CN114381473B - 转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用 - Google Patents

转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114381473B
CN114381473B CN202210066720.2A CN202210066720A CN114381473B CN 114381473 B CN114381473 B CN 114381473B CN 202210066720 A CN202210066720 A CN 202210066720A CN 114381473 B CN114381473 B CN 114381473B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lcerf19
transcription factor
essential oil
synthesis
gene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210066720.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114381473A (zh
Inventor
汪阳东
王民炎
陈益存
高暝
吴立文
赵耘霄
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Research Institute of Subtropical Forestry of Chinese Academy of Forestry
Original Assignee
Research Institute of Subtropical Forestry of Chinese Academy of Forestry
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Research Institute of Subtropical Forestry of Chinese Academy of Forestry filed Critical Research Institute of Subtropical Forestry of Chinese Academy of Forestry
Priority to CN202210066720.2A priority Critical patent/CN114381473B/zh
Publication of CN114381473A publication Critical patent/CN114381473A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114381473B publication Critical patent/CN114381473B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
    • C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
    • C12N15/8247—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine involving modified lipid metabolism, e.g. seed oil composition
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用，涉及生物技术领域。本发明提供了转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用。经发明人研究发现，转录因子LcERF19能够通过促进山鸡椒LcTPS42的表达提高山鸡椒精油生物合成，可在山鸡椒精油合成分子育种和创制高产山鸡椒新种质中进行应用，也可用于山鸡椒精油合成能力的检测。

Description

转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用。
背景技术
山鸡椒(Litsea cubeba(Lour.)Pers.)是我国重要的香精香料树种，全株含油，果实含油量高达4.0％以上。山鸡椒精油用途广泛，可用于香精香料、驱蚊抑菌、生物防治等，具有广阔的开发前景。因此，如何有效的提高山鸡椒果实精油产量，培育山鸡椒高含油量的新品种，对山鸡椒产业发展具有重要意义。挖掘调控精油合成的关键基因，利用植物基因工程进行分子育种是进行山鸡椒高精油含量定向育种和遗传改良的重要途径。
通过转录因子调控代谢途径中的关键基因是植物代谢调控的途径之一。ERF(ethylene-responsive factor)转录因子广泛的参与植物的生长发育、次生代谢、生物与非生物胁迫等多种过程，是植物重要的转录因子家族之一。ERF转录因子属于AP2/ERF家族，具有1个AP2结构域。ERF基因可通过与靶基因的启动子序列特异性结合激活或抑制靶基因的表达，从而调控植物的生长发育和与环境的响应。
精油化合物是植物重要的次生代谢物之一。丹参SmERF128可通过促进丹参酮合成途径关键基因SmCPS1和SmKSL1的表达提高丹参酮的产量。青蒿AaERF1和AaERF2可与AaADS和AaCYP71AV1启动子结合促进青蒿素和青蒿酸的积累。红豆杉TcERF15和TcERF12分别是紫杉醇生物合成的正/负调控因子。然而，山鸡椒中利用ERF转录因子调控精油合成的研究至今未见报道，限制了山鸡椒精油合成的遗传改良。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用，以解决上述问题中的至少一种。
本发明的第二目的在于提供含有上述转录因子LcERF19的载体。
本发明的第三目的在于提供含有上述载体的基因工程菌。
本发明的第四目的在于提供一种山鸡椒性状相关的标志物。
本发明的第五目的在于提供一种检测山鸡椒性状的试剂盒。
本发明的第六目的在于提供一种调控山鸡椒精油合成的方法。
第一方面，本发明提供了一种转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用；
所述转录因子LcERF19的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
作为进一步技术方案，所述转录因子LcERF19的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
作为进一步技术方案，所述山鸡椒精油包括香叶醛、香叶醇和橙花醇中的至少一种。
第二方面，本发明提供了一种载体，含有上述转录因子LcERF19的基因。
第三方面，本发明提供了一种基因工程菌，含有上述载体。
第四方面，本发明提供了一种山鸡椒性状相关的标志物，所述标志物选自(a1)：转录因子LcERF19；
(a2)：所述转录因子LcERF19的基因；
(a3)：(a2)转录的RNA；
所述性状包括山鸡椒精油合成能力。
第五方面，本发明提供了一种检测山鸡椒性状的试剂盒，所述试剂盒用于检测上述标志物。
作为进一步技术方案，所述试剂盒包括用于扩增转录因子LcERF19基因的引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
第六方面，本发明提供了一种调控山鸡椒精油合成的方法，包括过表达或抑制表达转录因子LcERF19的基因。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供了转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用。经发明人研究发现，转录因子LcERF19能够通过促进山鸡椒LcTPS42的表达提高山鸡椒精油生物合成，可在山鸡椒精油合成分子育种和创制高产山鸡椒新种质中进行应用，也可用于山鸡椒精油合成能力的检测。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为山鸡椒不同组织和果实不同发育时期的LcERF19和LcTPS42的基因表达量；
图2为利用双荧光素酶实验表明LcERF19正调控LcTPS42的表达；
图3为山鸡椒瞬时转化LcERF19基因后的精油化合物检测结果。
具体实施方式
下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
第一方面，本发明提供了一种转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用；
所述转录因子LcERF19的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
转录因子LcERF19的氨基酸序列如下：
MKMMMATADEVSALDLIRQHLIDDFSSFENDKNLIASSEIDAKLSVLVPKAETFDSETQSCSSLQSTSFGSPNFIPIPKQDYFQLNKSDGDFLEFRALPVQKVADLKEKTNLCQQRRPNSASPRRPSLKIALPPVPKVELSDAPAAEVSGENKRYRGVRQRPWGKFAAEIRDSNKRGSRVWLGTFETGIEAAKAYDRAAFQMRGSRAILNFPLEAGNGEEESTAGRKRRPEAESDEQAAVAVTAAKPTKKERTMEADAAEYAGNIPLTPSSWTGVDLTGTGIFNLPPLSPLSPHPALGYPQLMVT(SEQ ID NO.2)。
经发明人研究发现，转录因子LcERF19能够通过促进山鸡椒LcTPS42的表达提高山鸡椒精油生物合成，可在山鸡椒精油合成分子育种和创制高产山鸡椒新种质中进行应用。
在一些优选的实施方式中，所述转录因子LcERF19的基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
转录因子LcERF19的基因的核苷酸序列如下：
ATGAAGATGATGATGGCCACAGCTGATGAAGTCTCTGCTCTCGATCTAATTCGACAACACCTCATTGACGATTTCTCCTCTTTCGAAAACGATAAGAATCTCATTGCCTCCTCAGAAATCGATGCAAAGCTGTCGGTACTCGTACCAAAAGCAGAAACTTTCGATTCGGAAACTCAATCCTGCTCCTCCTTGCAGTCTACGAGCTTTGGGTCTCCGAATTTCATACCCATACCCAAACAGGATTACTTCCAGCTGAACAAATCGGACGGCGATTTTCTTGAATTTAGGGCTCTTCCTGTACAAAAAGTTGCTGATTTGAAAGAAAAAACGAATCTTTGCCAGCAGAGAAGACCAAACTCGGCGTCTCCTCGCCGTCCTTCGCTCAAGATCGCTCTCCCTCCAGTTCCGAAGGTCGAGTTGTCCGATGCGCCGGCGGCTGAGGTTTCCGGCGAGAATAAGCGCTACAGGGGCGTCCGGCAGCGGCCGTGGGGGAAATTTGCGGCGGAGATCCGAGATTCGAACAAGCGAGGGTCTAGGGTTTGGCTTGGGACCTTCGAGACGGGGATCGAAGCCGCAAAGGCGTACGATCGAGCGGCGTTCCAGATGCGCGGGAGTAGAGCGATTCTCAATTTCCCGCTCGAGGCCGGAAATGGCGAGGAGGAGTCGACGGCCGGCCGAAAGAGGCGCCCGGAAGCGGAATCTGACGAACAAGCGGCAGTTGCAGTTACAGCTGCAAAGCCTACTAAGAAGGAGAGGACGATGGAGGCTGACGCAGCAGAATATGCGGGGAATATTCCGTTAACGCCGTCAAGCTGGACTGGTGTGGATTTGACTGGGACGGGGATATTTAACCTTCCTCCGCTGTCGCCGTTATCTCCTCATCCAGCCTTGGGCTACCCTCAGCTTATGGTGACCTGA(SEQ ID NO.1)。
在一些优选的实施方式中，所述山鸡椒精油包括香叶醛、香叶醇和橙花醇中的至少一种。
第二方面，本发明提供了一种载体，含有上述转录因子LcERF19的基因。该载体导入到受体细胞中能够表达转录因子LcERF19。
第三方面，本发明提供了一种基因工程菌，含有上述载体。例如将上述载体导入到农杆菌中，进而以农杆菌为介质将目的基因插入值植物基因组中。
第四方面，本发明提供了一种山鸡椒性状相关的标志物，所述标志物选自(a1)：转录因子LcERF19；
(a2)：所述转录因子LcERF19的基因；
(a3)：(a2)转录的RNA；
所述性状包括山鸡椒精油合成能力。
由于转录因子LcERF19能够通过促进山鸡椒LcTPS42的表达提高山鸡椒精油生物合成，据此可以根据转录因子LcERF19、转录因子LcERF19基因或转录因子LcERF19基因转录的RNA判断山鸡椒精油合成能力。
第五方面，本发明提供了一种检测山鸡椒性状的试剂盒，所述试剂盒用于检测上述标志物。通过对上述标志物的检测，进而可以推断山鸡椒精油合成能力。
在一些优选的实施方式中，所述试剂盒包括用于扩增转录因子LcERF19基因的引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
引物F：ATGAAGATGATGATGGCCACAGCTG(SEQ ID NO.3)；
引物R：TCAGGTCACCATAAGCTGAGGGTAG(SEQ ID NO.4)。
采用上述引物能够特异性实现对扩增转录因子LcERF19基因的扩增。
第六方面，本发明提供了一种调控山鸡椒精油合成的方法，包括过表达或抑制表达转录因子LcERF19的基因。
在一些优选的实施方式中，将转录因子LcERF19的基因导入到山鸡椒叶片，结果发现香叶醛、香叶醇和橙花醇的产量提高了。
下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1 LcERF19的基因克隆
(1)RNA提取
取山鸡椒果实组织，液氮研磨成粉末后利用RN38 EASY spin plus植物RNA快速提取试剂盒提取RNA。反转录合成cDNA第一链后，根据LcERF19的CDS序列，设计引物如SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4，利用Ex-Taq高保真酶对LcERF19的cDNA序列进行扩增。
PCR反应体系：
反应程序：98℃变性10s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环。PCR产物经琼脂糖凝胶后用DNA凝胶回收试剂盒回收目的片段。
利用pClone007 Blunt Vector Kit构建克隆载体：
反应体系：
室温加样，轻柔混合后短暂离心，25℃静置10min。
取5μL连接产物加至50μL处于冰水混合物状态的大肠杆菌DH5α感受态，轻弹混匀后冰浴25min；42℃热激45s；冰上静置2min；加700μL无抗生素的LB液体培养基；200rpm，37℃振荡培养1h；取适量菌液涂布于含有50mg·L-1Amp的LB固体培养基上，37℃倒置培养过夜至长出单菌落，并进行阳性克隆检测和测序，获得LcERF19的核苷酸序列如SEQ ID NO.1。
实施例2 LcERF19和LcTPS42基因的表达模式分析
其中，LcTPS42是山鸡椒精油合成途径中的关键基因，可催化生成芳樟醇和香叶醇等山鸡椒精油的关键成分。
(1)RNA提取
将山鸡椒的根、茎、叶、花、果实组织分别进行RNA提取并检测样品浓度和质量，用于荧光定量PCR反应。使用QuantStudio 7Flex荧光定量PCR检测系统，以山鸡椒UBC基因为内参，按照荧光定量试剂盒TB Green Premix Ex Taq II(TliRNaseH Plus)进行操作。
扩增程序为：95℃预变性30s，95℃变性5s，60℃变性31s，共40个循环。每个样品3次生物学重复，3次技术重复。利用2-ΔΔCT方法计算LcERF19和LcTPS42基因的相对表达量。扩增LcTPS42的正向引物为5’-ATGTTGTCCTCAGCGGCTTCT-3’(SEQ ID NO.5)；反向引物为5’-CTAGATTCTGAAAGTTCCTCT-3’(SEQ ID NO.6)。用t检验计算不同组织中基因表达量的显著性差异，P<0.05用*标记，P<0.01用**标记。
结果表明(图1)，在山鸡椒果实中，LcERF19与LcTPS42的表达量呈良好的正相关关系。图中，DAF,开花后天数。
实施例3双荧光素酶实验验证LcERF19对LcTPS42的调控作用
构建LcERF19-SK载体和包含LcTPS42启动子的LcTPS42-PRO-LUC载体，分别转化农杆菌GV3101感受态细胞。
挑取阳性农杆菌单菌落，培养至OD600为0.8-1.0后2250g离心1min收集菌体。用悬浮液(乙酰丁香酮150μmol·L–1，MgCl2 10mM)重悬菌液，OD600调至0.6，将待检测的2种农杆菌菌液按照1:1体积比进行混合，室温静置2h。
选取生长1个月左右完全伸展的烟草叶片，将混合好的菌液用1mL的无针注射器从烟草叶背面进行注射。以空载SK和含LcTPS42启动子的LUC载体混合液作为对照，与待检测目标载体的菌液注射在同一片叶片的不同部位上，以保证相同的生长背景，每株注射2-3个烟草叶片。进行4次以上生物学重复。60-72h后取样，luminometer定量检测荧光强度，检测LUC/REN比值判断调控效应。
结果表明(图2)，与对照相比，LcERF19-SK载体和包含LcTPS42启动子的LUC载体共同转化后的相对LUC/REN比值显著提高，说明LcERF19可以促进LcTPS42的表达。
实施例4瞬时转化实验验证LcERF19对LcTPS42的调控作用
将含有LcERF19-pCambia1300S的农杆菌菌液加入50mL LB培养基中，培养至OD600为0.8时，收集菌体，用悬浮液(乙酰丁香酮150μmol·L–1，MgCl2 10mM，MES 10mM)重悬菌液后孵育2h后用注射器通过抽真空方式渗透山鸡椒叶片，48h后利用GC-MS检测挥发性成分，各组分分别用NIST08标准谱库进行检索匹配，碎片比对，并结合相关文献报道、各成分的相对保留时间等进行定性。定量按峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量。每个样品3次生物学重复。
结果如图3所示，瞬时转化LcERF19后显著提高了香叶醛、香叶醇和橙花醇的产量，这一结果表明LcERF19正调控山鸡椒的精油生物合成。
本发明表明LcERF19正调控山鸡椒精油生物合成，可应用于山鸡椒及其他植物的精油合成的分子育种和创制高产高品质新种质。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国林业科学研究院亚热带林业研究所
<120> 转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 918
<212> DNA
<213> 山鸡椒（Litsea cubeba（Lour.）Pers.）
<400> 1
atgaagatga tgatggccac agctgatgaa gtctctgctc tcgatctaat tcgacaacac 60
ctcattgacg atttctcctc tttcgaaaac gataagaatc tcattgcctc ctcagaaatc 120
gatgcaaagc tgtcggtact cgtaccaaaa gcagaaactt tcgattcgga aactcaatcc 180
tgctcctcct tgcagtctac gagctttggg tctccgaatt tcatacccat acccaaacag 240
gattacttcc agctgaacaa atcggacggc gattttcttg aatttagggc tcttcctgta 300
caaaaagttg ctgatttgaa agaaaaaacg aatctttgcc agcagagaag accaaactcg 360
gcgtctcctc gccgtccttc gctcaagatc gctctccctc cagttccgaa ggtcgagttg 420
tccgatgcgc cggcggctga ggtttccggc gagaataagc gctacagggg cgtccggcag 480
cggccgtggg ggaaatttgc ggcggagatc cgagattcga acaagcgagg gtctagggtt 540
tggcttggga ccttcgagac ggggatcgaa gccgcaaagg cgtacgatcg agcggcgttc 600
cagatgcgcg ggagtagagc gattctcaat ttcccgctcg aggccggaaa tggcgaggag 660
gagtcgacgg ccggccgaaa gaggcgcccg gaagcggaat ctgacgaaca agcggcagtt 720
gcagttacag ctgcaaagcc tactaagaag gagaggacga tggaggctga cgcagcagaa 780
tatgcgggga atattccgtt aacgccgtca agctggactg gtgtggattt gactgggacg 840
gggatattta accttcctcc gctgtcgccg ttatctcctc atccagcctt gggctaccct 900
cagcttatgg tgacctga 918
<210> 2
<211> 305
<212> PRT
<213> 山鸡椒（Litsea cubeba（Lour.）Pers.）
<400> 2
Met Lys Met Met Met Ala Thr Ala Asp Glu Val Ser Ala Leu Asp Leu
1 5 10 15
Ile Arg Gln His Leu Ile Asp Asp Phe Ser Ser Phe Glu Asn Asp Lys
20 25 30
Asn Leu Ile Ala Ser Ser Glu Ile Asp Ala Lys Leu Ser Val Leu Val
35 40 45
Pro Lys Ala Glu Thr Phe Asp Ser Glu Thr Gln Ser Cys Ser Ser Leu
50 55 60
Gln Ser Thr Ser Phe Gly Ser Pro Asn Phe Ile Pro Ile Pro Lys Gln
65 70 75 80
Asp Tyr Phe Gln Leu Asn Lys Ser Asp Gly Asp Phe Leu Glu Phe Arg
85 90 95
Ala Leu Pro Val Gln Lys Val Ala Asp Leu Lys Glu Lys Thr Asn Leu
100 105 110
Cys Gln Gln Arg Arg Pro Asn Ser Ala Ser Pro Arg Arg Pro Ser Leu
115 120 125
Lys Ile Ala Leu Pro Pro Val Pro Lys Val Glu Leu Ser Asp Ala Pro
130 135 140
Ala Ala Glu Val Ser Gly Glu Asn Lys Arg Tyr Arg Gly Val Arg Gln
145 150 155 160
Arg Pro Trp Gly Lys Phe Ala Ala Glu Ile Arg Asp Ser Asn Lys Arg
165 170 175
Gly Ser Arg Val Trp Leu Gly Thr Phe Glu Thr Gly Ile Glu Ala Ala
180 185 190
Lys Ala Tyr Asp Arg Ala Ala Phe Gln Met Arg Gly Ser Arg Ala Ile
195 200 205
Leu Asn Phe Pro Leu Glu Ala Gly Asn Gly Glu Glu Glu Ser Thr Ala
210 215 220
Gly Arg Lys Arg Arg Pro Glu Ala Glu Ser Asp Glu Gln Ala Ala Val
225 230 235 240
Ala Val Thr Ala Ala Lys Pro Thr Lys Lys Glu Arg Thr Met Glu Ala
245 250 255
Asp Ala Ala Glu Tyr Ala Gly Asn Ile Pro Leu Thr Pro Ser Ser Trp
260 265 270
Thr Gly Val Asp Leu Thr Gly Thr Gly Ile Phe Asn Leu Pro Pro Leu
275 280 285
Ser Pro Leu Ser Pro His Pro Ala Leu Gly Tyr Pro Gln Leu Met Val
290 295 300
Thr
305
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
atgaagatga tgatggccac agctg 25
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
tcaggtcacc ataagctgag ggtag 25
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
atgttgtcct cagcggcttc t 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ctagattctg aaagttcctc t 21

Claims (8)

1.转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用；
所述转录因子LcERF19的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述转录因子LcERF19的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述山鸡椒精油包括香叶醛、香叶醇和橙花醇中的至少一种。
4.一种载体，其特征在于，含有权利要求1-3任一项中所述转录因子LcERF19的基因。
5.一种基因工程菌，其特征在于，含有权利要求4所述的载体。
6.一种山鸡椒性状相关的标志物，其特征在于，所述标志物选自(a1)：权利要求1-3任一项中所述的转录因子LcERF19；
(a2)：所述转录因子LcERF19的基因；
(a3)：(a2)转录的RNA；
所述性状包括山鸡椒精油合成能力。
7.一种检测山鸡椒性状的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测权利要求6所述转录因子LcERF19的基因；
所述试剂盒包括用于扩增转录因子LcERF19基因的引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
8.一种调控山鸡椒精油合成的方法，其特征在于，包括过表达权利要求1-3任一项中所述的转录因子LcERF19的基因。
CN202210066720.2A 2022-01-20 2022-01-20 转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用 Active CN114381473B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210066720.2A CN114381473B (zh) 2022-01-20 2022-01-20 转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210066720.2A CN114381473B (zh) 2022-01-20 2022-01-20 转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114381473A CN114381473A (zh) 2022-04-22
CN114381473B true CN114381473B (zh) 2023-08-04

Family

ID=81204421

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210066720.2A Active CN114381473B (zh) 2022-01-20 2022-01-20 转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114381473B (zh)

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105198976A (zh) * 2015-10-15 2015-12-30 东北农业大学 一种与植物抗逆性相关蛋白GsERF6及其编码基因与应用
CN106987652A (zh) * 2017-06-07 2017-07-28 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 用于鉴定山鸡椒性别的snp标记及该snp标记的筛选方法
CN108913360A (zh) * 2018-06-26 2018-11-30 清远市瑶康生物科技有限公司 一种具有抗氧化活性的山苍子精油包埋物的制备方法
WO2019047004A1 (zh) * 2017-09-05 2019-03-14 拉芳家化股份有限公司 一种天然替代的植物精油防腐剂及在化妆品中的应用
CN112680483A (zh) * 2020-12-25 2021-04-20 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 山鸡椒醇脱氢酶LcADH31在制备柠檬醛或以其为活性物质的产品中的应用
CN113461793A (zh) * 2021-06-30 2021-10-01 华南农业大学 辣椒ERF转录因子CaERF102及其在提高辣椒素含量中的应用
CN114316008A (zh) * 2022-01-21 2022-04-12 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 转录因子lcmyb4在调控山鸡椒萜类合成中的应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105198976A (zh) * 2015-10-15 2015-12-30 东北农业大学 一种与植物抗逆性相关蛋白GsERF6及其编码基因与应用
CN106987652A (zh) * 2017-06-07 2017-07-28 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 用于鉴定山鸡椒性别的snp标记及该snp标记的筛选方法
WO2019047004A1 (zh) * 2017-09-05 2019-03-14 拉芳家化股份有限公司 一种天然替代的植物精油防腐剂及在化妆品中的应用
CN108913360A (zh) * 2018-06-26 2018-11-30 清远市瑶康生物科技有限公司 一种具有抗氧化活性的山苍子精油包埋物的制备方法
CN112680483A (zh) * 2020-12-25 2021-04-20 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 山鸡椒醇脱氢酶LcADH31在制备柠檬醛或以其为活性物质的产品中的应用
CN113461793A (zh) * 2021-06-30 2021-10-01 华南农业大学 辣椒ERF转录因子CaERF102及其在提高辣椒素含量中的应用
CN114316008A (zh) * 2022-01-21 2022-04-12 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 转录因子lcmyb4在调控山鸡椒萜类合成中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
GenBank: RWR85386.1;GenBank;GenBank;第1-2页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114381473A (zh) 2022-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107177599B (zh) 一种增强植物对镉毒害的耐受性并降低植物镉含量的编码基因与应用
CN111548400B (zh) 一种玫瑰花香调控基因RrMYB114及其应用
CN106754957B (zh) OsSCAMP13基因及编码蛋白与抗逆性的应用及获取方法
CN113025623B (zh) 一种玫瑰花香调控基因RrTPS1及其应用
CN113337536B (zh) Rs2z32基因作为植物免疫负调控因子在提高作物抗性中的应用
CN102675441A (zh) OsMADS57蛋白或其编码基因在抑制水稻分蘖中的应用
CN114316008B (zh) 转录因子lcmyb4在调控山鸡椒萜类合成中的应用
CN110862445B (zh) 影响烟草色素含量的NtOEP1基因及其应用
CN114381473B (zh) 转录因子LcERF19在调控山鸡椒精油合成中的应用
CN108192913A (zh) 一种提高植物非生物胁迫抗性的方法
CN107446928A (zh) 一个花椰菜器官发育调控miRNA序列及其应用
CN112195185B (zh) 一种番茄叶型调控基因及应用
CN104004773A (zh) 一种小麦wrky转录因子基因及其在改变拟南芥根系发育中的应用
CN108218969A (zh) 甘薯花青素转运相关蛋白IbGSTF4及其编码基因与应用
CN112410362A (zh) 云锦杜鹃花tps基因、用于克隆云锦杜鹃花tps基因的引物及其克隆方法和应用
CN117210490B (zh) 一种调控苹果属植物自花结实的pchr基因及其应用
CN109880845A (zh) 一种提高植物结瘤固氮效率的方法
CN105732785B (zh) 蛋白质GhDHN1在调控植物抗逆性中的应用
CN117229379A (zh) 转录因子LcWRKY在调控樟科植物单宁合成中的应用
CN109735561A (zh) 一种高结瘤固氮植物的培育方法
CN104988176B (zh) 一种提高杜仲含胶量的方法
CN116240209B (zh) 中国春小麦中受白粉菌强诱导的增强子及其应用
CN114990133B (zh) 一个烟草类胡萝卜素代谢相关的基因及应用
CN114736278B (zh) 一种马铃薯花色素苷生物合成负调控基因、转录因子及应用
CN117551684A (zh) QfBRC2基因在调控植物分枝发育中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant