CN114376071A - 葡萄糖氧化酶在用于制备改善甲壳动物肠道菌群结构及提高成活率的饲料添加剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了葡萄糖氧化酶在用于制备改善甲壳动物肠道菌群结构及提高成活率的饲料添加剂中的应用。所述葡萄糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，是由含有核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的葡萄糖氧化酶基因的毕赤酵母工程菌株表达产生的，最适作用温度为25℃。所述葡萄糖氧化酶的使用方法简单，以4U/g~10U/g的用量混合到甲壳动物的配合饲料中，连续拌服7~10天，即可有效降低肠道中变形菌门和拟杆菌门的占比、提高疣微菌门和放线菌门的占比，达到改善甲壳动物肠道菌群结构和提高甲壳动物成活率的作用。

Description

葡萄糖氧化酶在用于制备改善甲壳动物肠道菌群结构及提高 成活率的饲料添加剂中的应用

技术领域

本发明属于酶制剂技术领域，具体涉及葡萄糖氧化酶在用于制备改善甲壳动物肠道菌群结构及提高成活率的饲料添加剂中的应用。

背景技术

弧菌病是影响对虾养殖最为常见、危害较重的一类疾病。使用抗生素防治弧菌病，使用方便、见效快，但过度使用或滥用会造成水体微生态失衡、耐药性菌株的产生、水产品药物残留等问题。随着水产养殖业的快速发展，利用生态防治法来控制水产养殖病害受到越来越多的重视与青睐。

葡萄糖氧化酶（Glucose Oxidase，GOD）是一种需氧脱氢酶，催化β-D-葡萄糖脱氢氧化生成葡萄糖内脂和过氧化氢，葡萄糖内脂继而转化为葡萄糖酸。葡萄糖氧化酶主要青霉和黑曲霉等微生物产生，不同来源的葡萄糖氧化酶分子量有所不同，一般为130~180kDa。以往的实验显示在仔猪日粮中添加葡萄糖氧化酶能够改善仔猪断奶应激，促进断奶仔猪生长，并降低腹泻；发霉饲料中添加不同水平的葡萄糖氧化酶对肉鸡生产性能有所改善，能降低霉菌毒素的侵害。但葡萄糖氧化酶在水产动物中的应用鲜见报道。

发明内容

为了解决和克服现有技术中的问题和不足，本发明提供了葡萄糖氧化酶在用于制备改善甲壳动物肠道菌群结构及提高成活率的饲料添加剂中的应用。所述葡萄氧化酶最适温度为25℃，其在凡纳滨对虾饲料中拌服，可显著改善肠道菌群结构，降低弧菌数量占比。

为实现上述发明目的，本发明通过下述技术方案予以实现：

本发明提供了葡萄糖氧化酶在用于制备改善甲壳动物肠道菌群结构及提高成活率的饲料添加剂中的应用。

进一步的，在应用时，将所述葡萄糖氧化酶混合到甲壳动物的配合饲料中，连续拌服7~10天，即可达到改善甲壳动物肠道菌群结构和提高甲壳动物成活率的作用。

进一步的，所述葡萄糖氧化酶的添加量为4U/g~10U/g。

进一步的，所述葡萄糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，其适宜生长温度为20℃-40℃。

进一步的，所述葡萄糖氧化酶是由含有核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的葡萄糖氧化酶基因的毕赤酵母工程菌株表达产生，经压滤、微滤和超微滤后进行喷雾干燥，添加6%~8%质量比的无水葡萄糖后制备而成的。

进一步的，所述葡萄糖氧化酶的酶活含量≥10000U/g。

进一步的，所述改善甲壳动物肠道菌群结构包括降低肠道中变形菌门和拟杆菌门的占比、提高疣微菌门和放线菌门的占比。

进一步的，在使用2U/g~10U/g的葡萄糖氧化酶时，其能够显著降低甲壳动物肠道中弧菌属的数量，具体为弧菌属哈维氏弧菌的数量。

进一步的，所述甲壳动物包括凡纳滨对虾。

与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：

本发明中将葡萄糖氧化酶引用到凡纳滨对虾养殖过程中消化道的致病菌的抑制中，虽然面临温度较低和pH偏中性的环境的挑战（一般葡萄糖氧化酶最适温度高于30℃、最适pH＜6.5）。但本发明经过实验验证了在凡纳滨对虾养殖中使用了葡萄糖氧化酶GODaq，其最适生长温度为25℃，也不需要太高剂量，产生的过氧化氢的强氧化作用，即可对肠道菌群结构产生了正向的影响，而且哈维氏弧菌的占比显著降低，且使用方法简单，可以应用于现场养殖中，直接与饲料混合后投喂，不但降低了凡纳滨对虾肠道中优势菌群-弧菌占比，而且肠道的菌群丰富度显著上升，预示提高了肠道菌群的抗干扰能力。

附图说明

图1为不同添加量葡萄糖下葡萄糖氧化酶GODaq对副溶血弧菌的抑菌圈；

图2为不同添加量葡萄糖下葡萄糖氧化酶GODaq对溶藻弧菌的抑菌圈；

图3为葡萄糖氧化酶GODaq的最适温度曲线；

图4为添加不同剂量葡萄糖氧化酶GODaq对凡纳滨对虾肠道菌群结构的影响。

具体实施方式

结合以下具体实例对本发明的技术方案作进一步详细的说明。

下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学试剂公司购买。

实施例1、葡萄糖氧化酶GOD基因的密码子优化

根据NCBI数据库中的野生葡萄糖氧化酶基因序列（Genbank ID KJ774107.1）进行密码子优化。在对野生葡萄糖氧化酶基因序列优化的过程中，从密码子的优化指标中选取以下几点进行控制：

1.密码子使用偏好。根据Pichia pastoris的密码子使用频率分布表，替换相应密码子，调整密码子适应指数（CAI）和最优密码子使用频率(FOP)。

2.控制GC含量，防止出现容易导致提前终止的高AT序列。

3.减少序列转录的mRNA二级结构中的稳定结构。

4.避免过多的重复序列。

5.避开密码子优化过程中产生的载体携带的限制性内切酶位点。

优化获得的葡萄糖氧化酶基因GOD，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码得到的葡萄糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

将葡萄糖氧化酶基因GOD片段和表达载体pPIC9k，分别用快速限制性内切酶EcoRI、Not I进行双酶切，100 μL酶切体系为：PCR产物或载体30μL，10×buffer 10μL，EcoR I 3μL，Not I 3 μL，ddH₂O 54 μL。37℃酶切2h后，琼脂糖凝胶电泳回收片段。

将双酶切后的GOD片段和pPIC9k载体相连接构建表达载体pPIC9K-GOD。10μL连接体系为：GOD片段为2μL，pPIC9k载体为6μL，10×T4 DNA ligase buffer1μL，T4 DNA ligase1μL。22℃过夜连接，转化大肠杆菌DH5α，涂布含氨苄青霉素终浓度100μg/mL的LB平板，37℃过夜培养。挑取转化子测序验证，测序验证正确的转化子转接到LB液体培养基中，37℃过夜培养，提质粒，即为重组酵母表达质粒pPIC9K-GOD。

将重组质粒pPIC9K-GOD用SalI进行线性化，线性化片段用片段纯化试剂盒(TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purifibation Kit)纯化后，通过电转化方法转化毕赤酵母GS115，涂布MD平板。在MD平板上生长出的菌落即为毕赤酵母工程菌株。

挑取单个阳性转化子转接于BMGY培养基中，30℃，220rpm振荡培养18h后，离心获得菌体，将适量菌体转入BMMY培养基中，使菌体浓度达到OD600的数值等于1，30℃，220rpm振荡培养，每24h添加培养体积1%的甲醇。诱导表达4d后，将培养液离心获得上清，将上清经压滤、微滤和超微滤后进行喷雾干燥，获得酶活含量≥10000U/g的半成品，然后添加6%~8%无水葡萄糖后制作成10000U/g的成品，并将成品编号葡萄糖氧化酶GODaq。

实施例2、葡萄糖氧化酶体外抑制弧菌评价

1、不同浓度葡萄糖氧化酶对溶藻弧菌的抑菌圈评价：

将葡萄糖氧化酶GODaq和盐酸金霉素(麦克林)，用无菌水稀释制成不同含量的稀释液，葡萄糖氧化酶含量分别为5U/g、10U/g、20U/g，此外加入占无菌水体积2%的葡萄糖，盐酸金霉素含量分别为0.4g/L、0.8 g/L、1.6 g/L、3.2g/L，母液于30℃，200 rpm摇床上震荡1h，在2216E平板上涂布100μL浓度为10⁵ CFU/mL溶藻弧菌，然后再将牛津杯轻放在平板上，将不同浓度的200 μL不同含量的待测液加入到牛津杯中。将平板放于30℃恒温培养箱中培养16h，用直尺测量抑菌圈大小，并换算为盐酸金霉素效价。

结果如表1所示，葡萄糖氧化酶GODaq含量在5U/g~20U/g之间时对溶藻弧菌的抑菌圈直径不会随着含量升高而增大，但相对于盐酸金霉素，5U/g的葡萄糖氧化酶GODaq即可以达到30790ppm的效价，与3.2 g/L的盐酸金霉素的活性相同。

表1 不同浓度的葡萄糖氧化酶GODaq对溶藻弧菌的抑菌圈直径及效价

分组	抑菌圈直径（mm)	效价（ppm)
			5U/g葡萄糖氧化酶GODaq	15.5	30790
10U/g 葡萄糖氧化酶GODaq	15.5	30790
			20U/g葡萄糖氧化酶GODaq	15.5	30790
盐酸金霉素0.4g/L	0.0	0
			盐酸金霉素0.8g/L	9.5	7700
盐酸金霉素1.6 g/L	13.0	17280
			盐酸金霉素3.2 g/L	15.5	30790

2、添加不同含量葡萄糖对葡萄糖氧化酶GODaq抑菌效果的影响

用无菌水将葡萄糖氧化酶GODaq制作成5U/g的稀释液，不同试验组分别加入无菌水体积2%、4%、6%、8%和10%的无水葡萄糖，放于盛有无菌水的摇瓶中，于30℃，200 rpm震荡1h备用。分别在2216E平板上涂布100μL浓度为10⁵ CFU/mL不同靶标菌，然后再将牛津杯轻放在平板上，将不同浓度的200 μL不同含量的待测液加入到牛津杯中。将平板放于30℃恒温培养箱中培养16h，用直尺测量抑菌圈大小。

结果如表2和图1-2所示，葡萄糖氧化酶GODaq浓度为5U/g时，葡萄糖添加量为2%~10%均能起到抑菌效果，但从抑菌圈直径看2%~4%的葡萄糖添加量抑菌圈相对较小，推测是由于葡萄糖底物含量不足造成，因此要最大限度发挥葡萄糖氧化酶GODaq的作用，则需要在产品中添加＞4%的葡萄糖做底物。

表2 不同含量葡萄糖下葡萄糖氧化酶GODaq对不同靶标菌的抑菌圈（mm）

实施例3、葡萄糖氧化酶GODaq的最适温度

葡萄糖氧化酶GODaq含量检测方法为：用0.25mol/L pH 5.50的乙酸-乙酸钠缓冲溶液将葡萄糖氧化酶酶GODaq进行不同梯度稀释，取10 mL稀释好的酶液于洁净的试管中，置37℃恒温水浴锅中，恒温5 min。取2支洁净的试管，均分别加入邻联茴香胺甲醇缓冲液2.5 mL、葡萄糖溶液（180 g/L）0.3 mL、辣根过氧物酶溶液（0.03%）0.1 mL，置37℃恒温水浴锅中，恒温5 min，然后向其中一管加入 0.1 mL 蒸馏水（样品空白，用于调零），向样品管中加入 0.1 mL 恒温后的样品溶液摇匀，测定 460 nm处吸光值。读取初始吸光度值为A0 并计时，反应3 min时读取吸光度值为A1，得出△A=A1-A0。结果表示与计算X=（△A×n×3）/（11.3×t×0.1），其中n-稀释倍数，t-测定时间，min。

最适pH检测方法为：其他条件不变，通过调整水浴温度，分别在20℃、25℃、30℃、37℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃条件下，测定酶活含量，与20℃的酶活进行对比。

结果如图3表明，葡萄糖氧化酶GODaq起作用的最适温度为25℃，适应低温环境应用，与水产养殖环境相吻合。

实施例4、葡萄糖氧化酶GODaq在凡纳滨对虾中的应用研究

试验选择192尾（1.54±0.08）g凡纳滨对虾，随机分为4组，每个试验组4个水族箱，每个水族箱放养12尾对虾。第1组为空白对照组饲喂配合饲料；第2~4组分别在配合饲料中添加2U/g、4U/g、10U/g葡萄糖氧化酶粉末，与配合饲料按比例混合至封口袋中，添加适量蛋清包裹均匀后，晾干后于4℃保存。

每日投喂3餐，饱食投喂，摄食时间（90±10）min，水质条件为水温（27±1）℃、pH8.2±0.2、氨氮＜0.1mg/L、亚硝酸盐≤0.05 mg/L、弧菌数量＜2000 CFU/mL。采用气泵连续充气，循环水泵流量为12000 L/h，每天换水3%。

30天养殖试验结果如表3所示，投喂2~10U/g葡萄糖氧化酶对凡纳滨对虾生长、饵料系数和成活率无显著性影响（P＞0.05），饵料系数有降低趋势（P＞0.05），4~10U/g添加量下平均增重率和成活率有升高趋势（P＞0.05）（表3）。

表3 饲料中添加葡萄糖氧化酶GODaq对凡纳滨对虾生长性能的影响

采用高通量测序分析肠道微生物多样性，通过OUT聚类分析、Shannon指数分析显示饲料中添加不同浓度的葡萄氧化酶GODaq后群落物种丰度显著增加（P＜0.05）（表4）。通过菌群丰度分析显示凡纳滨对虾肠道主要优势菌群为变形菌门（Proteobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、疣微菌门（Verrucomicrobia）和放线菌门（Actinobacteria），且添加4U/g和10U/g的葡萄糖氧化酶后，与对照相比，对虾肠道中变形菌门和拟杆菌门占比明显下降（P＜0.05）（图4），变形菌门分别降低10.34%、15.51%，拟杆菌门分别降低31.41%、31.13%，两种添加量之间无显著性差异（P＞0.05）。疣微菌门和放线菌门占比明显上升（P＜0.05），疣微菌门占比分别是对照组的4.41和4.80倍，放线菌门占比分别是对照组的3.95和4.50倍。变形菌门占比降低主要体现在γ-变形菌纲的弧菌属占比降低，尤其是其中哈维氏弧菌的占比，且随着葡萄糖氧化酶添加量增加，呈现下降趋势（P＜0.05）（表5）。

表4 添加葡萄糖氧化酶GODaq对凡纳滨对虾肠道菌群α多样性统计

表5 添加葡萄糖氧化酶GODaq对凡纳滨对虾哈维氏弧菌占比的影响

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

序列表

<110> 青岛尚德生物技术有限公司

<120> 葡萄糖氧化酶在用于制备改善甲壳动物肠道菌群结构及提高成活率的饲料添加剂中的应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1770

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ttgccacatt acattagatc caacggtatt gaagcatcct tgttgactga tcctaaggat 60

gtttcaggta gaactgttga ttacattatt gctggaggtg gattgactgg tttgactact 120

gctgctagat tgactgaaaa cccaaacatt tcagttttgg ttattgaatc aggttcttac 180

gaatccgata gaggtcctat tattgaagat ttgaacgctt acggggacat ttttggttct 240

tccgttgatc atgcttacga aactgttgaa ttggctacta acaaccaaac tgctttgatt 300

agatccggta acggattggg tggttccact ttggttaacg gaggtacttg gactagacct 360

cataaggctc aagttgattc ctgggaaact gtttttggta acgaaggatg gaactgggat 420

aacgttgctg cttactcctt gcaagctgaa cgagcgcggg cccctaacgc taagcaaatt 480

gctgctggtc attactttaa cgcttcctgt catggaacta acggaactgt tcatgctggt 540

ccaagagata ctggagacga ttactcccca attgttaagg ctttgatgtc cgctgttgaa 600

gataggggtg ttccaactaa gaaggatttt ggatgtggcg acccacatgg agtttctatg 660

tttccaaaca ctttgcatga agatcaagtt agatccgatg ctgctagaga atggttgttg 720

cctaactacc aaagacctaa cttgcaagtt ttgactggtc aatacgttgg taaagttttg 780

ttgtcacaaa acggaactac tcctagagct gttggagttg aatttggtac tcataagggt 840

aacactcata acgtttacgc tgaacatgaa gttttgttgg ctgctggttc cgctgtttca 900

ccaactattt tggaatactc cggtattggt atgaagtcta ttttggaacc attgggtatt 960

gatactgttg ttgatttgcc agttggattg aacttgcaag atcaaactac tgctactgtt 1020

agatccagaa ttacttccgc tggagctgga caaggacaag ctgcttggtt tgctactttt 1080

aacgaaactt ttggagatta ctccgaaaag gctcatgaat tgttgaacac taagttggaa 1140

caatgggctg aagaagctgt tgctagaggt ggttttcata acactactgc tttgttgatt 1200

caatacgaaa actacagaga ttggattgtt aaccataacg ttgcttactc agaattgttt 1260

ttggatactg ctggagttgc ttcctttgat gtttgggatt tgttgccctt cactagagga 1320

tacgttcata ttttggataa agacccatac ttgcatcatt ttgcttacga tccacaatac 1380

tttttgaacg aattggattt gttgggacaa gctgctgcta ctcaattggc tagaaacatt 1440

tctaactcgg gtgctatgca aacttacttt gctggagaaa ctattccagg tgacaacttg 1500

gcttacgatg ctgatttgtc cgcttggact gaatacattc cataccattt tagacctaac 1560

taccacggag ttggtacttg ttctatgatg ccaaaggaaa tgggaggtgt tgttgataac 1620

gctgctagag tttacggagt tcaaggattg agagttattg atggttcaat tccaccaact 1680

caaatgtctt cacatgttat gactgtgttt tacgctatgg ctttgaagat ttcagatgct 1740

attttggaag attacgcttc tatgcaataa 1770

<210> 3

<211> 589

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Leu Pro His Tyr Ile Arg Ser Asn Gly Ile Glu Ala Ser Leu Leu Thr

1 5 10 15

Asp Pro Lys Asp Val Ser Gly Arg Thr Val Asp Tyr Ile Ile Ala Gly

20 25 30

Gly Gly Leu Thr Gly Leu Thr Thr Ala Ala Arg Leu Thr Glu Asn Pro

35 40 45

Asn Ile Ser Val Leu Val Ile Glu Ser Gly Ser Tyr Glu Ser Asp Arg

50 55 60

Gly Pro Ile Ile Glu Asp Leu Asn Ala Tyr Gly Asp Ile Phe Gly Ser

65 70 75 80

Ser Val Asp His Ala Tyr Glu Thr Val Glu Leu Ala Thr Asn Asn Gln

85 90 95

Thr Ala Leu Ile Arg Ser Gly Asn Gly Leu Gly Gly Ser Thr Leu Val

100 105 110

Asn Gly Gly Thr Trp Thr Arg Pro His Lys Ala Gln Val Asp Ser Trp

115 120 125

Glu Thr Val Phe Gly Asn Glu Gly Trp Asn Trp Asp Asn Val Ala Ala

130 135 140

Tyr Ser Leu Gln Ala Glu Arg Ala Arg Ala Pro Asn Ala Lys Gln Ile

145 150 155 160

Ala Ala Gly His Tyr Phe Asn Ala Ser Cys His Gly Thr Asn Gly Thr

165 170 175

Val His Ala Gly Pro Arg Asp Thr Gly Asp Asp Tyr Ser Pro Ile Val

180 185 190

Lys Ala Leu Met Ser Ala Val Glu Asp Arg Gly Val Pro Thr Lys Lys

195 200 205

Asp Phe Gly Cys Gly Asp Pro His Gly Val Ser Met Phe Pro Asn Thr

210 215 220

Leu His Glu Asp Gln Val Arg Ser Asp Ala Ala Arg Glu Trp Leu Leu

225 230 235 240

Pro Asn Tyr Gln Arg Pro Asn Leu Gln Val Leu Thr Gly Gln Tyr Val

245 250 255

Gly Lys Val Leu Leu Ser Gln Asn Gly Thr Thr Pro Arg Ala Val Gly

260 265 270

Val Glu Phe Gly Thr His Lys Gly Asn Thr His Asn Val Tyr Ala Glu

275 280 285

His Glu Val Leu Leu Ala Ala Gly Ser Ala Val Ser Pro Thr Ile Leu

290 295 300

Glu Tyr Ser Gly Ile Gly Met Lys Ser Ile Leu Glu Pro Leu Gly Ile

305 310 315 320

Asp Thr Val Val Asp Leu Pro Val Gly Leu Asn Leu Gln Asp Gln Thr

325 330 335

Thr Ala Thr Val Arg Ser Arg Ile Thr Ser Ala Gly Ala Gly Gln Gly

340 345 350

Gln Ala Ala Trp Phe Ala Thr Phe Asn Glu Thr Phe Gly Asp Tyr Ser

355 360 365

Glu Lys Ala His Glu Leu Leu Asn Thr Lys Leu Glu Gln Trp Ala Glu

370 375 380

Glu Ala Val Ala Arg Gly Gly Phe His Asn Thr Thr Ala Leu Leu Ile

385 390 395 400

Gln Tyr Glu Asn Tyr Arg Asp Trp Ile Val Asn His Asn Val Ala Tyr

405 410 415

Ser Glu Leu Phe Leu Asp Thr Ala Gly Val Ala Ser Phe Asp Val Trp

420 425 430

Asp Leu Leu Pro Phe Thr Arg Gly Tyr Val His Ile Leu Asp Lys Asp

435 440 445

Pro Tyr Leu His His Phe Ala Tyr Asp Pro Gln Tyr Phe Leu Asn Glu

450 455 460

Leu Asp Leu Leu Gly Gln Ala Ala Ala Thr Gln Leu Ala Arg Asn Ile

465 470 475 480

Ser Asn Ser Gly Ala Met Gln Thr Tyr Phe Ala Gly Glu Thr Ile Pro

485 490 495

Gly Asp Asn Leu Ala Tyr Asp Ala Asp Leu Ser Ala Trp Thr Glu Tyr

500 505 510

Ile Pro Tyr His Phe Arg Pro Asn Tyr His Gly Val Gly Thr Cys Ser

515 520 525

Met Met Pro Lys Glu Met Gly Gly Val Val Asp Asn Ala Ala Arg Val

530 535 540

Tyr Gly Val Gln Gly Leu Arg Val Ile Asp Gly Ser Ile Pro Pro Thr

545 550 555 560

Gln Met Ser Ser His Val Met Thr Val Phe Tyr Ala Met Ala Leu Lys

565 570 575

Ile Ser Asp Ala Ile Leu Glu Asp Tyr Ala Ser Met Gln

580 585

Claims (9)

1.葡萄糖氧化酶在用于制备改善甲壳动物肠道菌群结构及提高成活率的饲料添加剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在应用时，将所述葡萄糖氧化酶混合到甲壳动物的配合饲料中，连续拌服7~10天，即可达到改善甲壳动物肠道菌群结构和提高甲壳动物成活率的作用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶的添加量为4U/g~10U/g。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示，其适宜生长温度为20℃-40℃。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶是由含有核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的葡萄糖氧化酶基因的毕赤酵母工程菌株表达产生，经压滤、微滤和超微滤后进行喷雾干燥，添加6%~8%质量比的无水葡萄糖后制备而成的。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述葡萄糖氧化酶的酶活含量≥10000U/g。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述改善甲壳动物肠道菌群结构包括降低肠道中变形菌门和拟杆菌门的占比、提高疣微菌门和放线菌门的占比。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在使用2U/g~10U/g的葡萄糖氧化酶时，其能够显著降低甲壳动物肠道中弧菌属的数量，具体为弧菌属哈维氏弧菌的数量。

9.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述甲壳动物包括凡纳滨对虾。

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