CN114410547A - 一株能促进5-htp分泌及缓解抑郁的戊糖乳杆菌lpq1及其应用 - Google Patents

一株能促进5-htp分泌及缓解抑郁的戊糖乳杆菌lpq1及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株能促进5‑HTP分泌的戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)LPQ1，在中国典型培养物保藏中心进行保藏，保藏编号为CCTCC NO:M 20211625；还公开了一种菌剂，其活性成分包含LPQ1或LPQ1的发酵液；还公开了它们在制备促进肠道细胞或胰腺内分泌细胞分泌5‑HTP的试剂中的应用、在制备用于预防和/或治疗抑郁症及相关神经退行性病变产品中的应用、在制备食品、食品添加剂、保健品或药品中的应用。

Description

一株能促进5-HTP分泌及缓解抑郁的戊糖乳杆菌LPQ1及其 应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株能促进5-羟基色氨酸分泌的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1及其应用。
背景技术
抑郁症是一种普遍的精神疾病，主要特点是情绪低落、缺乏兴趣爱好或睡眠障碍等。超过3.5亿人受到抑郁症的影响，近五分之一的人在某个阶段经历抑郁情绪。抑郁症的生理病理学研究表明：抑郁症与脑功能障碍、神经递质途径失衡、线粒体缺陷、免疫系统异常、HPA轴混乱及脑-肠轴功能混乱这六个方面的表现相关。
目前应用于治疗抑郁症的药物主要有氟西汀和帕罗西汀，两类药物均为广泛应用的选择性血清素再吸收抑制型抗抑郁药物，主要作用为增加脑中血清素含量。血清素是一种兴奋性神经递质，广泛存在于大脑皮层及其他神经突触中，可参与调节包括情绪控制、应激、肠道分泌和激素释放及睡眠周期维持等多种生理功能。饮食中约90％的色氨酸通过犬尿氨酸途径代谢，这一过程与血清素合成途径竞争。5-羟基色氨酸(5-HTP)是动物体内合成血清素与褪黑素的前体，是血清素合成途径的中间体，不能用于任何其他代谢途径，可以有效地用于直接刺激血清素合成，且该物质可直接穿过血脑屏障。
乳酸菌主要来源于牛奶、人体等自然植物动物体，具有天然性及安全性高的特点。乳酸菌是常见的“精神益生菌”，目前已有众多报道表明小鼠口服乳酸菌可通过多途径、多靶点实现对抑郁症的改善，主要是通过可提高脑组织及血清中的血清素含量，发挥抗抑郁作用。Lactobacillus kefiranofaciens ZW3通过平衡肠道菌群代谢物、调节色氨酸代谢紊乱、保护HPA轴、抑制炎症等作用改善CUMS小鼠的抑郁行为。Lactobacillus casei的抗抑郁作用与上调单胺5-羟色胺(5-HT)、DA和NE的表达水平、激活BDNF-TrkB信号、抑制额叶皮层EKR1/2和P38的磷酸化以及调节大鼠肠道菌群结构变化有关。Bifidobacterium longumsubspecies infantis strainCCFM687通过调节5-HT1A-CREB-BDNF信号通路，减轻炎症和HPA轴亢进，改善肠道有益菌群和功能性代谢产物的产生等方式表现出抗抑郁类活性。因此，将具有促进肠嗜铬模拟细胞5-HTP分泌的乳酸菌开发为功能性制剂具有广阔的前景，值得深入研究。
发明内容
本发明的目的是针对上述问题，提供一株能促进5-HTP分泌的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1及其应用。
本发明为了实现其目的，采用的技术方案是：
一株能促进5-HTP分泌的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1，在中国典型培养物保藏中心进行保藏，保藏编号为CCTCC NO:M 20211625。
一种菌剂，其活性成分包含上述的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1或LPQ1的发酵液。
优选地，所述菌剂为冷冻干燥粉剂。
上述的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1，或上述的菌剂，在制备促进5-HTP分泌的试剂中的应用。
所述应用为在制备促进肠道细胞或胰腺内分泌细胞分泌5-HTP的试剂中的应用。
上述的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1，或上述的菌剂，在制备用于预防和/或治疗抑郁症及相关神经退行性病变产品中的应用。
上述的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1作为功能性益生菌在制备食品、食品添加剂、保健品或药品中的应用。
一种产品，其活性成分为上述的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1，或上述的菌剂，所述产品的用途为如下任意一种：
(1)作为5-HTP促分泌剂；
(2)预防和/或治疗抑郁症及相关神经退行性疾病；
(3)作为功能性益生菌应用到食品、食品添加剂、保健品或药品中。
本发明使用RIN-14B细胞测定乳酸菌对促进5-HTP分泌活性及缓解小鼠抑郁的实验结果显示：戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1及其发酵上清液具有促进RIN14B细胞分泌5-HTP的作用，发酵上清液的促进作用可高于对照组10倍；在抑郁小鼠模型试验中，服用LPQ1能够显著缓解小鼠的抑郁样行为，评估指标包括糖水偏好、强迫游泳、悬尾实验及旷场实验；服用LPQ1能显著降低肠道通透性，评估指标为结肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-7的表达；服用LPQ1能显著改善抑郁小鼠全身性炎症的发生，评估指标为结肠白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α及IL-10的表达，血清IL-6、TNF-α及IL-10的水平；服用LPQ1能提高其肠道中5-HTP及5-HT的水平，能增强肠道蠕动功能；服用LPQ1能提高血清及大脑皮层的5-HTP及5-HT水平，5-HTP可为脑中5-HT的合成提供前体物质，5-HT具有缓解抑郁的作用。因此，可以将LPQ1用于预防和/或治疗抑郁症及相关神经退行性疾病，或者作为功能性益生菌应用到食品、食品添加剂、保健品或药品中。
附图说明
图1为分离菌株菌落形态(A)及革兰氏染结果(B)。
图2为戊糖乳杆菌LPQ1的API 50CH反应结果。
图3为LPQ1及其上清液冻干粉对RIN14B细胞分泌5-HTP的促进作用。
图4为LPQ1干预抑郁小鼠五周后，小鼠的行为学变化示意图，(A)糖水偏好实验；(B)强迫游泳实验；(C)悬尾实验；(D)旷场实验。
图5为LPQ1干预抑郁小鼠五周后，结肠紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-7的表达情况。
图6为LPQ1干预抑郁小鼠五周后，结肠白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α及IL-10的表达，血清IL-6、TNF-α及IL-10的水平。
图7为LPQ1干预抑郁小鼠五周后，结肠5-HTP及5-HT的水平。
图8为LPQ1干预抑郁小鼠五周后，血清及大脑皮层的5-HTP及5-HT水平。
图4--8中，Control--对照组、CUMS--模型组、Fluoxetine--氟西汀干预组、Q1--LPQ1干预组。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但并不因此而限制本发明。
下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法；如无特殊说明，所用生物、化学试剂均为本领域常规试剂，均可通过商购获得。
实施例1、促进RIN-14B细胞分泌5-HTP实验
1实验材料
戊糖乳杆菌LPQ1菌株：来源于西南大学食品科学学院索化夷实验室菌种库。
LPQ1菌株保藏信息：
将菌株戊糖乳杆菌LPQ1菌株于2021年12月送中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)进行保藏，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，保藏日期：2021年12月22日；保藏编号：CCTCC NO:M 20211625；分类命名为：戊糖乳杆菌LPQ1(Lactobacillus pentosus)LPQ1。
大鼠胰岛瘤细胞系RIN-14B：来源于美国典型菌种保藏中心(American TypeCulture Collection，ATCC)，作为肠嗜铬细胞(enterochromaffin cells,EC)模型。
2实验方法
2.1乳酸菌的形态学鉴定
按照革兰氏染色试剂盒的说明书对乳酸菌进行染色，然后调节双目显微镜于100倍油镜下观察其形态。
2.2PCR扩增16S rDNA序列
采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株的DNA。采用25μL反应体系进行PCR扩增，反应结束后利用琼脂糖凝胶电泳进行检测。合格样品送华大基因科技有限公司测序，测序结果通过NCBI中的BLAST程序进行同源性比对分析。
2.3乳酸菌API 50CH试剂盒的生化鉴定
分离菌株在37℃培养18h，于3000r/min、15min的条件下离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤菌体后重悬为菌悬液。参考梅里埃(法国)API 50CH试剂盒说明书进行操作。
2.4乳酸菌LPQ1的制备
将乳酸菌以2％接种量活化2次后在37℃的条件下培养18h，随后低温4000g，离心10min收集菌体并洗涤2次，再将菌液的菌落总数调为1×109CFU/mL。
2.5乳酸菌发酵上清液SLPQ1的制备
将乳酸菌以2％接种量活化2次后在37℃的条件下培养18h，随后低温4000g，离心10min收集菌体并洗涤2次，再将菌液的菌落总数调为1×109CFU/mL，于37℃培养30min,低温4000g的条件下离心10min，取上清液冷冻干燥，得到乳酸菌SLPQ1粉剂，-80℃保存。
2.6乳酸菌发酵上清液SLPQ1对RIN114B细胞促进5-HTP分泌的影响
RIN14B细胞以4×105/mL的密度种在24孔板，孵育72h。弃去培养基，用含有0.1％牛血清白蛋白(BSA)和2μM氟西汀的HBSS(1mL，Hank's平衡盐溶液)清洗细胞，加入1mL含有16mg/mL的SLPQ1冻干粉的HBSS悬液，37℃孵育30min，收集上清，12000g离心5min，0.22μm滤头过滤，取上清液冷冻于-80℃待测。HPLC检测细胞上清中的5-HTP。
2.7数据统计与分析
根据SPSS22.0统计软件中Duncan's检验的单因素方差分析检验数据在P<0.05的水平上是否具有显著差异。所有试验至少进行3次重复，结果以平均值±标准差表示。
3结果与分析
3.1菌株的菌落形态和细胞形态
菌株纯化后在MRS培养基中形成单菌落，菌落形态几乎一致，大多数呈圆形，白色，表面光滑湿润。革兰氏染色后在显微镜下观察到紫色细胞形态，判定为革兰氏阳性菌(G+)。其中，编号为LPQ1的菌株的菌落形态和革兰氏染色结果见图1。
3.2菌株16S rDNA序列PCR扩增结果
16SrDNA同源性分析结果显示，编号为LPQ1的菌株与Gene Bank数据库中已知戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)的同源性达100％。戊糖乳杆菌LPQ1的16S rDNA基因扩增产物的双向序列如SEQ ID No.1所示。
3.3菌株生化特性鉴定结果
乳酸菌菌种水平的表型鉴定主要根据碳水化合物发酵试验。API 50CH试剂盒则是通过目的菌株对49种碳水化合物的反应情况进行鉴定。由图2和表1可知，菌株LPQ1可利用其中的22种碳水化合物。然后经API 50CH lab plus系统的鉴定，发现LPQ1的ID值为99.9％，T值为0.91，达到了鉴定标准(ID值≥99.0％且T值≥0.5)，鉴定结果为戊糖乳杆菌。
表1乳酸菌LPQ1对49种碳水化合物发酵试验结果
Figure BDA0003522039790000051
Figure BDA0003522039790000061
3.4LPQ1及SLPQ1对RIN-14B细胞分泌5-HTP含量的影响
将保藏于本实验室的戊糖乳杆菌LPQ1及其上清液SLPQ1进行制备，接着测定其对RIN-14B细胞分泌5-HTP的促进作用。由图3得出，LPQ1活菌对RIN-14B细胞促进5-HTP分泌量可达其自身分泌量的9.44倍，LPQ1活菌的上清液SLPQ1对RIN-14B细胞促进5-HTP分泌量可达其自身分泌量的10.63倍。这说明戊糖乳杆菌LPQ1是一株具有促进RIN-14B细胞分泌5-HTP的潜力菌株。
实施例2、戊糖乳杆菌LPQ1的动物实验
1慢性应激抑郁小鼠模型的建立及处理方法
取8周龄雄性BALB/C小鼠40只，适应环境一周后，根据体重随机分为四组：对照组、模型组、氟西汀干预组、LPQ1干预组，每组含10只小鼠。动物分组及处理方法见表2。
表2动物实验分组及处理办法
Figure BDA0003522039790000062
慢性不可预知应激抑郁小鼠模型：每天随机采用1-3种刺激，每天刺激的时间随机决定，避免昼夜节律。每种方法不超过三次，为期五周。刺激因素包括：(1)禁食12h；(2)禁水+空瓶刺激12h；(3)夹尾3min；(4)潮湿垫料24h；(5)异味刺激；(6)45°倾斜笼盒24h；(7)持续光照24h；(8)无垫料24h；(9)冰水游泳5min；(10)孤养24h；(11)热水游泳5min；(12)噪音刺激30min；(13)站立不稳5min；(14)束缚3min。
乳酸菌灌胃剂：取活化2代的戊糖乳杆菌LPQ1并于37℃下培养至18h，4000g离心10min收集菌体，弃去上清并用10％脱脂乳液重悬菌体，使乳酸菌浓度达到1×109CFU/mL。灌胃体积为0.1mL/10g/只。
第五周开始，停止每日的慢性不可预知应激以及药物和益生菌的干预，同时对所有小鼠进行行为学测试，行为测试结束后处死小鼠，收集相关组织及血清。
2动物实验方法
2.1小鼠行为学测试
(1)糖水偏好实验
在开始测试之前，笼内放置两个相同的饮水瓶，使小鼠适应性饮水至少3天。适应结束后，将其中一瓶水替换为含有1％蔗糖的水溶液。通过称量瓶子重量来检测水和蔗糖溶液的摄入量。蔗糖偏好计算公式为：蔗糖偏好＝M(蔗糖溶液)/[M(蔗糖溶液)+M(水)]×100％，总共测试3天，取平均值。实验结果如图4A所示，抑郁小鼠的糖水偏好程度显著下降，服用LPQ1后，小鼠恢复至正常的糖水偏好程度，表明LPQ1能缓解抑郁导致的快感缺失。
(2)强迫游泳实验
水温23℃，直径12cm,高20cm的圆形玻璃容器，水深10cm，将小鼠放入玻璃容器观察6min，记录后4min的累计不动时间。判定不动的标准是动物在水中停止挣扎，呈漂浮状态。
(3)悬尾实验
采用黑色悬尾箱，顶板中心绳连一个小夹子。用夹子夹住胶布,使小鼠呈倒悬体位，头部离悬尾箱底约5cm。观察6min，记录4min的累计不动时间。判定不动的标准是动物停止挣扎，身体呈垂直倒悬状态，静止不动。
(4)旷场实验
实验在安静的环境下进行。将动物放入40cm×40cm箱内底面中心，同时进行摄像和计时。观察13min后停止摄像，实验计算后10min小鼠行进总路程。
2.2qRT-PCR法测定结肠中IL-6、IL-10、TNF-α、ZO-1、Occludin及Claudin-7基因的表达
剪取少量结肠组织，使用PBS洗去血污，使用TRIzol试剂法提取总RNA并进行纯度与浓度检测。按照cDNA合成试剂盒RevertAidFirstStrandcDNASynthesisKit(品牌：MBI)说明书将总RNA反转录成cDNA，随后使用20μLPCR体系进行序列扩增，PCR程序为：95℃预变性10min；之后在95℃15s，60℃1min，72℃30s条件下循环40次。实验采用2-△△Ct法计算表3中的目的基因的相对含量，GAPDH为内参基因。
表3目的基因及对应的扩增引物序列
Figure BDA0003522039790000081
2.3LPQ1能显著降低抑郁小鼠血清中炎症因子的水平
取适量小鼠血清，用ELISA试剂盒检测血清中的IL-6、IL-10及TNF-α含量。
2.4LPQ1能显著提高抑郁小鼠血清中神经递质的水平
取适量小鼠血清，用ELISA试剂盒检测血清中的5-HT及5-HTP含量。
2.5LPQ1能显著提高抑郁小鼠结肠组织及皮层组织中神经递质的水平
取一定质量的结肠和大脑皮层组织，按照100mg组织1mL无菌PBS缓冲液的比例加乳PBS缓冲液，用组织匀浆器进行匀浆，组织液经过5000g，5min离心后取上清，用ELISA试剂盒检测5-HT和5-HTP含量。
2.6数据统计与分析
根据SPSS22.0统计软件中Duncan's检验的单因素方差分析检验数据在P<0.05的水平上是否具有显著差异。所有试验至少进行8次重复，结果以平均值±标准差表示。
3结果与分析
3.1戊糖乳杆菌LPQ1对抑郁小鼠行为的改变
糖水偏好实验是研究药物成瘾(酒精口服)和抑郁行为的动物行为学实验方法。实验结果如图4A所示，抑郁小鼠的糖水偏好程度显著下降，服用LPQ1后，小鼠的糖水偏好程度得以改善，表明LPQ1能缓解抑郁导致的快感缺失。
强迫游泳实验主要用于抗抑郁、镇静以及止痛类药物的研究。实验结果如图4B所示，抑郁组小鼠游泳的不动时间明显增长，表现出行为绝望的特点，而服用LPQ1能够显著改善这一现象，表明小鼠抑郁症状减轻。
悬尾实验一种经典而又能快速评价抗抑郁药物、兴奋药物、镇静药物药效的方法。实验结果如图4C所示，抑郁组小鼠悬尾的不动时间明显增长，表现出放弃挣扎，行为绝望，而服用LPQ1可以改善该类抑郁现象。
旷场实验，是评价实验动物在新异环境中自主行为、探究行为与紧张度的一种方法。以实验动物在新奇环境之中某些行为的发生频率和持续时间等，反应实验动物在陌生环境中的自主行为与探究行为，以尿便次数反应其紧张度。实验结果如图4D所示，在10min行进路程中，抑郁组小鼠行进路程最短，表明该组小鼠自发探索行为下降，紧张抑郁，而服用LPQ1的小鼠能较好的改善这类现象，行进总路程较长。
3.2戊糖乳杆菌LPQ1对抑郁小鼠肠道通透性的改善作用
肠道通透性与肠屏障功能有关，其正常的肠道通透性取决于肠黏膜屏障的完整性。肠道通透性的增加使得许多不该进入血液的物质进入血液循环，这使得焦虑和抑郁的产生。实验结果如图5所示，实验结果表明，服用LPQ1能够逆转抑郁造成的结肠组织中ZO-1、Occludin和Claudin-7基因水平的表达降低。其中LPQ1对结肠ZO-1及Claudin-7的表达的改善作用优于氟西汀。
3.3戊糖乳杆菌LPQ1对抑郁小鼠全身性炎症的改善作用
长期的压力会使我们的大脑发炎,破坏神经元之间的联系,导致抑郁。血液中的炎症细胞因子，可以通过血脑屏障发送从身体传送到大脑的信号，其可在包括大脑在内的全身产生强大的炎症效应。实验结果如图6所示，实验结果表明，服用LPQ1能够逆转抑郁造成的结肠组织中IL-10基因表达水平及含量降低，以及缓解抑郁引起的IL-6及TNF-α基因表达水平及含量的升高。
3.4戊糖乳杆菌LPQ1对结肠5-HTP及5-HT水平的影响
肠嗜铬细胞分泌的5-HTP能够进入血液循环，并穿越血脑屏障，为脑中5-HT的合成提供前体物质。5-HT是机体内一种重要的神经递质和自体活性物质。实验结果如图7所示，实验结果表明，服用LPQ1能使抑郁小鼠结肠5-HT及5-HTP水平恢复至正常水平。
3.5戊糖乳杆菌LPQ1对血清及大脑皮层5-HTP及5-HT水平的影响
外周组织中的5-HT对维持正常的肠道蠕动功能具有重要意义，而脑中5-HT含量直接与抑郁症密切相关，血清及大脑皮层中的5-HTP可作为5-HT合成的前体物质。验结果如图8所示，实验结果表明，服用LPQ1能使抑郁小鼠血清和大脑皮层中5-HT及5-HTP水平恢复至正常水平。
总之，这些结果表明，戊糖乳杆菌LPQ1可促进RIN-14B细胞分泌5-HTP，缓解慢性应激引起的抑郁状况，能改善抑郁小鼠肠道通透性及全身性炎症，并可提高结肠、血清及大脑皮层中5-HT及5-HTP含量，故戊糖乳杆菌LPQ1具有一定的缓解抑郁的作用。
应用例1、利用戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1制备乳酸菌奶饮料
按照如下步骤操作：
S1、戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1原始菌种在温度-75℃下以30重量％甘油悬液形式保存，或者在温度4℃下以冷冻干燥菌粉的形式保存备用。
S2、可以采用两种方法中的任意一种制备本发明的戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)LPQ1工作发酵剂：
第一种方法是将戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1原始菌种接种于12％(重量)的脱脂乳中，110℃灭菌10min，在37℃条件下培养14-16h至凝乳，连续培养活化两代，用作母发酵剂；将所述母发酵剂按3-5％(体积)接种于灭菌乳中，培养14-16h至凝乳，此时该凝乳中的活菌数约109cfu/mL，得到所述的工作发酵剂，可以直接将这种工作发酵剂添加到食品中，或者与可共生的制备发酵乳的商业发酵剂如保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌一起使用制备发酵乳。
第二种方法是将上述戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1原始菌种接种于MRS液体培养基中，在37℃条件下培养12-16h进行活化，连续活化两代，然后将活化培养物按2-4％(体积)接种于MRS培养基中，培养16-18h，在4℃条件下4000r/min离心15min，去除上清夜，得到细胞沉淀，将沉淀用一定量的无菌脱脂乳制成悬浮液，得到工作发酵剂备用。
S3、原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到4℃，再加入前面所述的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)工作发酵剂，使其浓度达到106cfu/ml以上，在4℃冷藏保存即得到含戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)活菌的乳酸菌奶饮料。
在本发明中，所述的MRS液体培养基是本技术领域的技术人员熟知的，是索莱宝公司销售的用于乳杆菌培养的培养基。
所述的加热杀菌是例如使用上海沃迪自动化装备股份有限公司销售的TW10D1000型管式杀菌机进行的。
所述的高温热杀菌是例如使用北京勇创嘉业机械设备有限公司销售的YC-104型板式超高温杀菌机进行的。
应用例2、利用戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1制备乳粉
按照应用例1中乳酸菌奶饮料的制备方法制备，只是原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再以原料乳体积的4％接菌量接种应用例1中所述的戊糖乳杆菌工作发酵剂，再在37℃下发酵16h，得到戊糖乳杆菌发酵乳；然后将戊糖乳杆菌发酵乳按照1:3(V:V)加到上述灭菌原料乳中，进行均质，真空浓缩、喷雾干燥得到含戊糖乳杆菌的乳粉。
所述的均质是例如使用常州市均质机械有限公司销售的GJB500-40小型均质机进行的。所述的浓缩是例如使用上海伟宙轻工机械有限公司销售的真空浓缩锅进行的。所述的喷雾干燥是例如使用上海沃迪科技有限公司销售的实验型喷雾干燥机进行的。
应用例3、利用戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1制备胶囊制品
将原料乳在140℃高温热杀菌2s，然后冷却至37℃，以原料乳体积的4％接菌量接种应用例1中的戊糖乳杆菌工作发酵剂，在37℃下发酵16h，得到戊糖乳杆菌发酵乳。将戊糖乳杆菌发酵乳以1:3(V:V)加入灭菌后的原料乳中均质，经真空浓缩、喷雾干燥处理后得到乳粉，将得到的乳粉装到胶囊中制成胶囊制品。
应用例4、利用戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)LPQ1制备发酵乳
按照应用例1中乳酸菌奶饮料的制备方法制备，只是原料乳在95℃下加热杀菌20min或在140℃下高温热杀菌2s，然后冷却到37℃，再按照3-5％(体积)加入前面所述的戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)工作发酵剂，再加入3-5％(体积)可共生的制备发酵乳商品发酵剂，混匀后在37℃下混菌发酵至滴定酸度以乳酸计0.6-0.7％，然后冷却至4℃，再进行冷藏保存得到所述的发酵乳。
所述的商品发酵剂优选的是保加利亚乳杆菌或嗜热链球菌。
在本发明的意义上，所述的原料乳是一种或多种选自脱脂奶、鲜奶、复原奶的原料乳。
以上所述，仅为本发明的具体实施例，但本发明的特征并不局限于此，任何熟悉该项技术的人在本发明领域内，可轻易想到的变化或修饰，都应涵盖在本发明的申请专利范围中。
序列表
<110> 西南大学
<120> 一株能促进5-HTP分泌及缓解抑郁的戊糖乳杆菌LPQ1及其应用
<160> 15
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1376
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gagtggcgaa ctggtgagta acacgtggga aacctgccca gaagcggggg ataacacctg 60
gaaacagatg ctaataccgc ataacaactt ggaccgcatg gtccgagttt gaaagatggc 120
ttcggctatc acttttggat ggtcccgcgg cgtattagct agatggtggg gtaacggctc 180
accatggcaa tgatacgtag ccgacctgag agggtaatcg gccacattgg gactgagaca 240
cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cacaatggac gaaagtctga 300
tggagcaacg ccgcgtgagt gaagaagggt ttcggctcgt aaaactctgt tgttaaagaa 360
gaacatatct gagagtaact gttcaggtat tgacggtatt taaccagaaa gccacggcta 420
actacgtgcc agcagccgcg gtaatacgta ggtggcaagc gttgtccgga tttattgggc 480
gtaaagcgag cgcaggcggt tttttaagtc tgatgtgaaa gccttcggct caaccgaaga 540
agtgcatcgg aaactgggaa acttgagtgc agaagaggac agtggaactc catgtgtagc 600
ggtgaaatgc gtagatatat ggaagaacac cagtggcgaa ggcggctgtc tggtctgtaa 660
ctgacgctga ggctcgaaag tatgggtagc aaacaggatt agataccctg gtagtccata 720
ccgtaaacga tgaatgctaa gtgttggagg gtttccgccc ttcagtgctg cagctaacgc 780
attaagcatt ccgcctgggg agtacggccg caaggctgaa actcaaagga attgacgggg 840
gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagct acgcgaagaa ccttaccagg 900
tcttgacata ctatgcaaat ctaagagatt agacgttccc ttcggggaca tggatacagg 960
tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gcaacgagcg 1020
caacccttat tatcagttgc cagcattaag ttgggcactc tggtgagact gccggtgaca 1080
aaccggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc cttatgacct gggctacaca 1140
cgtgctacaa tggatggtac aacgagttgc gaactcgcga gagtaagcta atctcttaaa 1200
gccattctca gttcggattg taggctgcaa ctcgcctaca tgaagtcgga atcgctagta 1260
atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac cgcccgtcac 1320
accatgagag tttgtaacac ccaaagtcgg tggggtaacc ttttaggaac cagccg 1376
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gaggtcaatg aaggggtcgt t 21
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ctcgtcccgt agacaaaatg gt 22
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ggtctgttgt gggtggtatc c 21
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
tccagccagt tgccttcttg 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
caaggagcat ttgaattccc 20
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
ggccttgtag acaccttggt c 21
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
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<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
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<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
gccctccttt taacacatca ga 22
<210> 11
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
gccgctaaga gcacagcaa 19
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
ccggataaaa agagtacgct gg 22
<210> 13
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
tgaaagtcca cctccttaca ga 22
<210> 14
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
catgggcgtc aaggggtta 19
<210> 15
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
ctggaggcat tgttttcatt gtg 23

Claims (8)

1.一株能促进5-HTP分泌的戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)LPQ1，在中国典型培养物保藏中心进行保藏，保藏编号为CCTCC NO:M 20211625。
2.一种菌剂，其活性成分包含权利要求1所述的戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)LPQ1或LPQ1的发酵液。
3.如权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂为冷冻干燥粉剂。
4.如权利要求1所述的戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)LPQ1，或权利要求2或3所述的菌剂，在制备促进5-HTP分泌的试剂中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述应用为在制备促进肠道细胞或胰腺内分泌细胞分泌5-HTP的试剂中的应用。
6.如权利要求1所述的戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)LPQ1，或权利要求2或3所述的菌剂，在制备用于预防和/或治疗抑郁症及相关神经退行性病变产品中的应用。
7.权利要求1所述的戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)LPQ1作为功能性益生菌在制备食品、食品添加剂、保健品或药品中的应用。
8.一种产品，其活性成分为权利要求1所述的戊糖乳杆菌(Lactobacilluspentosus)LPQ1，或权利要求2或3所述的菌剂，所述产品的用途为如下任意一种：
(1)作为5-HTP促分泌剂；
(2)预防和/或治疗抑郁症及相关神经退行性疾病；
(3)作为功能性益生菌应用到食品、食品添加剂、保健品或药品中。
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