，施用量应足以治愈或至少部分抑制疾病症状，包括其并发症和疾病发展中的中间病理表型。在本发明技术所述方法的某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。

本发明技术的其他方面包括在治疗或预防有需要的受试者ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的药物制备中使用一种组合物。适合向疑似患有或已患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的受试者施用包含线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))的组合物或药物，施用量应足以减轻受试者ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的一种或多种体征或症状。在本发明技术所述方法的某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。

可通过本领域已知的任何诊断或预后检测或其组合来确定受试者患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。

在治疗应用中，向受试者施用包含线粒体靶向模拟肽(如2(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))的组合物。在某些实施例中，每天施用所述模拟肽组合物一次、两次、三次、四次或五次。在某些实施例中，每天施用所述模拟肽组合物五次以上。此外，在某些实施例中，每天、每隔一天、每隔三天、每隔四天、每隔五天或每隔六天施用一次所述模拟肽组合物。在某些实施例中，每周、每两周、每三周或每月施用一次所述模拟肽组合物。在某些实施例中，施用所述模拟肽组合物1周、2周、3周、4周或5周。在某些实施例中，施用所述模拟肽6周或以上。在某些实施例中，施用所述模拟肽12周或以上。在某些实施例中，施用所述模拟肽不超过一年。在某些实施例中，施用所述模拟肽一年以上，或直至受试者的ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病体征或症状减轻。在某些实施例中，自受试者确诊患有、疑似患有或可能患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病至生命结束，根据医生的建议方案施用所述模拟肽。

根据本治疗方法进行治疗的受试者可以是任何哺乳动物，包括农场动物(如羊、猪、牛和马)；宠物(如狗和猫)；实验室动物(如大鼠、小鼠和家兔)。在某些实施例中，所述哺乳动物为人类。

在某些实施例中，使用一种或多种线粒体靶向模拟肽对确诊患有或疑似患有ALS的受试者进行治疗，可改善或消除以下一种或多种ALS症状：肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪和过早死亡。在某些实施例中，使用一种或多种线粒体靶向模拟肽对确诊患有或疑似患有ALS的受试者进行治疗，可改善或消除脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达水平提高症状。在某些实施例中，使用一种或多种线粒体靶向模拟肽对确诊患有或疑似患有ALS的受试者进行治疗，可改善或消除NfL在血浆中的积累。在某些实施例中，使用一种或多种线粒体靶向模拟肽对确诊患有或疑似患有ALS的受试者进行治疗，受试者的生存期/寿命延长。在某些实施例中，通过检测受试者症状是否较以下一项或多项有所改善，确定使用线粒体靶向模拟肽的治疗是否成功：(1)在开始治疗前或期间检测到的基线测量或症状水平；(2)一个对照受试者或一群对照受试者的测量或症状水平，其中，所述对照受试者出现一种或多种ALS症状，并且(i)未向其施用线粒体靶向模拟肽，或(ii)已向其施用对照肽或模拟肽；或(3)一项标准。

在某些实施例中，使用一种或多种线粒体靶向模拟肽对确诊患有或疑似患有α-共核蛋白病的受试者进行治疗，可改善或消除一种或多种α-共核蛋白病症状，包括但不限于受试者中多巴胺能神经元的损失。

在某些实施例中，使用一种或多种线粒体靶向模拟肽对确诊患有或疑似患有TDP-43蛋白病的受试者进行治疗，可改善或消除一种或多种TDP-43蛋白病症状，包括但不限于受试者的神经突长度减少。

预防方法

一方面，本发明技术提供了一种在可能患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的受试者中预防或延迟ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病或其一种或多种症状发作的方法。在预防应用中，向疑似患有或可能患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的受试者施用包含线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))的药物组合物或药物，施用量应足以消除或降低风险，或延迟疾病发作，包括疾病的生化、组织学和/或行为症状、其并发症和疾病发展中的中间病理表型。在本发明技术所述方法的某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。

可在出现疾病或障碍特有的症状前施用预防性线粒体靶向模拟肽，从而预防或延迟疾病或障碍的进展。

在预防应用中，向受试者施用包含线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))的组合物。在某些实施例中，每天施用所述模拟肽组合物一次、两次、三次、四次或五次。在某些实施例中，每天施用所述模拟肽组合物五次以上。此外，在某些实施例中，每天、每隔一天、每隔三天、每隔四天、每隔五天或每隔六天施用一次所述模拟肽组合物。在某些实施例中，每周、每两周、每三周或每月施用一次所述模拟肽组合物。在某些实施例中，施用所述模拟肽组合物1周、2周、3周、4周或5周。在某些实施例中，施用所述模拟肽6周或以上。在某些实施例中，施用所述模拟肽12周或以上。在某些实施例中，施用所述模拟肽不超过一年。在某些实施例中，施用所述模拟肽一年以上。在某些实施例中，自受试者确诊患有、疑似患有或可能患有ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病至生命结束，根据医生的建议方案施用所述模拟肽。

在某些实施例中，使用线粒体靶向模拟肽进行治疗，将预防或延迟以下一种或多种症状的发作：肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪和/或过早死亡。在某些实施例中，使用线粒体靶向模拟肽进行治疗，将预防或延迟脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达水平提高的发作。在某些实施例中，使用线粒体靶向模拟肽进行治疗，将预防或延迟神经丝轻链(NfL)在血浆中积累的发作。在某些实施例中，使用线粒体靶向模拟肽进行治疗，将预防或延迟过早死亡。在某些实施例中，治疗是指延迟ALS神经症状的发作(根据本发明所述的神经功能评分进行评估)。

在某些实施例中，使用线粒体靶向模拟肽进行治疗，将预防、延迟或减轻受试者中多巴胺能神经元的损失。

在某些实施例中，使用线粒体靶向模拟肽进行治疗，将预防或延迟受试者的神经突长度减少症状。

根据本预防方法进行治疗的哺乳动物可以是任何哺乳动物，包括农场动物(如羊、猪、牛和马)；宠物(如狗和猫)；实验室动物(如大鼠、小鼠和家兔)。在某些实施例中，所述哺乳动物为人类。

确定线粒体靶向模拟肽治疗剂的生物作用

在各个实施例中，进行适当的体外或体内检测，确定特定线粒体靶向模拟肽治疗剂的作用以及其是否适用于治疗。在各个实施例中，可使用代表性动物模型进行体外检测，确定给定线粒体靶向模拟肽治疗剂是否对减少或消除ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的体征和/或症状发挥预期作用。

动物模型

在人类受试者中进行检测前，可在适当的动物模型系统(包括但不限于大鼠、小鼠、鸡、牛、猴、家兔等)中检测治疗所用的化合物。同样，对于体内检测，可在向人类受试者施用前，使用本领域已知的任何动物模型系统。在某些实施例中，体外或体内检测旨在确定(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)的生物功能。在某些实施例中，所述动物模型为ALS的SOD1 G93A小鼠模型。在某些实施例中，所述动物模型为Sprague Dawley大鼠。在某些实施例中，所述动物模型为突变体α-突触核蛋白转导小鼠。在某些实施例中，所述动物模型为prp-TDP-43^A315T-UeGFP小鼠模型(Gautam等人，《神经病理学学报》，2019年1月；137(1):47-69)。

给药方式和有效剂量

可使用本领域已知用于使细胞、器官或组织与本发明技术所述线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))接触的任何方法。在本发明技术所述方法的某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。适当的方法包括体外、离体或体内方法。体内方法通常包括向哺乳动物(适当地，人类)施用线粒体靶向模拟肽。当在体内用于治疗时，向受试者施用有效量(即，具有预期治疗作用的量)的所述线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))。剂量和给药方案将取决于受试者的疾病、障碍或病症程度、所用特定线粒体靶向模拟肽的特性(例如，其治疗指数)、受试者以及受试者病史。

可在临床前试验和临床试验中通过医生和临床医生所熟知的方法确定有效量。可通过本领域众所周知的任何药物化合物给药方法，向有需要的哺乳动物施用所述方法中所用有效量的模拟肽。可全身或局部施用所述模拟肽。

所述模拟肽制剂可为可药用盐。术语“可药用盐”是指使用一种碱或酸制备的一种可向患者施用(如哺乳动物)的盐(例如，在给定给药方案下在哺乳动物中具有可接受安全性的盐)。但是，应理解，所述盐无需为可药用盐，如不打算向患者施用的中间化合物的盐。可药用盐可源自可药用无机或有机碱以及可药用无机或有机酸。此外，当肽或模拟肽包含一个碱性基团(如胺、吡啶或咪唑)以及一个酸性基团(如羧酸或四唑)时，在本发明所使用的术语“盐”内可能形成并包含两性离子。源自可药用无机碱的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、正铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、正锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐和锌盐等。源自可药用有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺(包括取代胺、环胺、天然胺等，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基吗啉、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、海巴胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三甲胺(NEt3)、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等)的盐，所述盐包括有机碱的质子化形式(例如，[HNEt₃]⁺)。源自可药用无机酸的盐包括硼酸、碳酸、氢卤酸(氢溴酸、盐酸、氢氟酸或氢碘酸)、硝酸、磷酸、氨基磺酸和硫酸的盐。源自可药用有机酸的盐包括脂肪族羟基酸(例如，柠檬酸、葡糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、苹果酸和酒石酸)、脂肪族一元羧酸(例如，乙酸、丁酸、甲酸、丙酸和三氟乙酸)、氨基酸(例如，天冬氨酸和谷氨酸)、芳族羧酸(例如苯甲酸、对氯苯甲酸、二苯乙酸、龙胆酸、马尿酸和三苯乙酸)、芳族羟基酸(例如，邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-羧酸和3-羟基萘-2-羧酸)、抗坏血酸、二羧酸(例如，延胡索酸、马来酸、草酸和琥珀酸)、葡糖醛酸、扁桃酸、粘液酸、烟酸、乳清酸、帕莫酸、泛酸、磺酸(例如，苯磺酸、樟脑磺酸、乙二磺酸、乙磺酸、羟乙磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸和对甲苯磺酸(PTSA))、昔萘酸等的盐。在某些实施例中，从包括以下几项的一组中选择所述可药用平衡离子：乙酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物、樟脑磺酸盐、氯化物、氯茶碱酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、水杨酸盐、硝酸盐、十八烷酸盐、油酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。在某些实施例中，所述盐为酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。在某些实施例中，所述模拟肽制剂可为单盐酸盐、双盐酸盐或三盐酸盐(例如，(Ia))。

可将本发明所述的线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))包含在药物组合物(可向受试者单独或联合施用以治疗或预防本发明所述的疾病、障碍或病症)中。可使用其他化合物(如治疗剂、肽、另一种模拟肽或其混合物等)配制所述模拟肽。在本发明技术所述方法的某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。此类组合物通常包含活性剂和一种可药用载体。在某些实施例中，可将所述药物组合物用作可向ALS、α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病受试者施用的药物或用于此类药物的制备中。可药用载体包括盐水、溶剂、分散介质、包衣、抗菌防霉剂、等渗吸收延迟剂等，与药物施用相容。也可将补充活性化合物加入组合物中。

通常以与其预期给药途径相容的方式配制药物组合物。给药途径示例包括胃肠外(例如，静脉内、皮内、腹膜内或皮下)、口服、玻璃体内、吸入、经皮(局部)、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入和粘膜给药。在某些实施例中，所述给药途径为口服。在某些实施例中，所述给药途径为皮下给药。用于胃肠外、皮内或皮外应用的溶液或混悬剂可包括以下组分：无菌稀释剂(如注射用水、盐溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂)；抗菌剂(如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯)；抗氧化剂(如抗坏血酸或亚硫酸氢钠)；螯合剂(如乙二胺四乙酸)；缓冲剂(如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐)以及用于调节张力的药剂(如氯化钠或葡萄糖)。可以使用酸或碱(如盐酸或氢氧化钠)来调节pH值。胃肠外制剂可封装在由玻璃或塑料制成的安瓿瓶、一次性注射器或多剂量瓶中。为便于患者或治疗医生使用，单独或在包含所有必要设备(例如，药瓶、稀释剂瓶、注射器和针头)的套件中提供一个疗程(例如，7天)的制剂。

注射用药物组合物可包括无菌水溶液(具有水溶性)或分散体以及用于临时制备无菌注射溶液或分散体的无菌粉末。对于静脉内给药，适当的载体包括生理盐水、抑菌水、CREMOPHOR EL^TM(巴斯夫公司(新泽西州帕西帕尼))或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，胃肠外给药组合物必须无菌，且应为容易注射的液体。组合物应在生产和储存条件下稳定，并且必须在保存时防止微生物(如细菌和真菌)的污染作用。

包含线粒体靶向模拟肽的组合物可包括载体，可以是溶剂或分散介质，包含水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其适当的混合物。通过使用卵磷脂等涂层、在分散的情况下保持所需粒度以及使用表面活性剂，可保持适当的流动性。使用羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等各种抗菌防霉剂，可防止微生物作用。为了防止氧化，可包含谷胱甘肽及其他抗氧化剂。在许多情况下，在组合物中包含等渗剂(例如，糖、多元醇(如甘露糖醇)、山梨糖醇或氯化钠)很有利。在组合物中加入延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝或明胶)，可延长注射组合物的吸收。

向适当的试剂中加入所需量的本活性化合物以及上述一种成分或成分组合，然后按需进行过滤灭菌，即可制备无菌注射溶液。通常向无菌运载体(包含基础分散介质以及上述所需其他成分)中加入活性化合物，制备分散体。对于制备无菌注射溶液的无菌粉末，典型的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，通过此类方法，可从其先前的无菌过滤溶液中产生包含活性成分及任何附加所需成分的粉末。

口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用载体。为了进行口服治疗给药，所述活性化合物可包含赋形剂，并以片剂、含片或胶囊剂(例如，明胶胶囊)的形式使用。也可使用液体载体(用作漱口水)制备口服组合物。药学上相容的结合剂和/或辅料可作为组合物的一部分包含在内。片剂、胶囊剂、丸剂、含片等可包含以下任何成分或性质相似的化合物：结合剂(如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶)；赋形剂(如淀粉或乳糖)；崩解剂(如海藻酸、Primogel或玉米淀粉)；润滑剂(如硬脂酸镁或硬脂酸酯)；助流剂(如胶体二氧化硅)；甜味剂(如蔗糖或糖精)；或调味剂(如薄荷、水杨酸甲酯或橙香精)。

可使用惰性物质稀释或增加化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物的体积。这些稀释剂可包括碳水化合物，尤其是甘露糖醇、乳糖、无水乳糖、纤维素、蔗糖、改性葡聚糖和淀粉。某些无机盐也可用作填充剂，包括三磷酸钙、碳酸镁和氯化钠。一些商用稀释剂包括Fast-Flo、Emdex、STA-Rx 1500、Emcompress和Avicel。

可在配制化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物时包含崩解剂以及惰性物质，形成固体剂型。用作崩解剂的物质包括但不限于淀粉，包括基于淀粉的商用崩解剂Explotab。可使用羧甲基淀粉钠、Amberlite、羧甲基纤维素钠、超支链淀粉、海藻酸钠、明胶、橙皮、酸性羧甲基纤维素、天然海绵和膨润土。另一种崩解剂形式为不溶性阳离子交换树脂。可将粉状胶用作崩解剂和结合剂，其中可包括琼脂、梧桐树胶或黄蓍胶等粉状胶。也可将海藻酸及其钠盐用作崩解剂。

结合剂可用于将化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物以及惰性物质固定在一起，形成硬片剂，并包含由阿拉伯胶、黄蓍胶、淀粉和明胶等天然产物组成的物质。还包括甲基纤维素(MC)、乙基纤维素(EC)和羧甲基纤维素(CMC)。可在醇溶液中包含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)，使治疗剂成粒状。

可在配制化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物时包含减摩剂，以防在配制过程中粘连。可在治疗剂和模壁之间加一层润滑剂，所述润滑剂包括但不限于硬脂酸(包括其镁盐和钙盐)、聚四氟乙烯(PTFE)、液体石蜡、植物油和蜡。也可使用月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁、聚乙二醇(不同分子量)、Carbowax 4000和6000等可溶性润滑剂。

可加入助流剂，从而在配制时改善药物流动特性并在压缩时促进重排。所述助流剂可包括淀粉、滑石粉、气相硅胶、热解硅胶和水合硅铝酸。

为了促进化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物溶解成水相环境，可加入表面活性剂，作为润湿剂。表面活性剂可包括月桂基硫酸钠、磺基琥珀酸钠二辛酯和磺酸钠二辛酯等阴离子洗涤剂。可使用的阴离子洗涤剂可包括苯扎氯铵和苄索氯铵。在配制时可作为表面活性剂包含在内的潜在非离子洗涤剂包括聚桂醇400、硬脂酸聚乙二醇40、聚氧乙烯氢化蓖麻油10、50和60、单硬脂酸甘油酯、聚山梨醇酯40、60、65和80、蔗糖脂肪酸酯、甲基纤维素和羧甲基纤维素。在配制本技术所述的化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物，或单独或按不同比率以混合物的形式配制衍生物时，这些表面活性剂可能存在。

可口服的药物制剂包括由明胶制成的推合胶囊以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨糖醇)制成的密封软胶囊。所述推合胶囊可包含活性成分以及填充料(如乳糖)、结合剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石粉或硬脂酸镁)以及稳定剂(可选)。在软胶囊中，可在脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇等适当的液体中溶解或悬浮活性化合物。此外，可加入稳定剂。也可使用口服微球。在本领域，已清晰定义此类微球。应以适用于给药途径的剂量施用所有口服制剂。

对于吸入给药，可使用加压包或雾化器以气雾剂喷雾的形式递送根据本申请使用的化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物，其中，将使用适当的抛射剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适当的气体。在某些实施例中，可使用加压容器、施配器(包含适当的抛射剂，例如，二氧化碳等气体)或雾化器以气雾剂喷雾的形式递送所述化合物。此类方法包括第6,468,798号美国专利中所述的方法。在使用加压气雾剂时，可设置一个定量递送阀门，从而确定剂量单位。用于吸入器或吹药器的明胶胶囊和盒体可包含化合物以及适当粉末基质(乳糖或淀粉)的粉末混合物。

吸入时，化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物可递送至哺乳动物的肺部，并穿过肺上皮内膜进入血流。其他吸入分子报告包括Adjei et等人，《药学研究》，7:565-569(1990年)；Adjei等人，《国际药学杂志》，63:135-144(1990年)(醋酸亮丙瑞林)；Braquet等人，《美国心血管药理杂志》，13(增刊5):143-146(1989年)(内皮素-1)；Hubbard等人，《内科学年鉴》，3:206-212(1989年)(抗胰蛋白酶)；Smith等人，1989年，《临床研究杂志》，84:1145-1146(a-1-蛋白酶)；Oswein等人，1990年，“蛋白雾化”，《呼吸道药物递送研讨会会报II》，科罗拉多州吉斯通，3月，(重组人生长激素)；Debs等人，1988年，《免疫学杂志》，140:3482-3488(干扰素γ和肿瘤坏死因子α)以及Platz等人，第5,284,656号美国专利(粒细胞集落刺激因子；通过本发明的引用，成为本发明的一部分)。第5,451,569号美国专利(Wong等人，发布日期：1995年9月19日；通过本发明的引用，成为本发明的一部分)对具有全身作用的肺部药物递送方法和组合物进行了说明。

考虑在本技术实践中使用适用于肺部递送治疗产品的各种机械器械，包括但不限于本领域的技术人员所熟知的雾化器、定量吸入器和干粉吸入器。

适用于本技术实践的商用器械的一些特定示例为由马林克罗公司(密苏里州圣路易斯)生产的Ultravent雾化器；由Marquest医疗产品公司(科罗拉多州恩格尔伍德)生产的Acorn II雾化器；由葛兰素公司(北卡罗来纳州三角科技园)生产的Ventolin定量吸入器；以及由费森斯公司(马萨诸塞州贝德福德)生产的Spinhaler干粉吸入器。

对于眼部或眼内制剂，可对眼睛或眼睛附近的区域使用本发明所述任何适当的线粒体靶向模拟肽递送模式(包含或不含治疗剂、肽或其他模拟肽，如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))。有关眼部制剂，通常参见Mitra(编辑)，《眼部药物递送系统》，马塞尔·德克尔公司(纽约州纽约)，(1993年)，另参见Havener,W.H.，《眼科药理学》，C.V.Mosby Co.出版社(圣路易斯)，(1983年)。适用于眼内或眼睛附近给药的制剂的非限制性示例包括但不限于眼用嵌入剂、微型片剂和局部制剂，如滴眼液、乳膏和原位凝胶。在一个实施例中，隐形眼镜涂有本发明所述的线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))。在某些实施例中，向眼部给药时，单剂量包含0.1ng-5000μg、1ng-500μg或10ng-100μg线粒体靶向模拟肽。

滴眼液包含一种无菌液体制剂，可直接向眼部给药。在某些实施例中，包含本发明所述的一种或多种线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))的滴眼液进一步包含一种或多种防腐剂。在某些实施例中，滴眼液的最适pH值等于泪液的pH值，约为7.4。

原位凝胶为粘性液体，当受到外部因素(如适当的pH值、温度和存在电解质)的影响时，能够进行溶胶-凝胶转变。由于这种特性，眼球表面的药物引流速度缓慢，活性成分的生物利用度提高。常用于原位凝胶制剂中的聚合物包括但不限于结冷胶、泊咯沙姆和邻苯二甲酸乙酸纤维素。

为了进行局部给药，可将化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物配制为本领域所熟知的溶液、凝胶、软膏、乳膏、混悬剂等。乳膏为外用半固体剂型，如局部用于眼睛或皮肤。在某些实施例中，乳膏包含一种熔点或软化点接近核心体温的固体或半固体烃类基质。在某些实施例中，涂在眼睛上的乳膏会分解成小滴，在结膜囊上停留较长时间，因此生物生物利用度提高。

眼用嵌入剂为固体或半固体剂型，不会存在传统眼科药物剂型的缺点。这种剂型不易受到防御机制的影响(如通过鼻泪管流出)，可在结膜囊上停留较长时间，并且比传统剂型更稳定。这种剂型还具有以下优点：实现一种或多种线粒体靶向模拟肽的精确给药、以恒定速度缓慢释放一种或多种线粒体靶向模拟肽以及限制一种或多种线粒体靶向模拟肽的全身吸收。在某些实施例中，眼用嵌入剂包含本发明所述的一种或多种线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))以及一种或多种聚合物材料。所述聚合物材料包括但不限于甲基纤维素及其衍生物(例如，羟丙基甲基纤维素(HPMC))、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮(PVP K-90)、聚乙烯醇、壳聚糖、羧甲基壳聚糖、明胶以及上述聚合物的各种混合物。

微型片剂为可生物降解的固体药物剂型，在涂抹到结膜囊上后，会转变成凝胶，从而延长活性成分与眼球表面的接触时间，进而提高活性成分的生物利用度。微型片剂的优点包括：易于涂抹到结膜囊上；可抵抗防御机制(如流泪或通过鼻泪管流出)；由于存在粘膜粘着聚合物，与角膜接触时间长；由于外载体层溶胀，在涂抹位置逐渐从制剂中释放活性成分。微型片剂包含本发明所述的一种或多种线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))以及一种或多种聚合物。适用于微型片剂的聚合物的非限制性示例包括纤维素衍生物(如羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟乙基纤维素(HEC)、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素)、丙烯酸酯(例如，聚丙烯酸及其交联形式)、卡波普或卡波姆、壳聚糖和淀粉(例如，滚筒干燥的蜡质玉米淀粉)。在某些实施例中，微型片剂进一步包含一种或多种赋形剂。赋形剂的非限制性示例包括甘露糖醇和硬脂酸镁。

眼部或眼内制剂可包含无毒辅助物质，如使用时无害的抗菌组分，例如，硫柳汞、苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、溴化苄基十二酸铵、苯甲醇或苯乙醇；缓冲成分，如氯化钠、硼酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠或葡糖酸盐缓冲液；以及其他常规成分，如脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、乙二胺四乙酸等。

在某些实施例中，增加包含本发明所述一种或多种线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))的眼用制剂的粘度，以改善与角膜的接触，并提高眼内生物利用度。为了增加粘度，可加入高分子量亲水性聚合物，此类聚合物不会通过生物膜扩散，在水中可形成三维网络。此类聚合物的非限制性示例包括聚乙烯醇、泊洛沙姆、透明质酸、卡波姆和多糖、纤维素衍生物、结冷胶和黄原胶。

也可通过粘膜或经皮途径完成本发明所述化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物的全身给药。为了实现粘膜或经皮给药，可在制剂中使用适合待渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂在本领域众所周知，包括洗涤剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物(粘膜给药)。可使用鼻腔喷雾剂完成粘膜给药。为了实现经皮给药，将活性化合物配制为本领域众所周知的的乳膏、油膏、凝胶或软膏。在一个实施例中，可通过离子透入实现经皮给药。

可在载体系统中配制化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物。所述载体可以是胶体系统。所述胶体系统可以是脂质体、磷脂双层运载体。在一个实施例中，在保持所述化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物完整性的同时，将其封装在脂质体中。本领域的技术人员理解，存在各种脂质体制备方法。(参见Lichtenberg等人，《生物化学分析方法》，33:337-462(1988年)；Anselem等人，《脂质体技术》，CRC出版社(1993年))。脂质体制剂可延迟清除，增加细胞摄取(参见Reddy，《药物治疗学年鉴》，34(7-8):915-923(2000))。也可将一种活性剂(包括但不限于可溶性、不溶性、渗透性、不透、可生物降解或胃滞留聚合物或脂质体)装入使用可药用成分制备的颗粒中。此类颗粒包括但不限于纳米颗粒、生物可降解纳米颗粒、微粒、生物可降解微粒、纳米微球、生物可降解纳米微球、微球、可生物降解微球、胶囊、乳剂、脂质体、胶束和病毒载体系统。

所述载体也可以是聚合物，例如，可生物降解、生物相容聚合物基质。在一个实施例中，在保持组合物完整性的同时，可将所述化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物嵌入聚合物基质中。所述聚合物可以是天然聚合物(如多肽、蛋白或多糖)或合成聚合物(如聚α羟基酸)。示例包括由胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、乙酸纤维素、硝酸纤维素、多糖、纤维蛋白、明胶及其组合制成的载体。在一个实施例中，所述聚合物为聚乳酸(PLA)或乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)。可以各种形式和大小制备并分离聚合物基质，包括微球和纳米微球。聚合物制剂可延长疗效的持续时间。(参见Reddy，《药物治疗学年鉴》，34(7-8):915-923(2000))。在临床试验中，已使用人生长激素(hGH)的聚合物制剂。(参见Kozarich和Rich，《化学生物学》，2:548-552(1998年))。

聚合物微球持续释放制剂的示例见PCT出版物WO 99/15154(Tracy等人)、第5,674,534号和第5,716,644号美国专利(Zale等人)、PCT出版物WO 96/40073(Zale等人)以及PCT出版物WO 00/38651(Shah等人)。第5,674,534号和第5,716,644号美国专利以及PCT出版物WO 96/40073对包含促红细胞生成素颗粒(具有盐聚集稳定性)的一种聚合物基质进行了说明。

在某些实施例中，使用载体制备所述治疗化合物，此类载体将防止治疗化合物被迅速排出体外，如控释制剂，包括植入剂和微胶囊递送系统。可使用可生物降解、生物相容聚合物，如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。可采用已知技术制备此类制剂。也可通过商业渠道从Alza公司和Nova制药公司获得这些材料。也可将脂质体悬浮液(包含靶向特异性细胞(含有细胞特异性抗原的单克隆抗体)的脂质体)用作可药用载体。可根据本领域的技术人员已知的方法制备这些材料，例如，如第4,522,811号美国专利所述。

所述治疗化合物还可用于加强细胞内递送。例如，脂质体递送系统在本领域中众所周知，参见Chonn和Cullis，“脂质体药物递送系统的研究进展”，《生物技术近期述评》，6:698-708(1995年)；Weiner，“蛋白递送用脂质体：选择生产与研制工艺”，《免疫方法》，4(3):201-9(1994年)；以及Gregoriadis，“药物递送用工程脂质体：进展与问题”，《生物技术趋势》，13(12):527-37(1995年)。在Mizguchi等人，《肿瘤通讯》，100:63-69(1996年)中，对在体内和体外使用膜融合脂质体向细胞递送蛋白进行了说明。

除上述制剂之外，也可将化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物配制为储库型制剂。可使用适当的聚合物或疏水性材料(例如，在可用油中的乳剂)或离子交换树脂配制此类长效制剂，或将其配制为微溶性衍生物(例如，配制为微溶性盐)。

可在颗粒或聚合物微球中提供化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物。聚合物微球持续释放制剂的示例见PCT出版物WO 99/15154(Tracy等人)、第5,674,534号和第5,716,644号美国专利(Zale等人)、PCT出版物WO 96/40073(Zale等人)以及PCT出版物WO 00/38651(Shah等人)。第5,674,534号和第5,716,644号美国专利以及PCT出版物WO 96/40073对包含促红细胞生成素颗粒(具有盐聚集稳定性)的一种聚合物基质进行了说明。所述颗粒的核心处包含治疗剂，周围包覆包衣(包括但限于肠溶包衣)。所述化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物也可分散在整个颗粒中。所述化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物也可吸附到颗粒中。所述颗粒可具有任何级别的释放动力学性质，包括零级释放、一级释放、二级释放、迟释、持续释放、速释及其任何组合。除所述化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物之外，所述颗粒还可包括药学和医学领域常用的任何材料，包括但不限于溶蚀性、非溶蚀性、可生物降解的或不可生物降解的材料或其组合。所述颗粒可以是微胶囊，包含本技术所述的化合物，呈溶液或半固体态。所述颗粒可具有各种形状。

可使用不可生物降解和可生物降解聚合物材料生产用于递送所述化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物的颗粒。此类聚合物可以是天然聚合物或合成聚合物。所述聚合物可以是天然聚合物(如多肽、蛋白或多糖)或合成聚合物(如聚α羟基酸)。示例包括由胶原蛋白、纤连蛋白、弹性蛋白、乙酸纤维素、硝酸纤维素、多糖、纤维蛋白、明胶及其组合制成的载体。特别相关的生物粘附聚合物包括生物溶蚀性水凝胶(如Sawhney H S等人，1993年，《大分子》，26:581-7所述，其指导通过本发明的引用，成为本发明的一部分)。其中包括聚透明质酸、酪蛋白、明胶、明胶蛋白、聚酐、聚丙烯酸、海藻酸盐、壳聚糖、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸乙酯)、聚(甲基丙烯酸丁酯)、聚(甲基丙烯酸异丁酯)、聚(甲基丙烯酸己酯)、聚(甲基丙烯酸异癸酯)、聚(甲基丙烯酸月桂酯)、聚(甲基丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)和聚己内酯。

可在控释系统中包含所述化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物。术语“控释”是指以控释形式从制剂中释放药物的任何含药制剂。这是指速释以及非速释制剂，非速释制剂包括但不限于持续释放制剂和迟释制剂。术语“持续释放”(也称为“缓释”)在传统意义上是指在较长一段时间内逐渐释放药物的一种药物剂型，优选但并不一定导致在较长一段时间内基本保持恒定血药浓度。术语“迟释”在传统意义上是指一种药物制剂，在其给药以及药物释放之间存在时间延迟。“迟释”可能涉及也可能不涉及在较长一段时间内逐渐释放药物，因此可能是也可能不是“持续释放”。

长效持续释放植入剂特别适用于治疗慢性病。在本发明中，“长效”释放是指植入剂(储库)可在至少7天(优选30-60天)内递送治疗水平的活性成分(即化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物)。长效持续释放植入剂对于本领域的普通技术人员众所周知，包括上述一些释药系统。

可通过细胞培养或实验动物的标准药物程序确定任何化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物的剂量、毒性和疗效，例如，用于确定LD50(50％群体致死剂量)和ED50(50％群体治疗有效剂量)。毒性作用和治疗作用之间的剂量比为治疗指数，可以用LD50/ED50比表示。治疗指数较高的化合物很有利。虽然可使用具有毒副作用的化合物，但是，应小心设计递送系统，使此类化合物靶向受影响组织部位，以尽量减少对未感染细胞的潜在损伤，从而减少副作用。

在制定用于人类的剂量范围时，可使用从细胞培养检测和动物研究中获得的数据。此类化合物的剂量可在包括ED50(具有极小毒性或没有毒性)的循环浓度范围内。根据所用剂量和给药途径，在此范围内，所述剂量可能有所不同。对于所述方法中所使用的任何化合物，可从细胞培养检测中对治疗有效剂量进行初始估计。可在动物模型中制定剂量，以达到循环血药浓度范围，此范围包括IC50(在细胞培养中确定)，即，实现症状半最大抑制的受试化合物浓度。可使用此类信息来准确确定用于人类的有用剂量。可通过高效液相色谱法测量血药浓度。

一般而言，有效量的线粒体靶向模拟肽为每天约0.000001mg/kg体重至约10000mg/kg体重，足以实现治疗或预防作用。适当地，所述剂量范围为每天约0.0001mg/kg体重至约100mg/kg体重。例如，剂量可为每天、每两天或每三天1mg/kg体重或10mg/kg体重，或每周、每两周或每三周在1-10mg/kg的范围内。在一个实施例中，单剂量肽或模拟肽的范围为0.001-10000mg/kg体重。在一个实施例中，每递送1毫升，载体中所述线粒体靶向模拟肽的浓度为0.2-2000mg。示例性治疗方案为每天或每周给药一次。在治疗应用中，有时需要在相对较短的时间间隔内使用相对较高的剂量，直至疾病进展减慢或终止，或直至受试者的疾病症状得到部分或完全改善。此后，可按预防方案对患者给药。

在某些实施例中，可将治疗有效量的线粒体靶向模拟肽定义为靶组织处10^-12-10^-6摩尔(例如，约10^-7摩尔)的模拟肽浓度。可通过0.001-100mg/kg的全身剂量或按体表面积计算的当量剂量来递送此浓度。将对剂量方案进行优化，以在靶组织处保持治疗浓度，如通过每天或每周给药，但也包括连续给药(例如，胃肠外输注或经皮给药)。

本领域的技术人员将理解，某些因素可能影响有效治疗受试者所需的剂量和时间，包括但不限于受试者疾病或障碍的严重程度、先前的治疗、总体健康状况和/或年龄以及其他现有疾病。此外，使用本发明所述治疗有效量的化合物、治疗剂、肽、模拟肽或其混合物治疗受试者可包括单次治疗或一系列治疗。

联合疗法

在某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))可与一种或多种预防或治疗ALS的其他疗法联合施用。在本发明技术所述方法的某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。在某些实施例中，其他疗法包括但不限于施用利鲁唑

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平

或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

在某些实施例中，所述其他疗法包括elamipretide(即SS-31或bendavia)联合给药。

在某些实施例中，单独、同时或按顺序施用所述线粒体靶向模拟肽以及利鲁唑。在某些实施例中，利鲁唑的剂量为约0.5mg/kg至约2mg/kg、约1mg/kg至约2mg/kg、约0.5mg/kg至约5mg/kg、约5mg/kg至约100mg/kg、约10mg/kg至约75mg/kg或约25mg/kg至约50mg/kg。在某些实施例中，白藜芦醇的剂量为0.8mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约40mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg、约100mg/kg、约110mg/kg、约120mg/kg、约125mg/kg、约130mg/kg、约140mg/kg、约150mg/kg、约160mg/kg、约175mg/kg、约180mg/kg、约190mg/kg、约200mg/kg或更多。在某些实施例中，按以下方案施用利鲁唑：每天两次、每天一次、每48小时一次、每72小时一次、每周两次、每周一次、每两周一次、每月一次、每2个月一次、每3个月一次或每6个月一次。在某些实施例中，利鲁唑的剂量取决于受试者的体重和/或年龄。

在某些实施例中，单独、同时或按顺序施用所述线粒体靶向模拟肽以及美卡舍明。在某些实施例中，美卡舍明的剂量为约0.5mg/kg至约2mg/kg、约1mg/kg至约2mg/kg、约0.5mg/kg至约5mg/kg、约5mg/kg至约100mg/kg、约10mg/kg至约75mg/kg或约25mg/kg至约50mg/kg。在某些实施例中，白藜芦醇的剂量为0.8mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约40mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg、约100mg/kg、约110mg/kg、约120mg/kg、约125mg/kg、约130mg/kg、约140mg/kg、约150mg/kg、约160mg/kg、约175mg/kg、约180mg/kg、约190mg/kg、约200mg/kg或更多。在某些实施例中，按以下方案施用美卡舍明：每天两次、每天一次、每48小时一次、每72小时一次、每周两次、每周一次、每两周一次、每月一次、每2个月一次、每3个月一次或每6个月一次。在某些实施例中，美卡舍明的剂量取决于受试者的体重和/或年龄。

在一个实施例中，向受试者联合施用至少一种线粒体靶向模拟肽以及其他治疗剂，以产生协同治疗作用。例如，施用至少一种线粒体靶向模拟肽以及一种或多种预防或治疗ALS的其他治疗剂将在预防或治疗疾病方面的作用大于加性作用。因此，在治疗或预防ALS时，可使用较低剂量的一种或多种任何单独治疗剂，从而增加疗效，减少副作用。在某些实施例中，联合施用至少一种线粒体靶向模拟肽以及以下一项或多项：利鲁唑

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平

或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

以在预防或治疗ALS时产生协同作用。在某些实施例中，所述其他治疗剂为elamipretide(也称为SS-31或bendavia)。

在某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))可与一种或多种预防或治疗α-共核蛋白病的其他疗法联合施用。在本发明技术所述方法的某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。在某些实施例中，所述其他疗法包括但不限于左旋多巴给药。在一个实施例中，向受试者联合施用至少一种线粒体靶向模拟肽以及其他治疗剂，以产生协同治疗作用。例如，施用至少一种线粒体靶向模拟肽以及一种或多种预防或治疗α-共核蛋白病的其他治疗剂将在预防或治疗疾病方面的作用大于加性作用。因此，在治疗或预防α-共核蛋白病时，可使用较低剂量的一种或多种任何单独治疗剂，从而增加疗效，减少副作用。

在某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(例如，(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐))可与一种或多种预防或治疗TDP-43蛋白病的其他疗法联合施用。在本发明技术所述方法的某些实施例中，所述线粒体靶向模拟肽为(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(例如，(Ia))。在某些实施例中，其他疗法包括但不限于抗抑郁药(如SSRI抗抑郁药，包括曲唑酮)给药。在一个实施例中，向受试者联合施用至少一种线粒体靶向模拟肽以及其他治疗剂，以产生协同治疗作用。例如，施用至少一种线粒体靶向模拟肽以及一种或多种预防或治疗TDP-43蛋白病的其他治疗剂将在预防或治疗疾病方面的作用大于加性作用。因此，在治疗或预防TDP-43蛋白病时，可使用较低剂量的一种或多种任何单独治疗剂，从而增加疗效，减少副作用。

在某些实施例中，可按任何顺序甚至同时施用多种治疗剂。如果同时施用，则可以单一、统一剂型或多种剂型(例如，以单片或单独两片)提供所述多种治疗剂。可多次施用一种治疗剂，或多次施用两种治疗剂。如果不同时施用，则多次施用之间的间隔时间可能有所不同(从0周以上至少于4周)。此外，所述联合方法、组合物和制剂不限于仅使用两种药剂。

示例

通过以下示例对本发明技术进行了进一步的说明，但这些示例不应视为任何方式的限制。

示例1–在动物模型中使用线粒体靶向模拟肽化合物治疗ALS

本示例显示了在疾病动物模型中使用线粒体靶向模拟肽化合物(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(即(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)、其立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物)治疗ALS的情况。

方法

研究设计。每天通过运载体对照品；(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(以其三盐酸盐-(Ia)的形式)(0.5mg/kg)；或(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(以其三盐酸盐-(Ia)的形式)(5.0mg/kg)的腹膜内给药，对三个实验组n＝20只(10只雄性，10只雌性)SOD1 G93A高复制转基因小鼠给药。自8周龄起对动物给药，在以人道方式结束生命(指当动物侧躺时，不能在30秒内从两侧恢复平稳)前，继续给药。实验终点以及中间收集和观察结果如下：

1.体重测量。每天记录体重。

2.神经功能评分。Weekly NeuroScore，一种基于五分制的神经疾病进展定性评估。评分定义如下：

0分：当通过尾巴悬吊小鼠时，其后腿从侧面中线向外完全伸展，连续悬吊三次，小鼠可以保持此伸展姿势2秒。

1分：尾巴悬吊时，腿部塌陷或部分塌陷，向侧面中线延伸，或后腿颤抖。

2分：行走12英寸，脚趾至少弯曲两次，或沿笼子底部或桌子拖脚的任何部分。

3分：僵硬麻痹，或关节活动度最小，并未用脚向前移动。

4分：小鼠不能在30秒内从两侧恢复平稳。

3.握力试验。每周前肢握力，具体如下：

a.对受试者进行称重，让其适应试验室至少60分钟。

b.设备：Bioseb握力计，配备一个适合小鼠抓握的网格。

c.拉住小鼠尾巴，将小鼠向下降至网格处，进行视觉定位，并让小鼠用前爪抓住网格。

d.沿水平方向将受试者用力拉离网格(与工作台平行)，连续试验三次，两次试验之间短暂休息一下(约30秒)。

e.在体重归一化和未归一化的情况下，对3个前爪和3个全爪试验的平均力(单位：克)进行分析。

4.眶后血液采集。每两周一次，眶后眼睛出血，确定药物接触水平以及神经丝轻链(轴突损伤生物标志物)水平，结果表明与人类患者ALS疾病进展有关。简而言之，使用异氟烷(5％诱导，2％维持)的O₂气体使小鼠镇静。当异氟烷到达麻醉平面时，停止对小鼠使用异氟烷，使用25μL玻璃毛细管从眶后窦采集血液，两侧交替连续出血。将200μL全血采集到装有3.5μL的25X HALT蛋白酶抑制剂混合物的BD K₂EDTA Microtainer采血管中，并放在冰上保存，以待处理。小鼠从麻醉中恢复过来后，将它们送回居住笼中。

结果

(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺的全身给药可以延迟ALS的神经症状进展。如上所述，自8周龄开始，向小鼠每天腹膜内注射(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(Ia)或运载体对照品，直至以人道方式结束生命。每周使用五分神经功能评分量表衡量神经疾病进展(请参见上述评分指标的研究设计)。相对于经运载体治疗的动物，施用5.0mg/kg的(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(以其三盐酸盐(Ia)的形式)可以延迟雄性动物的神经症状发作(通过双因素方差分析确定)(图1A)。在雌性小鼠中没有作用，在此转基因模型中，表型较温和(图1B)。

(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺的全身给药可以延长ALS小鼠模型的寿命。与运载体对照品相比，施用5.0mg/kg(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺的雄性小鼠寿命显著延长(图1C)。在雌性小鼠中没有作用，在此转基因模型中，疾病表型较温和(图1D)。

(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺的全身给药可以减轻ALS小鼠模型的肌肉力量下降问题。如图2A和表1A所示，(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(以其三盐酸盐(Ia)的形式)的全身给药可以减弱雄性SOD1 G93A转基因小鼠的握力丧失。自基线(8周)至每只动物的生命结束，确定握力值。在给药10周后，描绘个体动物下降平均值。在使用高剂量(5.0mg/kg)(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(以其三盐酸盐(Ia)的形式)进行治疗的雄性动物中，出现防止握力丧失的趋势，但作用程度并没有统计学意义(p＝0.08)。

(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺的全身给药可以降低ALS小鼠模型中神经丝轻链(NfL)在血浆中的积累。(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺的全身给药可以降低雄性SOD1 G93A转基因小鼠血浆中神经丝轻链(NfL)的积累。图3A-3B(及表2A-2B)显示了在施用(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺或运载体对照品10周后NfL(轴突损伤标志物)的血浆水平。5.0mg/kg的(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(以其三盐酸盐(Ia)的形式)对雄性转基因小鼠的NfL积累具有统计上显著的影响，因此可以防止CNS的轴突损伤(图3A)。请注意，雌性小鼠的总体NfL水平较低，这与此模型中雌性小鼠相关疾病表型较温和一致(图3B)。

如图4(及表3)所示，雄性SOD1 G93A转基因小鼠血浆神经丝水平与动物生存之间存在显著的相关性。图中描绘了本研究中每只雄性小鼠的血浆NfL水平，作为其以人道方式结束生命时的年龄函数。轴突损伤生物标志物积累与动物寿命之间的具有极显著的相关性，这表明，至少通过防止CNS的轴突缺失或损伤，(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(Ia)可以延长雄性SOD1 G93A小鼠的寿命。

这些结果表明，线粒体靶向模拟肽化合物(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(即(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)、其立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物可用于治疗ALS，因为它们有助于改善以下一种或多种症状：延迟ALS神经症状的发作，延长生存期，减轻肌肉力量下降问题和/或降低血浆神经丝轻链(NfL)水平。因此，可在方法中使用(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺，以对需要接受ALS治疗的患者进行治疗。

示例2–使用线粒体靶向模拟肽化合物治疗ALS

本示例预言性地演示了在有需要的受试者中使用线粒体靶向模拟肽化合物(如(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(即(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)、其立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物)治疗ALS的情况。

方法

每天向疑似患有或确诊患有ALS的受试者单独施用1mg/kg体重的(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(即(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)、其立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物，或与一种或多种治疗或预防ALS的其他治疗剂联合施用。根据本领域已知的方法，通过口服、局部、全身、静脉内、皮下、玻璃体内、腹腔内或肌肉内给药途径施用模拟肽和/或其他治疗剂。每周对受试者进行评估，确定是否存在与ALS相关的体征或症状和/或其严重程度，包括但不限于肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡、脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达水平提高以及神经丝轻链(NfL)在血浆中的积累。继续治疗，直至一种或多种ALS体征或症状得到改善或消除。

结果

在疑似患有或确诊患有ALS并施用治疗有效量的(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(即(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)、其立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物的受试者中，预计与一种或多种ALS相关症状的严重程度降低或消除。就这一点而言，进一步预计，与在单独使用线粒体靶向模拟肽化合物或其他治疗剂进行治疗的受试者中观察到的结果相比，联合施用(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺以及一种或多种其他治疗剂具有协同作用。

这些结果表明，(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(即(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)、其立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物可用于治疗ALS。这些结果表明，(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(I)或其可药用盐(如酒石酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、乳酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或马来酸盐(在不同情况下分别为单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐)、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐(即(Ia)、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐)、其立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物可用于改善以下一种或多种症状：肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡、脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达水平提高以及神经丝轻链(NfL)在血浆中的积累。因此，可在方法中使用所述模拟肽，以对需要接受ALS治疗的患者进行治疗。

示例3–与Elamipretide相比，本发明技术所述线粒体靶向模拟肽化合物的脑接触 量较高，并具有线粒体保护作用

本示例在大鼠模型中比较了(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(Ia)和elamipretide的脑摄取量，以及化合物Ia对减少线粒体活性氧(ROS)以及在氧化应激条件下预防保持产生ATP的药理作用。

方法

向Sprague Dawley大鼠皮下注射5mg/kg化合物Ia或elamipretide(每个时间点，n＝4)。在指定时间点处死动物，进行穿心灌注。通过LC-MS/MS确定全脑匀浆中的药物水平。结果见图5A。

使用缩血管肽内皮素-1(ET-1；每次注射240pmol)实现大脑中动脉闭塞，在Sprague Dawley大鼠中诱导缺血性卒中。通过皮下注射5mg/kg，在局部缺血发作前24小时和4小时向每只大鼠施用化合物Ia。在局部缺血发作后24小时，使用高分辨率测定仪(OxyGraph O2K)在从梗死区切除的脑匀浆中测量线粒体呼吸情况。用复合物I支持的氧化磷酸化作用除以复合物I相关泄漏呼吸，计算呼吸控制率。结果见图5B，**p<0.01，单因素方差分析。

结果

化合物Ia的脑接触量高于elamipretide的脑接触量(图5A)，化合物Ia在氧化应激条件下可恢复脑线粒体呼吸作用(图5B)。这些发现表明，化合物Ia适用于治疗神经退行性疾病，在此类疾病中，中枢神经系统的线粒体损伤促成病理机制。

示例4–线粒体靶向模拟肽化合物可减轻突变体α-突触核蛋白转导小鼠中黑质多 巴胺能神经元的损失。

本示例演示了在突变体α-突触核蛋白诱导多巴胺能神经元损失的小鼠模型中将(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(Ia)用作研究在神经退行性疾病模型中可能药效的一种方式。

方法

在野生型C57BL/6小鼠中，通过人α-突触核蛋白(存在致病性A53T突变)的AAV9介导病毒递送，诱导黑质致密部(SNc)多巴胺能神经元的损失。通过立体定向术，向每个SNc双侧注射4x10¹⁰个病毒颗粒。进行病毒转导时，动物为九周龄。自病毒转导前24小时开始，每天通过(Ia)腹膜内给药对动物进行治疗，持续治疗5周。实验组如下：

1.A组-注射AAV A53T，运载体治疗(n＝7)

2.B1组-注射AAV A53T，0.5mg/kg(Ia)治疗(n＝8)

3.B2组-注射AAV A53T，5.0mg/kg(Ia)治疗(n＝8)

4.C1组-注射Sham AAV9，0.5mg/kg(Ia)治疗(n＝6)

5.C2组-注射Sham AAV9，5.0mg/kg(Ia)治疗(n＝7)

病毒转导5周后，处死动物，取出并处理大脑，以进行免疫组织化学分析，并通过自动化体视学方法进行黑质致密部细胞计数(即，TH阳性神经元的数量)。切下连续切片，并使用酪氨酸羟化酶(TH)进行染色，计算多巴胺能神经元的数量。结果如图6A和图6B所示；**p<0.01与各组；***p<0.001与A组；^OOp<0.001与C1组和C2组。

通过SIMOA检测，在处死时采集的血液中确定血浆神经丝轻链水平，结果如图6C所示。通过单因素方差分析，确定组间无统计学意义。

结果

化合物Ia显著减轻了黑质中突变体α-突触核蛋白诱导多巴胺能神经元的损失(图6A和图6B)。在此诱导方案中，神经丝水平不会升高(图6C)。因此，化合物Ia治疗可预防突变体α-突触核蛋白毒性后黑质中多巴胺能神经元的损失。这些数据表明，化合物Ia可用于治疗和预防因α-共核蛋白病(如帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症)引起的神经退行性疾病的方法中。

示例5–线粒体靶向模拟肽化合物对表达上运动神经元的原代突变体TDP43具有神 经保护作用

本示例研究了(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺(Ia)在源自prp-TDP-43^A315T-UeGFP小鼠模型的原代细胞中的神经保护作用。

方法

在源自prp-TDP-43^A315T-UeGFP小鼠模型的原代细胞中进行研究(Gautam等人，《神经病理学学报》，2019年1月；137(1):47-69)。简而言之，这些小鼠表达致病性人TDP43转基因，在eGFP报告基因小鼠的背景下，导致线粒体、细胞核和内质网发生重度结构变化。转基因(prp)和报告基因(UCHL1)由组织特异性启动子元件驱动，导致产生携带TDP43突变的荧光绿皮质脊髓运动神经元。利用eGFP报告基因的内源荧光，可在原位直接观察到皮质脊髓运动神经元。混合皮层培养物源自prp-TDP-43^A315T-UeGFP小鼠大脑，在无血清最低限度培养基中可进行三次细胞分裂。每天移除和补充培养基+/-药物。在实验中所使用的化合物Ia剂量为10nM；100nM和1000nM。在DMSO运载体中制备药物，将DMSO用作运载体对照品(<1％体积比)。使用标准荧光显微镜技术对细胞进行成像。在GFP表达细胞上，使用自动成像软件(NIHImage J)计算神经突长度。进行三次独立生物学复制，每次复制至少对10个运动神经元进行成像。每个细胞的平均神经元长度见图7。使用Dunnet多重比较检验，通过单因素方差分析进行统计分析。***p<0.001与运载体；****p<0.0001与运载体。

结果

所有剂量(在源自A315T突变体TDP43转基因小鼠的原代上运动神经元培养物中进行评估)的化合物Ia治疗均可增加神经突长度。因此，这些数据表明，化合物Ia可有效用于治疗或预防TDP-43蛋白病(包括ALS和额颞叶变性(FTLD))的方法中。

等同

本发明技术并不受限于本申请中所述的特定实施例，而是用作本发明技术各个方面的单一说明。对于本领域的技术人员，显而易见的是，在不脱离其精神和范围的情况下，可对本发明技术进行多次修改和变更。除本发明所列举项之外，从上述说明中，本领域的技术人员可明确了解本发明技术范围内的功能等效方法和装置。此类修改和变更在所附权利要求的范围内。本发明技术仅受所附权利要求术语以及此类权利要求等同的全部范围的限制。应理解，本发明技术不限于各种特定方法、试剂、化合物组合物或生物系统。还应理解，本发明所用的术语仅用于特定实施例说明目的，并非限制目的。

此外，当根据马库什组来描述本发明的特征或方面时，本领域的技术人员将认识到，还可根据马库什组要素的任何单独要素或子组来描述本发明。

本领域的技术人员理解，出于任何及所有目的，特别是在提供书面描述方面，本发明所公开的所有范围也包括任何及所有可能的子范围及其子范围的组合。任何所列范围均可轻松视为足以描述并将相同范围分为至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作为非限制性示例，本发明所讨论的每个范围很容易分为下三分之一、中三分之一和上三分之一等。本领域的技术人员也理解，“多达”、“至少”、“大于”、“小于”等所有语言均包括所列举的数字，并且指可随后分为上述子范围的范围。最后，本领域的技术人员理解，一个范围包括每个单独成员。因此，例如，包括1-3个细胞的一组是指包括1个、2个或3个细胞的组。同样，包括1-5个细胞的一组是指包括1个、2个、3个、4个或5个细胞的组。

本发明中所引用的所有专利、专利申请、临时申请和出版物通过本发明的整体引用，成为本发明的一部分，包括所有附图和表格，在某种程度上，它们与本说明书的明确指导并不矛盾。

在权利要求中，列出了其他实施例。

Claims (105)

1.一种用于治疗或预防有需要受试者的肌萎缩侧索硬化(ALS)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的模拟肽(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述受试者确诊患有ALS。

3.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述ALS为家族性ALS。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述家族性ALS由超氧化物歧化酶1(SOD1)基因或TARDBP基因中的突变引起。

5.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽每日给药，使用2周或以上。

6.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽每日给药，使用12周或以上。

7.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗或预防包括治疗或预防ALS的一种或多种体征或症状，所述体征或症状包括肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡和脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达提高中的一种或多种。

8.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述治疗或预防包括治疗或预防神经丝轻链(NfL)的血浆积累。

9.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述受试者为哺乳动物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述哺乳类受试者为人类。

11.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽为口服或皮下给药。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

13.根据上述权利要求中任一项所述的方法，进一步包括单独、按顺序或同时向所述受试者施用其他治疗。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述其他治疗包括施用治疗剂。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述治疗剂选自由以下组成的组：利鲁唑

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平

或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

16.根据权利要求15所述的方法，其中，模拟肽和其他治疗性治疗的组合在预防或治疗ALS中具有协同作用。

17.根据上述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。

18.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

19.组合物在制备用于治疗或预防有需要受试者的肌萎缩侧索硬化(ALS)的药物中的用途，其中，所述组合物包括治疗有效量的模拟肽(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

20.根据权利要求19所述的用途，其中，所述受试者确诊患有ALS。

21.根据权利要求19或权利要求20所述的用途，其中，所述ALS为家族性ALS。

22.根据权利要求21所述的用途，其中，所述家族性ALS由超氧化物歧化酶1(SOD1)基因或TARDBP基因中的突变引起。

23.根据权利要求19-22中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽旨在每日给药，使用2周或以上。

24.根据权利要求19-22中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽旨在每日给药，使用12周或以上。

25.根据权利要求19-24中任一项所述的用途，其中，所述治疗或预防包括治疗或预防ALS的一种或多种体征或症状，所述体征或症状包括肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡和脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达提高中的一种或多种。

26.根据权利要求19-24中任一项所述的用途，其中，所述治疗或预防包括治疗或预防神经丝轻链(NfL)的血浆积累。

27.根据权利要求19-26中任一项所述的用途，其中，所述受试者为哺乳动物。

28.根据权利要求27所述的用途，其中，所述哺乳类受试者为人类。

29.根据权利要求19-28中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽配制为口服或皮下给药。

30.根据权利要求19-28中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽配制为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

31.根据权利要求19-30中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽旨在单独、按顺序或同时与其他治疗一起使用。

32.根据权利要求31所述的用途，其中，所述其他治疗包括使用治疗剂。

33.根据权利要求32所述的用途，其中，所述治疗剂选自由以下组成的组：利鲁唑

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平

或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

34.根据权利要求31-33中任一项所述的用途，其中，模拟肽和其他治疗的组合在预防或治疗ALS中具有协同作用。

35.根据权利要求19-34中任一项所述的用途，其中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。

36.根据权利要求19-34中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

37.一种用于治疗或预防有需要受试者的肌萎缩侧索硬化(ALS)的模拟肽(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

38.根据权利要求37所述的模拟肽，其中，所述受试者确诊患有ALS。

39.根据权利要求37或权利要求38所述的模拟肽，其中，所述ALS为家族性ALS。

40.根据权利要求39所述的模拟肽，其中，所述家族性ALS由超氧化物歧化酶1(SOD1)基因或TARDBP基因中的突变引起。

41.根据权利要求37-40中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽旨在每日给药，使用2周或以上。

42.根据权利要求37-40中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽旨在每日给药，使用12周或以上。

43.根据权利要求37-42中任一项所述的模拟肽，其中，所述治疗或预防包括治疗或预防ALS的一种或多种体征或症状，所述体征或症状包括肌无力、肌肉消瘦(萎缩)、肌束震颤、肌肉痉挛、运动迟缓、平衡差、不协调、音质改变、构音障碍、吞咽困难、眼闭合不全、流口水、假性延髓情绪、过早死亡和脑转运蛋白-18kDa(TSPO)表达提高中的一种或多种。

44.根据权利要求37-42中任一项所述的模拟肽，其中，所述治疗或预防包括治疗或预防神经丝轻链(NfL)的血浆积累。

45.根据权利要求37-44中任一项所述的模拟肽，其中，所述受试者为哺乳动物。

46.根据权利要求45所述的模拟肽，其中，所述哺乳类受试者为人类。

47.根据权利要求37-46中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽配制为口服或皮下给药。

48.根据权利要求37-46中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽配制为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

49.根据权利要求37-48中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽旨在单独、按顺序或同时与其他治疗一起使用。

50.根据权利要求49所述的模拟肽，其中，所述其他治疗包括使用治疗剂。

51.根据权利要求50所述的模拟肽，其中，所述治疗剂选自由以下组成的组：利鲁唑

依达拉奉

美卡舍明、巴氯芬

安定

丹曲林

非甾体类抗炎药、抗惊厥药(例如，卡马西平

或苯妥英

阿米替林

去甲替林(Pamelor^TM)和氯羟去甲安定

52.根据权利要求49-51中任一项所述的模拟肽，其中，模拟肽和其他治疗的组合在预防或治疗ALS中具有协同作用。

53.根据权利要求37-52中任一项所述的模拟肽，其中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。

54.根据权利要求37-53中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

55.一种用于治疗或预防有需要受试者的α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的模拟肽(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

56.根据权利要求55所述的方法，其中，所述受试者确诊患有α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。

57.根据权利要求55或权利要求56所述的方法，其中，所述α-共核蛋白病是帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症(MSA)，其中，所述TDP-43蛋白病是肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)。

58.根据权利要求55-57中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽每日给药，使用2周或以上。

59.根据权利要求55-58中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽每日给药，使用12周或以上。

60.根据权利要求55-59中任一项所述的方法，其中，所述治疗或预防α-共核蛋白病包括与未经治疗的对照相比，减轻受试者的多巴胺能神经元的损失。

61.根据权利要求55-59中任一项所述的方法，其中，所述治疗或预防TDP-43蛋白病包括与未经治疗的对照相比，受试者的神经突长度增加。

62.根据权利要求55-61中任一项所述的方法，其中，所述受试者为哺乳动物。

63.根据权利要求62所述的方法，其中，所述哺乳类受试者为人类。

64.根据权利要求55-63中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽为口服或皮下给药。

65.根据权利要求55-63中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

66.根据权利要求55-65中任一项所述的方法，进一步包括单独、按顺序或同时向所述受试者施用其他治疗。

67.根据权利要求66所述的方法，其中，所述其他治疗包括施用治疗剂。

68.根据权利要求67所述的方法，其中，所述治疗剂包括治疗α-共核蛋白病的左旋多巴，其中，所述治疗剂包括治疗TDP-43蛋白病的选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)抗抑郁药。

69.根据权利要求66-68中任一项所述的方法，其中，模拟肽和其他治疗性治疗的组合在预防或治疗α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病中具有协同作用。

70.根据权利要求55-69中任一项所述的方法，其中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。

71.根据权利要求55-70中任一项所述的方法，其中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

72.组合物在制备用于治疗或预防有需要受试者的α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的药物中的用途，其中，所述组合物包括治疗有效量的模拟肽(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

73.根据权利要求72所述的用途，其中，所述受试者确诊患有α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。

74.根据权利要求72或权利要求73所述的用途，其中，所述α-共核蛋白病是帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症(MSA)，其中，所述TDP-43蛋白病是肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)。

75.根据权利要求72-74中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽旨在每日给药，使用2周或以上。

76.根据权利要求72-75中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽旨在每日给药，使用12周或以上。

77.根据权利要求72-76中任一项所述的用途，其中，所述治疗或预防α-共核蛋白病包括与未经治疗的对照相比，减轻受试者的多巴胺能神经元的损失。

78.根据权利要求72-76中任一项所述的用途，其中，所述治疗或预防TDP-43蛋白病包括与未经治疗的对照相比，受试者的神经突长度增加。

79.根据权利要求72-78中任一项所述的用途，其中，所述受试者为哺乳动物。

80.根据权利要求79所述的用途，其中，所述哺乳类受试者为人类。

81.根据权利要求72-80中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽配制为口服或皮下给药。

82.根据权利要求72-80中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽配制为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

83.根据权利要求72-82中任一项所述的用途，进一步包括单独、按顺序或同时向所述受试者施用其他治疗。

84.根据权利要求83所述的用途，其中，所述其他治疗包括施用治疗剂。

85.根据权利要求84所述的用途，其中，所述治疗剂包括治疗α-共核蛋白病的左旋多巴，其中，所述治疗剂包括治疗TDP-43蛋白病的选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)抗抑郁药。

86.根据权利要求83-85中任一项所述的用途，其中，模拟肽和其他治疗性治疗的组合在预防或治疗α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病中具有协同作用。

87.根据权利要求72-86中任一项所述的用途，其中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。

88.根据权利要求72-87中任一项所述的用途，其中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

89.一种用于治疗或预防有需要受试者的α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病的模拟肽(R)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-5-氨基-1-(3-苄基-1,2,4-噁二唑-5-基)戊基)氨基)-3-(4-羟基-2,6-二甲苯基)-1-氧代丙-2-基)-5-胍基戊酰胺、或其可药用盐、立体异构体、互变异构体、水合物和/或溶剂化物。

90.根据权利要求89所述的模拟肽，其中，所述受试者确诊患有α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病。

91.根据权利要求89或权利要求90所述的模拟肽，其中，所述α-共核蛋白病是帕金森氏病(PD)、PD伴随痴呆、路易体痴呆或多系统萎缩症(MSA)，其中，所述TDP-43蛋白病是肌萎缩侧索硬化(ALS)或额颞叶变性(FTLD)。

92.根据权利要求89-91中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽旨在每日给药，使用2周或以上。

93.根据权利要求89-92中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽旨在每日给药，使用12周或以上。

94.根据权利要求89-93中任一项所述的模拟肽，其中，所述治疗或预防α-共核蛋白病包括与未经治疗的对照相比，减轻受试者的多巴胺能神经元的损失。

95.根据权利要求89-93中任一项所述的模拟肽，其中，所述治疗或预防TDP-43蛋白病包括与未经治疗的对照相比，受试者的神经突长度增加。

96.根据权利要求89-95中任一项所述的模拟肽，其中，所述受试者为哺乳动物。

97.根据权利要求96所述的模拟肽，其中，所述哺乳类受试者为人类。

98.根据权利要求89-97中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽配制为口服或皮下给药。

99.根据权利要求89-98中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽配制为局部、鼻内、全身、静脉、腹腔、皮内、眼内、眼部、鞘内、脑室内、离子透入、粘膜、玻璃体腔或肌肉给药。

100.根据权利要求89-99中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽旨在单独、按顺序或同时与其他治疗一起使用。

101.根据权利要求100所述的模拟肽，其中，所述其他治疗包括使用治疗剂。

102.根据权利要求101所述的模拟肽，其中，所述治疗剂包括治疗α-共核蛋白病的左旋多巴，其中，所述治疗剂包括治疗TDP-43蛋白病的选择性羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)抗抑郁药。

103.根据权利要求100-102中任一项所述的模拟肽，其中，模拟肽和其他治疗性治疗的组合在预防或治疗α-共核蛋白病或TDP-43蛋白病中具有协同作用。

104.根据权利要求89-103中任一项所述的模拟肽，其中，所述可药用盐包括酒石酸盐、延胡索酸盐、单乙酸盐、双乙酸盐、三乙酸盐、单三氟乙酸盐、双三氟乙酸盐、三氟乙酸盐、单盐酸盐、双盐酸盐、三盐酸盐、单甲苯磺酸盐、双甲苯磺酸盐或三甲苯磺酸盐。

105.根据权利要求89-104中任一项所述的模拟肽，其中，所述模拟肽配制为三盐酸盐、双盐酸盐或单盐酸盐。

Images