CN114369132A - 一种去氧胆酸的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种去氧胆酸的制备方法，包括以下步骤：以纯度为35%以上的胆酸为原材料，将胆酸通过氧化酶氧化得到7‑位酮基胆酸；其后将7‑位酮基胆酸进行黄鸣龙反应得到去氧胆酸粗品；其后将氧胆酸粗品纯化得到去氧胆酸；本发明选用特殊的7‑位特异性氧化酶将7位氧化，实现了专一性，特异性，极大的提升了7‑羟位基氧化效果；在化合物7‑位酮基胆酸的制备过程中，通过调节pH值、结晶温度和结晶时间得到易过滤且高含量产品；在化合物去氧胆酸的制备中，通过条件优化，降低了氢氧化钠和水合肼的用量，增加了安全性，降低了物料成本；在粗品回收溶剂析晶过程中，通过调节pH值除去水溶性杂质，提高了总收率及溶剂利用率。
Description
技术领域
本发明涉及去氧胆酸的制备领域，具体是一种去氧胆酸的制备方法。
背景技术
去氧胆酸在胆汁中主要以牛磺酸、甘氨酸结合形式存在，临床上具有促进胆汁分泌抗发炎作用。脱氧胆酸还主要用于生化研究、细菌学和酶学研究；作为脂酶加速剂与阴离子去除剂，用于蛋白质的溶解，用于制备细菌培养基。脱氧胆酸可制成各种脱氧胆酸盐，脱氧胆酸盐主要用于各种制剂，如片剂、注射剂等剂型，除此之外还能诱导人正常肝细胞凋亡。脱氧胆酸还可以与氨基酸类及类似物合成复合物如牛磺酸脱氧胆酸等。现有的合成方法对原材料胆酸的纯度要求较高，导致生产成本大大提高，在进行黄鸣龙反应的过程中对氢氧化钠和水合肼的消耗量大，大大增加了高温反应的危险性，总收率不高，且整个工艺流程复杂，对环境污染大，不适于工业化生产。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种去氧胆酸的制备方法，以至少达到提供一种操作简便、成本低廉、条件温和、环境友好、适合工业化生产的去氧胆酸的制备方法的目的。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种去氧胆酸的制备方法，包括以下步骤：以纯度为35％以上的胆酸为原材料，将胆酸通过氧化酶氧化得到7-位酮基胆酸；其后将7-位酮基胆酸进行黄鸣龙反应得到去氧胆酸粗品；其后将氧胆酸粗品纯化得到去氧胆酸。
进一步的，所述7-位酮基胆酸的制备包括以下步骤：
S11、将所述胆酸用质量分数为5％-10％氢氧化钠水溶液溶解，得到溶解液，所述氢氧化钠的质量为所述胆酸质量的1-2倍；
S12、将所述溶解液中滴加至的氧化酶的培养液中，所述培养液的体积为所述溶解液体积的5倍，进行反应转换；
S13、反应至转化完全后，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至40-50℃，其后用 15％硫酸调节pH至3-4，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在50-55℃下搅拌养晶3- 4小时，其后进行过滤，将滤饼进行水洗，其后将滤饼在50-60℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸。
进一步的，所述氧化酶为7-位氧化酶，所述7-位氧化酶选自中国科学院天津工业生物技术研究院。
进一步的，所述去氧胆酸的制备方法包括以下步骤：
S21、搅拌状态下将所述7-位酮基胆酸加入乙二醇中，所述乙二醇的质量为所述7-位酮基胆酸的3倍，其后加入3.0当量的氢氧化钠和2.5当量的水合肼，所述水合肼的质量浓度为 80％，其后加热升温至120-130℃搅拌反应4.0-4.5h，其后梯度升温至内温180-190℃(用时 3～4小时)，并于180-190℃搅拌反应4.0-4.5小时；
S22、反应完全后对反应体系进行降温，在温度降至90-100℃时加水稀释，稀释用水量为纯胆酸投料量的9倍质量，其后在50-60℃下搅拌30-40min，其后在50-60℃下用质量浓度为50％的硫酸调节pH至8-9，其后加入乙酸乙酯后，所述乙酸乙酯的加量为纯胆酸投料量质量的14.5倍；其后通过所述硫酸继续调节pH至5.5-6.0，其后搅拌10-20分钟，其后静置分液，乙酸乙酯相用温度为50-60℃的热水洗涤三次；
S23、洗涤三次后的乙酸乙酯相再加入洗涤后的乙酸乙酯相的4倍质量的水，并用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调节pH，调节至6.65-6.75；其后在80-85℃下常压回收57-63％质量的乙酸乙酯，其后降温至20-25℃，其后用50％硫酸调节pH至6.1-6.2，其后搅拌析晶过滤，将滤饼水洗后在50-60℃下鼓风干燥，得去氧胆酸粗品；
S24、将所述去氧胆酸粗品加入质量为所述去氧胆酸质量20倍的水中，其后升温至75-85℃搅拌转晶，其后降温至20℃-30℃搅拌1-2小时，其后过滤并水洗滤饼，其后在50-60℃下鼓风干燥，得去氧胆酸。
本发明以低浓度的胆酸(含量高于35％即可，从鸡胆汁中获得)为原料，制备去氧胆酸，制备流程如下：
在制备过程中，选用特定的氧化酶(选自中国科学院天津工业生物技术研究院的7-位氧化酶)，对胆酸7位上的羟基进行特异性好、专一性高的氧化反应，将其氧化为酮基；同时在去氧胆酸的制备过程中，过工艺条件进行优化，降低了黄鸣龙反应合成粗去氧胆酸(纯度为95％以上)过程中氢氧化钠和水合肼的用量，增加了安全性，降低了物料成本；本发明在对氧化酶、工艺、纯化条件改进的基础上，以低纯度的胆酸为原料制备得到高纯度的去氧胆酸。
本发明的有益效果是：
(1)以鸡胆汁为来源得到的低含量的胆酸(含量35％以上)为原料，提高了胆酸的利用率，降低了物料成本。
(2)在化合物7-位酮基胆酸的制备过程中，用特定的7-位特异性氧化酶(7-位氧化酶) 将胆酸的7位氧化，实现了专一性高、特异性好的氧化反应，使得7-位羟基基本转化为7-位酮基。
(3)在化合物7-位酮基胆酸的制备过程中，通过调节pH值、结晶温度和结晶时间得到易过滤且含量高的去氧胆酸(纯度不低于98％)产品。
(4)在化合物去氧胆酸的制备中，通过条件优化，降低了氢氧化钠和水合肼的用量，增加了安全性，降低了物料成本。
(5)在去氧胆酸的后处理过程中，通过热水洗涤除去了大部分水溶性杂质，回收溶剂析晶过程中，通过调节pH值除去剩余的水溶性杂质，提高了总收率及溶剂利用率。
具体实施方式
下面结合实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1
一种去氧胆酸的制备方法，具体包含以下步骤：
S11、将250g所述胆酸(40％含量，含纯胆酸100.0g，244.75mmol)用200.0g的质量分数为5％的氢氧化钠水溶液(250mmol)溶解，得到溶解液；
S12、将所述溶解液中滴加至2500ml的7-位氧化酶培养液(所述氧化酶浓度为30U/ml) 中进行反应转换，转换时温度控制在25℃、pH控制在8.3、溶氧量不低于30％；
S13、反应至转化率＞99％后终止反应，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至40℃，其后在温度为40℃下用15％硫酸调节pH至3，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在 50℃下搅拌养晶3小时，其后进行过滤，将滤饼用100g水进行水洗，其后将滤饼在50℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸；
S21、搅拌状态下将151.7g 7-位酮基胆酸(含量62.3％，含纯7-位酮基胆酸94.5g，232.44mmol)加入283.5g乙二醇中，其后加入46.5g氢氧化钠和36.4g水合肼，所述水合肼的质量浓度为80％，其后加热升温至120℃搅拌反应4.0h，其后梯度升温至内温180℃(用时 3小时)，并于180℃搅拌反应4.0小时；
S22、反应完全后对反应体系进行降温，在温度降至90℃时加850.5g水稀释，其后在50℃下搅拌30-40min，其后在50℃下用质量浓度为50％的硫酸调节pH至8，其后加入1370.2g乙酸乙酯；其后通过所述硫酸继续调节pH至5.5，其后搅拌10分钟，其后静置分液，乙酸乙酯相用温度为50℃的热水洗涤三次，每次用水850.5g；
S23、洗涤三次后的乙酸乙酯相再加入378.0g水，并用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调节pH，pH调节至6.65；其后在80℃下常压回收57％质量的乙酸乙酯，其后降温至20℃，其后用50％硫酸调节pH至6.1，其后于20℃搅拌30分钟析晶，其后过滤，将滤饼用189.0g水洗涤，其后将洗涤后的滤饼在50℃下鼓风干燥，得去氧胆酸粗品；
S24、将所述去氧胆酸粗品加入质量1708.0g水中，其后升温至75℃搅拌8h转晶，其后降温至20℃搅拌1小时，其后过滤并用170.8g水水洗滤饼，其后在50℃下鼓风干燥至水分低于0.5％，得去氧胆酸。
实施例2
一种去氧胆酸的制备方法，具体包含以下步骤：
S11、将250g所述胆酸(40％含量，含纯胆酸100.0g，244.75mmol)用200.0g的质量分数为5％的氢氧化钠水溶液(250mmol)溶解，得到溶解液；
S12、将所述溶解液中滴加至2500ml的7-位氧化酶培养液中进行反应转换(所述氧化酶浓度为40U/ml)，转换时温度控制在27℃、pH控制在8.5、溶氧量不低于30％；
S13、反应至转化率＞99％后终止反应，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至45℃，其后在温度为45℃下用15％硫酸调节pH至4，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在 57℃下搅拌养晶4小时，其后进行过滤，将滤饼用100g水进行水洗，其后将滤饼在55℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸；
S21、搅拌状态下将150.3g 7-位酮基胆酸(含量63.2％，含纯7-位酮基胆酸95.0g，233.67mmol)加入285.0g乙二醇中，其后加入46.7g氢氧化钠和36.6g水合肼，所述水合肼的质量浓度为80％，其后加热升温至125℃搅拌反应4.3h，其后梯度升温至内温185℃(用时 3小时)，并于185℃搅拌反应4.3小时；
S22、反应完全后对反应体系进行降温，在温度降至95℃时加855.0g水稀释，其后在55℃下搅拌35min，其后在55℃下用质量浓度为50％的硫酸调节pH至9，其后加入1377.5g乙酸乙酯；其后通过所述硫酸继续调节pH至5.8，其后搅拌15分钟，其后静置分液，乙酸乙酯相用温度为55℃的热水洗涤三次，每次用水855.0g；
S23、洗涤三次后的乙酸乙酯相再加入380.0g水，并用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调节pH，pH调节至6.70；其后在83℃下常压回收60％质量的乙酸乙酯，其后降温至23℃，其后用50％硫酸调节pH至6.2，其后于23℃搅拌35分钟析晶，其后过滤，将滤饼用190.0g水洗涤，其后将洗涤后的滤饼在55℃下鼓风干燥，得去氧胆酸粗品；
S24、将所述去氧胆酸粗品加入质量1710.0g水中，其后升温至79℃搅拌9h转晶，其后降温至25℃搅拌1.5小时，其后过滤并用171.8g水水洗滤饼，其后在55℃下鼓风干燥至水分低于0.5％，得去氧胆酸。
实施例3
一种去氧胆酸的制备方法，具体包含以下步骤：
S11、将250g所述胆酸(40％含量，含纯胆酸100.0g，244.75mmol)用200.0g的质量分数为5％的氢氧化钠水溶液(250mmol)溶解，得到溶解液；
S12、将所述溶解液中滴加至2500ml的7-位氧化酶培养液中进行反应转换(所述氧化酶浓度为50U/ml)，转换时温度控制在30℃、pH控制在8.6、溶氧量不低于30％；
S13、反应至转化率＞99％后终止反应，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至50℃，其后在温度为50℃下用15％硫酸调节pH至4，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在 55℃下搅拌养晶4小时，其后进行过滤，将滤饼用100g水进行水洗，其后将滤饼在60℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸；
S21、搅拌状态下将151.7g 7-位酮基胆酸(含量62.5％，含纯7-位酮基胆酸94.8g，233.18mmol)加入283.5g乙二醇中，其后加入46.5g氢氧化钠和36.4g水合肼，所述水合肼的质量浓度为80％，其后加热升温至130℃搅拌反应4.5h，其后梯度升温至内温190℃(用时 4小时)，并于190℃搅拌反应4.5小时；
S22、反应完全后对反应体系进行降温，在温度降至100℃时加850.5g水稀释，其后在 60℃下搅拌40min，其后在60℃下用质量浓度为50％的硫酸调节pH至9，其后加入1370.2g 乙酸乙酯；其后通过所述硫酸继续调节pH至6.0，其后搅拌20分钟，其后静置分液，乙酸乙酯相用温度为60℃的热水洗涤三次，每次用水850.5g；
S23、洗涤三次后的乙酸乙酯相再加入378.0g水，并用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调节pH，pH调节至6.75；其后在85℃下常压回收63％质量的乙酸乙酯，其后降温至25℃，其后用50％硫酸调节pH至6.2，其后于25℃搅拌40分钟析晶，其后过滤，将滤饼用189.0g水洗涤，其后将洗涤后的滤饼在60℃下鼓风干燥，得去氧胆酸粗品；
S24、将所述去氧胆酸粗品加入质量1720.0g水中，其后升温至85℃搅拌9h转晶，其后降温至30℃搅拌2小时，其后过滤并用172.0g水水洗滤饼，其后在60℃下鼓风干燥至水分低于0.5％，得去氧胆酸。
实施例4
一种去氧胆酸的制备方法，具体包含以下步骤：
S11、将128.2g所述胆酸(78％含量，含纯胆酸100.0g，244.75mmol)用100.0g的质量分数为5％的氢氧化钠水溶液(250mmol)溶解，得到溶解液；
S12、将所述溶解液中滴加至2500ml的7-位氧化酶培养液中进行反应转换(所述氧化酶浓度为38U/ml)，转换时温度控制在25℃、pH控制在8.3、溶氧量不低于30％；
S13、反应至转化率＞99％后终止反应，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至40℃，其后在温度为40℃下用15％硫酸调节pH至3，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在 50℃下搅拌养晶3小时，其后进行过滤，将滤饼用100g水进行水洗，其后将滤饼在50℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸；
S21、搅拌状态下将所述7-位酮基胆酸加入乙二醇中，所述乙二醇的质量为286.5g，其后加入47.0g氢氧化钠和36.8g水合肼，所述水合肼的质量浓度为80％，其后加热升温至120℃搅拌反应4.0h，其后梯度升温至内温180℃(用时3小时)，并于180℃搅拌反应4.0小时；
S22、反应完全后对反应体系进行降温，在温度降至90℃时加859.5g水稀释，其后在50℃下搅拌30min，其后在50℃下用质量浓度为50％的硫酸调节pH至8，其后加入1384.7g乙酸乙酯后；其后通过所述硫酸继续调节pH至5.5，其后搅拌10分钟，其后静置分液，得到的乙酸乙酯相用温度为50℃的热水洗涤三次，每次用水量为859.5g；
S23、洗涤三次后的乙酸乙酯相再加入382.0g水，并用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调节pH，pH调节至6.65；其后在80℃下常压回收57％质量的乙酸乙酯，其后降温至20℃，其后用50％硫酸调节pH至6.1，其后于20℃搅拌30分钟析晶，其后过滤，将滤饼用191.0g水洗涤，其后将洗涤后的滤饼在50℃下鼓风干燥，得去氧胆酸粗品；
S24、将所述去氧胆酸粗品加入1720.0g水中，其后升温至75℃搅拌8h转晶，其后降温至20℃搅拌1小时，其后过滤并用172.0g水水洗滤饼，其后在50℃下鼓风干燥，干燥至水分低于0.5％得去氧胆酸。
实施例5
一种去氧胆酸的制备方法，具体包含以下步骤：
S11、将128.2g所述胆酸(78％含量，含纯胆酸100.0g，244.75mmol)用100.0g的质量分数为5％的氢氧化钠水溶液(250mmol)溶解，得到溶解液；
S12、将所述溶解液中滴加至2500ml的7-位氧化酶培养液中进行反应转换(所述氧化酶浓度为43U/ml)，转换时温度控制在28℃、pH控制在8.4、溶氧量不低于30％；
S13、反应至转化率＞99％后终止反应，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至45℃，其后在温度为45℃下用15％硫酸调节pH至4，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在 53℃下搅拌养晶4小时，其后进行过滤，将滤饼用100g水进行水洗，其后将滤饼在55℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸；
S21、搅拌状态下将所述7-位酮基胆酸加入乙二醇中，所述乙二醇的质量为286.5g，其后加入47.0g氢氧化钠和36.8g水合肼，所述水合肼的质量浓度为80％，其后加热升温至125℃搅拌反应4.3h，其后梯度升温至内温185℃(用时3小时)，并于185℃搅拌反应4.3小时；
S22、反应完全后对反应体系进行降温，在温度降至95℃时加859.5g水稀释，其后在55℃下搅拌35min，其后在55℃下用质量浓度为50％的硫酸调节pH至9，其后加入1384.7g乙酸乙酯后；其后通过所述硫酸继续调节pH至5.8，其后搅拌15分钟，其后静置分液，得到的乙酸乙酯相用温度为55℃的热水洗涤三次，每次用水量为859.5g；
S23、洗涤三次后的乙酸乙酯相再加入382.0g水，并用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调节pH，pH调节至6.70；其后在83℃下常压回收60％质量的乙酸乙酯，其后降温至23℃，其后用50％硫酸调节pH至6.2，其后于23℃搅拌35分钟析晶，其后过滤，将滤饼用191.0g水洗涤，其后将洗涤后的滤饼在55℃下鼓风干燥，得去氧胆酸粗品；
S24、将所述去氧胆酸粗品加入1720.0g水中，其后升温至80℃搅拌9h转晶，其后降温至25℃搅拌2小时，其后过滤并用172.0g水水洗滤饼，其后在55℃下鼓风干燥，干燥至水分低于0.5％得去氧胆酸。
实施例6
一种去氧胆酸的制备方法，具体包含以下步骤：
S11、将128.2g所述胆酸(78％含量，含纯胆酸100.0g，244.75mmol)用100.0g的质量分数为5％的氢氧化钠水溶液(250mmol)溶解，得到溶解液；
S12、将所述溶解液中滴加至2500ml的7-位氧化酶培养液中进行反应转换(所述氧化酶浓度为40U/ml)，转换时温度控制在30℃、pH控制在8.6、溶氧量不低于30％；
S13、反应至转化率＞99％后终止反应，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至50℃，其后在温度为50℃下用15％硫酸调节pH至4，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在 55℃下搅拌养晶4小时，其后进行过滤，将滤饼用100g水进行水洗，其后将滤饼在60℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸；
S21、搅拌状态下将所述7-位酮基胆酸加入乙二醇中，所述乙二醇的质量为286.5g，其后加入47.0g氢氧化钠和36.8g水合肼，所述水合肼的质量浓度为80％，其后加热升温至130℃搅拌反应4.5h，其后梯度升温至内温190℃(用时4小时)，并于190℃搅拌反应4.5小时；
S22、反应完全后对反应体系进行降温，在温度降至90-100℃时加859.5g水稀释，其后在60℃下搅拌40min，其后在60℃下用质量浓度为50％的硫酸调节pH至9，其后加入1384.7g 乙酸乙酯后；其后通过所述硫酸继续调节pH至6.0，其后搅拌20分钟，其后静置分液，得到的乙酸乙酯相用温度为60℃的热水洗涤三次，每次用水量为859.5g；
S23、洗涤三次后的乙酸乙酯相再加入382.0g水，并用质量浓度为5％的氢氧化钠溶液调节pH，pH调节至6.75；其后在85℃下常压回收63％质量的乙酸乙酯，其后降温至25℃，其后用50％硫酸调节pH至6.2，其后于25℃搅拌40分钟析晶，其后过滤，将滤饼用191.0g水洗涤，其后将洗涤后的滤饼在60℃下鼓风干燥，得去氧胆酸粗品；
S24、将所述去氧胆酸粗品加入1720.0g水中，其后升温至85℃搅拌9h转晶，其后降温至30℃搅拌2小时，其后过滤并用172.0g水水洗滤饼，其后在60℃下鼓风干燥，干燥至水分低于0.5％得去氧胆酸。
对比例1
参考CN201210587426.2实施例
S11、将250g所述胆酸(40％含量，含纯胆酸100.0g，244.75mmol)用200.0g的质量分数为5％的氢氧化钠水溶液(250mmol)溶解，得到溶解液；
S12、将所述溶解液中滴加至2500ml的7-位氧化酶培养液中进行反应转换(所述氧化酶浓度为40U/ml)，转换时温度控制在27℃、pH控制在8.5、溶氧量不低于30％；
S13、反应至转化完全后，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至45℃，其后在温度为45℃下用15％硫酸调节pH至4，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在57℃下搅拌养晶4小时，其后进行过滤，将滤饼用100g水进行水洗，其后将滤饼在55℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸。
S21、称取151.7g 7-位酮基胆酸(含量62.3％，含纯7-位酮基胆酸94.5g，232.44mmol) 加入乙二醇850.5ml及固体氢氧化钠378g,85％水合肼415.8ml,回流3h,蒸馏出部分水合肼，继续升温至160℃,持续回流2h,冷却至室温下，倒入水中，用盐酸调节pH为2,有沉淀析出，过滤，水洗，得脱氧胆酸粗品123.5g(含量68.8％，含纯去氧胆酸85.0g),加入丙酮206ml重结晶后，于55℃鼓风干燥得去氧胆酸108.5g(含量73.36％，含纯去氧胆酸79.5g)。
对比例2
参考CN201210587426.2实施例
S11、将128.2g所述胆酸(78％含量，含纯胆酸为100.0g，244.75mmol)用10％的氢氧化钠水溶液(100.0g，250mmol)溶解，得到溶解液；
S12、将所述溶解液中滴加至2500ml的7-位氧化酶培养液中进行反应转换(所述氧化酶浓度为40U/ml)，转换时温度控制在27℃、pH控制在8.5、溶氧量不低于30％；
S13、反应至转化完全后，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至45℃，其后在温度为45℃下用15％硫酸调节pH至4，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在57℃下搅拌养晶4小时，其后进行过滤，将滤饼用100g水进行水洗，其后将滤饼在55℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸。
S21、称取上述124.8g 7-位酮基胆酸(含量76.5％，含纯7-位酮基胆酸95.5g,235.06mmol), 加入乙二醇859.5ml及固体氢氧化钠382g,85％水合肼420.2ml,回流3h,蒸馏出部分水合肼，继续升温至160℃,持续回流2h,冷却至室温下，倒入水中，用盐酸调节pH为2,有沉淀析出，过滤，水洗，得脱氧胆酸粗品108.8g(含量78.6％，含纯去氧胆酸85.50g),加入丙酮207.2ml重结晶后，于55℃鼓风干燥得去氧胆酸97.1g(含量81.32％，含纯去氧胆酸79.0g)。
产品检测
对实施例1-实施例6、对比例1-对比例2制备的去氧胆酸进行检测，检测结果如表1所示。
| 7-位酮基胆酸收率 | 去氧胆酸粗品收率 | 去氧胆酸收率 | 含量 | |
| 实施例1 | 94.5％ | 89.9％ | 84.00％ | 98.88％ |
| 实施例2 | 95.0％ | 90.2％ | 84.83％ | 98.63％ |
| 实施例3 | 94.5％ | 90.5％ | 84.52％ | 98.56％ |
| 实施例4 | 96.0％ | 90.3％ | 86.02％ | 99.15％ |
| 实施例5 | 94.8％ | 89.7％ | 85.00％ | 98.99％ |
| 实施例6 | 95.6％ | 89.6％ | 85.43％ | 99.24％ |
| 对比例1 | 94.5％ | 88.46％ | 82.80％ | 73.36％ |
| 对比例2 | 94.5％ | 89.05％ | 82.28％ | 81.32％ |
如表1可知：从实施例1-实施例6实验数据来看，本发明可利用低纯度的胆酸来制备高产率及高纯度的去氧胆酸，从实施例与对比例来看，本发明在制备去氧胆酸的过程中，对水合肼和氢氧化钠的消耗量远低于现有技术中对氢氧化钠和水合肼的消耗，从而保证了制备去氧胆酸的工艺过程中的安全性；同时本发明通过特定的7-位氧化酶实现高选择性的7位氧化。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。
Claims (4)
1.一种去氧胆酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以纯度为35%以上的胆酸为原材料，将胆酸通过氧化酶氧化得到7-位酮基胆酸；其后将7-位酮基胆酸进行黄鸣龙反应得到去氧胆酸粗品；其后将氧胆酸粗品纯化得到去氧胆酸。
2.根据权利要求1所述的一种去氧胆酸的制备方法，其特征在于：所述7-位酮基胆酸的制备包括以下步骤：
S11、将所述胆酸用质量分数为5%-10%氢氧化钠水溶液溶解，得到溶解液，所述氢氧化钠的质量为所述胆酸质量的1-2倍；
S12、将所述溶解液中滴加至的氧化酶的培养液中，所述培养液的体积为所述溶解液体积的5倍，进行反应转换；
S13、反应至转化完全后，将转化后的混合物进行过滤，将滤液升温至40-50℃，其后用15%硫酸调节pH至3-4，同时搅拌析晶，其后将调节好pH的混合物在50-55℃下搅拌养晶3-4小时，其后进行过滤，将滤饼进行水洗，其后将滤饼在50-60℃下鼓风干燥，得化合物7-位酮基胆酸。
3.根据权利要求2所述的一种去氧胆酸的制备方法，其特征在于：所述氧化酶为7-位氧化酶，所述7-位氧化酶选自中国科学院天津工业生物技术研究院。
4.根据权利要求2所述的一种去氧胆酸的制备方法，其特征在于：所述去氧胆酸的制备方法包括以下步骤：
S21、搅拌状态下将所述7-位酮基胆酸加入乙二醇中，所述乙二醇的质量为所述7-位酮基胆酸的3倍，其后加入3.0当量的氢氧化钠和2.5当量的水合肼，所述水合肼的质量浓度为80%，其后加热升温至120-130℃搅拌反应4.0-4.5h，其后梯度升温至内温180-190℃（用时3~4小时），并于180-190℃搅拌反应4.0-4.5小时；
S22、反应完全后对反应体系进行降温，在温度降至90-100℃时加水稀释，稀释用水量为所述反应体系质量的9倍质量，其后在50-60℃下搅拌30-40min，其后在50-60℃下用质量浓度为50%的硫酸调节pH至8-9，其后加入乙酸乙酯，所述乙酸乙酯的加量为7-位酮基胆酸投料量的14.5倍；其后通过所述硫酸继续调节pH至5.5-6.0，其后搅拌10-20分钟，其后静置分液，乙酸乙酯相用温度为50-60℃的热水洗涤三次；
S23、洗涤三次后的乙酸乙酯相再加入洗涤后的乙酸乙酯相的4倍质量的水，并用质量浓度为5%的氢氧化钠溶液调节pH，调节至6.65-6.75；其后在80-85℃下常压回收57-63%质量的乙酸乙酯，其后降温至20-25℃，其后用50%硫酸调节pH至6.1-6.2，其后搅拌析晶过滤，将滤饼水洗后在50-60℃下鼓风干燥，得去氧胆酸粗品；
S24、将所述去氧胆酸粗品加入质量为所述去氧胆酸质量20倍的水中，其后升温至75-85℃搅拌转晶，其后降温至20℃-30℃搅拌1-2小时，其后过滤并水洗滤饼，其后在50-60℃下鼓风干燥，得去氧胆酸。
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| CN115093454A (zh) * | 2022-07-04 | 2022-09-23 | 青海夏都医药有限公司 | 一种胆酸及脱氧胆酸化合物的联产制备方法 |
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- 2021-11-19 CN CN202111392260.4A patent/CN114369132A/zh active Pending
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220419 |
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