CN114438072A - 一种海藻糖的生产方法 - Google Patents

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Abstract

一种海藻糖的生产方法，属于海藻糖生产技术领域，包括硅胶改性、海藻糖合成酶固载、海藻糖合成；本发明开发出了基于固定化海藻糖合成酶技术的海藻糖生产方法，用改性硅胶固载了海藻糖合成酶，该固定化海藻糖合成酶的催化活性衰减慢，可多次重复利用且麦芽糖转化为海藻糖的转化率高；采用本发明所述方法制备海藻糖，固定化海藻糖合成酶初次使用时，麦芽糖转化为海藻糖的转化率为77.3~80.3%，该固定化海藻糖合成酶重复利用10次、20次、30次时，麦芽糖转化为海藻糖的转化率分别为74.9%、70.7%、68.5%。

Description

一种海藻糖的生产方法
技术领域
本发明涉及一种海藻糖的生产方法，属于海藻糖生产技术领域。
背景技术
海藻糖是一种极好的天然干燥剂和保鲜剂，也是一种新型功能性低聚糖。它在医药、食品等领域都有着广泛的应用前景。1995年，日本林原生化研究所报道，首次发现了能将麦芽糖直接转化为海藻糖的海藻糖合成酶。该酶反应流程短，易调控，而且不需要磷酸盐共存，海藻糖的产率高且不受底物麦芽糖浓度的影响。因而这种酶在海藻糖的工业生产中有着良好的应用前景。
目前海藻糖合成酶多以游离酶的形式用于海藻糖的工业化生产，游离状态的海藻糖合成酶稳定性差，易失活，无法重复利用，而且反应后也不易与产品分离，造成分离提纯操作上的成本居高不下，因而海藻糖合成酶的固定化和可重复利用技术成为酶催化制备海藻糖领域研究的热点。
中国专利CN106498000A公开了一种树脂固定海藻糖合酶催化麦芽糖产海藻糖的方法。将海藻糖合酶固定实在带环氧基团的树脂，海藻糖合酶上氨基与树脂上的环氧基通过共价键结合。该专利制备的树脂固定海藻糖合酶，麦芽糖转化为海藻糖的转化率低，催化活性衰减的很快，重复利用价值不高。
中国专利CN112608957A公开了一种固定化海藻糖合酶催化麦芽糖产海藻糖的方法，将海藻糖合酶通过双重吸附-交联法固定于介孔分子筛SBA-15上，用于催化麦芽糖产海藻糖，固定化方法简单、时间短、无污染、条件温和，固定化后的海藻糖合酶pH稳定性和热稳定性明显改善，且具有良好的酶学特性和可重复操作性。该专利制备的固定化海藻糖合酶，可重复利用的次数较低，而且固化过程中对酶活性的损伤较大。
以上可以看到，目前海藻糖合成酶固定化过程容易引起酶的损伤而失活，进而导致麦芽糖转化为海藻糖的转化率低，固定化合成酶催化活性衰减快，可重复利用次数低等问题。
发明内容
针对上述现有技术存在的不足，本发明提供一种海藻糖的生产方法，实现以下发明目的：开发出基于固定化海藻糖合成酶技术的海藻糖生产方法，该方法所制备的固定化海藻糖合成酶的催化活性衰减慢，可多次重复利用，麦芽糖转化为海藻糖的转化率高。
为实现上述发明目的，本发明采取以下技术方案：
一种海藻糖的生产方法，包括硅胶改性、海藻糖合成酶固载、海藻糖合成。
以下是对上述技术方案的进一步改进：
步骤1硅胶改性
将B型硅胶放入硫酸水溶液中，加热至微沸状态后，恒温回流1~2小时，然后滤出B型硅胶，用去离子水浸泡洗涤至洗出液的pH=6.8~7.0，自然晾干后得到清洗后的B型硅胶；将清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷混合后，向其中滴加乙酸，将体系的pH调节到3.5~4.8，控温140~160℃，150~300转/分速率下，搅拌回流1.5~4小时后，滤出的硅胶用乙醇浸泡洗涤3~5次后，在50~80℃下干燥1~2.5小时，得到改性硅胶；
所述B型硅胶，其形状为近似球形，粒径为0.5~2mm，平均孔径为4~8nm，比表面积为580~600m2/g；
所述B型硅胶与硫酸水溶液的质量比为1:2~4；
所述硫酸水溶液的质量浓度为50~70wt%；
所述清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷的质量比为12~22:75~110:1~4:1~6。
步骤2海藻糖合成酶固载
将海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶加到摇床振荡器中，控制温度10~35℃，旋转速度100~200转/分，振荡5~9小时后，滤出硅胶固体，用去离子水洗涤3~5次后，得到固定化海藻糖合成酶；
所述海藻糖合成酶酶液，是根据专利CN103205475A中实施例7所述方法制得的粗酶液，酶活性24.5~31.3U/mL；
所述海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶的质量比为10~20:0.1~0.3:0.05~0.15:1~5。
步骤3海藻糖合成
将固定化海藻糖合成酶放入麦芽糖溶液中，控温45~65℃，控制搅拌速度100~260转/分，反应30~50小时后，过滤分离，滤液为海藻糖粗品，滤出物为固定化海藻糖合成酶，滤出物用清水浸泡3~5小时后，自然晾干后可重复利用；
所述麦芽糖溶液，麦芽糖的质量浓度为10~15wt%；
所述固定化海藻糖合成酶与麦芽糖溶液的质量比为4~10:100。
与现有技术相比，本发明取得以下有益效果：
1、本发明开发出了基于固定化海藻糖合成酶技术的海藻糖生产方法，用改性硅胶固载了海藻糖合成酶，该固定化海藻糖合成酶的催化活性衰减慢，可多次重复利用且麦芽糖转化为海藻糖的转化率高；
2、采用本发明所述方法制备海藻糖，固定化海藻糖合成酶初次使用时，麦芽糖转化为海藻糖的转化率为77.3~80.3%，该固定化海藻糖合成酶重复利用10次、20次、30次时，麦芽糖转化为海藻糖的转化率分别为74.9%、70.7%、68.5%。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：一种海藻糖的生产方法
包括以下步骤：
1、硅胶改性
将B型硅胶放入硫酸水溶液中，加热至微沸状态后，恒温回流1.5小时，然后滤出B型硅胶，用去离子水浸泡洗涤至洗出液的pH=6.9，自然晾干后得到清洗后的B型硅胶；将清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷加到三口烧瓶中，向其中滴加乙酸，将烧瓶内液体的pH调节到4.0，控温150℃，200转/分速率下，搅拌回流2.5小时后，滤出的硅胶用乙醇浸泡洗涤4次后，在60℃下干燥2小时，得到改性硅胶；
所述B型硅胶，其形状为近似球形，粒径为1mm，平均孔径为6nm，比表面积为590m2/g；
所述B型硅胶与硫酸水溶液的质量比为1:3；
所述硫酸水溶液的质量浓度为60wt%；
所述清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷的质量比为17:100:3:2。
2、海藻糖合成酶固载
将海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶加到摇床振荡器中，控制温度20℃，旋转速度150转/分，振荡7小时后，滤出硅胶固体，用去离子水洗涤4次后，得到固定化海藻糖合成酶；
所述海藻糖合成酶酶液，是根据专利CN103205475A中实施例7-2所述方法制得的粗酶液，酶活性29.4U/mL；
所述海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶的质量比为14:0.2:0.1:3。
3、海藻糖合成
将固定化海藻糖合成酶放入麦芽糖溶液中，控温55℃，控制搅拌速度200转/分，反应40小时后，过滤分离，滤液为海藻糖粗品，滤出物为固定化海藻糖合成酶，滤出物用清水浸泡4小时后，自然晾干后可重复利用；
所述麦芽糖溶液，麦芽糖的质量浓度为13wt%；
所述固定化海藻糖合成酶与麦芽糖溶液的质量比为8:100。
实施例2：一种海藻糖的生产方法
包括以下步骤：
1、硅胶改性
将B型硅胶放入硫酸水溶液中，加热至微沸状态后，恒温回流1小时，然后滤出B型硅胶，用去离子水浸泡洗涤至洗出液的pH=6.8，自然晾干后得到清洗后的B型硅胶；将清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷加到三口烧瓶中，向其中滴加乙酸，将烧瓶内液体的pH调节到3.5，控温140℃，150转/分速率下，搅拌回流1.5小时后，滤出的硅胶用乙醇浸泡洗涤3次后，在50℃下干燥1小时，得到改性硅胶；
所述B型硅胶，其形状为近似球形，粒径为0.5mm，平均孔径为4nm，比表面积为580m2/g；
所述B型硅胶与硫酸水溶液的质量比为1:2；
所述硫酸水溶液的质量浓度为50wt%；
所述清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷的质量比为12:75:1:1。
2、海藻糖合成酶固载
将海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶加到摇床振荡器中，控制温度10℃，旋转速度100转/分，振荡5小时后，滤出硅胶固体，用去离子水洗涤3次后，得到固定化海藻糖合成酶；
所述海藻糖合成酶酶液，是根据专利CN103205475A中实施例7-1所述方法制得的粗酶液，酶活性24.5U/mL；
所述海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶的质量比为10:0.1:0.05:1。
3、海藻糖合成
将固定化海藻糖合成酶放入麦芽糖溶液中，控温45℃，控制搅拌速度100转/分，反应30小时后，过滤分离，滤液为海藻糖粗品，滤出物为固定化海藻糖合成酶，滤出物用清水浸泡3小时后，自然晾干后可重复利用；
所述麦芽糖溶液，麦芽糖的质量浓度为10wt%；
所述固定化海藻糖合成酶与麦芽糖溶液的质量比为4:100。
实施例3：一种海藻糖的生产方法
包括以下步骤：
1、硅胶改性
将B型硅胶放入硫酸水溶液中，加热至微沸状态后，恒温回流2小时，然后滤出B型硅胶，用去离子水浸泡洗涤至洗出液的pH=7.0，自然晾干后得到清洗后的B型硅胶；将清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷加到三口烧瓶中，向其中滴加乙酸，将烧瓶内液体的pH调节到4.8，控温160℃，300转/分速率下，搅拌回流4小时后，滤出的硅胶用乙醇浸泡洗涤5次后，在80℃下干燥2.5小时，得到改性硅胶；
所述B型硅胶，其形状为近似球形，粒径为2mm，平均孔径为8nm，比表面积为600m2/g；
所述B型硅胶与硫酸水溶液的质量比为1:4；
所述硫酸水溶液的质量浓度为70wt%；
所述清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷的质量比为22:110:4:6。
2、海藻糖合成酶固载
将海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶加到摇床振荡器中，控制温度35℃，旋转速度200转/分，振荡9小时后，滤出硅胶固体，用去离子水洗涤5次后，得到固定化海藻糖合成酶；
所述海藻糖合成酶酶液，是根据专利CN103205475A中实施例7-4所述方法制得的粗酶液，酶活性31.3U/mL；
所述海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶的质量比为20:0.3:0.15:5。
3、海藻糖合成
将固定化海藻糖合成酶放入麦芽糖溶液中，控温65℃，控制搅拌速度260转/分，反应50小时后，过滤分离，滤液为海藻糖粗品，滤出物为固定化海藻糖合成酶，滤出物用清水浸泡5小时后，自然晾干后可重复利用；
所述麦芽糖溶液，麦芽糖的质量浓度为15wt%；
所述固定化海藻糖合成酶与麦芽糖溶液的质量比为10:100。
对比例1：实施例1基础上，不进行海藻糖合成酶固载，直接用游离态的海藻糖合成酶酶液催化麦芽糖合成海藻糖
不进行步骤1和步骤2；
步骤3操作将固定化海藻糖合成酶等质量替换为海藻糖合成酶酶液，其它操作同于实施例1；
所述海藻糖合成酶酶液，是根据专利CN103205475A中实施例7-2所述方法制得的粗酶液，酶活性29.4U/mL。
对比例2：实施例1基础上，不进行硅胶改性步骤，直接用未改性硅胶固定化海藻糖合成酶
不进行步骤1；
步骤2中改性硅胶替换为等质量的未改性硅胶；
步骤3操作同于实施例1。
对比例3：实施例1基础上，步骤2海藻糖合成酶固载中不加入1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐
步骤1操作同于实施例1；
步骤2中将1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐替换为等质量的海藻糖合成酶酶液；
步骤3操作同于实施例1。
上述实施例1、2、3，对比例1、2、3以及实施例1中固定化海藻糖合成酶重复利用10次、20次、30次时，取样测试麦芽糖转化为海藻糖的转化率，麦芽糖转化为海藻糖的转化率计算公式如下：
麦芽糖转化为海藻糖的转化率(%)＝(海藻糖粗品中海藻糖的浓度×100）/反应起始时麦芽糖浓度；
上述测试结果见下表：
Figure 236920DEST_PATH_IMAGE001
从上表中可以看到，固载后的海藻糖合成酶与游离态的海藻糖合成酶相比，二者催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率，前者略高于后者，说明固载过程对海藻糖合成酶的活性没有影响；对比例2中的转化率仅为25.4%，可见不对硅胶改性的话，酶的固载量很低或者酶失活现象严重；对比例3转化率为58.6%，说明1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐两种物质对酶的固载过程有显著影响，这两种物质对酶与改性硅胶表面的固载化作用有显著促进作用。

Claims (4)

1.一种海藻糖的生产方法，其特征在于：包括硅胶改性、海藻糖合成酶固载、海藻糖合成；
所述硅胶改性，其方法为将B型硅胶放入硫酸水溶液中，加热至微沸状态后，恒温回流1~2小时，然后滤出B型硅胶，用去离子水浸泡洗涤至洗出液的pH=6.8~7.0，自然晾干后得到清洗后的B型硅胶；将清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷混合后，向其中滴加乙酸，将体系的pH调节到3.5~4.8，控温140~160℃，150~300转/分速率下，搅拌回流1.5~4小时后，滤出的硅胶用乙醇浸泡洗涤3~5次后，在50~80℃下干燥1~2.5小时，得到改性硅胶；
所述B型硅胶与硫酸水溶液的质量比为1:2~4；
所述硫酸水溶液的质量浓度为50~70wt%；
所述清洗后的B型硅胶、对二甲苯、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、γ-巯丙基三乙氧基硅烷的质量比为12~22:75~110:1~4:1~6；
所述海藻糖合成酶固载，其方法为将海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶加到摇床振荡器中，控制温度10~35℃，旋转速度100~200转/分，振荡5~9小时后，滤出硅胶固体，用去离子水洗涤3~5次后，得到固定化海藻糖合成酶；
所述海藻糖合成酶酶液、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐、2-氨基-2-脱氧-D-氨基葡萄糖盐酸盐、改性硅胶的质量比为10~20:0.1~0.3:0.05~0.15:1~5；
所述海藻糖合成，其方法为将固定化海藻糖合成酶放入麦芽糖溶液中，控温45~65℃，控制搅拌速度100~260转/分，反应30~50小时后，过滤分离，滤液为海藻糖粗品，滤出物为固定化海藻糖合成酶。
2.根据权利要求1所述的一种海藻糖的生产方法，其特征在于：
所述B型硅胶，其形状为近似球形，粒径为0.5~2mm，平均孔径为4~8nm，比表面积为580~600m2/g。
3.根据权利要求1所述的一种海藻糖的生产方法，其特征在于：
所述海藻糖合成酶酶液，酶活性24.5~31.3U/mL。
4.根据权利要求1所述的一种海藻糖的生产方法，其特征在于：
所述麦芽糖溶液，麦芽糖的质量浓度为10~15wt%；
所述固定化海藻糖合成酶与麦芽糖溶液的质量比为4~10:100。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116510026A (zh) * 2023-07-04 2023-08-01 山东天力药业有限公司 一种甘露醇复合药用辅料及其制备方法
WO2023193429A1 (zh) * 2022-04-08 2023-10-12 山东天力药业有限公司 一种海藻糖的生产方法

Citations (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4384045A (en) * 1980-05-21 1983-05-17 Borden, Inc. Activation of a siliceous carrier for enzyme immobilization
JPS63146791A (ja) * 1986-12-08 1988-06-18 Hitachi Ltd 酵素の固定化方法
WO2007050100A2 (en) * 2004-11-24 2007-05-03 Industrial Science & Technology Network, Inc. Immobilized enzymes and processes for preparing and using same
CN101508986A (zh) * 2009-03-18 2009-08-19 天津大学 以硅凝胶为载体的固定化青霉素酰化酶及制备方法
CN101736000A (zh) * 2009-12-30 2010-06-16 大连工业大学 提高固定化脂肪酶活性和稳定性的方法
CN102181422A (zh) * 2011-03-08 2011-09-14 天津大学 大孔载体“同步法”共价交联-固载木瓜蛋白酶聚体及方法
CN102302948A (zh) * 2011-06-21 2012-01-04 西北师范大学 硅胶固载型苯磺酸催化剂及其制备和应用
CN102337313A (zh) * 2011-10-17 2012-02-01 山东天力药业有限公司 一种制备海藻糖的方法
US20120219728A1 (en) * 2009-11-23 2012-08-30 Badri Brinda B Methods of surface treating porous particles
CN102952792A (zh) * 2012-11-12 2013-03-06 淮阴工学院 凹凸棒土负载海藻酸钠固定β-葡萄糖苷酶的制备方法
CN103205475A (zh) * 2013-04-15 2013-07-17 山东天力药业有限公司 新型麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生产中的应用
CN103602710A (zh) * 2013-09-30 2014-02-26 山东西王糖业有限公司 固定化复合酶制取葡萄糖酸钙的方法
CN103805589A (zh) * 2014-02-28 2014-05-21 湖北工业大学 纤维素酶交联晶体在硅胶板上的固定方法
CN106811455A (zh) * 2015-11-27 2017-06-09 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 固定化酶及其制备方法
CN107893065A (zh) * 2017-11-24 2018-04-10 宁夏乙征生物工程有限公司 一种固定化酶的制备方法
CN107930601A (zh) * 2017-11-02 2018-04-20 苏州硒诺唯新新材料科技有限公司 新型多聚有机改性硅胶材料的新组分及其使用
CN108246252A (zh) * 2018-01-04 2018-07-06 浙江工业大学 一种碳硅复合吸附剂及应用
CN108642035A (zh) * 2018-05-08 2018-10-12 江苏理工学院 一种硅胶固定gdh催化制备nadph的方法
CN111378641A (zh) * 2018-12-29 2020-07-07 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种固定化酶载体及固定化酶
CN112301025A (zh) * 2019-07-31 2021-02-02 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 固定化酶载体的修饰方法及应用
RU2753408C1 (ru) * 2020-10-07 2021-08-16 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный университет" (ФГБОУ ВО "КубГУ") Способ получения силикагеля с иммобилизованной альдегидной группой

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114438072B (zh) * 2022-04-08 2022-05-31 山东天力药业有限公司 一种海藻糖的生产方法

Patent Citations (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4384045A (en) * 1980-05-21 1983-05-17 Borden, Inc. Activation of a siliceous carrier for enzyme immobilization
JPS63146791A (ja) * 1986-12-08 1988-06-18 Hitachi Ltd 酵素の固定化方法
WO2007050100A2 (en) * 2004-11-24 2007-05-03 Industrial Science & Technology Network, Inc. Immobilized enzymes and processes for preparing and using same
CN101508986A (zh) * 2009-03-18 2009-08-19 天津大学 以硅凝胶为载体的固定化青霉素酰化酶及制备方法
US20120219728A1 (en) * 2009-11-23 2012-08-30 Badri Brinda B Methods of surface treating porous particles
CN101736000A (zh) * 2009-12-30 2010-06-16 大连工业大学 提高固定化脂肪酶活性和稳定性的方法
CN102181422A (zh) * 2011-03-08 2011-09-14 天津大学 大孔载体“同步法”共价交联-固载木瓜蛋白酶聚体及方法
CN102302948A (zh) * 2011-06-21 2012-01-04 西北师范大学 硅胶固载型苯磺酸催化剂及其制备和应用
CN102337313A (zh) * 2011-10-17 2012-02-01 山东天力药业有限公司 一种制备海藻糖的方法
CN102952792A (zh) * 2012-11-12 2013-03-06 淮阴工学院 凹凸棒土负载海藻酸钠固定β-葡萄糖苷酶的制备方法
CN103205475A (zh) * 2013-04-15 2013-07-17 山东天力药业有限公司 新型麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶在海藻糖生产中的应用
CN103602710A (zh) * 2013-09-30 2014-02-26 山东西王糖业有限公司 固定化复合酶制取葡萄糖酸钙的方法
CN103805589A (zh) * 2014-02-28 2014-05-21 湖北工业大学 纤维素酶交联晶体在硅胶板上的固定方法
CN106811455A (zh) * 2015-11-27 2017-06-09 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 固定化酶及其制备方法
CN107930601A (zh) * 2017-11-02 2018-04-20 苏州硒诺唯新新材料科技有限公司 新型多聚有机改性硅胶材料的新组分及其使用
CN107893065A (zh) * 2017-11-24 2018-04-10 宁夏乙征生物工程有限公司 一种固定化酶的制备方法
CN108246252A (zh) * 2018-01-04 2018-07-06 浙江工业大学 一种碳硅复合吸附剂及应用
CN108642035A (zh) * 2018-05-08 2018-10-12 江苏理工学院 一种硅胶固定gdh催化制备nadph的方法
CN111378641A (zh) * 2018-12-29 2020-07-07 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种固定化酶载体及固定化酶
CN112301025A (zh) * 2019-07-31 2021-02-02 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 固定化酶载体的修饰方法及应用
RU2753408C1 (ru) * 2020-10-07 2021-08-16 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный университет" (ФГБОУ ВО "КубГУ") Способ получения силикагеля с иммобилизованной альдегидной группой

Non-Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ADRIANA REKUC等: "Very stable silica-gel-bound laccase biocatalysts for the selective oxidation in continuous systems", 《BIORESOURCE TECHNOLOGY》 *
ADRIANA REKUC等: "Very stable silica-gel-bound laccase biocatalysts for the selective oxidation in continuous systems", 《BIORESOURCE TECHNOLOGY》, vol. 101, no. 7, 30 April 2010 (2010-04-30), pages 2076 - 2083, XP026822488 *
CHADIN KULSING等: "Insights into the Origin of the Separation Selectivity with Silica Hydride Adsorbents", 《THE JOURNAL OF PHYSICAL CHEMISTRY B》 *
CHADIN KULSING等: "Insights into the Origin of the Separation Selectivity with Silica Hydride Adsorbents", 《THE JOURNAL OF PHYSICAL CHEMISTRY B》, vol. 119, no. 7, 6 February 2015 (2015-02-06), pages 3063 - 3069 *
JULIANA MOTA DE OLIVEIRA等: "Production, characterization, and immobilization of protease from the yeast Rhodotorula oryzicola", 《BIOTECHNOL APPL BIOCHEM》 *
JULIANA MOTA DE OLIVEIRA等: "Production, characterization, and immobilization of protease from the yeast Rhodotorula oryzicola", 《BIOTECHNOL APPL BIOCHEM》, vol. 68, no. 5, 21 September 2020 (2020-09-21), pages 1033 - 1043 *
刘志良等: "氨基化硅胶载体固定化纤维素酶的研究", 《生物技术通报》 *
刘志良等: "氨基化硅胶载体固定化纤维素酶的研究", 《生物技术通报》, no. 3, 26 March 2010 (2010-03-26), pages 196 - 198 *
孙艳红等: "不同载体固定化产脂肪酶发酵性丝孢酵母的比较", 《大连工业大学学报》 *
孙艳红等: "不同载体固定化产脂肪酶发酵性丝孢酵母的比较", 《大连工业大学学报》, vol. 33, no. 4, 15 July 2014 (2014-07-15), pages 246 - 249 *
张虎等: "硅胶固载咪唑离子液体的制备及二氧化碳吸附性能", 《现代化工》 *
张虎等: "硅胶固载咪唑离子液体的制备及二氧化碳吸附性能", 《现代化工》, vol. 31, no. 11, 20 November 2011 (2011-11-20), pages 45 - 48 *
李从军主编: "《生物产品分离纯化技术》", 31 August 2009, 华中师范大学出版社, pages: 110 *
李连连: "以硅胶为载体的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体的制备及性质研究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库基础科学辑（电子期刊）》 *
李连连: "以硅胶为载体的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体的制备及性质研究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库基础科学辑（电子期刊）》, no. 12, 15 December 2015 (2015-12-15), pages 006 - 185 *
温小荣等: "氨基化大孔硅胶共价固定Pancreas porcine脂肪酶的研究", 《现代食品科技》 *
温小荣等: "氨基化大孔硅胶共价固定Pancreas porcine脂肪酶的研究", 《现代食品科技》, vol. 29, no. 10, 15 October 2013 (2013-10-15), pages 2487 - 2491 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023193429A1 (zh) * 2022-04-08 2023-10-12 山东天力药业有限公司 一种海藻糖的生产方法
CN116510026A (zh) * 2023-07-04 2023-08-01 山东天力药业有限公司 一种甘露醇复合药用辅料及其制备方法
CN116510026B (zh) * 2023-07-04 2023-09-19 山东天力药业有限公司 一种甘露醇复合药用辅料及其制备方法

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