CN114392293A

CN114392293A - 轮叶党参提取物的制备方法及在防治肾脏损伤方面的应用

Info

Publication number: CN114392293A
Application number: CN202111600744.3A
Authority: CN
Inventors: 赵立春; 李伟; 江婵玲; 李俊秀
Original assignee: Guangxi University of Chinese Medicine
Current assignee: Guangxi University of Chinese Medicine
Priority date: 2021-12-24
Filing date: 2021-12-24
Publication date: 2022-04-26

Abstract

本发明提出了一种轮叶党参提取物的制备方法，其特征在于，所述轮叶党参提取物由轮叶党参原料用水、低级醇、低级酮或乙酸乙酯做溶剂，或者这些溶剂中任选的混合溶剂，进行提取得到。该轮叶党参提取物的制备方法简单，易于操作，活性成分丰富。该提取物对化学物质诱导肾脏损伤小鼠具有明显的保护作用。

Description

轮叶党参提取物的制备方法及在防治肾脏损伤方面的应用

技术领域

本发明涉及轮叶党参提取物的制备方法及通过MAPK信号通路改善药物肾脏损伤的保护作用。

背景技术

顺铂是临床常用的治疗肿瘤药物，但其对机体的严重肾毒性制约它的使用。目前关于抗顺铂肾毒性的药物仍处于探索阶段，还没有一种十分理想的药物，既能抑制顺铂的肾毒性又不影响它治疗肿瘤的活性，因此，寻找新的抗顺铂肾毒性的药物很有必要。

轮叶党参为桔梗科轮叶党参(Codonopsis lanceolatae(Sieb.et Zucc.)Trauv.)的干燥根，是一种药食同源的中药材，在中国民间一直被用来治疗哮喘等疾病。近年来，因其具有广泛的药理活性而被学者青睐，与药理活性相关的有效成分的研究也随之深入。轮叶党参生品具有一定的刺激性，会对药效产生相应的负影响，所以其生药的应用在实际使用中受到了一定的限制，因此轮叶党参需经过蒸制后使用。药理学表明，蒸制轮叶党参对顺铂致肾损伤小鼠具有保护作用(参见：徐颀,等.蒸制轮叶党参对顺铂致小鼠肾损伤的保护作用及机制,《毒理学杂志》,2016)。

轮叶党参中党参炔苷的含量丰富，被认为是其主要的活性成分，亦是轮叶党参的刺激性成分。近年来，对生轮叶党参的研究较多，对热处理后的党参炔苷研究较少。研究表明：热处理可以减少中药的毒性，且易生成部分次级皂苷，多种活性成分容易提取，生物活性好。鲜人参加工成红参就是热处理的典型例证，与鲜人参比较，红参含有丰富的人参次级皂苷(Rg3,Rh2,Rh1等),且生物活性强。本发明主要基于中药传统的热处理的理论，对轮叶党参进行热处理，得到轮叶党参提取物后，发现对肾脏损伤具有明显的保护作用。

发明内容

本发明提供了一种轮叶党参提取物的制备方法及在防治肾脏损伤方面的药物或保健品及食品添加剂的应用。

本发明公开了一种轮叶党参提取物的制备方法，其特征在于，所述轮叶党参提取物由轮叶党参原料用水、低级醇、低级酮或乙酸乙酯做溶剂，或者这些溶剂中任选的混合溶剂，进行提取得到。

进一步的，所述轮叶党参原料的制备方法包括：新鲜采挖3年生轮叶党参，洗净泥土，蒸制一定时间，之后取出晾晒至干，粉碎，即得轮叶党参原料。

进一步的，所述轮叶党参原料属于经热处理的熟轮叶党参，其热处理可以是清蒸或液体辅料蒸，可以是常压或高压蒸制的任何一种。

进一步的，所述蒸制所用的液体辅料可以是醋、黄酒、蜂蜜、米泔水或姜汁任何一种，其蒸制时间为30min-24h，蒸制温度为90-120℃。

进一步的，所述提取用的溶剂中的所述低级醇为甲醇，乙醇，正丁醇其中之一，所述低级酮为丙酮；所述提取方法选自浸泡提取、回流提取、超声提取、逆流提取、超临界萃取中的任何一种。

本发明还公开一种根据以上任一所述制备方法制备的轮叶党参提取物。

进一步的，所述轮叶党参提取物包括有效成分紫丁香苷和党参炔苷，所述紫丁香苷含量范围为0.01-3.0％，所述党参炔苷含量范围为0.01-3％。

本发明还公开一种根据以上所述制备方法制备的轮叶党参提取物在防治肾脏损伤方面，以及药物、保健品及食品添加剂中的应用。

进一步的，所述化学性肾脏损伤为扑热息痛(又称，对乙酰氨基酚)过量使用所引起的严重肾脏损伤和肾脏功能衰竭。

进一步的，所述药物、保健品包括药物或保健品片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等多种剂型的任何一种。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本申请的进一步理解，构成本申请的一部分，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：

图1为本申请提供的轮叶党参提取物的HPLC色谱图；

图2为本申请提供的轮叶党参提取物对小鼠血清中炎症因子的影响示意图；

图3为本申请提供的肾脏组织学变化和Hoechst 33258染色(×400)示意图。

具体实施方式

前述轮叶党参提取物，主要是通过热处理得到轮叶党参原料后，再经提取制备，这里所述的热处理主要包括清蒸和液体辅料蒸制，再晒干或烘干即可熟轮叶党参原料；轮叶党参提取物的制备，包括用水，低级醇，低级酮或乙酸乙酯做溶剂，或者这些溶剂中任选额混合溶剂，进行提取得到的提取物；提取用溶剂中所用低级醇可以使甲醇、乙醇或正丁醇，低级酮为丙酮；提取方法选自浸泡提取、回流提取、超声提取、逆流提取以及超临界萃取。例如：用乙醇：水(按体积比90-10:10-90)的混合溶剂进行提取，优选可以用乙醇：水(按体积比70:30)的混合溶剂进行提取。

前述的轮叶党参提取物，主要包含紫丁香苷，党参炔苷，酚酸及黄酮类化合物。

前述的轮叶党参提取物，主要对化学性肾脏损伤具有预防和治疗作用，能够在日常生活中使用，以缓解和或改善化学物质引起的各种肾脏损伤。

当本发明用于上述用途时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以以任何常规的形式给药，如片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等。

本发明制备预防和制备化学性肾脏损伤的轮叶党参提取物可以与药用载体或食品载体混合，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是总所周知的，下面举几个例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖，淀粉，糊精，碳酸钙，合成或天然硫酸铝，氧化镁，硬脂酸镁，碳酸氢钠，干燥酵母等；溶液剂的赋形剂有水，甘油，1，2-丙二醇，单糖浆，乙醇，乙二醇，聚乙二醇，山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂蜡、木蜡、液体石蜡等组合成的疏水剂或亲水剂。

本发明可以通过下面的实验例进一步说明。

实施例1.轮叶党参提取物的制备方法

制备方法1：新鲜的轮叶党参，3年生，洗净，去皮，用纱布包好放入普通常压蒸锅中，蒸锅中放的蒸馏水作为蒸汽源，预热30min，蒸制6h，然后取出放入烘箱中45℃烘干24h，即为蒸制轮叶党参。

将上述所得蒸制轮叶党参，粉碎，过40目筛，用70％乙醇超声提取3次，合并提取物，减压浓缩，得轮叶党参提取物。

制备方法2：新鲜的轮叶党参，3年生，洗净，去皮，用纱布包好放入立式压力蒸汽灭菌器中，灭菌器中放的蒸馏水作为蒸汽源，预热30min，于105℃高压蒸制1h，然后取出放入烘箱中45℃烘干24h，即为蒸制轮叶党参。

制备方法3：新鲜的轮叶党参，3年生，洗净，去皮，用纱布包好放入立式压力蒸汽灭菌器中，灭菌器中放的陈醋作为蒸汽源，预热30min，于105℃高压蒸制1h，然后取出放入烘箱中45℃烘干24h，即为蒸制轮叶党参。

实施例2.轮叶党参提取物中有效成分的分析

应用UV和HPLC法测定了蒸制轮叶党参中不同有效成分含量，结果表明：经蒸制处理后，紫丁香苷，党参炔苷含量明显增加。此外，蒸制后轮叶党参香味增加，口服口感好，刺激性减弱。

实施例3.轮叶党参提取物对顺铂诱导的肾损伤小鼠的保护作用

将ICR小鼠随机分成空白对照组(Normal)、肾损伤模型组(Cisplatin)、轮叶党参提取物低剂组(200mg/kg)、高剂组(400mg/kg)，每组10只。各给药组连续灌胃10天，空白组和模型组均给予同体积生理盐水。于第7天给药后，禁食不禁水12h，模型组和各给药组均一次性腹腔注射20mg/kg顺铂生理盐水溶液，继续给药3天，末次给药后，禁食不禁水12h，摘眼球取血，离心制备血清，脱臼处死小鼠，迅速取出肾组织。将左肾置于生理盐水中制成匀浆，3000rmp/min离心5min，取上清液，试剂盒检测相关生化指标；右肾用4％甲醛固定后进行病理学及免疫组织化学分析。

从表1可以看出，与空白组小鼠相比，一次性顺铂注射3天后，小鼠状态萎靡，毛色灰暗，体重略有减轻，但无统计学意义(P>0.05)；肾指数和脾指数显著升高(P<0.05)，表明代谢器官受损严重，出现了免疫抑制反应；然而，轮叶党参提取物各给药组，小鼠状态明显好转，体重下降得到有效缓解，可以明显改善顺铂所致的肾指数下降(P<0.05)，但对肝和脾指数影响较小。

表1.SCL对小鼠体重及脏器指数的影响(Mean±SD,n＝10)

Table 1.Effects of SCL on body weight and organ indices in mice(Mean±SD,n＝10)

注：与空白对照组比较,^**P<0.01；与模型组比较,^#P<0.05。

从表2可以看出，与空白组相比，模型组小鼠血清中BUN和CRE水平均显著性升高(P<0.01)，表明急性肾损伤模型建立成功；与模型组比较，轮叶党参提取物低剂量组(200mg/kg)能够降低血清中BUN和CRE水平，但不具有显著性；轮叶党参提取物高剂量组(400mg/kg)小鼠血清中BUN和CRE水平均显著性降低(P<0.05)。

与空白组相比，模型组小鼠肾组织匀浆中MDA的含量显著增加(P<0.05)，表明顺铂急性肾损伤导致脂质过氧化；与模型组相比，轮叶党参提取物各剂量组均能不同程度的降低肾组织中MDA的含量，且高剂量具有显著性差异(P<0.05)。

表2.SCL对小鼠血清中BUN,CRE及肾组织中MDA水平的影响(Mean±SD,n＝10)

Table 2.Effects of SCL on BUN and CRE in serum,and MDA content inkidney tissues(Mean±SD,n＝10)

注：与空白对照组比较,^*P<0.05,^**P<0.01；与模型组比较,^#P<0.05

从图2可以看出，与空白组比较，模型组小鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平明显升高(P<0.01或P<0.05)；与模型组相比，轮叶党参提取物各剂量给药组均能够降低血清中TNF-α和IL-1β的水平，且具有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。表明SCL能够部分通过抑制炎症反应而发挥肾保护作用。

从图3A可以看出，空白组肾组织结构正常，可见正常肾小球及其周围肾小管，无肾小管变性坏死及透明管型等现象；而模型组肾小管上皮细胞胞界不清，部分细胞坏死，核固缩或消失，肾小管管腔内有均质红染的透明管型等现象；轮叶党参提取物低剂量组与模型组比较，细胞坏死程度减轻，核固缩或消失现象减少，但仍可见部分透明管型；而轮叶党参提取物高剂量组细胞坏死明显减少，透明管型现象显著减少，可见清晰的球囊腔，细胞形态基本正常。

从图3B可以看出，空白组无蓝色荧光的细胞核，说明无细胞凋亡现象；而模型组可见大量的具有均匀荧光强度的细胞核且大部分细胞核表现出正常轮廓；轮叶党参提取物低、高剂量组中均可观察到明显的细胞核破碎和凝结现象减少，说明其能显著抑制细胞凋亡，且呈现剂量依赖性关系。

制备药剂的实施例一

轮叶党参提取物20.00g，药用淀粉适量，两者充分混匀，装胶囊，制成100粒胶囊，每粒重0.25g，含轮叶党参提取物200mg。

制备药剂的实施例二

轮叶党参提取物20.00g，以1,2-丙二醇1000ml溶解，过滤后分装于1000只安瓶中，每瓶1.0ml，含轮叶党参提取物20mg。

Claims

1.一种轮叶党参提取物的制备方法，其特征在于，所述轮叶党参提取物由轮叶党参原料用水、低级醇、低级酮或乙酸乙酯做溶剂，或者这些溶剂中任选的混合溶剂，进行提取得到。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述轮叶党参原料的制备方法包括：新鲜采挖3年生轮叶党参，洗净泥土，蒸制一定时间，之后取出晾晒至干，粉碎，即得轮叶党参原料。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述轮叶党参原料属于经热处理的熟轮叶党参，其热处理可以是清蒸或液体辅料蒸，可以是常压或高压蒸制的任何一种。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蒸制所用的液体辅料可以是醋、黄酒、蜂蜜、米泔水或姜汁任何一种，其蒸制时间为30min-24h，蒸制温度为90-120℃。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取用的溶剂中的所述低级醇为甲醇，乙醇，正丁醇其中之一，所述低级酮为丙酮；所述提取方法选自浸泡提取、回流提取、超声提取、逆流提取、超临界萃取中的任何一种。

6.一种根据以上任一权利要求所述制备方法制备的轮叶党参提取物。

7.如权利要求6所述的轮叶党参提取物，其特征在于，所述轮叶党参提取物包括有效成分紫丁香苷和党参炔苷，所述紫丁香苷含量范围为0.01-3.0％，所述党参炔苷含量范围为0.01-3％。

8.一种根据权利要求6所述制备方法制备的轮叶党参提取物在防治肾脏损伤方面，以及药物、保健品及食品添加剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的轮叶党参提取物在防治肾脏损伤方面，以及药物、保健品及食品添加剂中的应用，其特征在于，所述肾脏损伤为扑热息痛(又称，对乙酰氨基酚)过量使用所引起的严重肾脏损伤和肾脏功能衰竭。

10.根据权利要求8所述的轮叶党参提取物在预防和治疗肾脏损伤方面，以及药物、保健品及食品添加剂中的应用，其特征在于，所述药物、保健品包括药物或保健品片剂，胶囊剂，粉针剂，注射剂，丸剂，软胶囊，颗粒剂和贴剂等多种剂型的任何一种。