CN114456987A - 一种侧孢短芽孢杆菌、芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一株产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)，名称为：B07‑2，分类命名为：侧孢短芽孢杆菌，保藏编号为：GDMCC No.62281，保藏日期为：2022年3月7日，保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。本发明中侧孢短芽孢杆菌B07‑2是一株益生菌，其本身和所分泌的抑菌活性物质具有较强的热稳定性和酸碱耐受性。本发明所制备得到的芽孢抗菌肽‑壳聚糖‑明胶复合保鲜膜能够有效抑制食源有害微生物，并且所用材料环保安全，可降解，可食用，不会对环境及人体造成危害。
Description
技术领域
本发明属于食品保鲜、生物技术领域，尤其是一种产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌、芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的制备方法和应用。
背景技术
目前，传统保鲜膜存在如下问题：
1、传统聚合保鲜膜不可降解。
2、传统聚合保鲜膜结构组分可能会对人类健康造成危害。
3、传统保鲜膜功能单一。
导致上述问题主要原因为：常规的保鲜膜为塑料包装制品，一般使用乙烯作为母料通过聚合反应制成，保鲜膜可分为三大类：第一种是聚乙烯，简称PE；第二种是聚氯乙烯，简称PVC；第三种是聚偏二氯乙烯，简称PVDC。这些保鲜膜都是采用了不可降解的塑料制成，具有安全隐患，一方面其不可降解，对环境环境不友好，造成环境污染；另一方面其中含有的迁移物质可能对人体存在不良影响。而且上述三种材料的保鲜膜无主动杀菌性和营养价值，功能单一。另外，目前食品应用中以人工合成保鲜剂使用较为广泛，但长期食用此类保鲜剂对人体健康存在安全隐患，能被选择利用的绿色保鲜剂不多。
通过检索，发现如下两篇与本发明专利申请相关的专利公开文献：
1、针对上述传统保鲜膜不可降解、对人类健康造成隐患的问题。现有技术(《一种新型可食用性果蔬保鲜膜的制备方法》，专利申请号ZL201811036917.1)，将豆渣中的大豆多糖提取并与壳聚糖、海藻酸钠、甘油搅拌制成保鲜膜，保鲜膜配方绿色安全、经济环保，但是其功能单一，不具有抑菌作用，不能实现保鲜效果升级。
2、针对缺乏绿色、安全保鲜剂问题，现有技术(《一种食品保鲜剂》，专利申请号CN201710278924.1)，以纳他霉素和酸性物质组成食品保鲜剂的基料，纳他霉素作为一种微生物源天然食品防腐剂，可以满足食品防腐保鲜要求及人们对于食品安全性的要求，但是纳他霉素作为抗生素类抑菌剂容易造成病原菌抗性，从而抑菌、保鲜效果下降甚至消失。
通过对比，本发明专利申请与上述专利公开文献存在本质的不同。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌、芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的制备方法和应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一株产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)，名称为：B07-2，分类命名为：侧孢短芽孢杆菌，保藏编号为：GDMCC No.62281，保藏日期为：2022年3月7日，保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
进一步地，所述侧孢短芽孢杆菌B07-2为从广东省茂名地区的肥料中分离得到的菌种。
进一步地，所述侧孢短芽孢杆菌B07-2对金黄色葡萄杆菌具有抗菌特性。
如上所述的侧孢短芽孢杆菌在金黄色葡萄杆菌抑菌方面中的应用。
如上所述的侧孢短芽孢杆菌在保鲜膜制备方面中的应用。
如上所述的侧孢短芽孢杆菌所生产的抗菌肽。
进一步地，所述抗菌肽对金黄色葡萄杆菌产生抗菌特性。
如上所述的抗菌肽在保鲜膜制备方面中的应用。
利用如上所述的抗菌肽的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜，其制备步骤如下：
(1)溶液制备
①5％的壳聚糖溶液：以5％的质量比，将壳聚糖添加到质量分数1％的乙酸溶液中，40℃磁力搅拌40-60min，直至形成均匀粘稠溶液；
②0.75％的明胶溶液：以0.75％的质量比，将明胶添加到去离子水中，40℃磁力搅拌，直至明胶完全溶解；
(2)抗菌肽粗提物制备
①接种侧孢短芽孢杆菌B07-2发酵：把已经活化好的侧孢短芽孢杆菌B07-2按1％的接种量接种到灭菌的NB培养基中，30℃、200rpm培养72h；
②抗菌肽粗提取：将发酵液的pH调至3，121℃灭菌20min后加入2％(质量比)的NaCl；加入体积终浓度为1％的活性炭，30℃、200rpm下吸附10min；抽滤，保留吸附后的活性炭，弃滤液，得活性炭-抗菌肽复合物，用体积浓度为20％的无水乙醇对活性炭-抗菌肽复合物进行解吸附，40℃搅拌10min，抽滤，保留滤液，滤液旋转蒸发除去无水乙醇，即得到抗菌肽粗提物，4℃保存备用；
(3)配料：将抗菌肽粗提物用去离子水进行复溶，得到抗菌肽粗提物溶液，其中，每1L发酵液得到的抗菌肽粗提物用10mL去离子水复溶；
然后按体积比5：5：1依次加入壳聚糖溶液、明胶溶液、抗菌肽粗提物溶液，混合得膜液，再向膜液中添加甘油，其中，每20mL膜液加入0.3g甘油；
(4)搅拌：40℃磁力搅拌至均匀；
(5)倒模：搅拌好的膜液超声排气10min，倒入玻璃培养皿中；
(6)烘干：60℃干燥1h后，室温静置过夜；
(7)揭膜，即得芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜。
进一步地，所述步骤(5)中玻璃培养皿的直径为90mm。
本发明取得的优点和积极效果为：
1、本发明所制备得到的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜能够有效抑制食源有害微生物，并且所用材料环保安全，可降解，可食用，不会对环境及人体造成危害。
2、本发明芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜是一款抗菌、可降解的复合保鲜膜，解决了传统聚合保鲜膜不可降解、结构成分对人类健康有隐患、功能单一等问题。
3、本发明发现产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌B07-2，从肥料中分离得到侧孢短芽孢杆菌B07-2经过活性检测后，证实产抗菌肽，为天然保鲜剂提供新选择。
3、本发明采用侧孢短芽孢杆菌B07-2的细菌抗菌肽粗提物作为天然抗菌保鲜剂加入可降解保鲜膜中，针对绿色、安全保鲜剂缺乏的问题，本发明通过侧孢短芽孢杆菌B07-2发酵、提取得到的抗菌肽粗提物作为天然保鲜剂加入到壳聚糖-明胶膜液中，赋予保鲜膜有效、安全的抑菌作用。
4、本发明中侧孢短芽孢杆菌B07-2是一株益生菌，其本身和所分泌的抑菌活性物质具有较强的热稳定性和酸碱耐受性。
附图说明
图1为本发明中侧孢短芽孢杆菌B07-2的发酵上清液对金黄色葡萄球菌的抑制作用图；
图2本发明侧孢短芽孢杆菌B07-2的菌落形态图；
图3为本发明中侧孢短芽孢杆菌B07-2的抗菌肽粗提物的抑菌效果图；
图4为本发明在不同温度处理下侧孢短芽孢杆菌B07-2的抗菌肽粗提物对金黄色葡萄球菌的抑制活性检测图；
图5为本发明在不同pH条件处理下侧孢短芽孢杆菌B07-2的抗菌肽粗提物对金黄色葡萄球菌的抑制活性检测图；
图6为本发明中芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的一张实物照片图；
图7为本发明芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的抑菌活性检测的一张照片图。
具体实施方式
下面详细叙述本发明的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
本发明中所使用的原料，如无特殊说明，均为常规的市售产品；本发明中所使用的方法，如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
一株产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)，名称为：B07-2，分类命名为：侧孢短芽孢杆菌，保藏编号为：GDMCC No.62281，保藏日期为：2022年3月7日，保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
较优地，所述侧孢短芽孢杆菌B07-2为从广东省茂名地区的肥料中分离得到的菌种。
较优地，所述侧孢短芽孢杆菌B07-2对金黄色葡萄杆菌具有抗菌特性。
如上所述的侧孢短芽孢杆菌在金黄色葡萄杆菌抑菌方面中的应用。
如上所述的侧孢短芽孢杆菌在保鲜膜制备方面中的应用。
如上所述的侧孢短芽孢杆菌所生产的抗菌肽。
较优地，所述抗菌肽对金黄色葡萄杆菌产生抗菌特性。
如上所述的抗菌肽在保鲜膜制备方面中的应用。
利用如上所述的抗菌肽的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜，其制备步骤如下：
(1)溶液制备
③5％的壳聚糖溶液：以5％的质量比，将壳聚糖添加到质量分数1％的乙酸溶液中，40℃磁力搅拌40-60min，直至形成均匀粘稠溶液；
④0.75％的明胶溶液：以0.75％的质量比，将明胶添加到去离子水中，40℃磁力搅拌，直至明胶完全溶解；
(2)抗菌肽粗提物制备
③接种侧孢短芽孢杆菌B07-2发酵：把已经活化好的侧孢短芽孢杆菌B07-2按1％的接种量接种到灭菌的NB培养基中，30℃、200rpm培养72h；
④抗菌肽粗提取：将发酵液的pH调至3，121℃灭菌20min后加入2％(质量比)的NaCl；加入体积终浓度为1％的活性炭，30℃、200rpm下吸附10min；抽滤，保留吸附后的活性炭，弃滤液，得活性炭-抗菌肽复合物，用体积浓度为20％的无水乙醇对活性炭-抗菌肽复合物进行解吸附，40℃搅拌10min，抽滤，保留滤液，滤液旋转蒸发除去无水乙醇，即得到抗菌肽粗提物，4℃保存备用；
(3)配料：将抗菌肽粗提物用去离子水进行复溶，得到抗菌肽粗提物溶液，其中，每1L发酵液得到的抗菌肽粗提物用10mL去离子水复溶；
然后按体积比5：5：1依次加入壳聚糖溶液、明胶溶液、抗菌肽粗提物溶液，混合得膜液，再向膜液中添加甘油，其中，每20mL膜液加入0.3g甘油；
(4)搅拌：40℃磁力搅拌至均匀；
(5)倒模：搅拌好的膜液超声排气10min，倒入玻璃培养皿中；
(6)烘干：60℃干燥1h后，室温静置过夜；
(7)揭膜，即得芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜。
较优地，所述步骤(5)中玻璃培养皿的直径为90mm。
具体地，相关制备及检测实施例如下：
一株产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)，名称为：B07-2，分类命名为：侧孢短芽孢杆菌，保藏编号为：GDMCC No.62281，保藏日期为：2022年3月7日，保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
所述侧孢短芽孢杆菌B07-2为从广东省茂名地区的肥料中分离得到的菌种，其培养及筛选如下：
肥料分离芽孢杆菌使用稀释平板法，稀释平板法用1/1000稀释浓度的肥料稀释液接种于NA培养基后，置30℃过夜培养，挑取单菌落进行纯化培养、鉴定，侧孢短芽孢杆菌B07-2的16SrRNA基因序列为：
(GCAGTCGAGCGAGGGTCTTCGGACCCTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAGGCAACCTGCCTGTGAGACTGGGATAACATAGGGAAACTTATGCTAATACCGGATAGGGTTTTGCTTCGCCTGAAGCGAAACGGAAAGATGGCGCAAGCTATCACTTACAGATGGGCCTGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATTTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAACGATGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAGTTCTGTTGTTAGGGAAGAAACAGTGCTATTTAAATAAGATAGCACCTTGACGGTACCTAACGAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGTGGCTATGTAAGTCTGATGTTAAAGCCCGAGGCTCAACCTCGGTTCGCATTGGAAACTGTGTAGCTTGAGTGCAGGAGAGGAAAGTGGTATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGCCTGTAACTGACACTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTAGGGGTTTCAATACCCTTAGTGCCGCAGCTAACGCAATAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGCTCGCAAGAGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCACTGACCGCTCTAGAGATAGAGCTTCCCTTCGGGGCAGTGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCTTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAGAGAGACTGCCGTCGACAAGACGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGGGATGCTACTTCGCGAGAAGATGCTAATCTCTTAAAACCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGGGAGTTTGCAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCGTAAGGAGCC)，最大相似模式菌为Brevibacilluslaterosporus，相似度99.8％。完成后将其置于25％的甘油中，并于-80℃保藏。
拮抗菌筛选使用滤纸法，分离得到的侧孢短芽孢杆菌以1％的接种量接种到NB培养基中，30℃培养24h，10000rpm离心3min，保留上清液备用。指示菌使用OD600为0.8的金黄色葡萄杆菌，吸取指示菌液100uL涂板吹干，灭菌滤纸片置于平板上，20uL侧孢短芽孢杆菌滴加到滤纸片，30℃培养24h后观察抑菌圈(如图1所示)。由此筛选获得侧孢短芽孢杆菌B07-2。
如图1所示，侧孢短芽孢杆菌B07-2的发酵上清液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用.
本发明侧孢短芽孢杆菌B07-2的菌落为圆形，呈淡黄色。如图2所示。
如上所述的侧孢短芽孢杆菌B07-2发酵液经过抗菌肽粗提取方法(活性炭吸附-乙醇解吸附)，得到抗菌肽粗提物，去离子水复溶，使用滤纸片法，金黄色葡萄球菌为指示菌，进行抑菌活性检测。
结果如图3所示，侧孢短芽孢杆菌B07-2的抗菌肽粗提物比发酵上清液具有更为明显的抑菌效果，抗菌肽纯度提高。
本发明中侧孢短芽孢杆菌B07-2是一株益生菌，其本身和所分泌的抑菌活性物质具有较强的热稳定性和酸碱耐受性。
如图4所示，以室温为对照，在40、60、80、100℃分别处理侧孢短芽孢杆菌B07-2的抗菌肽粗提物2h，侧孢短芽孢杆菌B07-2的抗菌肽粗提物对金黄色葡萄球菌的抑制活性依然明显，证明侧孢短芽孢杆菌B07-2本身和所分泌的抑菌活性物质具有较强的热稳定性。
如图5所示，以原始pH为对照，分别在pH2、4、6、8、10下30℃水浴处理侧孢短芽孢杆菌B07-2的抗菌肽粗提物2h后，恢复原始pH，侧孢短芽孢杆菌B07-2抗菌肽粗提物对金黄色葡萄球菌依然保留强抑制活性，证明侧孢短芽孢杆菌B07-2本身和所分泌的抑菌活性物质具有较强的酸碱耐受性。
实施例1
一种芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的制备方法，步骤如下：
(1)溶液制备
⑤5％的壳聚糖溶液：以5％的质量比，将壳聚糖添加到质量分数1％的乙酸溶液中，40℃磁力搅拌40-60min，直至形成均匀粘稠溶液。
⑥0.75％的明胶溶液：以0.75％的质量比，将明胶添加到去离子水中，40℃磁力搅拌，直至明胶完全溶解。
(2)抗菌肽粗提物制备
⑤接种侧孢短芽孢杆菌发酵B07-2：把已经活化好的拮抗侧孢短芽孢杆菌按1％的接种量接种到灭菌的NB培养基中，30℃、200rpm培养72h。
⑥抗菌肽粗提取：将发酵液pH调至3，121℃灭菌20min后加入2％(质量比)的NaCl。加入体积比为1％的活性炭，30℃、200rpm下吸附10min。抽滤，保留吸附后的活性炭，弃滤液，得活性炭-抗菌肽复合物，用体积比为20％的无水乙醇对活性炭-抗菌肽复合物进行解吸附，40℃搅拌10min，抽滤，保留滤液，滤液旋转蒸发除去无水乙醇，即得到抗菌肽粗提物，4℃保存备用。
(3)配料：将抗菌肽粗提物用去离子水进行复溶，得到抗菌肽粗提物溶液，其中，每1L发酵液得到的抗菌肽粗提物用10mL去离子水复溶；
然后按体积比5：5：1依次加入壳聚糖溶液、明胶溶液、抗菌肽粗提物溶液，混合得膜液，再向膜液中添加甘油，其中，每20mL膜液加入0.3g甘油；
其中，
(4)搅拌：40℃磁力搅拌至均匀。
(5)倒模：搅拌好的膜液超声排气10min，缓慢倒入直径为90mm玻璃培养皿中。
(6)烘干：60℃干燥1h后，室温静置过夜。
(7)揭膜，由此得到芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜。
本实施例的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜相关检测与结果如下：
1、本实施例的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的照片如图6所示。本实施例的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的尺寸数据：直径90mm。
2、指示菌使用OD600为0.8的金黄色葡萄杆菌，吸取指示菌液100uL涂板(90mm直径培养皿)吹干，将裁剪成直径0.5cm的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜圆片置于平板上，30℃培养24h后观察抑菌圈。结果如图7所示，从图7可以看出，本实施例的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜对金黄色葡萄菌的抑菌圈直径为1.1cm。
3、将本发明保鲜膜裁剪成3cm×3cm的样品，105℃烘至恒重，测定烘干后的重量，记为W1，后加入50mL去离子水完全浸没样品，25℃，50rpm水浴震荡2h后于105℃再次烘至恒重，测定重量并记为W2，计算降解率＝(W1-W2)/W1×100％≈39.2％，证明本研究保鲜膜吸水，分子间的化学键被破坏，在水中即能降解。而传统保鲜膜在水中几乎不能降解。
4、本发明保鲜膜制备原料壳聚糖溶液、明胶溶液和抗菌肽粗提物的协同效果
除了下表中的相关原料的添加份数不同之外，其余步骤均同实施例1。相关检测结果如表1所示。
表1本发明保鲜膜制备原料壳聚糖溶液、明胶溶液和抗菌肽粗提物的协同效果表
从表1可以看出，只使用壳聚糖或明胶，膜的质地会不理想，两者混合，优缺点互补可以达到最佳的膜质地；另外，壳聚糖和明胶一旦成膜，其本身的抑菌效果将会降低，但如添加有抑菌活性的抗菌肽，抗菌肽与壳聚糖、明胶相容良好，膜的抑菌活性因为抗菌肽、壳聚糖、明胶的协同作用而大大提高，继而在平板上都能明显观察得到。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例所公开的内容。
序列表
<110> 天津科技大学，广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）
<120> 一种侧孢短芽孢杆菌、芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜的制备方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1396
<212> DNA
<213> 侧孢短芽孢杆菌B07-2的16SrRNA基因序列(Unknown)
<400> 1
gcagtcgagc gagggtcttc ggaccctagc ggcggacggg tgagtaacac gtaggcaacc 60
tgcctgtgag actgggataa catagggaaa cttatgctaa taccggatag ggttttgctt 120
cgcctgaagc gaaacggaaa gatggcgcaa gctatcactt acagatgggc ctgcggcgca 180
ttagctagtt ggtgaggtaa cggctcacca aggcgacgat gcgtagccga cctgagaggg 240
tgaccggcca cactgggact gagacacggc ccagactcct acgggaggca gcagtaggga 300
attttccaca atggacgaaa gtctgatgga gcaacgccgc gtgaacgatg aaggctttcg 360
ggtcgtaaag ttctgttgtt agggaagaaa cagtgctatt taaataagat agcaccttga 420
cggtacctaa cgagaaagcc acggctaact acgtgccagc agccgcggta atacgtaggt 480
ggcaagcgtt gtccggaatt attgggcgta aagcgcgcgc aggtggctat gtaagtctga 540
tgttaaagcc cgaggctcaa cctcggttcg cattggaaac tgtgtagctt gagtgcagga 600
gaggaaagtg gtattccacg tgtagcggtg aaatgcgtag agatgtggag gaacaccagt 660
ggcgaaggcg actttctggc ctgtaactga cactgaggcg cgaaagcgtg gggagcaaac 720
aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgag tgctaggtgt taggggtttc 780
aataccctta gtgccgcagc taacgcaata agcactccgc ctggggagta cgctcgcaag 840
agtgaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc 900
gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatcccac tgaccgctct agagatagag 960
cttcccttcg gggcagtggt gacaggtggt gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga 1020
tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac ccttatcttt agttgccagc attcagttgg 1080
gcactctaga gagactgccg tcgacaagac ggaggaaggc ggggatgacg tcaaatcatc 1140
atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg ctacaatggt tggtacaacg ggatgctact 1200
tcgcgagaag atgctaatct cttaaaacca atctcagttc ggattgtagg ctgcaactcg 1260
cctacatgaa gtcggaatcg ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc 1320
cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca cgggagtttg caacacccga agtcggtgag 1380
gtaaccgtaa ggagcc 1396
Claims (10)
1.一株产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)，其特征在于：名称为：B07-2，分类命名为：侧孢短芽孢杆菌，保藏编号为：GDMCC No.62281，保藏日期为：2022年3月7日，保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
2.根据权利要求1所述的产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌，其特征在于：所述侧孢短芽孢杆菌B07-2为从广东省茂名地区的肥料中分离得到的菌种。
3.根据权利要求1所述的产抗菌肽生防菌侧孢短芽孢杆菌，其特征在于：所述侧孢短芽孢杆菌B07-2对金黄色葡萄杆菌具有抗菌特性。
4.如权利要求1至3任一项所述的侧孢短芽孢杆菌在金黄色葡萄杆菌抑菌方面中的应用。
5.如权利要求1至3任一项所述的侧孢短芽孢杆菌在保鲜膜制备方面中的应用。
6.如权利要求1至3任一项所述的侧孢短芽孢杆菌所生产的抗菌肽。
7.根据权利要求6所述的抗菌肽，其特征在于：所述抗菌肽对金黄色葡萄杆菌产生抗菌特性。
8.如权利要求6或7所述的抗菌肽在保鲜膜制备方面中的应用。
9.利用如权利要求6或7所述的抗菌肽的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜，其特征在于：其制备步骤如下：
(1)溶液制备
①5％的壳聚糖溶液：以5％的质量比，将壳聚糖添加到质量分数1％的乙酸溶液中，40℃磁力搅拌40-60min，直至形成均匀粘稠溶液；
①0.75％的明胶溶液：以0.75％的质量比，将明胶添加到去离子水中，40℃磁力搅拌，直至明胶完全溶解；
(2)抗菌肽粗提物制备
①接种侧孢短芽孢杆菌B07-2发酵：把已经活化好的侧孢短芽孢杆菌B07-2按1％的接种量接种到灭菌的NB培养基中，30℃、200rpm培养72h；
①抗菌肽粗提取：将发酵液的pH调至3，121℃灭菌20min后加入2％(质量比)的NaCl；加入体积终浓度为1％的活性炭，30℃、200rpm下吸附10min；抽滤，保留吸附后的活性炭，弃滤液，得活性炭-抗菌肽复合物，用体积浓度为20％的无水乙醇对活性炭-抗菌肽复合物进行解吸附，40℃搅拌10min，抽滤，保留滤液，滤液旋转蒸发除去无水乙醇，即得到抗菌肽粗提物，4℃保存备用；
(3)配料：将抗菌肽粗提物用去离子水进行复溶，得到抗菌肽粗提物溶液，其中，每1L发酵液得到的抗菌肽粗提物用10mL去离子水复溶；
然后按体积比5：5：1依次加入壳聚糖溶液、明胶溶液、抗菌肽粗提物溶液，混合得膜液，再向膜液中添加甘油，其中，每20mL膜液加入0.3g甘油；
(4)搅拌：40℃磁力搅拌至均匀；
(5)倒模：搅拌好的膜液超声排气10min，倒入玻璃培养皿中；
(6)烘干：60℃干燥1h后，室温静置过夜；
(7)揭膜，即得芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜。
10.根据权利要求9所述的芽孢抗菌肽-壳聚糖-明胶复合保鲜膜，其特征在于：所述步骤(5)中玻璃培养皿的直径为90mm。
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
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