CN114410771B - 基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合、试剂盒和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及基因检测技术领域，具体公开了一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合、试剂盒和方法。本发明采用第一代测序技术，其中涉及120个基因及近千个不同位点的致病性突变，本发明可以根据需求，随机进行不同的基因检测验证，选择所需基因位点的引物组而无需进行相关引物设计，以及后续筛选，可以两步PCR，纯化后直接进行测序，可以一次性进行96个样本检测，很大程度上简化了检测过程，降低了检测成本，准确率较高。
Description
技术领域
本发明涉及基因检测技术领域，尤其是涉及一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合、试剂盒和方法。
背景技术
遗传代谢性疾病(inherited metabolic diseases，IMD)是指由于基因突变引起酶缺陷、细胞膜功能异常或受体缺陷，从而导致机体生化代谢紊乱，造成中间或旁路代谢产物蓄积或终末代谢产物缺乏而引起一系列临床症状的一组疾病。迄今发现的疾病已经超过1000种。虽然IMD单一病种发病率较低，每种疾病均属少见病或罕见病，但因病种繁多，综合患病率并不低。IMD的临床表现复杂多样，随年龄、性别不同而有差异，危害极大。有些疾病在新生儿早期，例如出生后数小时或几天内即会发病，部分疾病却可能在幼儿期、儿童期、青少年期甚至成年期发病。由此造成的后果是：一方面，临床诊断十分困难；另一方面，如果不及早发现并治疗，疾病可对新生儿造成不可逆转的严重损害，如智力低下、终身残疾，甚至死亡。因此，对IMD应致力于早期诊断和及时治疗，从而避免或减轻疾病的危害。有虽然每种遗传病发病率比例较低，但由于人群基数大，可能获益的患者数量仍然可观。因此，快速、准确、全面的遗传病检测鉴定可以为患者带来更优的医疗决策。
目前，新生儿遗传病的检测方法主要包括串联质谱分析(LC/MS)、二代测序(NGS)、实时荧光定量PCR(RT-RCR)等方法。如铂金埃尔默(PE)公司基于串联质谱分析NeoBase新生儿筛查试剂盒，通过串联质谱分析对新生儿干血斑样本中非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮等含量变化来确定是否患有新生儿代谢性遗传疾病。串联质谱分析是目前临床上检测新生儿代谢性遗传疾病的常用检测方法；NGS目前已被广泛应用于遗传病筛查领域。基于其高通量特性，NGS可以一次性检测成百上千种遗传相关的致病性突变，是目前检测范围最广的一种检测手段；RT-PCR是一种非常成熟的遗传病检测方法，许多发病风险非常高的单基因遗传病往往可以通过这种方法进行检测，如艾吉泰康的人类HLA-B27核酸检测试剂盒，使用RT-PCR的方法用于引起强制性脊柱炎的人类HLA-B27基因核酸检测，其检测准确性较高。
串联质谱分析方法通常是对代谢产物进行检测，往往仅限于代谢性遗传病筛查，且无法得出疾病产生的根本原因，同时存在一定假阳性，假阴性的问题；实时荧光定量PCR(RT-RCR)虽然检测准确率很高，但是往往只能检测单个基因或者极少的几个基因位点的突变，检测范围比较狭窄；二代测序(NGS)检测通量很高，一次性可以检测多种引起遗传病的致病性突变，操作流程比较复杂，检测时间较长，单个样本检测成本高，技术难度相对较大，当然也会存在一定假阳性，假阴性的问题，且检测不够灵活应对多种检测需求。
目前已有技术成本高、可检测基因的位点少、检测不够灵活，准确性不够等缺点，难以满足目前检测样本数量大、检测位点多、检测时效要求高、检测准确性高等检测要求。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合、试剂盒和方法。本发明采用第一代测序技术，其中涉及120个基因及近千个不同位点的致病性突变，本发明可以根据需求，随机进行不同的基因检测验证，选择所需基因位点的引物组而无需进行相关引物设计，以及后续筛选，可以两步PCR，纯化后直接进行测序，可以一次性进行96个样本检测，很大程度上简化了检测过程，降低了检测成本，准确率较高。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
第一目的，本发明提供了一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合，所述引物库组合包括以下引物：
1)针对UGT1A1基因(c.211G>A)多态性位点的检测引物：如SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物；
2)针对GJB2基因(c.109G>A)多态性位点的检测引物：如SEQ ID NO:3所示的正向引物和SEQ ID NO:4所示的反向引物；
3)针对GUSB基因(c.104C>A)多态性位点的检测引物：如SEQ ID NO:225所示的正向引物和SEQ ID NO:226所示的反向引物；
4)针对SLC26A4基因(c.919-2A>G)多态性位点的检测引物：如SEQ ID NO:13所示的正向引物和SEQ ID NO:14所示的反向引物；
5)针对ABCG5基因(c.904+1G>A)多态性位点的检测引物：如SEQ ID NO:51所示的正向引物和SEQ ID NO:52所示的反向引物；
6)针对LDLR基因(c.1747C>T)多态性位点的检测引物：如SEQ ID NO:37所示的正向引物和SEQ ID NO:38所示的反向引物；
7)针对SLC26A4基因(c.1692dupA)多态性位点的检测引物：如SEQ ID NO:131所示的正向引物和SEQ ID NO:132所示的反向引物；
8)针对GALT基因(c.821-7A>G)多态性位点的检测引物：如SEQ ID NO:93所示的正向引物和SEQ ID NO:94所示的反向引物。
作为本发明所述引物库组合的优选实施方式，所述新生儿遗传病基因还包括ABCD4、ABCG8、ACAD8、ACADM、ACADS、ACADSB、ACADVL、ACAT1、ACSF3、ADA、AGL、AHCY、ALDH7A1、ALDOB、APOB、ARG1、ARSA、ARSB、ASL、ASS1、ATP7A、ATP7B、AUH、BCKDHA、BCKDHB、BTD、CBS、CPS1、CPT1A、CPT2、CYP11B1、DBT、DDC、DLD、ETFA、ETFB、ETFDH、MUT、ETHE1、F9、FAH、G6PC、G6PD、GAA、GALC、GALE、GALK1、GALNS、GAMT、GBA、GCDH、GCH1、GJB3、GLA、GLB1、GLDC、GNMT、GNPTAB、HADHA、HADHB、HBB、HEXA、HLCS、HMGCL、HPD、HSD17B10、IDS、IDUA、IVD、L2HGDH、LDLR、LMBRD1、MAT1A、MCCC1、MCCC2、MMAA、MMAB、MMACHC、MMADHC、MTHFR、MTR、MT-RNR1、MTRR、NAGLU、NAGS、NPC1、NPC2、OTC、PAH、PC、PCCA、PCCB、PCSK9、PHGDH、PHKA2、PNPO、PRODH、PTS、PYGL、QDPR、SGSH、SLC10A1、SLC12A3、SLC22A5、SLC25A13、SLC25A15、SLC25A20、SLC37A4、SLC6A8、SMPD1、SPR、SUCLG1、TAT、TH中的至少一种。
第二目的，本发明提供了一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的试剂盒，包括上述的引物库组合。
第三目的，本发明提供了一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的方法，所述方法为非诊断用途。
第四目的，本发明提供了上述引物库组合在制备检测新生儿遗传病基因的试剂盒中的用途。
第五目的，本发明提供了一种采用上述引物库组合检测新生儿遗传病基因的方法，所述方法为非诊断方法，包括以下步骤：
1)提取干血斑样本的DNA；
2)采用如上述引物库组合进行第一轮PCR扩增，获得PCR扩增产物，然后进行测序PCR扩增，纯化及上机测序，分析测序结果。
作为本发明所述方法的优选实施方式，步骤2)中第一轮PCR扩增的条件为：a、98℃30s；b、98℃ 10s；c、58℃ 30s；d、72℃ 1min；e、回到b循环30次；f、72℃ 5min；g、25℃，循环。
作为本发明所述方法的优选实施方式，测序PCR反应体系为：BDT v3.1 0.5μL、5xSeq Buffer 1.75μL、引物组1.0μL和水5.75μL。
作为本发明所述方法的优选实施方式，步骤2)中测序PCR扩增的条件为：a、96℃1min；b、96℃ 10s；c、50℃ 30s；d、60℃ 4min；e、回到b循环25次；f、25℃，循环。
本发明经过DNA提取-多重PCR扩增-测序PCR扩增-上机测序-序列分析，操作步骤简单，结果稳定可靠，易于同时进行多个样本的批量处理，且可同时检测多个基因多种位点。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合、试剂盒和方法，通过对新生儿遗传病频率较高的120个基因的常见突变位点(957个)设计扩增引物，通过两步PCR反应进行序列测定，分析序列后判读样本是否存在突变现象。本发明通过两步PCR反应即可完成测序前的样品准备工作，在很大程度上简化了检测过程，降低了检测成本，具有灵敏度高和特异性高等特点。
附图说明
图1为基因UGT1A1 c.211G>A的测序结果图；
图2为基因GJB2 c.109G>A的测序结果图；
图3为基因GUSB c.104C>A的测序结果图；
图4为基因SLC26A4 c.919-2A>G的测序结果图；
图5为基因ABCG5 c.904+1G>A的测序结果图；
图6为基因LDLR c.1747C>T的测序结果图；
图7为基因SLC26A4 c.1692dupA的测序结果图；
图8为基因GALT c.821-7A>G的测序结果图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
在以下实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明涉及的引物库基因及相应引物组如表1所示。
表1
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实施例1
1、选择经过验证的的含GJB2 c.109G>A；GUSB c.104C>A；SLC26A4 c.919-2A>G；UGT1A1 c.211G>A四种致病突变的干血斑样本，编号为20211027_1，选择含有LDLR c.1747C>T及ABCG5 c.904+1G>A两种致病突变的干血斑样本编号为20211027_2，选择含有SLC26A4c.1692dupA及GALT c.821-7A>G两种致病突变的干血斑样本编号为20211027_3，一共8个突变位点。同时选择5个经过验证的不含致病突变的阴性样本作为对照。
利用湾区生物干血斑提取试剂盒进行组织DNA的提取。首先取3片3mm的干血斑样品，加入裂解液及蛋白酶K等对组织细胞进行裂解，加利用磁珠将DNA吸附到磁珠上上，进行清洗后，用EB水将磁铁上上的DNA洗脱下来，用Qubit和ND对其浓度进行检测，结果如下：
2、在引物库中选择上述8个致病位点对应的引物组，使用引物组所提取的DNA进行扩增。每个阳性位点扩增的同时安排同引物组的5个阴性样本做对照，共进行48个样本的扩增。
1)对DNA进行扩增，具体流程如下：
| Final concentration | 投入量(μL) | |
| ddH2O | NA | 8.5 |
| Q5TM Master Mix | 1× | 12.5 |
| 正向引物 | 10pmol | 1.0 |
| 反向引物 | 10pmol | 1.0 |
| Template | 3.125～200ng | 2 |
| Total | NA | 23.0 |
2)按照以下步骤进行PCR扩增：
3、对48个样本进行正反测序，按以下比例准备测序PCR反应体系，每个样本分两管，分别使用正反向引物进行扩增，一共96个带测序样本：
| Reaction | 1/8× |
| BDT v3.1 | 0.5μL |
| 5x Seq Buffer | 1.75μL |
| Primer 3.2μM | 1.0μL |
| H2O | 5.75μL |
| Template | 1.0μL |
1)按照以下步骤进行PCR扩增：
4、对测序PCR产物进行纯化，流程如下：
1)每管加入1.0μL 125mM EDTA到管底，每管加入1.0μL 3M NaAc到管底；
2)每管加入35.0μL 100％酒精，铝箔或胶盖封严密，震荡混匀4次，室温放置15min；
3)3700rpm离心30min，马上倒置96孔板，离心至850rpm停止离心；
4)每管加入50.0μL的-20℃预冷70％酒精，3700rpm离心15min；马上倒置96孔板，离心至850rpm停止离心；
5)重复用预冷70％酒精洗涤1次；
6)室温挥发净酒精，加入10.0μL Hi-Di Formamide溶解DNA；
溶解后的样品需要在95℃变性4min，迅速置冰中冷却4min后(取出后置于-20℃冰箱)，上样电泳。
5、随后对96个样本上机进行后续的测序以及测序后的数据分析，得到如下结果：
表2
参考图1-8及表2的结果知，本发明的检测方法可以快速同时验证多种基因突变位点。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州盛安医学检验有限公司
<120> 基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合、试剂盒和方法
<130> 2022-01-07
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<170> PatentIn version 3.5
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cgagatgatg acttgtggag c 21
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 41
tgcgtctgtc cacgtggcaa g 21
<210> 42
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 42
gattctgcat gcatcccagg 20
<210> 43
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 43
tgcagcttgg gaggaataac 20
<210> 44
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 44
cccctgtagg acctctccac 20
<210> 45
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 45
tgcatcaggg tctaatctct tg 22
<210> 46
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 46
ttgggctcac atggtttaca 20
<210> 47
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 47
tgtgcaaaac acagggagaa tttc 24
<210> 48
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 48
agcctgggca acaagagtga aa 22
<210> 49
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 49
gtgaaggttt gactggtttc c 21
<210> 50
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 50
aaaagttgct ccctttcagc cc 22
<210> 51
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 51
cagagacatt caaagtgc 18
<210> 52
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 52
tgaagagtat aaaacacaaa aac 23
<210> 53
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 53
cgccacctcc ctttctaag 19
<210> 54
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<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 54
cccttctgaa gtcgatc 17
<210> 55
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 55
gcaagtgata agcagagtcc 20
<210> 56
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 56
agcagaccta ccctacagtt t 21
<210> 57
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 57
cgggcttctc gggccaggtg taccg 25
<210> 58
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 58
cggtacacct ggcccgagaa gcccg 25
<210> 59
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 59
ggggaaacca tggtcttttt 20
<210> 60
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 60
gagggagcag atgtgagca 19
<210> 61
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 61
tggagaaagt gagagaggaa 20
<210> 62
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 62
aagcaactag tagctgtggg 20
<210> 63
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 63
gttgaagtga gccaaatc 18
<210> 64
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 64
ggagatcagg tcagttc 17
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 65
gtttggatgt gcttggctga 20
<210> 66
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 66
ccagtgaatg ttgtaaaaat gttca 25
<210> 67
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 67
ctagcaaagg tcccaaatcc 20
<210> 68
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 68
ttgctccaaa taccagtgcc 20
<210> 69
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 69
cctccctagt ggtatcctgt 20
<210> 70
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 70
atgtcttgag gatccagtca 20
<210> 71
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 71
acagaggctt caatccctga 20
<210> 72
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 72
ggtgagcatc tgggcaagga 20
<210> 73
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 73
atggcagaaa tgatcaaagc 20
<210> 74
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 74
ccaaatcaat gcttgtgtcc 20
<210> 75
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 75
cattttgaat tatagcatct ctga 24
<210> 76
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 76
tgaaaaggag aaatagcacc t 21
<210> 77
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 77
tctggctaga ctgtgagc 18
<210> 78
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 78
tttgcaggct ctggctccaa c 21
<210> 79
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 79
tctctaggcc ctgtaccttt g 21
<210> 80
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 80
cggcccgtat gtcagattgt a 21
<210> 81
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 81
ttcctgtgcc acgtggcagt 20
<210> 82
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 82
ttatgccgtg acctaagagg 20
<210> 83
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 83
agttacttgt ggccttttct c 21
<210> 84
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 84
gaagtgtttg ggtctcattg t 21
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 85
ctatatactt ggcattctgt 20
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<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 86
gagatgtggc ggctttcc 18
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 87
tctcaaaggt ggacagcttc 20
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<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 88
ggaatcagtg ttgtgtgctc 20
<210> 89
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 89
gctgatgatc tcgttcctgc 20
<210> 90
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 90
gacacaggac gcagaaacaa 20
<210> 91
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 91
aaggtatgta ttatgtggca ttac 24
<210> 92
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 92
aaggtatgta ttatgtggca ttac 24
<210> 93
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 93
cagctattct ctgtcctccc a 21
<210> 94
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 94
gtgacagacc aagacctcat c 21
<210> 95
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 95
cagcacgtga cctctcctta 20
<210> 96
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 96
agtctgtgtc tatccgccac 20
<210> 97
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 97
gaaagtggcc tgaccaacat 20
<210> 98
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 98
gccagccaca tctagagagc 20
<210> 99
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 99
agtcaggact cactgtcctc 20
<210> 100
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 100
cggtcttctg cagagcctcg gctgg 25
<210> 101
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 101
ctgattatac actattgaat atgacc 26
<210> 102
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 102
ccaccgcacc cagccaaggc 20
<210> 103
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 103
cagcacgtga cctctcctta 20
<210> 104
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 104
agtctgtgtc tatccgccac 20
<210> 105
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 105
gtctttccat tatcagagag 20
<210> 106
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 106
cttcccaact tcttacattt g 21
<210> 107
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 107
tagcctgccc actgccccat gt 22
<210> 108
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 108
cccaaactcc aggaaacaaa 20
<210> 109
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 109
tcttgaacca ccccaactat gctc 24
<210> 110
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 110
catgtattcc ctaccatggt ttg 23
<210> 111
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 111
Phe Gly Gly Ala Thr Gly Cys Ala Gly Gly Ala Cys Thr Thr Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ala Cys Thr
20
<210> 112
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 112
Arg Gly Cys Gly Ala Gly Gly Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly Ala Cys
1 5 10 15
Ala Gly Cys
<210> 113
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 113
tgcctacttc agcagcacat atac 24
<210> 114
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 114
cctgagcatg agaaagaatg agg 23
<210> 115
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 115
gatatccacg ctgttttga 19
<210> 116
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 116
catgcacgcg atcaaccact 20
<210> 117
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 117
gtaaagtatc aaccaagacc tcacg 25
<210> 118
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 118
ctcaggggcc acgtctggat agagatg 27
<210> 119
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 119
cgctgcagac tcttgaatgt 20
<210> 120
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 120
agcactgctt cccagaactt 20
<210> 121
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 121
cctatgagtt ggtcaaccac accaag 26
<210> 122
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 122
gtggttgacc aactcatagg agtcccgg 28
<210> 123
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 123
ccgatcgaac agagaggaac 20
<210> 124
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 124
gttttcactg ggctggagag 20
<210> 125
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 125
tcacctagga agcccttgga 20
<210> 126
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 126
cacactcagc cgtctgtcat 20
<210> 127
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 127
gcggaagctt caaagcctcc tcttc 25
<210> 128
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 128
gcgcgaattc aggtctccag ttgtttca 28
<210> 129
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 129
gacagaccct cacaacaaaa ga 22
<210> 130
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 130
gcgttggaaa tgaaaaggaa 20
<210> 131
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 131
agttgagtcc tgctacccag ctc 23
<210> 132
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 132
gcctattcct gattggacc 19
<210> 133
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 133
gtaaacaaac gatgactgc 19
<210> 134
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 134
gagagttcaa tggcttaaag g 21
<210> 135
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 135
tgaggaaact gaggcttatt ga 22
<210> 136
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 136
tgtaaaacga cggccagtac tctgaac 27
<210> 137
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 137
atgaattctg cattttgagg ctgttt 26
<210> 138
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 138
ataagcttca aaggcaaatg caaaac 26
<210> 139
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 139
aggggaggac atcatt 16
<210> 140
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 140
caggttgggg gtcagtacc 19
<210> 141
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 141
ggttcaggtt ggggagagca g 21
<210> 142
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 142
tcctgctcct tatgcccacc c 21
<210> 143
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 143
gttgttaggg ctcgtgggag 20
<210> 144
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 144
atccttacgg tcgatgcagg 20
<210> 145
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 145
gtctgactct tcttctcctt cttc 24
<210> 146
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 146
tctaaaggca caactcacaa tca 23
<210> 147
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 147
ctgaacatgg gagaataacc 20
<210> 148
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 148
catcaggaaa gtgaagagga 20
<210> 149
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 149
ccgagcatcc cgcgccgac 19
<210> 150
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 150
cagctgcccg ccccacatct 20
<210> 151
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 151
tgtccttttc ttaccccaag a 21
<210> 152
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 152
gagttttgag ggtttaaggc a 21
<210> 153
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 153
ggcccctctc accctctg 18
<210> 154
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 154
ggttctgaag ggtgaatagg 20
<210> 155
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 155
cagcacgtga cctctcctta 20
<210> 156
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 156
agtctgtgtc tatccgccac 20
<210> 157
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 157
tgtgggtgga tagattttgg 20
<210> 158
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 158
ggggttctcc actcatcg 18
<210> 159
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 159
ggcttcttcc tgatgtacgg 20
<210> 160
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 160
ggcttcttcc tgatgtacgg 20
<210> 161
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 161
actgccctgc ctgggttgac 20
<210> 162
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 162
ggcttccatc acacctctgt 20
<210> 163
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 163
agataggaaa tcaataccaa 20
<210> 164
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 164
cccacataat tctcatatgt 20
<210> 165
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 165
ccttcctgcc atggatgatg g 21
<210> 166
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 166
tagataagcg gtgcaaaggg c 21
<210> 167
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 167
atctctttac aggtgtggac aacc 24
<210> 168
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 168
gttacatacc tctcctttct g 21
<210> 169
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 169
gtttcaaatt ctctatcctt tctaag 26
<210> 170
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 170
caagcacatt tgccccatct tct 23
<210> 171
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 171
tgtaaaacga cggccagtaa agctg 25
<210> 172
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 172
caggaaacag ctatgaccga caagggat 28
<210> 173
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 173
atgccatacc ttgccacact 20
<210> 174
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 174
ccccgtgccc ttctctaaaa 20
<210> 175
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 175
tctcaaaggt ggacagcttc 20
<210> 176
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 176
ggaatcagtg ttgtgtgctc 20
<210> 177
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 177
aggtgttagc ataacaccgg 20
<210> 178
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 178
ggagcaattc agaactccct 20
<210> 179
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 179
cagcacgtga cctctcctta 20
<210> 180
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 180
agtctgtgtc tatccgccac 20
<210> 181
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 181
aagatcagag cccccaaagc 20
<210> 182
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 182
tgggaaacac tgatttaagc agga 24
<210> 183
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 183
gctgtcatgg gcagtgactg 20
<210> 184
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 184
gctgaagtca gcaacatgag 20
Arg Gly Cys Thr Gly Ala Gly Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala Gly Gly
1 5 10 15
Cys Thr Gly
<210> 185
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 185
cagagtacgt gtccagcg 18
<210> 186
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 186
gaggttctct cccacaagg 19
<210> 187
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 187
agacccagtt agcgttgatc 20
<210> 188
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 188
tcaaatatac atgaaaaatg agatcctcc 29
<210> 189
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 189
gctgcaaccc tgtgtttctg gcc 23
<210> 190
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 190
cttcccttgt ttgattacat gg 22
<210> 191
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 191
accaaaccag cagctgtcta ctcc 24
<210> 192
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 192
aatgctactg gcagtacgat cgg 23
<210> 193
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 193
atgcttgcac tgtgctagta c 21
<210> 194
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 194
tgatgcctaa caccgcacct a 21
<210> 195
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 195
acctttgcag ggaatacagg gc 22
<210> 196
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 196
tgtcttcctc tctctaaggg gttc 24
<210> 197
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 197
agcacccatc ctcagaacgg 20
<210> 198
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 198
ctcttcagtc actgaggagg 20
<210> 199
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 199
gcacgtgacc cccatggccc 20
<210> 200
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 200
gcgccctcct ccgtgccttc ct 22
<210> 201
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 201
gggccagttt catctagaag gc 22
<210> 202
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 202
gccccctaaa agtctaatgt cc 22
<210> 203
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 203
tgaggatagc agccaagtca 20
<210> 204
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 204
tcagcctgga gtggtgaatg 20
<210> 205
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 205
ttgaacttcc aaatcttata ttcattg 27
<210> 206
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 206
gcagcatgag gtcagatgtc 20
<210> 207
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 207
gtcggctcta agaagttgc 19
<210> 208
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 208
actggactct gtccttgc 18
<210> 209
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 209
gcatgggaag aggatatctg g 21
<210> 210
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 210
ggactaggcc gcttgc 16
<210> 211
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 211
ggcaagggtt ggttgtcagc 20
<210> 212
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 212
ccatctcctc agctctcctc cc 22
<210> 213
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 213
gaattccctc cccagctcac tgtg 24
<210> 214
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 214
gaattcaaac ccttcccatg aagac 25
<210> 215
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 215
gggcttgagg gaatgagg 18
<210> 216
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 216
ggtgatggga gggcagca 18
<210> 217
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 217
gctatatttt ggattaagta ttatg 25
<210> 218
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 218
tacaagactg tctaataaag tac 23
<210> 219
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 219
gaaatgtgaa gccatcaacc t 21
<210> 220
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 220
tatctaatcc tgagagtagc c 21
<210> 221
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 221
aaccagggtt ccttctccct 20
<210> 222
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 222
gtctgtcctc ttgagcacgt g 21
<210> 223
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 223
tcccagcgga ggtgaaagta t 21
<210> 224
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 224
catcttgtct aaattcaagc ga 22
<210> 225
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 225
ggaccgggaa gcatggcccg 20
<210> 226
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 226
ttcggagccg ggagggcagg 20
<210> 227
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 227
agagagcaca ggaagcccca tc 22
<210> 228
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 228
cagtcccaca ttgctcaagc 20
<210> 229
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 229
gactagcatt gccacctcct t 21
<210> 230
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 230
aatgatgaag tcgtgagaaa tacag 25
<210> 231
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 231
atccagtggt gggaattctg 20
<210> 232
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 232
tctccattcc caaaacaaac tc 22
<210> 233
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 233
cgctgtgcct ccacccccag gtgtgt 26
<210> 234
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 234
tcaaaggtga gcagcccttg gccagc 26
<210> 235
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 235
cctctccctt ctcacaaatc t 21
<210> 236
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 236
tgctgctgct taggtggtgg at 22
<210> 237
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 237
tccttatact ggatgaaatg gtcacaa 27
<210> 238
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 238
tctttcttag gggttaaatg gcatcta 27
<210> 239
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 239
cccatagcta aaaggccatc tacc 24
<210> 240
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工合成
<400> 240
cccatagcta aaaggccatc tacc 24
Claims (10)
1.一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的引物库组合，其特征在于，包括以下引物：
1）针对UGT1A1基因多态性位点为c.211G>A的检测引物：如SEQ ID NO:1所示的正向引物和SEQ ID NO:2所示的反向引物；
2）针对GJB2基因多态性位点为c.109G>A的检测引物：如SEQ ID NO:3所示的正向引物和SEQ ID NO:4所示的反向引物；
3）针对GUSB基因多态性位点为c.104C>A的检测引物：如SEQ ID NO:225所示的正向引物和SEQ ID NO:226所示的反向引物；
4）针对SLC26A4基因多态性位点为c.919-2A>G的检测引物：如SEQ ID NO:13所示的正向引物和SEQ ID NO:14所示的反向引物；
5）针对ABCG5基因多态性位点为c.904+1G>A的检测引物：如SEQ ID NO:51所示的正向引物和SEQ ID NO:52所示的反向引物；
6）针对LDLR基因多态性位点为c.1747C>T的检测引物：如SEQ ID NO:37所示的正向引物和SEQ ID NO:38所示的反向引物；
7）针对SLC26A4基因多态性位点为c.1692dupA的检测引物：如SEQ ID NO:131所示的正向引物和SEQ ID NO:132所示的反向引物；
8）针对GALT基因多态性位点为c.821-7A>G的检测引物：如SEQ ID NO:93所示的正向引物和SEQ ID NO:94所示的反向引物。
2.如权利要求1所述的引物库组合，其特征在于，所述新生儿遗传病基因还包括ABCD4、ABCG8、ACAD8、ACADM、ACADS、ACADSB、ACADVL、ACAT1、ACSF3、ADA、AGL、AHCY、ALDH7A1、ALDOB、APOB、ARG1、ARSA、ARSB、ASL、ASS1、ATP7A、ATP7B、AUH、BCKDHA、BCKDHB、BTD、CBS、CPS1、CPT1A、CPT2、CYP11B1、DBT、DDC、DLD、ETFA、ETFB、ETFDH、MUT、ETHE1、F9、FAH、G6PC、G6PD、GAA、GALC、GALE、GALK1、GALNS、GAMT、GBA、GCDH、GCH1、GJB3、GLA、GLB1、GLDC、GNMT、GNPTAB、HADHA、HADHB、HBB、HEXA、HLCS、HMGCL、HPD、HSD17B10、IDS、IDUA、IVD、L2HGDH、LDLR、LMBRD1、MAT1A、MCCC1、MCCC2、MMAA、MMAB、MMACHC、MMADHC、MTHFR、MTR、MT-RNR1、MTRR、NAGLU、NAGS、NPC1、NPC2、OTC、PAH、PC、PCCA、PCCB、PCSK9、PHGDH、PHKA2、PNPO、PRODH、PTS、PYGL、QDPR、SGSH、SLC10A1、SLC12A3、SLC22A5、SLC25A13、SLC25A15、SLC25A20、SLC37A4、SLC6A8、SMPD1、SPR、SUCLG1、TAT、TH中的至少一种。
3.如权利要求2所述的引物库组合，其特征在于，所述引物库组合还包括以下引物：
针对SLC10A1基因多态性位点为c.800C>T的检测引物：如SEQ ID NO:5所示的正向引物和SEQ ID NO:6所示的反向引物；针对GALC基因多态性位点为c.1901T>C的检测引物：如SEQID NO:7所示的正向引物和SEQ ID NO:8所示的反向引物；针对SLC25A13基因多态性位点为c.852_855delTATG的检测引物：如SEQ ID NO:9所示的正向引物和SEQ ID NO:10所示的反向引物；针对PRODH基因多态性位点为c.1322T>C的检测引物：如SEQ ID NO:11所示的正向引物和SEQ ID NO:12所示的反向引物；针对SLC22A5基因多态性位点为c.1400C>G的检测引物：如SEQ ID NO:15所示的正向引物和SEQ ID NO:16所示的反向引物；针对SLC25A20基因多态性位点为c.199-10T>G的检测引物：如SEQ ID NO:17所示的正向引物和SEQ ID NO:18所示的反向引物；针对ACADSB基因多态性位点为c.1165A>G的检测引物：如SEQ ID NO:19所示的正向引物和SEQ ID NO:20所示的反向引物；针对ATP7B基因多态性位点为c.2755C>G的检测引物：如SEQ ID NO:21所示的正向引物和SEQ ID NO:22所示的反向引物；针对G6PD基因多态性位点为c.1478G>A的检测引物：如SEQ ID NO:23所示的正向引物和SEQ ID NO:24所示的反向引物；针对PAH基因多态性位点为c.1174T>A的检测引物：如SEQ ID NO:25所示的正向引物和SEQ ID NO:26所示的反向引物；针对GAA基因多态性位点为c.752C>T的检测引物：如SEQ ID NO:27所示的正向引物和SEQ ID NO:28所示的反向引物；针对ACADS基因多态性位点为c.1031A>G的检测引物：如SEQ ID NO:29所示的正向引物和SEQ ID NO:30所示的反向引物；针对PTS基因多态性位点为c.259C>T的检测引物：如SEQ ID NO:31所示的正向引物和SEQ ID NO:32所示的反向引物；针对MMACHC基因多态性位点为c.609G>A的检测引物：如SEQ ID NO:33所示的正向引物和SEQ ID NO:34所示的反向引物；针对MT-RNR1基因多态性位点为m.1555A>G的检测引物：如SEQ ID NO:35所示的正向引物和SEQ ID NO:36所示的反向引物；针对APOB基因多态性位点为c.10579C>T的检测引物：如SEQ ID NO:39所示的正向引物和SEQ ID NO:40所示的反向引物；针对HLCS基因多态性位点为c.1522C>T的检测引物：如SEQ ID NO:41所示的正向引物和SEQ ID NO:42所示的反向引物；针对GJB3基因多态性位点为c.538C>T的检测引物：如SEQ ID NO:43所示的正向引物和SEQ ID NO:44所示的反向引物；针对MUT基因多态性位点为c.1663G>A的检测引物：如SEQ ID NO:45所示的正向引物和SEQ ID NO:46所示的反向引物；针对ETFDH基因多态性位点为c.250G>A的检测引物：如SEQ ID NO:47所示的正向引物和SEQ ID NO:48所示的反向引物；针对ALDOB基因多态性位点为c.1013C>T的检测引物：如SEQ ID NO:49所示的正向引物和SEQ ID NO:50所示的反向引物；针对GCDH基因多态性位点为c.1244-2A>C的检测引物：如SEQ ID NO:53所示的正向引物和SEQ ID NO:54所示的反向引物；针对GBA基因多态性位点为c.1448T>C的检测引物：如SEQ ID NO:55所示的正向引物和SEQ ID NO:56所示的反向引物；针对TH基因多态性位点为c.698G>A的检测引物：如SEQ ID NO:57所示的正向引物和SEQ ID NO:58所示的反向引物；针对NAGLU基因多态性位点为c.1562C>T的检测引物：如SEQ ID NO:59所示的正向引物和SEQ ID NO:60所示的反向引物；针对CPS1基因多态性位点为c.2407C>G的检测引物：如SEQ ID NO:61所示的正向引物和SEQ ID NO:62所示的反向引物；针对GALE基因多态性位点为c.505C>T的检测引物：如SEQ ID NO:63所示的正向引物和SEQ ID NO:64所示的反向引物；针对PYGL基因多态性位点为c.2467C>T的检测引物：如SEQ ID NO:65所示的正向引物和SEQ ID NO:66所示的反向引物；针对G6PC基因多态性位点为c.648G>T的检测引物：如SEQID NO:67所示的正向引物和SEQ ID NO:68所示的反向引物；针对ASS1基因多态性位点为c.1087C>T的检测引物：如SEQ ID NO:69所示的正向引物和SEQ ID NO:70所示的反向引物；针对MAT1A基因多态性位点为c.1070C>T的检测引物：如SEQ ID NO:71所示的正向引物和SEQ ID NO:72所示的反向引物；针对AGL基因多态性位点为c.1735+1G>T的检测引物：如SEQID NO:73所示的正向引物和SEQ ID NO:74所示的反向引物；针对ACADM基因多态性位点为c.449_452delCTGA的检测引物：如SEQ ID NO:75所示的正向引物和SEQ ID NO:76所示的反向引物；
针对SMPD1基因多态性位点为c.1133G>A的检测引物：如SEQ ID NO:77所示的正向引物和SEQ ID NO:78所示的反向引物；针对SLC25A15基因多态性位点为c.535C>T的检测引物：如SEQ ID NO:79所示的正向引物和SEQ ID NO:80所示的反向引物；针对SGSH基因多态性位点为c.703G>A的检测引物：如SEQ ID NO:81所示的正向引物和SEQ ID NO:82所示的反向引物；针对IVD基因多态性位点为c.158G>A的检测引物：如SEQ ID NO:83所示的正向引物和SEQ ID NO:84所示的反向引物；针对ACAT1基因多态性位点为c.1160T>C的检测引物：如SEQID NO:85所示的正向引物和SEQ ID NO:86所示的反向引物；针对HBB基因多态性位点为c.-78A>G的检测引物：如SEQ ID NO:87所示的正向引物和SEQ ID NO:88所示的反向引物；针对ARSA基因多态性位点为c.1344dupC的检测引物：如SEQ ID NO:89所示的正向引物和SEQ IDNO:90所示的反向引物；针对PCCB基因多态性位点为c.838dupC的检测引物：如SEQ ID NO:91所示的正向引物和SEQ ID NO:92所示的反向引物；针对GLA基因多态性位点为c.640-801G>A的检测引物：如SEQ ID NO:95所示的正向引物和SEQ ID NO:96所示的反向引物；针对ALDH7A1基因多态性位点为c.1008+1G>A的检测引物：如SEQ ID NO:97所示的正向引物和SEQ ID NO:98所示的反向引物；针对ACADVL基因多态性位点为c.1349G>A的检测引物：如SEQ ID NO:99所示的正向引物和SEQ ID NO:100所示的反向引物；针对MCCC1基因多态性位点为c.980C>G的检测引物：如SEQ ID NO:101所示的正向引物和SEQ ID NO:102所示的反向引物；针对MMAA基因多态性位点为c.742C>T的检测引物：如SEQ ID NO:103所示的正向引物和SEQ ID NO:104所示的反向引物；针对ETFA基因多态性位点为c.625C>T的检测引物：如SEQ ID NO:105所示的正向引物和SEQ ID NO:106所示的反向引物；针对BCKDHA基因多态性位点为c.1310_1311delAC的检测引物：如SEQ ID NO:107所示的正向引物和SEQ ID NO:108所示的反向引物；针对CPT2基因多态性位点为c.338C>T的检测引物：如SEQ ID NO:109所示的正向引物和SEQ ID NO:110所示的反向引物；针对PC基因多态性位点为c.2493_2494delGT的检测引物：如SEQ ID NO:111所示的正向引物和SEQ ID NO:112所示的反向引物；针对GNPTAB基因多态性位点为c.2715+1G>A的检测引物：如SEQ ID NO:113所示的正向引物和SEQ ID NO:114所示的反向引物；针对ABCD4基因多态性位点为c.1667_1668delAG的检测引物：如SEQ ID NO:115所示的正向引物和SEQ ID NO:116所示的反向引物；针对GALNS基因多态性位点为c.1156C>T的检测引物：如SEQ ID NO:117所示的正向引物和SEQ ID NO:118所示的反向引物；针对ACSF3基因多态性位点为c.690G>A的检测引物：如SEQ ID NO:119所示的正向引物和SEQ ID NO:120所示的反向引物；针对NAGS基因多态性位点为c.1552G>A的检测引物：如SEQ ID NO:121所示的正向引物和SEQ ID NO:122所示的反向引物；针对PNPO基因多态性位点为c.448_451delCCTG的检测引物：如SEQ ID NO:123所示的正向引物和SEQ ID NO:124所示的反向引物；针对HADHA基因多态性位点为c.1720_1721delCT的检测引物：如SEQ ID NO:125所示的正向引物和SEQ ID NO:126所示的反向引物；针对ADA基因多态性位点为c.467G>A的检测引物：如SEQ ID NO:127所示的正向引物和SEQ ID NO:128所示的反向引物；针对BCKDHB基因多态性位点为c.331C>T的检测引物：如SEQ ID NO:129所示的正向引物和SEQ ID NO:130所示的反向引物；针对ARSB基因多态性位点为c.1197C>G的检测引物：如SEQ ID NO:133所示的正向引物和SEQ ID NO:134所示的反向引物；针对MTR基因多态性位点为c.2100dupA的检测引物：如SEQ ID NO:135所示的正向引物和SEQ ID NO:136所示的反向引物；针对HMGCL基因多态性位点为c.206_207delCT的检测引物：如SEQ ID NO:137所示的正向引物和SEQ ID NO:138所示的反向引物；针对PCSK9基因多态性位点为c.1300C>T的检测引物：如SEQ ID NO:139所示的正向引物和SEQ ID NO:140所示的反向引物；针对SLC37A4基因多态性位点为c.446G>A的检测引物：如SEQ ID NO:141所示的正向引物和SEQ ID NO:142所示的反向引物；针对ACAD8基因多态性位点为c.3G>T的检测引物：如SEQ ID NO:143所示的正向引物和SEQ ID NO:144所示的反向引物；针对PCCA基因多态性位点为c.802C>T的检测引物：如SEQ ID NO:145所示的正向引物和SEQ ID NO:146所示的反向引物；针对TAT基因多态性位点为c.236-1G>T的检测引物：如SEQ ID NO:147所示的正向引物和SEQ ID NO:148所示的反向引物；针对GALK1基因多态性位点为c.165+2T>G的检测引物：如SEQ ID NO:149所示的正向引物和SEQ ID NO:150所示的反向引物；针对SUCLG1基因多态性位点为c.460C>T的检测引物：如SEQ ID NO:151所示的正向引物和SEQ ID NO:152所示的反向引物；针对CBS基因多态性位点为c.346G>A的检测引物：如SEQ ID NO:153所示的正向引物和SEQ ID NO:154所示的反向引物；针对BTD基因多态性位点为c.43A>T的检测引物：如SEQ ID NO:155所示的正向引物和SEQ ID NO:156所示的反向引物；针对LMBRD1基因多态性位点为c.247-2A>G的检测引物：如SEQ ID NO:157所示的正向引物和SEQ ID NO:158所示的反向引物；针对DDC基因多态性位点为c.1297dupA的检测引物：如SEQ ID NO:159所示的正向引物和SEQ ID NO:160所示的反向引物；针对ASL基因多态性位点为c.299T>C的检测引物：如SEQ ID NO:161所示的正向引物和SEQ ID NO:162所示的反向引物；针对F9基因多态性位点为c.682G>A的检测引物：如SEQ ID NO:163所示的正向引物和SEQ ID NO:164所示的反向引物；针对PHKA2基因多态性位点为c.1099C>T的检测引物：如SEQ ID NO:165所示的正向引物和SEQ ID NO:166所示的反向引物；针对OTC基因多态性位点为c.148G>A的检测引物：如SEQ ID NO:167所示的正向引物和SEQ ID NO:168所示的反向引物；针对DBT基因多态性位点为c.1017+1G>C的检测引物：如SEQ ID NO:169所示的正向引物和SEQ ID NO:170所示的反向引物；针对MTHFR基因多态性位点为c.667G>A的检测引物：如SEQ ID NO:171所示的正向引物和SEQ ID NO:172所示的反向引物；针对L2HGDH基因多态性位点为c.343C>T的检测引物：如SEQ ID NO:173所示的正向引物和SEQ ID NO:174所示的反向引物；针对FAH基因多态性位点为c.509G>T的检测引物：如SEQ ID NO:175所示的正向引物和SEQ ID NO:176所示的反向引物；针对HADHB基因多态性位点为c.739C>T的检测引物：如SEQ ID NO:177所示的正向引物和SEQ ID NO:178所示的反向引物；针对QDPR基因多态性位点为c.710C>T的检测引物：如SEQ ID NO:179所示的正向引物和SEQ ID NO:180所示的反向引物；针对MTRR基因多态性位点为c.1727T>G的检测引物：如SEQ ID NO:181所示的正向引物和SEQ IDNO:182所示的反向引物；针对PHGDH基因多态性位点为c.385A>T的检测引物：如SEQ ID NO:183所示的正向引物和SEQ ID NO:184所示的反向引物；针对CPT1A基因多态性位点为c.2071C>T的检测引物：如SEQ ID NO:185所示的正向引物和SEQ ID NO:186所示的反向引物；针对MMAB基因多态性位点为c.682delG的检测引物：如SEQ ID NO:187所示的正向引物和SEQ ID NO:188所示的反向引物；针对HPD基因多态性位点为c.224G>A的检测引物：如SEQID NO:189所示的正向引物和SEQ ID NO:190所示的反向引物；针对GCH1基因多态性位点为c.662T>A的检测引物：如SEQ ID NO:191所示的正向引物和SEQ ID NO:192所示的反向引物；针对NPC2基因多态性位点为c.363+1G>T的检测引物：如SEQ ID NO:193所示的正向引物和SEQ ID NO:194所示的反向引物；针对HEXA基因多态性位点为c.1444G>A的检测引物：如SEQ ID NO:195所示的正向引物和SEQ ID NO:196所示的反向引物；针对NPC1基因多态性位点为c.3562G>T的检测引物：如SEQ ID NO:197所示的正向引物和SEQ ID NO:198所示的反向引物；针对GAMT基因多态性位点为c.705delA的检测引物：如SEQ ID NO:199所示的正向引物和SEQ ID NO:200所示的反向引物；针对ETHE1基因多态性位点为c.488G>A的检测引物：如SEQ ID NO:201所示的正向引物和SEQ ID NO:202所示的反向引物；针对ETFB基因多态性位点为c.249delA的检测引物：如SEQ ID NO:203所示的正向引物和SEQ ID NO:204所示的反向引物；针对MMADHC基因多态性位点为c.438_442delAGAGT的检测引物：如SEQ IDNO:205所示的正向引物和SEQ ID NO:206所示的反向引物；针对ABCG8基因多态性位点为c.163C>T的检测引物：如SEQ ID NO:207所示的正向引物和SEQ ID NO:208所示的反向引物；针对SPR基因多态性位点为c.372G>A的检测引物：如SEQ ID NO:209所示的正向引物和SEQ ID NO:210所示的反向引物；针对AHCY基因多态性位点为c.807_814delTAACATTG的检测引物：如SEQ ID NO:211所示的正向引物和SEQ ID NO:212所示的反向引物；针对GLB1基因多态性位点为c.1734G>T的检测引物：如SEQ ID NO:213所示的正向引物和SEQ ID NO:214所示的反向引物；针对IDUA基因多态性位点为c.1861C>T的检测引物：如SEQ ID NO:215所示的正向引物和SEQ ID NO:216所示的反向引物；针对MCCC2基因多态性位点为c.197-2A>G的检测引物：如SEQ ID NO:217所示的正向引物和SEQ ID NO:218所示的反向引物；针对ARG1基因多态性位点为c.703G>A的检测引物：如SEQ ID NO:219所示的正向引物和SEQ IDNO:220所示的反向引物；针对GNMT基因多态性位点为c.296G>A的检测引物：如SEQ ID NO:221所示的正向引物和SEQ ID NO:222所示的反向引物；针对DLD基因多态性位点为c.140T>C的检测引物：如SEQ ID NO:223所示的正向引物和SEQ ID NO:224所示的反向引物；针对CYP11B1基因多态性位点为c.1358G>A的检测引物：如SEQ ID NO:227所示的正向引物和SEQID NO:228所示的反向引物；针对GLDC基因多态性位点为c.2938A>G的检测引物：如SEQ IDNO:229所示的正向引物和SEQ ID NO:230所示的反向引物；针对AUH基因多态性位点为c.883C>T的检测引物：如SEQ ID NO:231所示的正向引物和SEQ ID NO:232所示的反向引物；针对SLC6A8基因多态性位点为c.321_323delCTT的检测引物：如SEQ ID NO:233所示的正向引物和SEQ ID NO:234所示的反向引物；针对HSD17B10多态性位点为c.397G>A的检测引物：如SEQ ID NO:235所示的正向引物和SEQ ID NO:236所示的反向引物；针对ATP7A多态性位点为c.2090C>T的检测引物：如SEQ ID NO:237所示的正向引物和SEQ ID NO:238所示的反向引物；针对IDS多态性位点为c.421A>T的检测引物：如SEQ ID NO:239所示的正向引物和SEQ ID NO:240所示的反向引物。
4.一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-3任一项所述的引物库组合。
5.一种基于一代测序平台检测新生儿遗传病基因的方法，其特征在于，所述方法基于如权利要求4所述的试剂盒进行检测；所述方法为非诊断用途。
6.如权利要求1-3任一项所述的引物库组合在制备检测新生儿遗传病基因的试剂盒中的用途。
7.一种采用如权利要求1-3任一项所述的引物库组合检测新生儿遗传病基因的方法，所述方法为非诊断方法，包括以下步骤：
1）提取干血斑样本的DNA；
2）采用如权利要求1-3任一项所述的引物库组合进行第一轮PCR扩增，获得PCR扩增产物，然后进行测序PCR扩增，纯化及上机测序，分析测序结果。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2）中第一轮PCR扩增的条件为：a、98°C30 s；b、98°C 10 s；c、58°C 30 s；d、72°C 1min；e、回到b循环30次；f、72°C 5min；g、25°C，循环。
9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，测序PCR反应体系为：BDT v3.1 0.5 μL、5 xSeq Buffer 1.75 μL、引物组 1 .0μL和水 5.75 μL。
10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤2）中测序PCR扩增的条件为：a、96°C1min；b、96°C 10 s；c、50°C 30 s；d、60°C 4min；e、回到b循环25次；f、25°C，循环。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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