CN114344343A - 植物乳杆菌在制备抗急性肺损伤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了植物乳杆菌在制备抗急性肺损伤药物中的应用。所述的植物乳杆菌L168于2017年2月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMC CNo.13660。本发明人研究了植物乳杆菌L168在小鼠急性肺损伤治疗作用；研究发现，植物乳杆菌L168对小鼠急性肺损伤具有显著的改善作用，可成为未来治疗急性肺损伤的有效药物。
Description
技术领域：
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及植物乳杆菌在制备抗急性肺损伤药物中的应用。
背景技术：
急性肺损伤(acute lung injury，ALI)是临床因素导致肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞急性损伤，呈现急性发作的双侧肺浸润伴低氧血症，是危重患者人群死亡的重要原因。
植物乳杆菌L168(菌株保藏号：CGMCCNo.13660)是发明人筛选的一株益生菌，研究表明，植物乳杆菌L168可矫正果蝇的社交行为，并有望应用到人类自闭症疾病的诊疗中。本发明研究发现植物乳杆菌L168(L168)给药均可改善ALI带来的机体损伤，抑制体内细胞因子风暴的生成。
发明内容：
本发明的目的在于提供植物乳杆菌在制备抗急性肺损伤中的应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
植物乳杆菌L168在制备抗急性肺损伤药物中的应用。
优选的：所述的植物乳杆菌L168的保藏号为：CGMCC No.13660。
进一步优选的：所述的药物包括植物乳杆菌L168和药学上可接受的载体或者常规食用辅料。
更进一步优选的：所述药物的剂型为口服剂型。
本发明的有益效果：
本发明人研究了植物乳杆菌L168在小鼠急性肺损伤治疗作用；研究发现，植物乳杆菌 L168对小鼠急性肺损伤具有显著的改善作用，可成为未来治疗急性肺损伤的有效药物。
附图说明
图1为植物乳杆菌LP-L168处理增加急性肺损伤小鼠体重。
图2为植物乳杆菌LP-L168处理能够改善急性肺损伤小鼠血氧饱和度.
图3为植物乳杆菌LP-L168处理能够改善急性肺损伤小肺功能。
图4为植物乳杆菌LP-L168处理能够改善急性肺损伤小鼠外周细胞因子水平。
图5为植物乳杆菌LP-L168处理可改善急性肺损伤模型小鼠的肺脏损伤。
生物材料保藏信息
植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)L168保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏日期为2017年2月13日,保藏编号为CGMCC No.13660。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和本质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
将冷冻保存的LP-L168划线接种于MRS固体培养基中，在37℃有氧静置16h。再经过挑单克隆活化2-3代。制备L168悬液(以下简称LP-L168)：10000g，5min离心，PBS洗3 次，PBS重悬，使得300μl悬液中包含1*10^9/CFU的L168。
实施例2
急性肺损伤的造模过程及分组信息:
正常组：：8-10周的小鼠每天灌胃300μl PBS，每天1次，灌胃后10天采用喉镜辅助气管插管注射生理盐水,每两天记录1次体重；
ALI组：：8-10周的小鼠每天灌胃300μl PBS，每天1次，灌胃后10天采用喉镜辅助气管插管注射博来霉素，给药浓度为15mg/kg，每两天记录1次体重；
ALI+LP-L168组：：8-10周的小鼠每天灌胃300μl含1*10^9CFU LP-L168，每天1 次，在LP-L168灌胃后10天采用喉镜辅助气管插管注射博来霉素，给药浓度为15mg/kg，每两天记录1次体重；
25天后造模结束后，小鼠进行实施例4-6的检测项目。
实施例3
造模过程中，每两天记录1次各组小鼠体重，结果如图1所示，结果显示，植物乳杆菌 LP-L168处理能够增加急性肺损伤小鼠体重，改善其总体状态。
实施例4
造模结束后进行血氧饱和度及肺功能的检测。
利用无创脉搏血氧仪以无创的方式测量小鼠的血氧饱和度。血氧饱和度过低一定程度代表小鼠的肺部损伤或者纤维化，结果如2所示。
利用WBP仪器评估小鼠的肺功能。全身体积描记系统简称WBP系统(Whole BodyPlethysmography),主要用于监测清醒自由活动、非束缚、非麻醉状态下实验动物的呼吸功能。检测指标为EF50、PenH和Rpef。EF50是呼出50％气量时对应的呼气流速(ml/s)。 PenH是气道阻力的替代测量方法。Rpef是达到峰值呼气流量之前的呼气分数。EF50、PenH 和Rpef改变表明支气管收缩或气道阻塞。结果如图3所示。
图2和图3结果显示，植物乳杆菌LP-L168处理能够显著改善急性肺损伤小鼠血氧及肺功能。
实施例5
实施例4检测完毕后，5％水合氯醛麻醉小鼠，取小鼠外周血。血液进行3500rpm，15min离心，取血清。血清送武汉华联科公司进行细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、 TGF-β和TNF-α)的检测。分析结果如图4所示，结果显示，植物乳杆菌LP-L168处理能够改善急性肺损伤小鼠外周细胞因子水平。
实施例6
小鼠造模结束后，取每组小鼠的同一片肺叶进行4％(m/v,g/100ml)的多聚甲醛固定，进行石蜡切片操作及常规H&E染色(HE染色武汉塞维尔公司具体操作)。
我们随机选择了三个高倍肺组织病变区域(60×)，小鼠急性肺损伤组织病理评分标准参考如下：
(A)肺泡腔中性粒细胞(无＝0,1-5个细胞＝1，>5个细胞＝2)；
(B)间质间隔中性粒细胞(无＝0,1-5个细胞＝1，>5个细胞＝2)；
(C)透明膜(无＝0,1个＝1，>1个＝2)；
(D)空气空间中的蛋白质碎片(无＝0，一个＝1，>1个＝2)；
(E)肺泡间隔增厚(<2倍厚度＝0,2–4倍厚度＝1，>4倍厚度＝2)
为了获得每个区域的肺损伤评分，然后将A-E的评分输入以下公式，其中包含为疾病状态的每个表型分配不同级别重要性的乘数。分数＝[(20x)+(14x B)+(7x C)+(7x D)+(2 x E)]/100。对每只小鼠的三个区域的分数取平均值，以获得从0到1(包括1)的最终分数。
每组小鼠肺脏HE代表性图如图5A，组织病理评分如图5B：结果显示，植物乳杆菌LP-L168处理能够显著改善急性肺损伤小鼠血氧饱和度及肺功能。
Claims (1)
1.植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)L168在制备抗急性肺损伤药物中的应用，所述的植物乳杆菌L168于2017年2月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMC CNo.13660。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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