CN114366844A - 一种明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料及其制备方法 - Google Patents

一种明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种明胶‑壳聚糖‑三七素复合止血膜材料及其制备方法。首先以脱细胞猪真皮基质材料为原料，在自制的低温恒温反应釜中，采用酸性复合酶HD‑1，制备出医用明胶粉剂；再用三七素改性明胶，得到三七素改性明胶溶液，与事先配制好的壳聚糖溶液以10:8的重量比例共混，形成静电纺丝液；再将静电纺丝液注入静电纺丝机纺丝液容器中，在电压15～25kv、溶液流量为0.1～0.5ml/s、接收距离50～250mm的静电纺丝条件下进行静电纺丝，得到明胶‑壳聚糖‑三七素复合止血膜材料。该膜材料具有良好的生物相容性、降解稳定性和物理机械性能，具有凝血时间短、止血效果好、抗菌抑菌、促愈合等性能，既可以作为止血材料用于各种创伤止血修复，又可以作为创伤敷料使用。

Description

一种明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料及其制备方法
技术领域
本发明属于医用止血材料领域，特别涉及一种复合止血膜材料及其制备方法。
背景技术
出血给人类生命造成极大的危险，寻求快速有效的止血剂一直是国内外研究的热点。在各类外科手术或创伤治疗中，创面出血及与外界隔离避免感染，对患者的伤口愈合影响很大。在战争中，据统计在伤后48小时内死因中，出血是主要的原因，占所有外伤事故的80％。创伤失血过多会使得伤员疼痛、休克、昏迷甚至死亡，因此止血材料需要快速有效止血，还得具有抗炎镇痛、促进伤口复合等的效果。
传统的止血材料主要是急救包、四头带、止血带和绷带等，这类材料不易携带和消毒保存，止血几乎靠机械作用效果不好。近年来，人们研制出一类生物可吸收止血材料，其中胶原基止血材料受到人们的广泛关注，胶原既具有良好的生物相容性、生物降解性、低毒性、弱抗原性，又能激活细胞特性基团的表达，维持细胞正常的特性表达，有利于细胞的黏附、生长、增殖、分化，其止血性能也较为突出，已有大量的文献报道。但现有止血材料还存在以下不足：
1.制备材料工艺复杂，生产成本成本高；
2.影响成品质量的因素过多，质量控制难度大；
3.现有的止血材料止血性能较差，功能单一，难以满足临床需求；
4.胶原基止血材料虽然止血效果优于其它止血材料，但由于I型胶原不溶于水，又找不到合适的溶剂，若采用静电纺丝，则必须采用诸如六氟异丙醇这种有毒的溶剂，存在一定风险。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供了一种明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料及其制备方法，以获得一种既具有快速止血、消炎镇痛、促进伤口愈合等功能，又具有良好的生物相容性、生物降解性、粘附性的止血膜材料，同时保证制备工艺无有毒试剂添加。
本发明所述复合止血膜材料以脱细胞猪真皮基质材料为原料，在低温恒温转鼓中利用酸性复合酶HD-1制备出高纯度、无免疫原性的医用明胶粉剂，并将三七素接枝在明胶分子上，再与壳聚糖复合，制备出静电纺丝液，通过静电纺丝得到。该材料具有止血时间短、止血效果好、抗菌消炎、促进伤口愈合的功能，兼具降解稳定性好、物理机械性能好，贴附性优良等优点，并且原料来源广泛，制备工艺简单，生产周期短，生产成本低。
本发明所述的明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料的制备方法，包括以下步骤：
(1)明胶粉剂的制备
(1-1)将低温恒温转鼓内温调至4℃，将脱细胞猪真皮基质材料切割成小皮块，加入超纯水清洗数次，加入Tris-NaCl缓冲溶液，搅拌后浸泡30～90分钟至小皮块成为半透明状，排出缓冲溶液，用超纯水清洗数次，排出超纯水；然后加入超纯水，再加入小皮块重量0.8％～2.0％的醋酸(加入后溶液pH为1.8～3.0)照搅拌-静置重复操作数次，排出液体；再在4℃条件下将小皮块粉碎、匀浆，得到浆料；
(1-2)将低温恒温转鼓内温调至4℃，加入浆料和超纯水，搅拌均匀后加入浆料质量0.2～0.6％的醋酸，搅拌均匀，再加入浆料质量5％～8％的酸性复合酶HD-1，搅拌15～48小时进行反应；反应完成后，将反应液抽滤，将滤液的pH调节至7.0～7.5，加入一定量的硫酸铵，静置6～16小时；然后离心分离，收集上清液，将沉淀物溶解在醋酸溶液中，离心，收集上清液，如此重复溶解离心3～5次，再用超纯水洗涤沉淀，离心，收集上清液，将收集的全部上清液喷雾干燥，得到明胶粉剂。
(2)配制明胶溶液
将反应釜的内温调至4℃，加入100份明胶粉剂，加入超纯水，搅拌均匀制成质量浓度5％～30％的明胶溶液，记为母液A。
(3)配制壳聚糖溶液
将反应釜的内温调至4℃，加入300～600重量份超纯水、9～15重量份的20％的硝酸溶液，搅拌均匀，加入1重量份的壳聚糖，按照搅拌-静置反复操作至壳聚糖完全溶解，得到壳聚糖溶液，记为母液B。
(4)三七素改性明胶溶液的制备
将反应釜的内温调至4℃，加入100重量份的0.04～0.8mol/L的醋酸溶液，再加入0.5～2.5重量份的明胶粉剂，搅拌均匀，加入0.03～0.8重量份的三七素，搅拌3～12小时，得到三七素改性明胶溶液，记为母液C。
(5)配制静电纺丝液
将反应釜的内温调至4℃，加入100重量份的母液C、80重量份的母液B，搅拌40～90分钟，得到静电纺丝液。
(6)纺制明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜
将静电纺丝液注入静电纺丝机纺丝液容器中，进行静电纺丝，得到明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜；用剂量为15-30KGy/h60Co所产生的γ射线消毒灭菌、成型包装。
进一步地，步骤(1-1)中，所述用切皮机将其切割成5.0×5.0mm小块；Tris-NaCl缓冲液的加入量为小皮块重量的100％。
进一步地，步骤(1-1)和步骤(3)中，所述搅拌-静置是搅拌25分钟，静置5分钟，如此重复操作数次。
进一步地，步骤(1-1)中，清洗时用水量为小皮块重量200％～300％的超纯水；步骤(1-2)中，超纯水加入量为浆料重量的50～60％。
进一步地，步骤(1-2)中，反应时的搅拌速度为50～90rpm；反应结束后离心是在6000～10000rpm下离心10～40分钟。
进一步地，步骤(1-1)所述脱细胞猪真皮基质材料以可溯源猪皮为原料所制得，为成都汉丁新材料科技有限公司产品。
进一步地，步骤(1)中所述醋酸为分析纯醋酸。
进一步地，步骤(1-2)中所得明胶粉剂符合医用要求，其关键性能指标满足以下要求：pH值为4.2～6.8；分子量及其分布：150～250KDa；纯度：≥95％；电导率：≤0.5mS/cm；亚硫酸盐≤1ml；铬：≤1.5ppm；重金属含量：≤15ppm；微生物限度：细菌数不超过500个/g。
进一步地，所述反应釜为市售的低温恒温转鼓。
进一步地，步骤(1)中所述酸性复合酶HD-1，为成都汉丁新材料科技有限公司生产的产品，其活力单位为2000单位/克，最适pH值为2.0～2.5，最适温度为36～40℃。
进一步地，步骤(2)中超纯水的加入量为明胶粉剂重量300％～2000％。
进一步地，所述的静电纺丝条件为：电压15～25kv，溶液流量为0.1～0.5ml/s，接收距离100～300mm。
进一步地，步骤(3)中所述不同脱乙酰度的壳聚糖的脱乙酰度为60～90％。
本发明提供的明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料，通过上述方法制备得到，该材料的关键技术性能指标如下：
(1)关键理化性能指标：
①灰分：≤2.0％(m/m)；
②吸水量：≥16g/g(m/m)；
③重金属含量：≤10μg/g(m/m)；
④凝血时间：≤20s
(2)关键生物学性能指标：
①细胞毒性：细胞毒性反应不大于1级；
②经口急性毒性：无急性毒性；
③致敏试验：无致敏反应；
④皮内反应试验：原发性皮肤刺激指数(PII)为0.0。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1.本发明所使用材料均为生物质，来源广泛，价廉易得。明胶是以脱细胞猪真皮基质材料为原料提取得到，纯度高，无免疫原性，质量有保证。
2.本发明制备方法简便，生产周期短，生产周期只有4～5天。
3.本发明所述止血膜材料组分简单，配方科学，实现了多组分的优势互补，协同作用，最终达到良好的止血效果。所得材料与现有产品相比，不仅具有止血时间短、止血效果好的优势，而且还具有抗菌消炎、促进伤口愈合的功能，同时兼有降解稳定性好、物理机械性能好、贴附性优良等优点。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明。有必要指出，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员根据上述发明内容，对本发明做出一些非本质的改进和调整进行具体实施，仍属于发明保护的范围。
以下实施例中，所述的明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料所具有的关键性能指标测定方法如下表所示。
Figure BDA0003386129600000051
以下实施例中，明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料的凝血时间测定方法如下：
取内径为8mm的玻璃洁净试管，加入明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料0.1g，再加入氯化钙0.1ml，摇匀，向试管中加入血液0.5ml，轻摇，混匀，立即计时，在37℃水浴箱内观察，每隔30s稍稍倾斜试管1次，观察有无凝血。从加入血液开始计时，到倾斜试管血液凝聚成血块于管底不流动时为止，即为此材料的凝血时间。重复测定6次。
实施例1
(1)明胶粉剂的制备
(1-1)将低温恒温转鼓内温调至4℃，取10重量份的脱细胞猪真皮基质材料(以下简称基质材料)，用切皮机将其切割成5.0×5.0mm小块(以下称为“小皮块”)，加入到低温恒温转鼓中，加入小皮块重量300％的超纯水清洗10分钟，排水，再加入小皮块重量300％的超纯水清洗10分钟，排水，如此反复清洗3次，清洗达到要求后(肉眼观察溶液体是否清澈)，排水。然后加入小皮块重量100％的Tris-NaCl(Tris0.05mol/L，NaCl1mol/L，pH＝7.5)缓冲溶液，搅拌10分钟，浸泡30分钟，至小皮块成为半透明状。达到要求后排出缓冲溶液，加入小皮块重量200％的超纯水清洗10分钟，排水，再加入小皮块重量200％的超纯水清洗10分钟，排水，如此反复清洗3次，排水。加入小皮块重量200％的超纯水，加入小皮块重量1.0％的醋酸(分析纯)，此时浴液pH＝2.8，搅拌25分钟，静置5分钟，如此重复3次，排液。
(1-2)在4℃条件下，用粉碎机将小皮块粉碎、匀浆，得到浆料，称重，作为以下各工序的计料依据。先将低温恒温转鼓内温调至4℃，将称重后的浆料加入到转鼓中，加入浆料重量50％的超纯水，搅拌10分钟，再加入浆料重0.3％的醋酸(分析纯)，搅拌10分钟，加入浆料重5％的酸性复合酶HD-1，在搅拌速度为90rpm下搅拌48小时进行反应。反应结束后停止搅拌，将反应液抽滤，取滤液，将滤液的pH调节至7.0～7.5，加入一定量的硫酸铵(分析纯)，静置6小时；然后在6000rpm下离心10分钟，收集上清液，将沉淀物溶解在0.5mol/L的醋酸溶液中，在6000rpm下离心10分钟，收集上清液，如此重复溶解离心3次，最后以超纯水洗涤沉淀，离心，收集上清液，将全部上清液喷雾干燥，得到明胶粉剂。
(2)配制明胶溶液
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100份明胶粉剂和明胶粉剂重量300％的超纯水，搅拌10～30分钟，配制成30％的明胶溶液，记为母液A。
(3)配制壳聚糖溶液
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入300～600重量份的超纯水和15重量份的20％的硝酸溶液，搅拌20分钟，再加入1重量份的壳聚糖，搅拌25分钟，停5分钟，如此重复操作12次，直至壳聚糖完全溶解，得到壳聚糖溶液，记为母液B。
(4)三七素改性明胶溶液的制备
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100重量份的0.04M的醋酸溶液和0.5重量份的明胶粉剂，搅拌30分钟，再加入0.3重量份的三七素，搅拌3.0小时，得到三七素改性明胶溶液，记为母液C。
(5)配制静电纺丝液
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100重量份的母液C，再加入80重量份的母液B，搅拌40分钟，得到静电纺丝液。
(6)纺制明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜
将静电纺丝液注入静电纺丝机纺丝液容器中进行静电纺丝，静电纺丝条件为：电压15kv，溶液流量为0.1ml/s，接收距离100mm。通过静电纺丝得到明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜，再用剂量为15KGy/h60Co所产生的γ射线消毒灭菌、成型包装，即得成品。
上述方法所制得的明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料，其关键性能指标检测结果如下表所示。
序号 关键性能指标 检测结果
1 灰分/％(m/m) 1.82
2 吸水量/g/g(m/m) 17.50
3 重金属含量/μg/g(m/m) 8.61
4 凝血时间/s 18.00
5 细胞毒性/级 0-1
6 经口急性毒性 无急性毒性
7 致敏试验 无致敏反应
8 皮内反应试验 原发性皮肤刺激指数(PII)为0.00
实施例2
(1)明胶粉剂的制备
(1-1)将低温恒温转鼓内温调至4℃，取10重量份的脱细胞猪真皮基质材料(以下简称基质材料)，用切皮机将其切割成5.0×5.0mm小块(以下称为“小皮块”)，加入到低温恒温转鼓中，加入小皮块重量300％的超纯水清洗10分钟，排水，再加入小皮块重量300％的超纯水清洗10分钟，如此反复清洗4次，清洗达到要求后，排水。然后加入小皮块重量100％的Tris-NaCl(Tris0.05mol/L，NaCl1mol/L，pH＝7.5)缓冲溶液，搅拌10分钟，浸泡60分钟，至小皮块成为半透明状后，排出缓冲溶液，加入小皮块重量200％的超纯水清洗10分钟，排水，再加入小皮块重量200％的超纯水清洗10分钟，排水，如此反复清洗4次，排水。加入小皮块重量200％的超纯水，加入小皮块重量0.8～2.0％的醋酸(分析纯)，浴液pH＝2.4，搅拌25分钟，静置5分钟，如此重复操作6次，排液。
(1-2)在4℃条件下，用粉碎机将小皮块粉碎、匀浆，得到浆料，接着称重，作为以下各工序的计料依据。将反应釜内温调至4℃，将称重后的浆料加入到反应釜中，加入浆料重量55％的超纯水，搅拌10分钟，再加入浆料重0.4％的醋酸(分析纯)，搅拌10分钟，再加入浆料重6.5％的酸性复合酶HD-1，在搅拌速度为70rpm下搅拌32小时进行反应。反应完成后，停止搅拌，将反应液抽滤，取滤液，将滤液的pH调节至7.0～7.5，加入一定量的硫酸铵(分析纯)，静置11小时；然后在8000rpm下离心25分钟，收集上清液，将沉淀物溶解在0.5mol/L的醋酸溶液中，在8000rpm下离心25分钟，收集上清液，如此反复溶解离心4次，最后以超纯水洗涤沉淀，离心，收集上清液，将全部上清液喷雾干燥，得到明胶粉剂。
(2)配制明胶溶液
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100份明胶粉剂和明胶粉剂重量1200％的超纯水，搅拌20分钟，配制成8％的明胶溶液，记为母液A。
(3)配制壳聚糖溶液
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入450重量份的超纯水和12重量份的20％的硝酸溶液，搅拌20分钟，再加入1重量份的壳聚糖，搅拌25分钟，停5分钟，如此反复操作10次，直至壳聚糖完全溶解，得到壳聚糖溶液，记为母液B。
(4)三七素改性明胶溶液的制备
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100重量份的0.6M的醋酸溶液和1.5重量份的明胶粉剂，搅拌35分钟，再加入0.55重量份的三七素，搅拌7.5小时，得到三七素改性明胶溶液，记为母液C。
(5)配制静电纺丝液
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100重量份的母液C，再加入80重量份的母液B，搅拌65分钟，得到静电纺丝液。
(6)纺制明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜
将静电纺丝液注入静电纺丝机纺丝液容器中，进行静电纺丝，静电纺丝条件为：电压20kv，溶液流量为0.3ml/s，接收距离200mm。通过静电纺丝得到明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜，再用剂量为23KGy/h60Co所产生的γ射线消毒灭菌、成型包装，即得成品。
所制得的明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料，其关键性能指标检测结果如下表所示。
序号 关键性能指标 检测结果
1 灰分/％(m/m) 1.63
2 吸水量/g/g(m/m) 22.75
3 重金属含量/μg/g(m/m) 7.82
4 凝血时间/s 15.00
5 细胞毒性/级 0-1
6 经口急性毒性 无急性毒性
7 致敏试验 无致敏反应
8 皮内反应试验 原发性皮肤刺激指数(PII)为0.00
实施例3
(1)明胶粉剂的制备
(1-1)将低温恒温转鼓内文调至4℃，取10重量份的脱细胞猪真皮基质材料(以下简称基质材料)，用切皮机将其切割成5.0×5.0mm小块(以下称为“小皮块”)，加入低温恒温转鼓中，加入小皮块重量300％的超纯水清洗10分钟，排水，再加入小皮块重量300％的超纯水清洗10分钟，排水，如此反复清洗6次，排水。然后加入小皮块重量100％的Tris-NaCl(Tris0.05mol/L，NaCl1mol/L，pH＝7.5)缓冲溶液，搅拌10分钟，浸泡90分钟，至小皮块成为半透明状。达到要求后，排出缓冲溶液。然后加入小皮块重量200％的超纯水清洗10分钟，排水，再加入小皮块重量200％的超纯水清洗10分钟，排水，如此反复清洗6次，排水。加入小皮块重量200％的超纯水，加入小皮块重量2.0％的醋酸(分析纯)，浴液pH＝2.0，搅拌25分钟，静置5分钟，如此反复9次。排液。
(1-2)在4℃条件下，用粉碎机将小皮块粉碎、匀浆，得到浆料，称重，作为以下各工序的计料依据。将反应釜内温调至4℃，将称重后的浆料加入到反应釜中，加入浆料重量60％的超纯水，搅拌10分钟，加入浆料重0.6％的醋酸(分析纯)，搅拌10分钟，再加入浆料8％的酸性复合酶HD-1，在搅拌速度为50rpm下搅拌15小时进行反应。反应完成后，停止搅拌，将反应液抽滤，取滤液，将滤液的pH调节至7.0～7.5，加入一定量的硫酸铵(分析纯)，静置16小时；然后在10000rpm下离心40分钟，收集上清液，将沉淀物溶解在0.5mol/L的醋酸溶液中，在10000rpm下离心40分钟，收集上清液，如此反复溶解离心5次，最后以超纯水洗涤沉淀，离心，收集上清液，将全部上清液喷雾干燥，得到明胶粉剂。
(2)配制明胶溶液
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100份明胶粉剂和明胶粉剂重量2000％的超纯水，搅拌30分钟，配制成5％的明胶溶液，记为母液A。
(3)配制壳聚糖溶液
先将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入600重量份的超纯水和9重量份的20％的硝酸溶液，搅拌20分钟，加入1重量份的壳聚糖，搅拌25分钟，停5分钟，如此反复操作12次，直至壳聚糖完全溶解，得到壳聚糖溶液，记为母液B。
(4)三七素改性明胶溶液的制备
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100重量份的0.8mol/L的醋酸溶液和2.5重量份的明胶粉剂，搅拌40分钟，再加入0.8重量份的三七素，搅拌12小时，得到三七素改性明胶溶液，记为母液C。
(5)配制静电纺丝液
将反应釜的内温调至4℃，向反应釜中加入100重量份的母液C，再加入80重量份的母液B，搅拌90分钟，得到静电纺丝液。
(6)纺制明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜
将静电纺丝液注入静电纺丝机纺丝液容器中，进行静电纺丝，静电纺丝条件为：电压25kv，溶液流量为0.5ml/s，接收距离300mm。通过静电纺丝得到明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜，再用剂量为30KGy/h60Co所产生的γ射线消毒灭菌、成型包装，即得成品。
所制得的明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料，其关键性能指标检测结果如下表所示。
序号 关键性能指标 检测结果
1 灰分/％(m/m) 1.63
2 吸水量/g/g(m/m) 22.75
3 重金属含量/μg/g(m/m) 7.82
4 凝血时间/s 15.00
5 细胞毒性/级 0-1
6 经口急性毒性 无急性毒性
7 致敏试验 无致敏反应
8 皮内反应试验 原发性皮肤刺激指数(PII)为0.00

Claims (10)

1.一种明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料，其特征在于，组分包含壳聚糖和三七素改性明胶，该材料的主要技术性能指标如下：
①灰分：≤2.0％(m/m)；
②吸水量：≥16g/g(m/m)；
③重金属含量：≤10μg/g(m/m)；
④凝血时间：≤20s
(2)关键生物学性能指标：
①细胞毒性：细胞毒性反应不大于1级；
②经口急性毒性：无急性毒性；
③致敏试验：无致敏反应；
④皮内反应试验：原发性皮肤刺激指数(PII)为0.0。
2.权利要求1所述明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)明胶粉剂的制备
(1-1)将低温恒温转鼓内文调至4℃，将脱细胞猪真皮基质材料切割成小皮块，加入超纯水清洗数次，加入Tris-NaCl缓冲溶液，搅拌后浸泡30～90分钟至小皮块成为半透明状，排出缓冲溶液，用超纯水清洗数次，排出超纯水；然后加入超纯水，再加入小皮块重量0.8％～2.0％的醋酸，按照搅拌-静置重复操作数次，排出液体；再在4℃条件下将小皮块粉碎、匀浆，得到浆料；
(1-2)将低温恒温转鼓内温调至4℃，加入浆料和超纯水，搅拌均匀后加入浆料质量0.2～0.6％的醋酸，搅拌均匀，再加入浆料质量5％～8％的酸性复合酶HD-1，搅拌15～48小时进行反应；反应完成后，将反应液抽滤，将滤液的pH调节至7.0～7.5，加入一定量的硫酸铵，静置6～16小时；然后离心，收集上清液，将沉淀物溶解在醋酸溶液中，离心，收集上清液，如此重复溶解离心3～5次，再用超纯水洗涤沉淀，离心，收集上清液，将全部上清液喷雾干燥，得到明胶粉剂；
(2)配制明胶溶液
将反应釜的内温调至4℃，加入100份明胶粉剂，加入超纯水，搅拌均匀制成质量浓度5％～30％的明胶溶液，记为母液A；
(3)配制壳聚糖溶液
将反应釜的内温调至4℃，加入300～600重量份超纯水、9～15重量份的20％的硝酸溶液，搅拌均匀，加入1重量份的壳聚糖，按照搅拌-静置反复操作至壳聚糖完全溶解，得到壳聚糖溶液，记为母液B；
(4)三七素改性明胶溶液的制备
将反应釜的内温调至4℃，加入100重量份的0.04～0.8mol/L的醋酸溶液，再加入0.5～2.5重量份的明胶粉剂，搅拌均匀，加入0.03～0.8重量份的三七素，搅拌3～12小时，得到三七素改性明胶溶液，记为母液C；
(5)配制静电纺丝液
将反应釜的内温调至4℃，加入100重量份的母液C、80重量份的母液B，搅拌40～90分钟，得到静电纺丝液；
(6)纺制明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜
将静电纺丝液注入静电纺丝机纺丝液容器中，进行静电纺丝，得到明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜；用剂量为15-30KGy/h60Co所产生的γ射线消毒灭菌、成型包装。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1-1)中，所述用切皮机将其切割成5.0×5.0mm小块；Tris-NaCl缓冲液的加入量为小皮块重量的100％。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1-1)中，清洗时用水量为小皮块重量200％～300％的超纯水；步骤(1-2)中，超纯水加入量为浆料重量的50～60％；步骤(2)中超纯水的加入量为明胶粉剂重量300％～2000％。
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1-2)中，反应时的搅拌速度为50～90rpm；反应结束后离心是在6000～10000rpm下离心10～40分钟。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1-1)所述脱细胞猪真皮基质材料以可溯源猪皮为原料所制得，为成都汉丁新材料科技有限公司产品；所述反应釜为低温恒温转鼓。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中所述醋酸为分析纯醋酸；进一步地，所述复合酸性酶HD-1，为成都汉丁新材料科技有限公司生产的产品，其活力单位为2000单位/克，最适pH值为2.0～2.5，最适温度为36～40℃。
8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1-2)中所得明胶粉剂符合医用要求，其关键性能指标满足以下要求：pH值为4.2～6.8；分子量及其分布：150～250KDa；纯度：≥95％；电导率：≤0.5mS/cm；亚硫酸盐≤1ml；铬：≤1.5ppm；重金属含量：≤15ppm；微生物限度：细菌数不超过500个/g。
9.据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(3)中所述壳聚糖的脱乙酰度为60～90％。
10.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(5)中所述的静电纺丝条件为：电压15～25kv，溶液流量为0.1～0.5ml/s，接收距离100～300mm。
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