CN114432459B - 一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物、制备方法及其应用 - Google Patents
一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物、制备方法及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
一种过氧化物纳米酶‑葡萄糖氧化酶双酶复合物、制备方法及其应用，属于生物技术领域。本发明针对现有化学药物的不足，以生物酶活性为设计理念，以纳米酶为基底，将天然酶(葡萄糖氧化酶)和纳米酶(MOF‑Fe)通过PEG偶联，形成自身偶联反应体系进而形成联级反应；在葡萄糖存在下，利用组装体内自身葡萄糖氧化酶活性，将葡萄糖分解成H2O2，为下一步反应提供底物；在铁离子存在的金属有机框架材料(MOFs)中，利用其过氧化物酶活性，对已形成的H2O2进行分解，产生自由基。该复合物在消耗葡萄糖的前提下，产生杀伤作用，提高对旋毛虫的杀伤效率，其在人畜共患旋毛虫病等相关人兽共患寄生虫病中的治疗具有潜在的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物及其制备方法，该过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物可以在制备治疗人畜共患旋毛虫病等相关寄生虫病药物中得到应用。
背景技术
旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种呈全球分布具有重要危害的人畜共患寄生虫病。旋毛虫在分化成长过程中，周围环境中及宿主体内的葡萄糖起到至关重要的作用，旋毛虫可利用环境及宿主体内的葡萄糖，通过糖酵解等方式为自身分化及成长提供所需的能量。但在葡萄糖氧化酶存在条件下，葡萄糖可被分解为H2O2，进而减少其对于旋毛虫体内能量的供给。
旋毛虫的早期杀伤一直是科学家们关注的焦点，由于咪唑类药物可溶性差且过量食用会产生一定的副作用，采用生物酶法对旋毛虫进行杀伤尤为重要。在寄生虫侵染宿主过程中，嗜酸性粒细胞和/或中性粒细胞白细胞在宿主抵御侵袭性、迁移性蠕虫感染中起着重要作用。在许多寄生虫病感染中，随着中性粒细胞与嗜酸性粒细胞增高，对病原体表现出杀伤作用逐渐增强，而其杀伤性多源自于其表面的过氧化物酶特性。旋毛虫体外培养结果表明，在有H2O2存在条件下，利用嗜酸性粒细胞的过氧化物酶活性，可形成嗜酸性粒细胞过氧化物酶/H2O2/Cl-的互作机制，进而对旋毛虫起到杀伤作用。中性粒细胞在抗体的介导下，产生的过氧化物酶优于嗜酸性粒细胞的过氧化物酶，因此体外杀伤幼虫优于嗜酸性粒细胞，其结果进一步证实过氧化物酶在旋毛虫杀伤作用中起到至关重要的作用。但天然过氧化物酶来源有限且价格昂贵，因此大范围的利用天然过氧化物酶对旋毛虫进行杀伤和治疗仍存在局限性。
自2007年以来，纳米酶持续被人们所关注，与天然酶相比，其具有成本低、易于大规模生产、对恶劣环境具有较高的耐受性、高稳定性且易长期储存等特点。同时，具有类酶特性的纳米材料，易于同葡萄糖氧化酶形成共存体系。2012年，周宏才课题组(Feng D,etal.(2012)Zirconium-metalloporphyrin PCN-222:mesoporous metal–organicframeworks with ultrahigh stability as biomimetic catalysts.Angewandte ChemieInternational Edition 51(41):10307-10310.)以四羧基苯基卟吩(TCPP)为配体，锆原子团簇为金属节点，设计合成了具有一维孔道结构的三维卟啉MOF，进一步研究表明在有金属离子存在条件下，所合成的MOF具有类过氧化物酶活性。
基于目前现状，设计出利用生物酶活性所形成偶联体系，进而对旋毛虫具有杀伤作用的复合物至关重要。
发明内容
本发明针对现有化学药物的不足，以生物酶活性为设计理念，以纳米酶为基底，通过偶联葡萄糖氧化酶提供了一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物及其制备方法，该过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物可以在制备治疗人畜共患旋毛虫病的药物中得到应用。
本发明是将天然酶(葡萄糖氧化酶)和纳米酶(MOF-Fe)通过PEG偶联，形成自身偶联反应体系进而形成联级反应；在葡萄糖存在下，利用组装体内自身葡萄糖氧化酶活性，将葡萄糖分解成H2O2，为下一步反应提供底物；在铁离子存在的金属有机框架材料(MOFs)中，利用其过氧化物酶活性，对已形成的H2O2进行分解，产生自由基。该复合物在消耗葡萄糖的前提下，产生杀伤作用，提高对旋毛虫的杀伤效率。
本发明所述的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物的制备方法，其步骤如下：
(1)配体四羧基苯基卟吩的铁金属化：取100～200mg TCPP(四羧基苯基卟吩)和300～400mg FeCl2·4H2O(四水氯化亚铁)超声溶解于15～25mL DMF(二甲基甲酰胺)中，120～180℃冷凝回流1～4小时；然后抽滤，抽滤产物用水洗涤3～10次，所得沉淀于60～100℃下干燥除去水份，得到TCPP-Fe；
(2)MOF-525(Fe)(即MOF-Fe)的合成：取8～12mg TCPP-Fe和4～8mg ZrOCl2·8H2O(八水氯氧化锆)超声溶解于2～6mL DMF中，再加入0.1～1mL冰醋酸，80～95℃反应15～20小时；反应结束后于8 000～15 000rpm下离心8～15min收集沉淀，将得到的沉淀用DMF反复洗涤沉淀至上清液澄清透明，再将洗涤后的沉淀于120～160℃、真空下干燥24～48小时，得到MOF-Fe；
(3)MOF-Fe的活化：取25～35mg步骤(2)制备的MOF-Fe超声溶解于15～30mL DMF中，随后加入0.3～1mL、8M的HCl(盐酸)，在100～150℃下反应10～16小时；反应结束后于10000～15 000rpm下离心8～15min收集沉淀，将得到的沉淀用DMF反复洗涤至上清液澄清透明，再将洗涤后的沉淀于120～160℃、真空下干燥24～48小时，得到活化后的MOF-Fe；
(4)PEG偶联MOF-Fe的合成：称取8～15mg步骤(3)活化后的MOF-Fe超声溶解于8～20mL DMF中，随后加入8～20mg NH2-PEG-COOH(氨基聚乙二醇羧基)(MW：1 000～10 000)，20～45℃下反应4～10小时；反应结束后于10 000～16 000rpm下离心8～15min收集沉淀，将得到的沉淀用蒸馏水反复洗涤至上清液澄清透明，再将洗涤后的沉淀于-45～-60℃下冷冻干燥18～30小时，得到PEG-MOF-525(Fe)(即MP(Fe))；
(5)GOx-PEG-MOF-525(Fe)(即MPG(Fe))的合成：称取8～15mg葡萄糖氧化酶(GOx)溶解于5～15mL MES(吗啉乙磺酸一水合物)缓冲液中(pH 6.6)，随后加入0.1～0.3mL、20mMEDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)水溶液，25～40℃搅拌10～20分钟形成反应溶液1；称取8～15mg步骤(4)制备的MP(Fe)溶解于8～15mL MES缓冲液中(pH 6.6)，随后加入0.1～0.3mL、20mM NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)水溶液，25～40℃搅拌10～20分钟形成反应溶液2；将反应溶液1和反应溶液2充分混合，20～40℃反应0.5～4小时；反应结束后于10 000～16 000rpm下离心8～15min收集沉淀，将得到的沉淀用蒸馏水反复洗涤至上清液澄清透明，再将洗涤后的沉淀于-45～-60℃下冷冻干燥18～30小时，得到MPG(Fe)粉末，即本发明所述的过氧化物纳米酶－葡萄糖氧化酶双酶复合物。
本发明所述的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物，其是由上述方法制备得到。本发明所述的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物可以在制备治疗人畜共患旋毛虫病的药物中得到应用。
本发明所构建的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物，在铁离子存在的条件下，可以形成自身的级联反应，所有构建的MPG(Fe)复合物可在仅有葡萄糖存在的条件下，产生自由基，表现出过氧化物酶及葡萄糖氧化酶双酶活性。在没有铁离子存在的条件下，GOx通过PEG和MOF-Fr形成的GOx-PEG-MOF-Fr(即MPG(Fr))仅表现葡萄糖氧化酶特性。本发明所述的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物，对不同时期旋毛虫进行体外杀伤构建旋毛虫感染模型，对小鼠进行腹腔注射通过减虫率说明其体内杀伤作用。
相对于现有技术，本发明具有以下效果：本发明所涉及的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物是一种同时具有过氧化物酶活性及葡萄糖氧化酶活性的纳米酶，对不同时期旋毛虫起到一定的杀伤效果，其酶学特性在人畜共患旋毛虫病等相关人兽共患寄生虫病中的治疗具有潜在的应用价值。
附图说明
图1是实施例1中材料的扫描电镜(SEM)(a～c)和透射电镜(TEM)(d～f)成像图。其中a为放大90 000倍的MOF-Fe(即MOF-525(Fe))，b为放大90 000倍的MP(Fe)(即PEG-MOF-525(Fe))，c为放大70 000倍的MPG(Fe)(即GOx-PEG-MOF-525(Fe))；d为放大200 000倍的MOF-Fe，e为放大400 000倍的MP(Fe)，f为放大200 000倍的MPG(Fe)。
图2是实施例1中产物的紫外-可见吸收光谱图，从图中可知经PEG修饰后纳米酶(MP(Fe))Q带579nm处吸收峰红移至584nm处，626nm处吸收峰红移至629nm处。连接葡萄糖氧化酶后(MPG(Fe))Q带吸收峰与PEG修饰后的纳米酶无明显差异。Soret带处吸收峰无明显变化。
图3是实施例1中X射线衍射图，表明实施例1中所合成的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物晶体结构稳定，连接葡萄糖氧化酶后，MOF-Fe结构基本没有变化。
图4是实施例1中MPG(Fe)对底物ABTS(a)和TMB(b)的酶促反应动力学曲线。
图5是实施例1中MPG(Fr)葡萄糖氧化酶活力验证曲线。
图6是实施例1中MPG(Fe)随时间增加对成虫(a)和新生幼虫(b)生存率影响的柱形图。
图7是实施例1中MOF(Fe)随时间增加对成虫(a)和新生幼虫(b)生存率影响的柱形图。
图8是实施例1中不同浓度MPG(Fe)对小鼠体内成虫数量的影响柱形图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。本实施例以本发明技术方案为前提进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例提供一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物合成方法，其所需药品如下：
TCPP(四羧基苯基卟吩)购自日本TCI试剂公司，NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)、EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐)、FeCl2·4H2O(四水氯化亚铁)、ZrOCl2·8H2O(八水氯氧化锆)、ABTS(2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐)和TMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)购自上海阿拉丁试剂公司，NH2-PEG-COOH(氨基聚乙二醇羧基盐酸盐)购自上海芃硕生物科技公司，MES(吗啉乙磺酸一水合物)购自北京索莱宝生物科技公司，GOx(葡萄糖氧化酶)、HPR(辣根过氧化物酶)、Glu(葡萄糖)购自上海源叶生物公司，DMF(二甲基甲酰胺)、冰醋酸、浓盐酸、氢氧化钠购自国药化学试剂公司。
具体合成方法如下：
1.配体-四羧基苯基卟吩的铁金属化：
取160mg TCPP(四羧基苯基卟吩)和400mg FeCl2·4H2O，超声溶解于20mL DMF中，160℃冷凝回流2小时；然后抽滤，用水洗涤5次，洗涤后的沉淀80℃干燥除去沉淀中的水份，得到TCPP-Fe。
2.MOF-Fr或MOF-Fe的合成
称取TCPP或TCPP-Fe 9.8mg，ZrOCl2·8H2O 5.2mg，超声溶解于3mL DMF中，随后加入0.2mL冰醋酸，90℃油浴反应18小时。18小时后，得到的沉淀10 000rpm离心10分钟收集沉淀，去掉上清。剩余沉淀用DMF反复洗涤三次，洗涤后的沉淀150℃真空干燥36小时得到MOF-Fr或MOF-Fe。
3.MOF的活化
取MOF-Fr或MOF-Fe 30mg超声溶解于20mL DMF溶液中，随后加入0.75mL HCl(8M)，120℃反应12小时。反应结束后，12 000rpm离心10分钟收集沉淀。得到的沉淀用DMF洗涤至上清澄清透明。洗涤后的沉淀150℃真空干燥36h得到活化后的MOF-Fr或MOF-Fe。
4.MP(Fr)或MP(Fe)合成
称取10mg活化后的MOF-Fr或MOF-Fe超声溶解于10mL DMF中，随后加入10mg NH2-PEG-COOH(MW：2000)，25℃反应6小时。反应结束后，15 000rpm离心10min收集沉淀。得到的沉淀用蒸馏水洗涤至上清澄清透明。洗涤后的沉淀冷冻干燥24小时，得到MP(Fr)或MP(Fe)。
5.MPG(Fr)或MPG(Fe)的合成
反应1：称取10mg GOx溶解于10mL MES缓冲液(pH 6.6)中，随后加入0.1mL EDC水溶液(20mM)37℃搅拌15分钟。反应2：称取10mg MP(Fr)或MP(Fe)溶解于10mL MES缓冲液(pH6.6)中，随后加入0.1mL NHS水溶液(20mM)，37℃搅拌15分钟形成反应溶液2。将反应溶液1和反应溶液2混合，25℃反应1小时。反应结束后，15 000rpm离心10分钟收集沉淀。得到的沉淀用蒸馏水洗涤至上清澄清透明，再将洗涤后的沉淀冷冻干燥24小时，得到GOx-PEG-MOF-Fr(MPG(Fr))或GOx-PEG-MOF-Fe(MPG(Fe))。
实施例2
本实施例对实施例1中所得到的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物进行SEM、TEM成像表征，实施例1中的成像结果如图1所示，由图所知，实施例1中所合成的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物(MPG(Fe))大小约为50nm，形态呈类球形且均匀分布。SEM显示所合成的MOF-Fe呈现均匀的球形分布(图1a)，TEM(图1d)结果同SME结果相互佐证，证实MOF-Fe为大小约50nm呈球形均匀分布的个体。依实施例1中合成MP(Fe)，其SEM结果(图1b)和TEM结果(图1e)表明，同MOF-Fe相比较，MP(Fe)形态没有发生显著变化，但PEG的连接会增加其交联性，进而提高其水溶性。依实施例1中合成MPG(Fe)后，SEM结果(图1c)和TEM(图1f)表明其形态仍呈球形均与分布，GOx的混合并没有影响其结构变化。
实施例3
本实施例对实施例1中所得到的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物进行紫外光谱表征，实施例1中的紫外光谱图结果如图2所示，由图所知，经PEG修饰后纳米酶Q带579nm处吸收峰红移至584nm处，626nm处吸收峰红移至629nm处。连接葡萄糖氧化酶后Q带吸收峰与PEG修饰后的纳米酶无明显差异。Soret带处吸收峰无明显变化。
实施例4
本实施例对实施例1中所得到的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物进行X射线衍射(XRD)，实施例1中的XRD结果如图3所示，由图所知，实施例1中所合成的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物晶体结构稳定，连接葡萄糖氧化酶后，MOF(Fe)结构基本没有变化。
实施例5
本实施例通过对实施例1中的MPG(Fe)复合物级联反应活性实验来评估本发明所涉及的纳米酶-葡萄糖氧化酶的酶学特性。为确保实验现象的准确性，在实验中选取两种经典的过氧化物酶底物2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)进行平行实验。测定过程为：1mL反应体系中含ABTS(2mM)或TMB(2mM)、葡萄糖(20mM)、MPG(Fe)(0.1mg)、醋酸缓冲溶液(pH＝4.0，0.2M)，使用UV-2700型紫外-可见分光光谱仪动力学模式(ABTS(734nm)或TMB(652nm))监测反应体系随时间变化底物转化情况。其实验结果如图4所示。只有MPG(Fe)与葡萄糖同时存在时才能催化过氧化物酶底物ABTS或TMB氧化生成氧化型ABTS或TMB。
实施例6
在进一步探究MPG(Fr)复合物级联反应，本实施例通过对实施例1中的MPG(Fr)的葡萄糖氧化酶活性进行试验，利用过氧化物酶法进一步评估其葡萄糖氧化酶在联级反应中的作用。测定条件为：1mL反应体系含ABTS(2mM)、Glu(葡萄糖)(20mM)、HRP(辣根过氧化物酶)(0.1mg/mL)、MPG(Fr)(0.1mg)，醋酸缓冲溶液(pH＝4.0，0.2M)使用UV-2700型紫外-可见分光光谱仪动力学模式(ABTS(734nm))监测反应体系随时间变化底物转化情况。实验结果如图5所示，当反应体系中存在HRP、葡萄糖时(曲线1)，氧化型ABTS浓度随时间变化不断增加。体系中存在葡萄糖，无HRP时(曲线2)，无氧化型ABTS的生成。体系中存在HRP，无葡萄糖时(曲线3)，无氧化型ABTS的生成。因此MPG(Fr)复合物能催化葡萄糖产生H2O2。
实施例7
一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物体外对旋毛虫不同时期的杀伤评估试验。本实施例通过对实施例1中的MPG(Fe)复合物在体外对旋毛虫不同时期的杀伤试验来评估本发明所涉到的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物的体外杀伤效力。试验测定条件为：成虫培养48孔板中，每孔含1mL pH 7.4PBS缓冲液(含200mM葡萄糖)，50μg/mL MPG(Fe)，显微镜下计数2、4、8、12、24小时成虫死亡个数。新生幼虫培养96孔板中，孔含200μL pH 7.4PBS缓冲液(200mM葡萄糖)，10μg/mL MPG(Fe)，显微镜下计数2、4、8、12小时新生幼虫死亡个数。实验结果如图6所示，成虫在经50μg/mL MPG(Fe)共培养24小时后，死亡率约为75％；新生幼虫经10μg/mL MPG(Fe)共培养12小时后，死亡率约为97％，该过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物对成虫和新生幼虫均具有较强的杀伤能力。
为了论证对于旋毛虫的杀伤效果不是来自于材料本身，选用等浓度的MOF-Fe进行对比试验，其结果如图7所示，证明对于旋毛虫的杀伤作用仅来自于实施例1中所合成的过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物，且对于旋毛虫不同时期(新生幼虫和成虫)均有杀伤效力。
实施例8
一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物对感染旋毛虫的小鼠减虫率的影响。本实施例通过对实施例1中的MPG(Fe)复合物不同浓度在体内对旋毛虫减虫率的试验来评估本发明所涉到的过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物的体内作用效力。构建旋毛虫感染的小鼠模型，小鼠感染计量300条/只，在感染后6小时、12小时和24小时分别采用腹腔注射的方式对小鼠进行MPG(Fe)复合物，高剂量组(High Dose)7.5mg/kg，低剂量组(Low Dose)2.5mg/kg，注射三次后，在感染30小时后对小鼠进行解剖收集肠道中的虫子并计算其减虫率。为避免其他因素干扰，对小鼠随机分组并随机抽取三只计算其注射后减虫率的平均值，设置PBS组排除溶剂对减虫率的影响。结果如图8所示，该过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物在小鼠内，对旋毛虫感染后的小鼠具有良好的作用效果且高剂量组的减虫率优于低剂量组。
Claims (3)
1.一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物的制备方法，其步骤如下：
（1）配体四羧基苯基卟吩的铁金属化：取100~200 mg TCPP和300~400 mg FeCl2·4H2O超声溶解于15~25 mL DMF中，120~180℃冷凝回流1~4小时；然后抽滤，抽滤产物用水洗涤3~10次，所得沉淀于60~100℃下干燥除去水份，得到TCPP-Fe；其中，TCPP为四羧基苯基卟吩；
（2）MOF-Fe的合成：取8~12 mg TCPP-Fe和4~8 mg ZrOCl2·8H2O超声溶解于2~6 mL DMF中，再加入0.1~1 mL冰醋酸，80~95℃反应15~20小时；反应结束后于8 000~15 000rpm下离心8~15 min收集沉淀，将得到的沉淀用DMF反复洗涤沉淀至上清液澄清透明，再将洗涤后的沉淀于120~160 ℃、真空下干燥24~48小时，得到MOF-Fe；
（3）MOF-Fe的活化：取25~35 mg步骤（2）制备的MOF-Fe超声溶解于15~30 mL DMF中，随后加入0.3~1 mL、8M的HCl，在100~150℃下反应10~16小时；反应结束后于10 000~15 000rpm下离心8~15 min收集沉淀，将得到的沉淀用DMF反复洗涤至上清液澄清透明，再将洗涤后的沉淀于120~160℃、真空下干燥24~48小时，得到活化后的MOF-Fe；
（4）PEG偶联MOF-Fe的合成：称取8~15mg步骤（3）活化后的MOF-Fe超声溶解于8~20 mLDMF中，随后加入8~20 mg NH2-PEG-COOH，20~45℃下反应4~10小时；反应结束后于10 000~16 000 rpm下离心8~15 min收集沉淀，将得到的沉淀用蒸馏水反复洗涤至上清液澄清透明，再将洗涤后的沉淀于-45~ -60℃下冷冻干燥18~30小时，得到MP（Fe）；
（5）MPG（Fe）的合成：称取8~15 mg葡萄糖氧化酶溶解于5~15 mL、pH 6.6的MES缓冲液中，随后加入0.1~0.3 mL、20 mM EDC水溶液，25~40℃搅拌10~20分钟形成反应溶液1；称取8~15 mg步骤（4）制备的MP（Fe）溶解于8~15 mL MES缓冲液中，随后加入0.1~0.3 mL、20 mMNHS水溶液，25~40℃搅拌10~20分钟形成反应溶液2；将反应溶液1和反应溶液2充分混合，20~40℃反应0.5~4小时；反应结束后于10 000~16 000 rpm下离心8~15 min收集沉淀，将得到的沉淀用蒸馏水反复洗涤至上清液澄清透明，再将洗涤后的沉淀于-45~ -60℃下冷冻干燥18~30小时，得到MPG（Fe）粉末，即过氧化物纳米酶－葡萄糖氧化酶双酶复合物；其中，MES为吗啉乙磺酸一水合物，EDC为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，NHS为N-羟基琥珀酰亚胺。
2.一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物，其特征在于：是由权利要求1所述的方法制备得到。
3.权利要求2所述的一种过氧化物纳米酶-葡萄糖氧化酶双酶复合物在制备治疗人畜共患寄生虫病药物中的应用，其特征在于：寄生虫为旋毛虫。
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| 金属有机框架抗菌材料的研究进展;齐野;任双颂;车颖;叶俊伟;宁桂玲;;化学学报(第07期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114432459A (zh) | 2022-05-06 |
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