CN114404567A

CN114404567A - 卷曲蛋白质7在增强肠道屏障保护功能中的应用

Info

Publication number: CN114404567A
Application number: CN202111661415.XA
Authority: CN
Inventors: 王修启; 叶茂; 金成龙; 秦颖超; 高春起; 严会超
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2021-12-30
Filing date: 2021-12-30
Publication date: 2022-04-29
Anticipated expiration: 2041-12-30
Also published as: CN114404567B

Abstract

本发明公开了卷曲蛋白质7在增强肠道屏障保护功能中的应用。本发明通过诱导表达纯化获得了猪源重组卷曲蛋白质7(FZD7)，发现其可结合赖氨酸和Iturin A，可用于提高氨基酸的利用率，促进氨基酸的吸收。而FZD7可通过结合Iturin A上调Wnt/β‑catenin信号通路，增加肠道干细胞的增殖活性，促进受损屏障的快速修复，缓解细菌对肠道的损伤，增强肠道屏障保护功能，使其免受细菌损害。本发明不仅发现了FZD7蛋白质的新功能，同时拓宽了猪FZD7蛋白质的应用范围。

Description

卷曲蛋白质7在增强肠道屏障保护功能中的应用

技术领域

本发明属于分子生物技术领域。更具体地，涉及卷曲蛋白质7在增强肠道屏障保护功能中的应用。

背景技术

七次跨膜受体FZD(Frizzled，FZD)蛋白质家族是G蛋白偶联受体亚家族的成员之一，在动物发育过程中高度保守。哺乳动物FZD蛋白质家族共有10个成员，可分为四个亚家族，分别为FZD1/2/4/6/7亚家族、FZD5/8亚家族、FZD4亚家族和FZD9/10亚家族；大多数低等两侧对称动物仅含有四个FZD蛋白质家族成员。其中，卷曲蛋白质7(Frizzled7，FZD7)可与Wnt配体结合，抑制细胞质中β-catenin的磷酸化，然后β-catenin通过核膜，以Active β-catenin形式与TCF/LEF反应元件结合，调节经典Wnt信号通路活性。

目前关于FZD7的研究多集中于人源FZD7，研究发现FZD7在多种恶性肿瘤中被显著上调，其通过激活Wnt通路调控细胞增殖以及肿瘤细胞的侵袭与迁移，可作为抗癌药剂靶标用于开发抗癌药。例如专利“卷曲蛋白结合药剂及其应用”中就公开了一种可与人类卷曲受体结合的新型抗癌药剂。但不同物种来源的同种蛋白的功能可能不同，目前还未有关于猪源FZD7功能的报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供卷曲蛋白质7(FZD7)的新应用。

本发明的第一个目的是提供所述卷曲蛋白质7在增强肠道屏障保护功能中的应用。

本发明第二个目的是提供所述卷曲蛋白质7在制备增强肠道屏障保护功能的产品中的应用。

本发明第三个目的是提供所述卷曲蛋白质7在提高氨基酸利用率中的应用。

本发明第四个目的是提供所述卷曲蛋白质7在促进氨基酸吸收中的应用。

本发明第五个目的是提供所述卷曲蛋白质7在制备促氨基酸吸收的产品中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明利用GenBank数据库中猪FZD7蛋白质的编码序列设计引物，通过PCR扩增获得了编码猪FZD7成熟肽的核苷酸片段，所得猪FZD7成熟肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码猪FZD7成熟肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。在此基础上，本发明通过构建重组FZD7表达载体，将猪FZD7成熟肽与组氨酸(His)标签进行融合表达，获得了重组FZD7蛋白质。

本发明发现重组FZD7蛋白质可结合赖氨酸和伊枯草菌素A(Iturin A)，提高氨基酸的利用率，促进氨基酸的吸收；FZD7可通过结合Iturin A上调Wnt/β-catenin信号通路，增加肠道干细胞增殖活性，促进受损屏障快速修复，缓解细菌对肠道的损伤，增强肠道屏障保护功能，使其免受细菌损害。因此，本发明申请保护卷曲蛋白质7或其编码基因的以下应用：

本发明申请保护卷曲蛋白质7在增强肠道屏障保护功能中的应用。

本发明申请保护卷曲蛋白质7在制备增强肠道屏障保护功能的产品中的应用。

本发明申请保护卷曲蛋白质7在提高氨基酸利用率中的应用。

本发明申请保护卷曲蛋白质7在促进氨基酸吸收中的应用。

本发明申请保护所述卷曲蛋白质7在制备促氨基酸吸收的产品中的应用。

具体地，所述卷曲蛋白质7的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码卷曲蛋白质7的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

具体地，所述氨基酸为赖氨酸，见实施例2和3。

具体地，所述促进氨基酸吸收为促进细胞氨基酸吸收。

具体地，所述细胞为肠干细胞或骨骼肌卫星细胞。

具体地，所述细胞为猪肠干细胞或猪骨骼肌卫星细胞。

本发明还提供了一种重组猪FZD7蛋白质的表达方法，利用SEQ ID NO.2所示编码FZD7的基因序列构建重组表达载体，再将其转入宿主菌中进行诱导表达。

优选地，所述表达载体为PET-32α，见实施例1。

优选地，所述宿主菌为Rosetta菌，见实施例1。

优选地，诱导表达所用IPTG的浓度为1mmol/L，见实施例1。

优选地，诱导表达的条件为25℃、150r/min，1mmol/L IPTG诱导8小时，见实施例1。

本发明具有以下有益效果：

本发明发现重组FZD7蛋白质可结合赖氨酸和Iturin A，可将其用于提高氨基酸的利用率，促进氨基酸的吸收。而FZD7可通过结合Iturin A上调Wnt/β-catenin信号通路，增加肠道干细胞的增殖活性，促进受损屏障修复，缓解细菌对肠道的损伤，增强肠道屏障保护功能，使其免受细菌损害。本发明不仅发现了FZD7蛋白质的新功能，同时拓宽了猪FZD7蛋白质的应用范围。

附图说明

图1为重组FZD7阳性克隆的鉴定结果；其中，图A为阳性克隆的PCR检测结果；图B为阳性克隆的测序比对结果。

图2为重组FZD7蛋白质的检测结果；其中，图A为重组FZD7-Rosetta菌经IPTG诱导后沉淀及上清中rpFZD7蛋白质表达效果的电泳图；图B为利用His标签抗体及FZD7抗体鉴定重组FZD7-Rosetta菌经IPTG诱导前后rpFZD7蛋白质的鉴定结果。

图3为诱导纯化后的rpFZD7蛋白质的检测结果；其中，图A为利用His标签抗体的鉴定结果；图B为利用FZD7抗体的鉴定结果。

图4为MTT法检测不同浓度FZD7抑制剂Fz7-21抑制猪骨骼肌卫星细胞增殖活性的结果。

图5为不同浓度FZD7抑制剂Fz7-21处理猪肠干细胞的结果；其中，图A为肠类器官生长图；图B为肠类器官生成效率；图C为肠类器官生扩增面积；图D为肠类器官出芽指数；图E为肠类器官出芽数目统计；图F为肠类器官出芽数目分级统计。

图6为等温滴定量热仪(ITC)检测rpFZD7与赖氨酸结合的结果。

图7为Biacore验证rpFZD7结合Iturin A的结果。

图8为Iturin A缓解STb-R引起的肠道屏障功能损伤的结果。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

实施例1 重组FZD7表达载体的构建以及重组蛋白质的表达与纯化

1、基因的克隆及重组载体的构建

本发明利用GenBank数据库中猪FZD7蛋白质的编码序列(NC_010457.5)设计引物，通过PCR扩增获得了编码猪FZD7成熟肽的核苷酸片段，猪FZD7成熟肽的氨基酸序列如SEQID NO.1所示，编码猪FZD7成熟肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。通过构建重组FZD7表达载体，将猪FZD7成熟肽与组氨酸(His)标签进行融合表达，获得重组猪FZD7蛋白质。

使用限制性内切酶Xba I和Bam HI分别对重组猪FZD7蛋白质的编码序列以及表达载体PET-32α进行双酶切，并用T4连接酶进行连接，连接体系如表1所示，16℃条件下连接过夜。

表1 T4连接酶连接体系

目的片段	1μL
		载体	1.2μL
T4连接酶	1μL
		T4 DNA ligase buffer	2μL
加水至	20μL

采用热休克法将连接产物转入大肠杆菌感受态细胞，挑取单克隆菌株，经PCR鉴定后将阳性菌株送测序，具体步骤为：

a.取刚融化的DH5α感受态细胞50μL与10μL连接产物混匀于1.5mL离心管，冰上孵育半个小时；

b.42℃热处理1.5分钟后迅速置于冰上3min进行冷处理；

c.加入600μL的不含抗生素LB液体培养基，摇床(37℃，200r/min)培养1h使其活化；

d.离心(3000r/min，2min)去除上清培养基，余50μL左右培养基重悬沉淀下来的菌体，均匀涂布于含氨苄抗性的LB固体培养基表面；

e.平板倒放于37℃培养箱内培养8～14h，挑取单克隆，通过PCR初步鉴定后，将阳性单克隆送公司测序，保种测序正确的菌株。

重组猪FZD7阳性克隆的鉴定结果如图1所示。其中，图1A为阳性克隆的PCR检测结果，图1B为阳性克隆的测序比对结果。由图1A可知，该单一条带位置符合预期，其测序比对结果(图1B)表明成功构建了重组猪FZD7表达载体。

2、重组猪FZD7(rpFZD7)蛋白质的诱导表达及纯化

培养及诱导条件的筛选：

提取重组载体并重新转化到三种不同感受态工程菌(BL21、C43 pLysS和Rosetta)中，步骤同上述a-e，分别挑取测序正确的表达菌株进行保种并诱导rpFZD7蛋白质表达。

分别吸取1mL三种工程菌的菌液接种于500mL LB液体培养基中，分别以不同温度及转速梯度条件培养至OD值大约0.7左右，加入不同体积IPTG至诱导工作浓度分别为0.5mmol/L、1mmol/L和2mmol/L，继续培养4小时、6小时和8个小时，用His标签抗体或FZD7抗体检测重组BL21、C43 pLysS和Rosetta菌中rpFZD7蛋白质表达情况。通过鉴定rpFZD7蛋白质表达情况，筛选出使用Rosetta菌在最适培养条件为25℃、150r/min，1mmol/L IPTG诱导8小时表达效果最佳。

将IPTG诱导前后的FZD7-Rosetta菌分别经离心、破碎和再离心，用考马斯蓝检测IPTG诱导前后上清及沉淀中的rpFZD7蛋白质表达效果，结果如图2所示。其中，图2A为重组FZD7-Rosetta菌经IPTG诱导后的上清和沉淀中rpFZD7蛋白质表达效果的电泳图，由图可知，在预期位置出现了蛋白质条带，表明成功获得了rpFZD7蛋白质，且沉淀中的rpFZD7蛋白质的量更高。图2B为利用His标签抗体及FZD7抗体鉴定重组FZD7-Rosetta菌经IPTG诱导前后FZD7蛋白质的鉴定结果，结果表明诱导后蛋白质的表达量显著提高。

用碧云天生物技术公司的His标签纯化试剂盒(货号：P2226，耐还原螯合型)对FZD7-Rosetta菌破碎后上清中rpFZD7蛋白质进行纯化并透析。通过Western blotting分析rpFZD7蛋白质的表达情况。图3为纯化后的rpFZD7蛋白质的检测结果；其中，图3A为利用His标签抗体的鉴定结果；图3B为利用FZD7抗体的鉴定结果。上述结果表明，本发明不仅成功构建了rpFZD7蛋白质的制备方法，且rpFZD7蛋白质的表达纯化效果好。

实施例2 FZD7抑制剂Fz7-21处理猪骨骼肌卫星细胞及猪肠道干细胞

1、MTT掺入法检测Fz7-21对猪骨骼肌卫星细胞增殖活性的影响

a.以2×10³个细胞/孔将猪骨骼肌卫星细胞接种于96孔板中，每孔200μL，每组接种10孔，同时每块板接种10孔不含细胞的完全培养液作为空白对照，置入37℃、饱和湿度、5％CO₂的培养箱中培养，隔天换液；

b.分别于不同浓度Fz7-21处理后6h、12h、24h和48h，随机取一块96孔板，每孔加入20μL MTT工作液，置培养箱中继续孵育4h；

c.吸干孔中的培养液，每孔加入150μL DMSO，避光，在摇床上100r/min摇晃30min，使其充分混匀；

d.选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值，即A490处的OD值，最后以时间为横轴，OD值为纵轴绘制细胞生长曲线。

MTT法检测不同浓度FZD7抑制剂Fz7-21抑制猪骨骼肌卫星细胞增殖活性的结果如图4所示，结果表明采用FZD7抑制剂Fz7-21可显著抑制猪骨骼肌卫星细胞及猪肠干细胞增殖。

2、Fz7-21对猪肠干细胞增殖活性的影响

将隐窝接种于48孔板中，用含有不同浓度Fz7-21的干细胞完全培养基进行培养，每天用倒置显微镜观察并记录类肠团的生长情况。结果如图5所示，其中图5A为肠类器官生长图，图5B为肠类器官生成效率，图5C为肠类器官生扩增面积，图5D为肠类器官出芽指数，图5E为肠类器官出芽数目统计，图5F为肠类器官出芽数目分级统计。结果表明，FZD7在维持细胞正常增殖过程中不可或缺。

实施例3 等温滴定量热仪(ITC)验证FZD7可结合赖氨酸

本实施例以重组FZD7蛋白质与赖氨酸为例，通过等温滴定量热仪(ITC)验证具有结合能力。

1、样品准备

纯化后的rpFZD7蛋白质及分析纯赖氨酸

2、实验过程及测定指标

纯化后的rpFZD7蛋白质样品放在等温滴定量热仪iTC200的滴定针中，将10mmol/L赖氨酸溶液放于样品池中，温度设定为25℃。滴一滴滴定0.4μLrpFZD7蛋白质，后续19滴分别为每150sec滴2μL体积。通过对反应过程中的热动力学检测及相关参数的计算(结果如图6所示)，可以特异性地反应分子间相互作用的程度。

3、试验结果

由图6可知，本发明所述rpFZD7蛋白质可在体外成功结合赖氨酸。结合上述结果可预期rpFZD7蛋白质可以促进细胞对赖氨酸的吸收。

实施例4 Biacore验证FZD7可结合Iturin A

本实施例以重组FZD7蛋白质和Iturin A为例，通过Biacore验证FZD7可结合Iturin A，二者具有结合能力。

1、样品准备

纯化后的rpFZD7蛋白质和Iturin A溶液

2、试验过程及测定指标

首先检测不同浓度和pH的rpFZD7蛋白质与芯片偶联的效果，选取合适的rpFZD7蛋白质浓度及PH值，将rpFZD7偶联在芯片上。分别用不同浓度的Iturin A溶液孵育后用液体洗脱。通过观察对接的动力学曲线变化情况以及平衡解离常数(KD值)的大小，确定IturinA是否和rpFZD7具有较强的结合能力。

3、试验结果

试验结果如图7所示，结果表明rpFZD7蛋白质可在体外成功结合Iturin A。

实施例5 FZD7介导Iturin A缓解STb-R菌对肠道屏障功能的损伤

1、试验过程及测定指标

选取健康的断奶仔猪24头，随机分为3组，分别为对照组、STb-R菌组及Iturin A+STb-R组。对照组和STb-R菌组饲喂基础日粮，Iturin A+STb-R组饲喂含有320mg/kg IturinA的基础日粮；分组三天后，STb-R菌组及Iturin A+STb-R组灌胃STb-R菌(1×10¹²/头)，灌胃10天后屠宰采样，通过Ussing chamber检测各组空肠组织肠道跨膜电阻值(TEER值)，以此评价肠道屏障功能的变化情况，并通过Western blotting检测空肠组织FZD7蛋白质、Wnt/β-catenin信号通路和关键蛋白质Active β-catenin以及增殖细胞核抗原(ProliferatingCell Nuclear Antigen，PCNA)的表达情况。

2、试验结果

试验结果如图8所示，由图8A可知，添加Iturin A可显著缓解STb-R菌对FZD7蛋白质、Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白质Active β-catenin及增殖标志蛋白质PCNA的表达量抑制作用。即Iturin A可以通过结合Wnt/β-catenin上信号受体FZD7结合上调Wnt/β-catenin，增加肠道干细胞增殖活性，促进受损屏障的快速修复，协同Iturin A的抗菌功能，减少细菌对肠道屏障的破坏，从而保护肠道屏障功能免受细菌破坏。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 卷曲蛋白质7在增强肠道屏障保护功能中的应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 574

<212> PRT

<213> 猪( Sus scrofa domestica)

<400> 1

Met Arg Gly Pro Arg Thr Ala Ala Ser Pro Ser Pro Leu Gly Leu Cys

1 5 10 15

Thr Met Val Leu Ala Val Leu Gly Ala Leu Pro Ala Gly Ala Gly Ala

20 25 30

Gln Pro Tyr His Gly Glu Lys Gly Ile Ser Val Pro Asp His Gly Phe

35 40 45

Cys Gln Pro Ile Ser Ile Pro Leu Cys Thr Asp Ile Ala Tyr Asn Gln

50 55 60

Thr Ile Leu Pro Asn Leu Leu Gly His Thr Asn Gln Glu Asp Ala Gly

65 70 75 80

Leu Glu Val His Gln Phe Tyr Pro Leu Val Lys Val Gln Cys Ser Pro

85 90 95

Glu Leu Arg Phe Phe Leu Cys Ser Met Tyr Ala Pro Val Cys Thr Val

100 105 110

Leu Asp Lys Ala Ile Pro Pro Cys Arg Ser Leu Cys Glu Arg Ala Arg

115 120 125

Gln Gly Cys Glu Ala Leu Met Asn Lys Phe Gly Phe Gln Trp Pro Glu

130 135 140

Arg Leu Arg Cys Glu Asn Phe Pro Val His Gly Ala Gly Glu Ile Cys

145 150 155 160

Val Gly Gln Asn Thr Ser Asp Gly Ser Gly Gly Pro Gly Gly Gly Pro

165 170 175

Thr Ala Tyr Pro Thr Ala Pro Tyr Met Pro Asp Leu Pro Phe Thr Ala

180 185 190

Leu Pro Pro Gly Ala Ala Asp Gly Arg Gly Arg Ser Ala Phe Pro Phe

195 200 205

Ser Cys Pro Arg Gln Leu Lys Val Pro Pro Tyr Leu Gly Tyr Arg Phe

210 215 220

Leu Gly Glu Arg Asp Cys Gly Ala Pro Cys Glu Pro Gly Arg Ala Asn

225 230 235 240

Gly Leu Met Tyr Phe Lys Glu Glu Glu Arg Arg Phe Ala Arg Leu Trp

245 250 255

Val Gly Val Trp Ser Val Leu Cys Cys Ala Ser Thr Leu Phe Thr Val

260 265 270

Leu Thr Tyr Leu Val Asp Met Arg Arg Phe Ser Tyr Pro Glu Arg Pro

275 280 285

Ile Ile Phe Leu Ser Gly Cys Tyr Phe Met Val Ala Val Ala His Val

290 295 300

Ala Gly Phe Leu Leu Glu Asp Arg Ala Val Cys Val Glu Arg Phe Ser

305 310 315 320

Glu Asp Gly Tyr Arg Thr Val Ala Gln Gly Thr Lys Lys Glu Gly Cys

325 330 335

Thr Ile Leu Phe Met Val Leu Tyr Phe Phe Gly Met Ala Ser Ser Ile

340 345 350

Trp Trp Val Ile Leu Ser Leu Thr Trp Phe Leu Ala Ala Gly Met Lys

355 360 365

Trp Gly His Glu Ala Ile Glu Ala Asn Ser Gln Tyr Phe His Leu Ala

370 375 380

Ala Trp Ala Val Pro Ala Val Lys Thr Ile Thr Ile Leu Ala Met Gly

385 390 395 400

Gln Val Asp Gly Asp Leu Leu Ser Gly Val Cys Tyr Val Gly Leu Ser

405 410 415

Ser Val Asp Ala Leu Arg Gly Phe Val Leu Ala Pro Leu Phe Val Tyr

420 425 430

Leu Phe Ile Gly Thr Ser Phe Leu Leu Ala Gly Phe Val Ser Leu Phe

435 440 445

Arg Ile Arg Thr Ile Met Lys His Asp Gly Thr Lys Thr Glu Lys Leu

450 455 460

Glu Lys Leu Met Val Arg Ile Gly Val Phe Ser Val Leu Tyr Thr Val

465 470 475 480

Pro Ala Thr Ile Val Leu Ala Cys Tyr Phe Tyr Glu Gln Ala Phe Arg

485 490 495

Glu His Trp Glu Arg Thr Trp Leu Leu Gln Thr Cys Lys Ser Tyr Ala

500 505 510

Val Pro Cys Pro Pro Gly His Phe Pro Pro Met Ser Pro Asp Phe Thr

515 520 525

Val Phe Met Ile Lys Tyr Leu Met Thr Met Ile Val Gly Ile Thr Thr

530 535 540

Gly Phe Trp Ile Trp Ser Gly Lys Thr Leu Gln Ser Trp Arg Arg Phe

545 550 555 560

Tyr His Arg Leu Ser His Ser Ser Lys Gly Glu Thr Ala Val

565 570

<210> 2

<211> 1725

<212> DNA

<213> 猪( Sus scrofa domestica)

<400> 2

atgcggggcc cccgcacggc agcgtcgccc tcgcctctgg gcctgtgcac catggtgctt 60

gcagtgctgg gcgcactgcc cgcgggcgcc ggggcgcagc cgtaccacgg cgagaagggc 120

atctcagtgc cggaccacgg cttctgccag cctatttcca tccctctgtg cacggacatc 180

gcctacaacc agaccatcct gcccaacctg ctgggtcaca cgaaccaaga agatgcgggc 240

ctcgaggtgc accagttcta cccgctggtg aaggtgcagt gttctcccga gctgcgcttc 300

ttcctgtgct ccatgtacgc acccgtgtgc accgtgctcg ataaggccat cccgccgtgc 360

cgttctctgt gcgagcgtgc ccgccagggg tgtgaggcgc tcatgaacaa gttcggcttc 420

caatggcccg agcggctgcg ttgcgagaac ttccctgtgc acggcgccgg cgagatctgc 480

gtgggccaga acacgtccga cggctccggg ggcccaggcg gcgggcccac cgcctatcct 540

acagcgccct acatgcccga cctgcccttc accgcgctgc ccccgggagc cgctgacggc 600

aggggccgct cggccttccc cttctcgtgc ccccgccagc tcaaggtgcc cccctacctg 660

ggctaccgct tcctgggcga gcgcgactgc ggcgccccct gcgagccggg ccgcgccaac 720

ggcctcatgt actttaagga ggaggagagg cgcttcgccc gcctctgggt gggcgtgtgg 780

tcagtgctgt gctgcgcctc gacgctcttc acggtgctca cctacctagt ggacatgcgg 840

cgcttcagct acccggagcg gcccatcatc ttcctgtcgg gctgctactt catggtggcc 900

gtggcgcacg tggccggctt cctgctggag gaccgcgccg tgtgcgtgga gcgcttctca 960

gaagacggct accgcacggt ggcgcagggc accaagaagg agggctgcac catcctcttc 1020

atggtgctct acttcttcgg catggccagt tccatctggt gggtcatctt gtcgctcact 1080

tggttcctgg ccgctggcat gaagtggggc cacgaggcca tcgaggccaa ctctcagtac 1140

ttccacctgg ctgcgtgggc ggtgcccgct gtcaagacca tcaccatcct ggccatgggc 1200

caggtggacg gggacctgct cagcggggtt tgctacgtgg gcctgtccag cgtggacgcg 1260

ctgcggggct tcgtgctggc gcccctgttc gtctacctct tcatcggcac gtccttcctg 1320

ctggccggct tcgtgtcgct tttccgcatc cgcaccatca tgaagcacga cggcaccaaa 1380

acggagaagc tggagaagct catggtgcgc attggcgtct tcagcgtgct ctacaccgtg 1440

cccgccacca tcgtcctggc ctgttacttc tacgagcagg ccttccgcga acactgggag 1500

cgcacctggc tcctgcagac gtgcaagagc tacgcggttc cctgcccgcc cggccacttc 1560

ccgcccatga gccctgactt caccgtcttc atgatcaaat acctgatgac catgatcgta 1620

ggcatcacca cgggcttctg gatctggtcc ggcaagaccc tgcagtcgtg gcgccgcttc 1680

taccacagac tcagccacag cagcaagggg gagacggcgg tatga 1725

Claims

1.卷曲蛋白质7在增强肠道屏障保护功能中的应用，其特征在于，所述卷曲蛋白质7的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述应用为卷曲蛋白质7通过结合伊枯草菌素A或其同系物在增强肠道干细胞增殖活性，促进受损屏障快速修复，增强肠道屏障保护功能中的应用。

3.权利要求1所述卷曲蛋白质7在制备增强肠道屏障保护功能的产品中的应用。

4.权利要求1所述卷曲蛋白质7在提高氨基酸利用率中的应用。

5.权利要求1所述卷曲蛋白质7在促进氨基酸吸收中的应用。

6.权利要求1所述卷曲蛋白质7在制备促氨基酸吸收的产品中的应用。

7.根据权利要求1～6任一所述应用，其特征在于，编码所述卷曲蛋白质7的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

8.根据权利要求4～6任一所述应用，其特征在于，所述氨基酸为赖氨酸。

9.根据权利要求5或6所述应用，其特征在于，所述促进氨基酸吸收为促进细胞氨基酸吸收。

10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，所述细胞为肠干细胞或骨骼肌卫星细胞。