CN114451454A - 改善肠道微环境健康的母乳低聚糖组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用于改善肠道微环境健康的母乳低聚糖组合物。具体而言,本发明提供了一种母乳低聚糖组合物在制备用于改善肠道微环境健康的食品中的应用,其中,所述母乳低聚糖组合物包括2’‑岩藻糖基乳糖和乳糖‑N‑四糖,且2’‑岩藻糖基乳糖与乳糖‑N‑四糖的质量比为(1~4):1;所述改善肠道微环境健康包括抑制或减少肠道支链脂肪酸的产生。本发明的母乳低聚糖组合物可用于添加在婴幼儿食品中,有利于改善配方粉喂养的婴幼儿肠道健康。
Description
技术领域
本发明是关于一种母乳低聚糖组合物及其应用,具体地说,是关于一种含有特定比例的2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖的母乳低聚糖组合物及其在改善肠道微环境健康特别是用于抑制或减少肠道支链脂肪酸产生方面的新应用。
背景技术
母乳低聚糖(Human Milk Oligosaccharides,简称HMOs)属于母乳中除乳糖和脂肪外,含量第三丰富的物质。其总含量在泌乳期的各个阶段有变化,在成熟乳中大约是12-14g/L,而初乳中大约是20-24g/L。每一种母乳低聚糖的结构在还原端都有一个乳糖,大部分以聚乳糖胺作为结构主链,并在链端含有岩藻糖、唾液酸或二者均有。母乳低聚糖主要由三大类组成:(1)岩藻糖基类低聚糖,以2’-岩藻糖基低聚糖和3’-岩藻糖基低聚糖为代表性物质;(2)唾液酸基类低聚糖,以3’-唾液酸基乳糖和6’-唾液酸基乳糖为代表性物质;(3)不含岩藻糖基或唾液酸基的核心糖链结构形成的低聚糖,以乳糖-N-四糖和乳糖-N-新四糖为代表性物质。HMOs的存在与含量存在个体差异,并与哺乳母亲的路易斯分泌型组成有关。由于婴幼儿配方粉的原料通常是牛乳,而牛乳中通常不含或含有很少这类低聚糖物质,HMOs便成为了婴幼儿配方粉想要更加接近母乳成分所必须跨越的一道鸿沟。
肠道菌群是人体肠道微生态系统的重要组成物质,对人类健康有重要作用。肠道菌群中的厌氧类杆菌、双歧杆菌、真细菌、链球菌和乳酸杆菌等通过发酵碳水化合物、蛋白质和脂质等能释放代谢产物短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFA),主要包括乙酸、丙酸和丁酸等。SCFA可调节机体的多种生理功能,为调节肠道微环境的健康发挥了重要作用。比如,SCFA能提供能量和调节电解质,乙酸是宿主能量的重要来源,丙酸能参与丙酮酸逆转化为葡萄糖的过程,丁酸被上皮细胞摄取,是上皮细胞的主要能量来源。SCFA还具有抗炎、提升肠道屏障功能和抗菌的作用。肠道菌群发酵释放的SCFA能降低肠道pH,进而增加肠道内有益菌的生长,减少有害菌的增殖。
此外,肠道中代谢产物还可能有少量的支链脂肪酸(BCFA)如异丁酸和异戊酸,它们由肠道菌群代谢支链氨基酸如缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸等产生,是未消化的蛋白与多肽到达结肠后被细菌发酵的产物,主要来自于膳食或粘膜细胞的脱落。因此与乙酸、丙酸和丁酸不同,异丁酸和异戊酸是蛋白质的代谢产物。异丁酸和异戊酸的降低可看做从蛋白发酵转向纤维发酵,被认为是积极的效应。这些支链脂肪酸被认为是结肠蛋白质发酵的标记物质,该过程同时也产生其他代谢物,如氨气、酚、对甲酚、或生物胺类等,这些物质能对小肠环境中的细胞造成破坏(Aguirre et al.,2016)。粪便中高水平的异戊酸与人的抑郁和皮质醇水平有关(Szczesniak et al.,2016)。
相比于母乳喂养的婴幼儿,未接受母乳喂养的婴幼儿的粪便中的支链脂肪酸异丁酸和异戊酸含量较高,这些较高的支链脂肪酸是来自氨基酸代谢的,较高的短链脂肪酸可能对婴幼儿代谢产生影响。一些研究表明,异丁酸、异戊酸都是挥发性脂肪酸,能调控血清素的生物合成,并与几种病理性生理状态有关,特别是异戊酸,虽然仅仅是总的脂肪酸代谢物的非常小的部分,但是高含量异戊酸是有毒性的,并与内脏疼痛和其他胃肠道不适有关系,比如感染后的肠易激综合征。
因此,对于未接受母乳喂养的婴幼儿,需要有可改善肠道微环境健康如减少异丁酸和异戊酸等支链脂肪酸的解决方案。
发明内容
本发明发现一些母乳低聚糖组合物具有显著改善肠道微环境健康的作用,具体表现在可抑制或减少肠道支链脂肪酸的产生,特别是对于未接受母乳喂养的婴幼儿(配方粉喂养的婴幼儿),能够显著地减少肠道内支链脂肪酸如异丁酸和异戊酸的产生,从而提供了一种母乳低聚糖组合物及其应用。
具体而言,本发明提供了一种母乳低聚糖组合物在制备用于改善肠道微环境健康的食品中的应用,其中,所述母乳低聚糖组合物包括2’-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-四糖,且2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖的质量比为(1~4):1;所述改善肠道微环境健康包括抑制或减少肠道支链脂肪酸的产生。
已知母乳低聚糖包括岩藻糖基乳糖、唾液酸基乳糖,以及不带岩藻糖基或唾液酸基的母乳寡糖基本糖链结构(典型的代表物质包括乳糖-N-四糖及其同分异构体乳糖-N-新四糖)。
其中2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL或2-FL或2FL),为岩藻糖与乳糖形成的三糖结构,是岩藻糖基类低聚糖的代表性物质。市售该物质通常为经微生物发酵法制备,与人乳中发现的寡糖具有相同结构。
乳糖-N-四糖(lacto-N-tetraose,LNT),为乳糖与四糖形成的六糖结构,是以核心糖链为基础结构,且不含岩藻糖基或唾液酸基的低聚糖的代表性物质。市售该物质通常为经微生物发酵法制备,与人乳中发现的寡糖具有相同结构。
根据本发明的具体实施方案,本发明的母乳低聚糖组合物在制备用于改善肠道微环境健康的食品中的应用中,所述食品是用于改善配方粉喂养的婴幼儿肠道微环境健康。
根据本发明的具体实施方案,本发明的母乳低聚糖组合物在制备用于改善肠道微环境健康的食品中的应用中,所述减少肠道支链脂肪酸包括减少远端结肠异戊酸的产生。
根据本发明的具体实施方案,本发明的母乳低聚糖组合物在制备用于改善肠道微环境健康的食品中的应用中,所述改善肠道微环境健康还包括:减少远端结肠异丁酸的产生、降低肠道pH值、在肠道系统中作为益生元被肠道菌群利用并产气,和/或调控肠道系统中有益的短链脂肪酸的产生,所述有益的短链脂肪酸包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和/或乳酸。
另一方面,本发明还提供了一种母乳低聚糖组合物,其包括质量比(1~4):1的2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖。所述的母乳低聚糖组合物可用于改善肠道微环境健康。
在本发明一些具体实施方案中,本发明还提供了一种食品,其中包括母乳低聚糖2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖,所述2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖的质量比为(1~4):1。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明的所述母乳低聚糖组合物包括质量比为1:1的2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明的所述母乳低聚糖组合物包括质量比为2:1的2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明的所述母乳低聚糖组合物包括质量比为4:1的2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖。
根据本发明的具体实施方案,本发明的用于改善肠道微环境健康的食品包括营养补充剂、婴幼儿配方粉(婴幼儿配方食品)、液态奶、辅食中的一种或多种。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明的用于改善肠道微环境健康的食品为营养补充剂,2’-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-四糖在营养补充剂中的应用量为1.0-50g/100g粉剂。该营养补充剂可设计为特别用于针对配方粉喂养的婴幼儿,改善其肠道微环境健康。
在本发明的一些具体实施方案中,本发明的用于改善肠道微环境健康的食品为婴儿配方粉,2’-岩藻糖基乳糖在婴儿配方粉中的应用量为:在乳粉中的应用量为14.2-3182.2mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.02-4.2g/L;优选地,在乳粉中的应用量为70.9-1818.4mg/100g粉,或以换算成奶液为0.1-2.4g/L;更优选地,在乳粉中的应用量为70.9-1515.3mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.1-2.0g/L。另,乳糖-N-四糖的量参照前述比例应用。具体地,乳糖-N-四糖在婴儿配方粉中的应用量可为:在乳粉中的应用量为14.2-2273.0mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.02-3.0g/L;优选在乳粉中的应用量为70.9-1515.3mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.1-2.0g/L;更优选在乳粉中的应用量为70.9-757.7mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.1-1.0g/L。
各母乳低聚糖在其他食品中的应用量可根据具体需要进行适当调整。
综上所述,本发明发现一些母乳低聚糖组合物能显著改善肠道微环境健康,可用于添加在婴幼儿食品(包括婴幼儿配方粉、液态奶、辅食、营养补充剂)中,有利于改善配方粉喂养的婴幼儿肠道健康。
附图说明
图1显示本发明的2’-FL与LNT组合物与婴儿粪便发酵产生异戊酸的情况。
图2显示各HMO单体与组合物经婴儿粪便发酵后的pH情况。
图3显示各HMO单体与组合物经婴儿粪便发酵后气压情况。
图4显示本发明的各HMO单体与组合物产短链脂肪酸情况。
图5显示本发明的各HMO单体与组合物与婴儿粪便发酵产生甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、乳酸的情况。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解,现结合具体实施例及对本发明的技术方案进行以下详细说明,应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例中,各原始试剂材料均可商购获得,未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件,或按照仪器制造商所建议的条件。
此外,为避免重复,以下列出各实施例中的实验需要经过的通用步骤,如粪便菌的接种培养等。
实验方法
从捐献者处获得婴儿粪便样本(所有受试者婴儿均为常规婴儿配方粉喂养的三月龄婴儿),冷冻储存。将粪便样本在30分钟内化冻后,与培养基轻柔的混合,作为初始培养物质加入到批量发酵培养基中,并持续混合溶液,维持理想的混合均一度。因为化冻时间一致,各组在初始的细菌组成相似。对发酵过程中的短链脂肪酸、pH、气压和菌群进行测定。本实验中所有HMO原料来自供应商Jennewein。具体实验过程如下:
样品前处理
从婴儿粪便捐献者处通过尿布多次采集粪便。将每次采集的粪便转运到试管,并在-20℃条件下储存。将多次采集的粪便样本解冻后混合,使用灭菌的氯化钠溶液(0.9%(w/v))在厌氧操作台中进行稀释溶解(气相:81%N2、15%CO2和4%H2,Bactron 300,Sheldon Manufacturing,Cornelius,USA)。通过加入灭菌的玻璃球进行混匀,再进行充分混合(2000rpm)。将粪便溶液与SIEM培养基以5:82(v/v)比例混合,作为粪便培养液。
小批量发酵
取10mL婴儿粪便菌群并在厌氧条件下转移到发酵瓶进行小批量发酵。在43mL基底缓冲液(用于调整pH并模拟相应的远端结肠环境)的基础上,每个发酵瓶中还含有添加了不同组别HMO单体或组合物的20mL PBS缓冲液(用于溶解和带入HMO受试物质),每个发酵瓶中的各HMO单体或组合物的终浓度均为2g/L。另设对照组不添加HMO。小瓶在37℃震动条件下孵育。孵育时,在0、6小时、24小时和48小时检测气压(使用气体压力计测定发酵瓶中的压力),随后取样检测pH和短链脂肪酸。重复测定三次。
短链脂肪酸测试方法为:使用气象色谱仪GC-2014(Shimadzu,'s-Hertogenbosch,Netherlands)对样品中的短链脂肪酸进行测定。通过毛细管柱(EC-1000,Econo-Cap,25mm×0.53mm,1.2μM,Alltech,Laarne,Belgium)分离样品中各脂肪酸后,使用火焰电离检测器进行检测,其中进样器温度设为100℃,检测器温度设为220℃,使用氮气为载气,2-甲基乙酸为内标。
在HMO干预期间,各组的气体产量通过测量气压变化来比较。对短链脂肪酸的分析包括异戊酸,还分析了甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸和乳酸,各物质通过HPLC进行分析。
数据分析
对于数据结果进行Two way ANOVA的统计分析,并采用Tukey’s multiplecomparisons test进行显著性差异分析。两个组若有显著性差异,且p<0.05,则用星号*表示。两个星号**表示p<0.01。三个星号***表示p<0.001。
实施例1:2’-FL与LNT组合物抑制/减少异戊酸的产生
本实施例中,设置以下多组受试组别,各组中HMO添加情况如下(除对照组未添加HMO外,其余每个发酵瓶中的HMO的总终浓度均为2g/L):
对照组:未添加HMO(即仅添加缓冲液);
试验组1:添加2’-FL与LNT组合物,2’-FL与LNT质量比1:1;
试验组2:添加2’-FL与LNT组合物,2’-FL与LNT质量比4:1;
比较组1:仅添加2’-FL;
比较组2:仅添加LNT;
比较组3:添加LNT与3’-SL组合物,LNT与3’-SL质量比6:1。
各受试组在0、6小时、24小时和48小时时产异戊酸情况请参见图1及表1。
表1
发酵48h后,产异戊酸 | 是否有显著性差异 | P值 |
2’-FL+LNT 1:1vs.对照 | ** | 0.0078 |
2’-FL+LNT 4:1vs.对照 | ** | 0.0084 |
LNT+3’-SL 6:1vs.对照 | 否 | 0.3023 |
2’-FL vs.对照 | * | 0.0292 |
LNT vs.对照 | * | 0.0414 |
在发酵48小时后,对于产生异戊酸的情况进行了分析,发现相比对照,各HMO组合物或单体均有降低异戊酸的趋势。其中,单独的2’-FL与LNT均显著降低了异戊酸(P<0.05),而质量比1:1和4:1的2’-FL+LNT组合物更加显著地降低了异戊酸(P<0.01),体现了组合物在抑制/减少肠道异戊酸产生方面的协同效应。
实施例2:2’-FL与LNT组合物对肠道菌群发酵产气及产其他酸性能的影响
本实施例中,考察了2’-FL与LNT组合物对肠道菌群发酵产气及产其他酸性能的影响。其中,设置以下多组受试组别,各组中HMO添加情况如下(除对照组未添加HMO外,其余每个发酵瓶中的HMO的总终浓度均为2g/L):
对照组:未添加HMO(即仅添加缓冲液);
试验组1:添加2’-FL与LNT组合物,2’-FL与LNT质量比1:1;
试验组2:添加2’-FL与LNT组合物,2’-FL与LNT质量比2:1;
试验组3:添加2’-FL与LNT组合物,2’-FL与LNT质量比4:1;
比较组1:仅添加2’-FL;
比较组2:仅添加LNT。
1.HMO组合物经婴儿粪便发酵后的pH情况
各受试组经婴儿粪便发酵后产pH情况请参见图2。几乎所有的受试HMO和HMO组合物对于培养基的酸化(即降低pH)作用效果都相似。说明各受试HMO组合物发酵后都能产生一定量的短链脂肪酸作为代谢产物。
2.HMO组合物经婴儿粪便发酵后气压情况
各受试组经婴儿粪便发酵后气压情况请参见图3。各受试组均具有一定的发酵产气能力,特别是2’-FL与LNT质量比4:1组产生的气压相比其他组别更高(图3)。
3.HMO组合物经婴儿粪便发酵后产生短链脂肪酸的情况
各组HMO组合物经婴儿粪便发酵后产生短链脂肪酸的情况分别参见图4和图5。可以看出,本发明的2’-FL与LNT组合物各受试组均能一定程度上促进有益的短链脂肪酸包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和/或乳酸的产生,并减少异丁酸的产生。
实施例3、添加的母乳低聚糖组合的婴儿配方粉
本实施例提供一种0~6月龄的婴儿配方奶粉,该配方奶粉中总蛋白质含量为11.1g/100g粉,脂肪含量为28.3g/100g粉,碳水化合物含量为52.9g/100g粉,母乳低聚糖含量1.4g/100g粉,其中,母乳低聚糖为2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)与乳糖-N-四糖(LNT)的组合,2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)与乳糖-N-四糖(LNT)的质量比为4:1。
Claims (10)
1.一种母乳低聚糖组合物在制备用于改善肠道微环境健康的食品中的应用,其中,所述母乳低聚糖组合物包括2’-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-四糖,且2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖的质量比为(1~4):1;所述改善肠道微环境健康包括抑制或减少肠道支链脂肪酸的产生。
2.根据权利要求1所述的应用,其中,所述食品是用于改善配方粉喂养的婴幼儿肠道微环境健康。
3.根据权利要求1或2所述的应用,其中,所述减少肠道支链脂肪酸包括减少远端结肠异戊酸的产生。
4.根据权利要求1所述的应用,其中,所述改善肠道微环境健康还包括:减少远端结肠异丁酸的产生、降低肠道pH值、在肠道系统中作为益生元被肠道菌群利用并产气,和/或调控肠道系统中有益的短链脂肪酸的产生,所述有益的短链脂肪酸包括甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和/或乳酸。
5.根据权利要求1所述的应用,其中,所述食品包括营养补充剂、婴幼儿配方粉、液态奶、辅食中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的应用,其中,所述食品为营养补充剂,2’-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-四糖在营养补充剂中的应用量为1.0-50g/100g粉剂。
7.根据权利要求5所述的应用,其中,所述食品为婴儿配方粉,2’-岩藻糖基乳糖在婴儿配方粉中的应用量为:在乳粉中的应用量为14.2-3182.2mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.02-4.2g/L;优选地,在乳粉中的应用量为70.9-1818.4mg/100g粉,或以换算成奶液为0.1-2.4g/L;更优选地,在乳粉中的应用量为70.9-1515.3mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.1-2.0g/L。
8.根据权利要求7所述的应用,其中,乳糖-N-四糖在婴儿配方粉中的应用量为:在乳粉中的应用量为14.2-2273.0mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.02-3.0g/L;优选在乳粉中的应用量为70.9-1515.3mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.1-2.0g/L;更优选在乳粉中的应用量为70.9-757.7mg/100g粉,或以换算成奶液计为0.1-1.0g/L。
9.一种母乳低聚糖组合物,其包括2’-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-四糖,且2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖的质量比为(1~4):1。
10.一种食品,其中包括母乳低聚糖2’-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-四糖,所述2’-岩藻糖基乳糖与乳糖-N-四糖的质量比为(1~4):1。
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