CN114344333A - 动物非致病性细胞相关组分的应用和包含该组分的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本申请公开涉及局部病变疾病通过局部给药的治疗。具体而言,本申请公开涉及动物非致病性细胞相关组分的应用和包含该组分的药物组合物。动物非致病性细胞相关组分作为可提供治疗作用的活性成分应用于局部病变疾病治疗、包含该动物非致病性细胞相关组分的药物组合物和药物试剂盒。
Description
技术领域
本申请公开涉及局部病变疾病通过局部给药的治疗。具体而言,本申请公开涉及动物非致病性细胞相关组分作为可提供治疗作用的活性成分应用于局部病变疾病治疗、包含该动物非致病性细胞相关组分的药物组合物、以及一种治疗局部病变疾病的方法。
背景技术
实体肿瘤是局部病变疾病的一个经典研究模型。实体肿瘤是一种具有瘤体征状的肿瘤疾病,瘤体是包含有肿瘤细胞的一种特征性病变组织。以胰腺癌瘤体为例,胰腺癌细胞在其中仅占约30%的体积比。可见,除了肿瘤细胞,瘤体组织中往往还存在更大量的其它组成(有时亦被称作肿瘤细胞的微环境),包括其它多种细胞、多种细胞间质、多种管道等。
瘤内给药具有将药物进行物理靶向的优点。于是曾经有人认为,细胞毒药物的瘤内给药可以提高其瘤内浓度、从而提高其疗效。然而,仅仅提高其瘤内浓度,似乎尚不能大大提高其药物效应。除了求助于其缓释形式以外,细胞毒药物在临床上几乎仍全身给药。
临床上用过的化学消融剂(高纯度乙醇、高浓度酸碱、弱酸强碱盐)不以肿瘤细胞破坏而以瘤体组织破坏为特征。与细胞毒药物相比,其几乎无靶向癌细胞的全身疗效,却往往显示出更高局部疗效。此外,尚有化学消融剂可能产生免疫效应的报道。然而,经典化学消融剂的刺激性很大,而长效性通常不高。这使得它们实际能够应用的介入体积(例如酸碱用量不超过0.2ml/kg)和介入部位非常受限(例如对瘤体所在器官的限制、瘤体边缘消融受限等),复发率也居高不下。因而,近十年来经典化学消融剂以经从恶性实体肿瘤临床上淡出。
因而,仍然需要开发新的治疗局部病变疾病(例如实体肿瘤)的药物,以满足现有技术尚不能满足的各种临床需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于治疗局部病变疾病的局部药物。更具体而言,本发明的目的在于提供一种可提供包括局部化疗和任选存在的其它化疗、或/和包括给药区域内的次生免疫作用和任选存在的其它免疫作用参与的免疫治疗的局部病变疾病治疗局部药物。
根据本申请公开的一个方面,其提供动物非致病性细胞相关组分在制备用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物中的应用。在一个实施方案中,所述药物组合物还可任选地包含能够与所述动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述动物非致病性细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
根据本申请公开的另一个方面,其提供一种用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物,其包含作为治疗活性成分的动物非致病性细胞相关组分。在一个实施方案中,所述药物组合物还包含能够与所述动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述动物非致病性细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
根据本申请公开的又一个方面,其提供一种用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物,其包含作为治疗活性成分的动物非致病性细胞相关组分以及能够与该动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
根据本申请公开的再一个方面,其提供一种治疗局部病变疾病的方法,该方法包括以下步骤:向有此需要的个体的局部病变内和/或局部病变外局部施用治疗有效量的根据本申请公开的药物组合物。
根据本申请公开的再一个方面,其提供药物试剂盒,该试剂盒包括一个或多个装有根据本申请公开的药物组合物的单独容器。在一个实施方案中,所述药物试剂盒还可包括如何向有需要的个体施用所述药物组合物的说明书或标签。
在一个实施方案中,对于上述应用、药物组合物、方法或试剂盒,所述局部病变疾病包括肿瘤、非瘤肿大、局部炎症、分泌腺功能异常和皮肤病,其中所述肿瘤包括恶性和非恶性实体肿瘤。在一个实施方案中,所述实体肿瘤包括以下肿瘤及其次生肿瘤之一种或多种:乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、肠癌、口腔癌、食道癌、胃癌、喉癌、睾丸癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、脑瘤、淋巴瘤。
根据本发明的实施方案与治疗局部病变疾病的包含动物非致病性细胞相关组分的组合物的现有技术相比具有以下优点:提供了一种全新的药理(局部作用或局部协同作用以及它们的次生免疫作用),从而可以进行现有技术组合物未能进行的包含类化学消融在内的局部治疗或/和包含次生免疫作用在内的免疫治疗,该局部治疗可以产生远远超过现有技术方案的疗效(例如3倍以上的抑瘤率)以及适应症(例于突破了现有技术中的肿瘤特异性限制,以及对个体免疫功能的依赖性限制),该免疫治疗也可以产生远远超过现有技术方案的免疫疗效(例如病变区内或/和病变区外所述次生免疫作用产生或大大加强的免疫疗效大大超过了机体免疫增强的预期)以及适应症。此外,本发明的实施方案还具有大大降低了不限定给药方式的现有技术方案的安全性风险。
根据本发明的实施方案与治疗局部病变疾病的其它组合物的现有技术相比具有以下优点:与现有细胞毒药物相比,显示出几乎无毒的全身安全性和明显较高的长期疗效;与现有分子靶向药物相比,显示出不那么苛刻的适应症筛选,以及针对快速生长瘤体、大瘤体和乏血供瘤体的巨大潜力;与现有化学消融剂相比,显示出明显低得多的局部刺激性以及更好的长期效应。本发明的应用和组合物也不受现有细胞毒性药物和现有分子靶向药物遭遇的耐药性问题的困扰。此外,该应用和组合物制备方便、成本便宜,特别有助于使难以承受高额费用的广大人群也享受到安全、有效治疗。
具体实施方式
众所周知,某物质作为活性成分应用于局部病变疾病治疗,是因为它在特定条件下可以显示出该治疗活性。同一物质可以在不同条件下显示出不同活性,或不同药理。开发现有物质的新药理和开发活性新物质一样,都是为了引入更有利于个体的治疗作用。例如,乙醇作为杀菌剂应用于药物制备有悠久的历史。然而,直到1980年代,科学家才发现高浓度乙醇在特定条件(瘤内给药)可以显示针对肿瘤组织的化学消融药理。于是,在其后约20年时间,高浓度乙醇广泛应用于瘤体等局部病变的化学消融治疗。
本发明的发明人在一个通常用作化疗模型的荷瘤裸鼠实验中意外地发现,动物组织半流体可以在某些特定的条件下产生有意义的局部化学作用、甚至可能是类化学消融。组成和结构与其非常不同的动物细胞组分(例如白细胞浓缩物)居然也显示出该新药理。这些特定条件并非现有技术中动物非致病性细胞相关组分的应用条件,而是如以下所限定的。
根据一个方面,本申请公开提供动物非致病性细胞相关组分在制备用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物中的应用。在一个实施方案中,所述药物组合物还可任选地包含能够与所述动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分(以下也称为协同成分),并且所述动物非致病性细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。该药物组合物可以是如下具体说明的根据本申请公开的药物组合物。
根据另一个方面,本申请公开提供一种用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物,其包含作为治疗活性成分的动物非致病性细胞相关组分。在一个实施方案中,所述药物组合物还包含能够与所述动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述动物非致病性细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
根据又一个方面,本申请公开提供一种用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物,其包含作为治疗活性成分的动物非致病性细胞相关组分以及能够与该动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
根据再一个方面,本申请公开涉及一种治疗局部病变疾病的方法,其包括以下步骤:向有此需要的个体的局部病变内或/和病变外局部施用治疗有效量的根据本申请公开的药物组合物。
在本申请公开的范围中,术语“细胞”是指天然细胞及其类似物,其中所述类似物包括与之类似的工程细胞、以及天然细胞或工程细胞的衍生物。术语“非致病性细胞”是指不会对个体产生致病作用的细胞。术语“动物非致病性细胞相关组分”(在本发明中简写为动物细胞相关组分或细胞相关组分)是指源于动物的、与非致病性细胞有关的可药用组分及其类似物,其包括例如非致病性细胞、包含非致病性细胞的组分(例如动物组织)、非致病性细胞包含的可药用组分(例如动物细胞所含组分)、以及它们的类似物(例如细胞衍生物)。
在本申请公开的范围中,术语“治疗作用”区别于辅助(治疗)作用,前者是指使得疾病有效缓解、好转或痊愈的主要药理作用(例如局部病变的局部治疗、或/和局部病变疾病的免疫治疗),而后者是指虽不能有效缓解、好转或痊愈疾病但却也对个体有利的次要药理作用(例如机体的免疫增强)。包含可提供治疗作用的活性成分的药物组合物通常被称作治疗药物,而活性成分仅可提供辅助治疗作用的的药物组合物通常被称作辅助治疗药物。
在本申请公开的范围中,术语“药物组合物”是指明确了药理以及给出了在个体体内实现该药理所必须的药理方法、药理组成、药理环境等药学特征的物质。术语“药理方法”是指某特定药理的实现所必须的药物组合物给药方法,例如益生菌肠道屏障改善必须的药理方法是口服,而乙醇化学消融必须的药理方法是病变区内给药。术语“药理组成”是指某特定药理的实现所必须的药物组合物组成,不同的药理往往可能有非常不同的药理组成,例如常规协同作用仅要求活性成分协同量比,而局部常规协同作用还要求协同浓度等协同组成。术语“药理环境”是指药物组合物在靶区内实现某特定药理所必须的外源性干扰的最小化,例如其它原因所须的添加剂(例如渗透压调节剂)可能对该特定药理产生的负面作用。无特定药理环境限定的药物组合物通常必然包含有增强给药顺应性(例如口服药的调味剂)和给药安全性(例如注射剂所包含的渗透压调节剂)的非活性成分,而局部作用药理则必须要求限定药理环境以减少非活性成分的可能的药理干扰。无特定药理方法限定(例如可静注、肌注或其它局部注射)的药物组合物的药理意味着在这些方法中都可以实现者(例如益生菌注射剂的免疫增强、细胞毒药物的细胞增长抑制、乙醇的醉酒样反应),有特定药理方法限定的药物组合物的药理则意味着仅在该方法中可以实现者(例如口服益生菌的肠道屏障改善、局部给药乙醇的化学消融)。无特定药理组成限定(例如给出制剂浓度而无药理浓度,或/和给出给药剂量而无药理体积)的药物组合物的药理意味着在给定的活性成分、活性成分量比、和组合物剂量后都可以实现者(例如益生菌注射剂的免疫增强、细胞毒药物的细胞增长抑制、乙醇的醉酒样反应),有特定药理组成限定的药物组合物的药理则意味着仅在该组成条件下可以实现者,例如乙醇在其药理方法(病变内给药)、药理浓度(例如≥70%的高浓度)、药理体积(例如给药体积/靶区体积比≥0.25)限定下的药理为化学消融。
在本申请公开的范围中,术语“局部给药”区别于常规给药(全身性给药),局部给药是指将药物在病变内(例如瘤内给药)或/和病变外局部(例如皮下注射、肌肉注射、局部植入、局部涂抹、局部喷射、局部滴入、局部插入或其他方式)给药,而常规给药则是指将药物经消化道(例如口服)或血管(例如静脉注射、腹腔注射)给药后经血液递送至靶区的方式。术语“病变内给药”是指让药物直接进入而不是以带药血液的方式间接进入局部病变内的任何给药方式,例如经皮病变内注射或/和经血管进入病变内的导管灌注等。
在本发明的范围内,所述细胞相关组分与所述能够与该动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分一起局部给药。在一个实施方案中,所述动物细胞相关组分与所述活性活性成分包含在同一个药剂中。
在本申请公开的范围中,术语“协同作用”是指特定活性成分(例如动物细胞相关组分)在特定条件下的一种特殊药理性质,该性质使得该特定活性成分与另一些活性成分(如本申请中的化学活性成分)的共用作用超过它们各自单用作用的加和预期。
在一个实施方案中,根据本申请公开的药物组合物具有使得所述细胞相关组分提供所述治疗作用所需的药理组成。在一个实施方案中,该药物组合物包含动物非致病性细胞相关组分以及使得该细胞相关组分提供局部作用(或/和局部协同作用)和任选存在的其它作用所需的药理组成,例如以下组之一种或多种:优选的药理活性成分、活性成分药理含量(药理浓度、或/和药理体积)、活性成分局部药理环境。在一个实施方案中,该细胞相关组分作为根据本申请公开所定义的应用中的活性成分。在一个实施方案中,在本发明的应用、组合物和方法中,所述细胞相关组分与所述能够产生协同作用的化学活性成分包含在同一个药剂中。在一个实施方案中,所述细胞相关组分和所述能够与该细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分作为根据本申请公开所定义的应用、组合物和方法中的活性成分。在一个实施方案中,所述药物组合物还包括液体载体,例如注射用水。
在根据申请公开的治疗局部病变疾病的方法中,根据一个实施方案,所述动物细胞相关组分与所述能够产生协同作用的化学活性成分包含在不同药剂中。在一个实施方案中,施用所述化学活性成分先于施用所述动物细胞相关组分。
在根据本申请公开的应用、组合物以及方法中,所述治疗作用包括涉及局部作用(或局部协同作用)的局部治疗或/和免疫治疗。在一个实施方案中,所述局部作用(或局部协同作用)包括局部化学作用(或局部化学协同作用)和任选存在的其它作用。在一个实施方案中,所述局部治疗包括一处或多处局部病变的类化学消融和任选存在的其它化疗。在一个实施方案中,所述免疫治疗包括所述病变内或/和病变外所述局部作用(或局部协同作用)的次生免疫作用和任选存在的其它免疫作用。在一个实施方案中,所述局部作用(或局部协同作用)优选为独立于该局部病变的病原体(细胞、病毒或细菌)增殖抑制作用。
在本申请公开的范围中,术语“局部治疗”区别于“全身治疗”,后者是指针对个体全身(例如瘤体、瘤体联通的区域、体内其它部分所含肿瘤细胞)的治疗,而前者是指针对个体局部病变所在的局部区域(例如给药局部病变及与其联通的其它病变区域)的治疗。术语“局部化疗”是指局部作用包括局部化学作用(或局部化学协同作用)的局部治疗。
在本申请公开的范围中,术语“局部作用”区别于常规作用,是指局部给药后药物在组织间隙渗透所及的局部(例如瘤或/和瘤外局部)范围内产生的药理作用,而常规作用则是指常规用药后药物经消化道或血管给药后以血药形式递送至靶区所产生的药理作用。术语“局部化学作用”是指包括化学作用的局部作用。术语“局部协同作用”是指包括协同作用的局部作用。术语“局部化学协同作用”是指包括协同作用的局部化学作用。
在本申请公开的范围中,局部化学作用(或局部化学协同作用)在药理上包括普通局部化学作用、化学消融和类化学消融。术语“普通局部化学作用”是指药物效应不超过同一药物的常规化学作用的动力学差异最大预期(例如200%以内)的局部化学作用,例如细胞毒药物常规给药产生的化疗作用。术语“化学消融”是指药物效应超过同一药物的常规化学作用(例如高浓度乙醇常规给药产生的化疗作用)的动力学差异最大预期(例如大于200%、优选为大于400)的局部化学作用,习惯上指经典化学消融剂(例如高浓度乙醇、高浓度酸、高浓度碱)所显示的局部化学作用。术语“类化学消融”是指包括化学消融在内的局部化学作用。类化学消融虽非经典化学消融剂所致,但其在药理上明显区别于普通局部化学作用。
在本申请公开的范围中,术语“免疫治疗”区别于术语“免疫增强”,前者是指其单独使用便可达到治疗作用的免疫作用(例如治疗疫苗、特异性抗体等的免疫作用),而后者是指单独使用不能达到治疗作用、但仍有辅助作用的免疫作用(例如免疫增强剂具有提高机体免疫功能的作用)。术语“次生免疫作用”区别于术语“药物抗原作用”,后者是指药物自身的抗原作用(例如任何药物作为外来物进入体内引起的抗原作用),而前者是指与给药相关的、但区别于药物抗原作用的免疫作用,例如药物局部化学作用导致的原位疫苗作用)。术语“原位次生免疫作用”区别于术语“非原位次生免疫作用”,前者是指病变(例如瘤体)内的次生免疫作用,而后者是指病变外(例如腋下皮内)的次生免疫作用。术语“次生免疫物质”是指在给药区域内由于局部给药形成的、且与所给药物本身不同的免疫物质,例如给药后因任何原因被释放、生成、激活、或/和幕集的抗原、佐剂、或/和其它免疫分子。术语“原位次生免疫物质”区别于术语“非原位次生免疫物质”,前者是指是指病变(例如瘤体)内的次生免疫物质(例如原位抗原、原位佐剂、或/和病变内被释放、生成、激活、或/和幕集的其它免疫分子),而后者是指病变外(例如腋下皮内)的的次生免疫物质(例如给药处形成的结节性免疫物质、因该结节或/和给药处其它药物效应被释放、生成、激活、或/和幕集的其它免疫分子、等等)。
在本申请公开的范围中,术语“疫苗抗原”区别于术语“抗原”,后者是指能够诱发机体产生免疫应答的任何物质,而前者是指能够诱发机体产生针对特定疾病、且达到治疗作用的抗原,例如同一种物质可以通过大不相同的技术方案被用作疫苗抗原和免疫增强剂抗原。术语“佐剂”是指在疫苗中可以增强其抗原的免疫治疗作用的物质。术语“原位抗原”是指可作为抗原的原位次生免疫物质。术语“类疫苗药物”或“类疫苗”,是指可提供类似于疫苗作用的次生免疫作用(区别于免疫增强剂和常规疫苗)和任选存在的外源性抗原作用的治疗药物。
在本申请公开中,本发明的组合物的类化学消融与经典化学消融剂的化学消融高度一致,从而与可能包含有细胞相关组分的现有技术组合物的常规作用大不一致,从而导至以下组合物特征差异:1)、根据本公开的组合物的药理方法严格限定于局部给药,而现有技术组合物的药理方法则不限于局部给药;2)、根据本公开的组合物的药理组成超过现有技术组合物基于其常规药理组成的预期,例如完全不同的药理活性成分优选原则、完全不同的药理含量(药理浓度、或/和药理体积)、不同的药理环境(例如对盐类渗透压调节剂的排斥);3)根据本公开的组合物的药理效应大大超过现有技术组合物基于其常规用药(更接近细胞实验条件)的动力学差异最大预期,例如高出许多的疗效(抑瘤率大于200%、优选大于400%)和新的适应症(例如所述局部病变的局部治疗而非所述局部病变疾病的治疗)和新的适用个体,这也进一步显示两种组合物之间的差异并非动力学差异而是药理差异(例如局部作用vs常规作用)。
在本申请公开中,所述治疗的适用个体选自包括以下组之一种或多种:免疫抑制个体、可局部病变内给药的个体、局部病变组织可类化学消融的个体、局部病变内可产生次生免疫物质的个体、病变外给药区域内可产生次生免疫物质的个体。
在本发明的范围中,术语“免疫抑制个体”是指荷瘤裸小鼠模型所能代表的任何个体,例如其免疫功能因任何原因处于较低水平、且在本发明技术方案中的组合物可提供局部作用的时间内(例如以下实施例2中第一次给药7日内)利用其它方法(例如免疫增强)不能达到正常水平的个体例如因免疫为低下而难以进行放疗或常规化疗的个体。
在一个实施方案中,所述治疗作用为包括涉及所述局部作用(或局部协同作用)的所述局部治疗或/和所述免疫治疗。在一个实施方案中,所述治疗的适用个体选自包括以下组之一种或多种:免疫抑制个体、可局部病变内给药且该局部病变组织可类化学消融或/和该局部病变内可产生次生免疫作用的个体、病变外给药区域内可产生次生免疫作用的个体。在一个实施方案中,所述组合物为类化学消融-原位和非原位免疫治疗药物。
在一个实施方案中,所述治疗作用为包括涉及所述局部作用(或局部协同作用)的所述免疫治疗,以及所述免疫治疗包括所述病变内或/和病变外所述局部作用(或局部协同作用)的次生免疫作用和任选存在的其它免疫作用。在一个实施方案中,所述治疗的适用个体选自包括以下组之一种或多种:可局部病变内给药且该局部病变组织可类化学消融或/和该局部病变内可产生次生免疫作用的个体、病变外给药区域内可产生次生免疫作用的个体。在一个实施方案中,所述组合物为原位或/和和非原位免疫治疗药物。
在一个实施方案中,所述治疗作用为包括涉及所述局部作用(或局部协同作用)的所述局部治疗或/和免疫治疗,以及其中所述局部治疗包括一处或多处局部病变的类化学消融和任选存在的其它化疗;所述免疫治疗包括所述病变内所述局部作用(或局部协同作用)的次生免疫作用和任选存在的其它免疫作用。在一个实施方案中,所述治疗的适用个体选自包括以下组之一种或多种:免疫抑制个体、可局部病变内给药的个体、局部病变组织可类化学消融的个体、局部病变可产生次生免疫作用的个体。在一个实施方案中,所述组合物为类化学消融-原位免疫治疗药物。
在一个实施方案中,所述治疗作用为包括涉及局部作用(或局部协同作用)的局部治疗,以及其中所述局部治疗包括一处或多处局部病变的类化学消融和任选存在的其它化疗。在一个实施方案中,所述治疗的适用个体选自包括以下组之一种或多种:免疫抑制个体、可局部病变内给药的个体、局部病变组织可类化学消融的个体。在一个实施方案中,所述组合物为类化学消融药物。
在一个实施方案中,所述治疗作用为包括涉及局部作用(或局部协同作用)的免疫治疗,以及其中所述免疫治疗包括所述病变内所述局部作用(或局部协同作用)的次生免疫作用和任选存在的其它免疫作用。在一个实施方案中,所述治疗的适用个体选自可局部病变内给药、且局部病变可产生次生免疫作用的个体。在一个实施方案中,所述组合物为原位免疫治疗药物,例如可提供病变内靶区原位疫苗激活和任选存在的其它免疫作用的免疫治疗药物。
在一个实施方案中,所述治疗作用为包括涉及局部作用(或局部协同作用)的免疫治疗,以及其中所述免疫治疗包括所述病变外所述局部作用(或局部协同作用)的次生免疫作用和任选存在的其它免疫作用。在一个实施方案中,所述治疗的适用个体选自病变外给药区域内可产生次生免疫作用的个体。在一个实施方案中,所述组合物为可提供病变外次生免疫作用和任选存在的其它免疫作用的免疫治疗药物。在一个实施方案中,所述病变外次生免疫作用包括所述局部作用(或局部协同作用)次生的非正常结构(例如结节)的免疫作用。在一个实施方案中,所述免疫治疗药物包括例如类疫苗药物。
在根据本申请公开所定义的应用、药物组合物或方法中,所述动物细胞相关组分选自可提供包括以下组作用之一种或多种者:所述局部作用、所述局部作用的次生作用、所述局部给药的免疫作用。在一个实施方案中,所述次生作用包括给药区域内次生的免疫物质参与的免疫作用
在一个实施方案中,所述动物为选自动物免疫原性最小化者,优选为选自自体或/和移植反应最小化的同种异体动物。在一个实施方案中,所述非致病性细胞相关组分为选自优选动物的动物组织组分或/和动物细胞组分之一种或多种,其中所述动物组织组分选自以下组之一种或多种:动物组织、动物组织的组织破碎物、动物组织的细胞破碎物;所述动物细胞组分选自以下组之一种或多种:动物天然细胞、天然细胞破坏组分、以及所述天然细胞或天然细胞破坏组分的衍生物或工程类似物。
在本申请公开的范围中,所述移植反应可接受的同种异体优选为选自以下组之一种或多种:源自个体的ABO血型相符或HLA相近的同种异基因异体、源自个体的严重损伤同种同基因异体。
在本申请公开的范围中,术语“动物组织组分”是指源于动物组织或其类似物的制备物。术语“动物细胞组分”是指源于动物细胞或其类似物的制备物,包括例如动物细胞、动物细胞包含的组分、及它们的衍生物(例如扩增或/和激活细胞、细胞破碎组分)。术语“动物组织组分”是指源于动物组织(包含细胞)或其类似物的制备物,包括例如动物组织及其衍生物(例如动物组织破碎组分)。
在一个实施方案中,所述组织选自结缔组织之一种或多种,所述结缔组织例如是血液、骨髓、脊,优选为血液。
在一个实施方案中,所述组织选自非结缔组织之一种或多种之一种或多种,所述非结缔组织例如以下器官所含组织:肠、胃、肉、胰腺、脾脏、肝脏、肺、软骨、关节、皮、胎盘、脐带。在一个实施方案中,所述非结缔组织优选为脾脏、胎盘或/和脐带。
在一个实施方案中,所述细胞包括血液细胞,所述血液细胞为选自以下组细胞及其衍生物之一种或多种:红细胞、白细胞、血小板。在一个实施方案中,所述细胞包括白细胞和红细胞。在一个实施方案中,所述细胞包括白细胞。在一个实施方案中,所述白细胞为选自以下细胞及其衍生物之一种或多种:粒细胞、单核细胞、淋巴细胞。在一个实施方案中,所述细胞选自包括淋巴细胞之一种或多种。在一个实施方案中,所述淋巴细胞为选自以下细胞及其衍生物之一种或多种:T细胞、B细胞、裸细胞。在一个实施方案中,所述血液细胞衍生物选自包括通过自体或同种异体血细胞的体外诱导、激活、扩增而生成的以下组之一种或多种:DC细胞、LAK细胞、TIL细胞、CIK细胞、DC-CIK、CTL细胞,TCR-T细胞、CAR-T细胞、NK细胞,γδ干细胞等。
在一个实施方案中,所述细胞包括选自包括以下组之一种或多种:皮肤细胞、肌肉细胞、分泌腺细胞、所述组织富含细胞、干细胞。在一个实施方案中,所述干细胞例如间充质干细胞、造血干细胞。
在根据本申请公开所定义的应用、药物组合物或方法中,所述动物细胞相关组分高度偏离其天然状态。在一个实施方案中,所述动物组织半流体类组分高度偏离天然状态。在一个实施方案中,所述动物细胞组分高度偏离天然状态。在一个实施方案中,所述高度偏离天然状态包括以下之一种或多种处理后的状态:天然组成(例如组织内血管或筋膜的剥离,细胞比容的大幅度增加等)的改变、天然结构的改变、组织块的分割)、天然状态的严重损伤、大大高于天然浓度的浓度。
在一个实施方案中,所述严重损伤选自包括以下之一种或多种处理造成的损伤:凝固化处理、机械破碎、超声处理、热处理、冻融处理、照射处理。众所周知,组织经严重损伤处理可以改变组织组成(例如组织内血管或筋膜的剥离)、结构(例如骨髓或背髓抽出)、形态(例如从流体或固体变为半流体),从而使得组织远离天然状态。细胞经严重损伤处理(例如细胞的机械损伤、超声波损伤、热损伤、冻融损伤、照射损伤、化学损伤)也可以改变细胞组成、结构、细胞聚集体形态(例如从流体或固体变为半流体),从而使得细胞或细胞聚集体远离天然状态。远离天然状态除了有可能丧失生理功能(例如组织不能再被用于器官移植或组织移植,以及细胞增殖弱化),而且还有可能被机体免疫系统作为重大创伤(例如其优势抗原性不再是异基因抗原性)识别和应对(抗原作用)。
在本申请公开的范围中,术语“严重损伤”是指不仅丧失生理功能且能被机体免疫系统识别和应对作重大创伤加以消除的损伤状态。术语“机械破碎”是指使用机械进行的破坏,其包括机械分割(例如组织取样)和剪切破碎(转速为≥10转/分、优选10-50000转/分)。固体或半固体经机械破碎后可以变为颗粒。此外,半固体半流体(例如脊髄)在进入注射器或注射时,亦受到机械破碎从而严重损伤。术语“凝固化”是指使液体转化为固体或半固体的处理,其选自包括本领域公知的任何液体组织的凝固化处理,例如:自凝固化(例如自凝固血液)、热凝固化(例如热凝固血液)、凝固剂凝固化(例如凝固剂凝固血液)。其中,热凝固化可以通过热处理来进行,凝固剂凝固化是通过在液体中加入凝固剂(例如血液中加入凝血酶和氯化钙)来进行。术语“超声处理”是指将待处理物体(例如血液、组织颗粒)放入超声装置中进行超声(例如工作频率为2-60kHZ)以使其结构受到破坏。术语“热处理”是指加热,其选自包括以下之一种或多种:直接热处理、蒸汽热处理、冻干热处理、微波热处理、射频热处理、激光热处理。热处理温度为≥40℃、优选为60℃-115℃。例如,可对血液进行如上所述的热处理。术语“冻融处理”是指包括冷冻处理和冷冻物的融化在内的处理,其中所述冷冻处理选自机械制冷或/和液氮制冷,制冷温度为≤-60℃、优选为-60℃-160℃。例如,可对血液、组织颗粒进行如上所述的冻融处理。术语“照射处理”是指照射強度为20-100Gy的处理,其选自包括以下之一种或多种:X射线照射处理、γ射线照射处理、光敏性药物+紫外线照射处理。例如,可对血液、组织颗粒进行如上所述的照射处理。
在根据本申请公开所定义的应用、药物组合物或方法中,所述组合物的组成必须满足使得该动物细胞相关组分提供所述作用所需的药理浓度条件,其中所述药理浓度(局部给药细胞比容)为>20%、≥30%、30-90%、优选为45-90%或75-85%。
在本申请公开的范围中,除非另有说明,术语“浓度”是指指定组分在药物(或组合物)中的百分比浓度,其中对于动物组分而言,所述细胞相关组分的浓度是指该组分所含细胞或/和细胞所含组分对应的来源细胞在组合物中的细胞比容;其它活性成分的的浓度是指该成分的重量百分比浓度。术语“制剂浓度”是指指定组分在药物制剂形态(例如注射剂或灌注液)中的浓度。术语“给药浓度”是指指定组分在药物制剂的给药形态(例如制剂的稀释液)中的浓度。术语“瘤内初浓度”是指药物进入瘤时指定组分在含药介质(例如含药血液)中的浓度。既使本发明组合物的动物细胞相关组分给药浓度与常规注射剂中的动物细胞相关组分给药浓度相同,它们各自药理(局部化学作用vs免疫增强作用)所必须的瘤内初浓度也可以大不相同。而本发明的应用、组合物及方法的技术方案特征之一,是要保障所述作用、尤其是局部化学作用所须的局部初浓度(局部给药浓度)。
根据本申请公开的药物组合物中的动物细胞相关组分局部给药浓度,通常是给药器械(注射器、穿刺器、灌注导管等)终点(例如针孔、导管出口等)的药物中的动物细胞相关组分浓度。对注射用粉针剂而言,所述给药浓度即为干粉和液体载体的混合物(例如悬浊液)中的动物细胞相关组分浓度。
在一个实施方案中,根据本申请公开的方法包括向所述个体的局部病变内、或局部病变内和局部病变外施用治疗有效量的所述药物组合物。所述个体为选自以下之一种或多种个体:免疫抑制个体、具有可内部给药的局部病变的个体、具有可化学消融或类化学消融的局部病变组织的个体、具有经局部作用可产生原位抗原或原位佐剂的局部病变的个体、病变外给药区域内局部作用可形成原生或次生的抗原或佐剂的个体。
在根据本申请公开中,所述药物组合物的施用量与所述局部病变内靶区体积之比(v/v)>0.1、0.15-1.5、优选为0.23-1.5或0.5-1.5。或者,所述药物组合物的施用量为≥1ml,或局部病变内的施用量为10-150ml或/和局部病变外的施用量为1.5-50ml。
在本申请公开的范围中,术语“靶”是指药理的主要目标,例如细胞毒药物针对肿瘤细胞,免疫调节药物针对免疫系统之调节因子,化学消融剂针对瘤组织,等等。术语“靶区”是指本次给药设计针对的靶所在空间范围(例如瘤体或其一部)。例如,靶区可以是指作为本次治疗目标的一个瘤体(当瘤体直径较小,所需一次给药剂量在临床上可行)或瘤体中之一部分(当瘤体直径较大,所需一次给药剂量在临床上不可行)。
在根据本申请公开所定义的应用、药物组合物或方法的一个实施方案中,所述药物组合物为半流体类组合物。在一个实施方案中,所述动物非致病性细胞相关组分包括可使得该组合物为半流体类组合物的动物细胞相关半流体类组分,其中所述半流体类组分选自动物组织半流体类组分或/和动物细胞半流体类组分之一种或多种,且其中所述动物组织半流体类组分选自以下组之一种或多种:(例如骨髓、脊髓、凝固血液)、动物组织的组织破碎物半流体(例如胎盘破碎物、脐带破碎物、凝固血液破碎物)、动物组织的细胞破碎物半流体;所述动物细胞半流体类组分选自以下组之一种或多种:动物天然细胞半流体类浓缩物、天然细胞破坏组分半流体类浓缩物、天然细胞或天然细胞破坏组分的衍生物或工程类似物半流体类浓缩物。
在本申请公开的范围中,术语“半流体类”是指液体和半固体之间的这样一类物理形态,其包括半流体及其类似物。术语“半流体”是指在室温下限时内(例如20秒)无外压则无肉眼可见的流动、而在临床(施用时)可接受的外压(例如可施加在注射器推进装置上的外压)下可以流动并导致不可逆形变的物体,其区别于液体(无外压时亦有流动性)和半固体(在临床可接受的外压下仅发生可逆形变)。术语“半流体类似物”是指液体(悬浊液)和半流体之间的、与半流体接近的一种物理形态,其在室温下静止约1分钟时不出现、而悬浊液出现明显分层;其在室温下无外压时约1分钟以内可出现、而半流体不会出现肉眼可见的流动。例如,某些动物器官(例如肌肉块、肝、胃、肠、心、肺、胰腺、软骨、关节等)的组织、以及某些压力下不流动的凝胶(例如纤维蛋白胶)是半固体,而不是半流体。而细胞浓缩物在常规浓度下为悬浊液,在超常规浓度(例如细胞比容≥70%、优选为≥75%)下为半流体类组分。
在一个实施方案中,所述半流体包括液体组织(例如血液)或动物细胞组分(例如含血组分)的凝固化半流体。在一个实施方案中,所述半流体类组分还可提供缓释作用。这是由于所述半流体类似于凝胶半固体、但可注射性更高,且在给药区形成的半流体结节可以可控地释放出其中所含其它活性成分,从而产生超过载体和所述活性成分的单药加和作用的治疗效应。
在根据本申请公开所定义的应用、药物组合物或方法中,所述组合物的组成必须满足该动物细胞相关组分提供所述作用所需的局部药理环境条件,其中所述局部药理环境要求能够产生协同作用的化学活性成分以外的其它组分的存在最少化,优选为不含常规组合物中药剂学或/和给药安全性所需的非活性成分,例如口服制剂中的固体赋形剂和调味剂、以及常规注射剂中的渗透压提高剂。
在一个实施方案中,所述动物细胞相关组分选自所述细胞相关水溶性组分,以及所述能够产生协同作用的化学活性成分为水溶性的。在一个实施方案中,所述药物组合物中,所述化学活性成分为水溶性的,而所述动物细胞相关选自动物细胞相关水不溶组分或/和动物细胞相关半流体类组分。在一个实施方案中,所述药物组合物中,所述化学活性成分为水不溶性的,而所述细胞相关选自动物细胞相关水不溶组分或/和动物细胞相关半流体类组分。
在根据本申请公开所定义的应用、药物组合物或方法中,所述能够产生协同作用的化学活性成分选自包括弱局部作用化合物和/或细胞毒药物之一种或多种。在一个实施方案中,所述弱局部作用化合物选自包括以下组之一种或多种:氨基酸类营养素、活体染料、奎宁类化合物。在一个实施方案中,所述化学活性成分优选为选自活体染料和1种或多种其它所述化学活性成分。在一个实施方案中,所述化学活性成分优选为选自活体染料和1种或多种细胞毒药物。在一个实施方案中,所述化学活性成分优选为选自活体染料和1种或多种氨基酸营养素。在一个实施方案中,所述化学活性成分优选为选自氨基酸营养素和1种或多种细胞毒药物。在一个实施方案中,所述化学活性成分优选为选自氨基酸营养素、活体染料和1种或多种细胞毒药物。
在一个实施方案中,当所述化学活性化合物包括细胞毒药物时,所述动物细胞相关组分和细胞毒药物的量比(V动物细胞相关组分/W细胞毒药物)为(2-100)/(0.1-1);当所述化学活性化合物包括弱局部作用化合物时,所述动物细胞相关组分和弱局部作用化合物的量比(V动物细胞相关组分/W弱局部作用化合物)为(1.5-40)/(0.1-1),其中当所述弱局部作用化合物为氨基酸营养素时,该量比(V动物细胞相关组分/W氨基酸营养素)为(1.5-7)/(0.1-1);当所述弱局部作用化合物为活体染料时,该量比(V动物细胞相关组分/W活体染料)为(2-40)/(0.1-1);当所述弱局部作用化合物包括所述奎宁类化合物时,所述动物细胞相关组分和和奎宁类化合物的量比(V动物细胞相关组分/W奎宁类化合物)为(1-40)/(0.1-1)。
在本申请公开中,术语“氨基酸类营养素”是指具有营养保健效应的氨基酸类化合物,优选为选自各国官方药典或指南所载的氨基酸类营养药和具有营养保健作用的氨基酸类辅料。
在一个实施方案中,所述氨基酸类营养素为选自以下组之一种或多种:氨基酸、氨基酸盐、寡肽和多肽。在一个实施方案中,所述氨基酸类营养素优选为选自以下组中的氨基酸或其盐或者包含或由以下氨基酸构成的寡肽和多肽:丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、β-丙氨酸、牛磺酸、γ氨基丁酸(GABA)、茶氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸。在一个实施方案中,所述氨基酸类营养素更优选为选自以下组中的氨基酸或其盐或者包含或由以下氨基酸构成的寡肽和多肽:精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。
在一个实施方案中,所述氨基酸类营养素的浓度为>2.5%、或5-30%、优选为5-25%。
在本申请公开中,术语“活体染料”是指进入动物活体组织后能够使组织、细胞、亚细胞单元等结构上色、但对动物整体没有不可接受的危害性的芳香化合物染料。
在一个实施方案中,所述活体染料可以是本领域技术人员已知的任意合适者,例如可以是选自以下组中的一种或多种有机染料及其水合物或衍生物:亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、孟加拉红、甲苯胺蓝、台盼蓝、碱性蓝、伊红、碱性品红、结晶紫、龙胆紫、中性红、詹纳斯绿B、番红。在一个实施方案中,所述选自亚甲蓝类染料。在一个实施方案中,所述亚甲蓝类染料例如可以为选自以下化合物及其水合物和衍生物:亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、新亚甲蓝。在一个实施方案中,所述亚甲蓝类染料优选为选自亚甲蓝及其水合物和衍生物。
在一个实施方案中,所述活体染料的浓度为≥0.25%、或0.25-10%、优选为0.25-1.5%或2.5%-10%。在一个实施方案中,所述亚甲蓝类染料的浓度(w/v)≥0.35%、优选为0.35-2%、更优选为0.35-1.5%或0.5-1%。在一个实施方案中,所述亚甲蓝类染料之外的其他活体染料(例如孟加拉红)的浓度(w/v)为1-10%。
在一个实施方案中,所述化学活性成分选自包括奎宁类化合物之一种或多种。在一个实施方案中,所述奎宁类化合物例如选自以下组及其衍生物之一种或多种:奎宁、一盐酸奎宁、二盐酸奎宁,以及所述奎宁类化合物的浓度为≥0.5%、或0.5-5%、优选为1.5-5%或1.5%-3%。
在一个实施方案中,所述化学活性成分选自包括细胞毒药物之一种或多种。在一个实施方案中,所述细胞毒药物的浓度为≥0.1%、0.1-15%。
在本申请公开的范围内,术语“细胞毒药物”是指主要以病变细胞或病变细胞内结构为靶实现其药物效应的活性成分,例如在细胞实验或在在荷瘤动物中显示出抗癌细胞增殖的物质,优选为选自常规化疗药物。术语“常规化疗药物”是指在安全剂量下可以通过常规用药有效治疗局部病变疾病的药物,其选自药学上可接受的任何常规化疗药物,优选为选自本领域公知的常规化疗药物,更优选为选自各国官方主管行政部门(例如FDA或中国药监局)己批准或将批准、或经各国官方药典己载入或将载入的常规化疗药物(例如抗肿瘤药物)。
在一个实施方案中,所述细胞毒药物可以为选自以下组之一种或多种:破坏DNA结构和功能的药物(例如烷化剂,如环磷酰胺、卡莫司汀等)、金属铂络合物(如顺铂、卡铂等)、DNA拓扑异构酶抑制剂(例如多柔比星类、拓扑替康、伊立替康等)、嵌入DNA中干扰转录RNA的药物(例如抗肿瘤抗生素,如放线菌素类、柔红霉素、多柔比星等)、干扰DNA合成的药物(例如嘧啶拮抗物,如尿嘧啶衍生物5-氟尿嘧啶、呋氟尿嘧啶、双呋氟尿嘧啶,胞嘧啶衍生物,如阿糖胞苷、环胞苷、5-氮杂胞苷等)、嘌呤拮抗物(例如溶癌呤、硫鸟嘌呤等)、叶酸拮抗物(例如甲氨蝶呤等)、影响蛋白质合成的药物(例如秋水仙碱类、长春碱类、紫杉烷类,例如紫杉醇、多西紫杉等)。
在根据本申请公开的药物组合物中,所述细胞毒药物可以为选自以下组之一种或多种:尿嘧啶衍生物类、环磷酰胺类、吉西他滨类、表柔比星类、抗肿瘤抗生素类、替尼泊苷、金属铂络合物、紫杉烷类;优选为选自以下药物及其类似衍生物一种或多种:5-氟尿嘧啶、环磷酰胺、吉西他滨、表柔比星、抗肿瘤抗生素、替尼泊苷、金属铂络合物、紫杉醇。
在一个具体实施方案中,选自所述烷化剂的细胞毒药物(例如环磷酰胺、卡莫司汀等)在所述药物组合物中的浓度(w/v)为0.5-6%、优选为0.75-1.5%。
在一个具体实施方案中,选自所述金属铂络合物的细胞毒药物(例如顺铂、卡铂等)在所述药物组合物中的浓度(w/v)为0.03-0.15%、优选为0.05-0.15%。
在一个具体实施方案中,选自所述DNA拓扑异构酶抑制剂的细胞毒药物(例如多柔比星类、拓扑替康、伊立替康等)在所述药物组合物中的浓度(w/v)为0.05-0.20%、优选为0.075-0.15%。
在一个具体实施方案中,选自所述抗肿瘤抗生素的细胞毒药物(例如放线菌素类、柔红霉素等)在所述药物组合物中的浓度(w/v)为1-4%、优选为1-2%。
在一个具体实施方案中,选自所述嘧啶拮抗物的细胞毒药物(例如尿嘧啶衍生物5-氟尿嘧啶、呋氟尿嘧啶、双呋氟尿嘧啶,胞嘧啶衍生物阿糖胞苷、环胞苷、5-氮杂胞苷等)在所述药物组合物中的浓度(w/v)浓度为0.5-2%、优选为0.75-1.5%。
在一个实施方案中,根据本申请公开的药物组合物可任选地进一步包含其它生物活性成分,其选自以下组之一种或多种:抗原、免疫调节类抗体、细胞因子、佐剂。
在一个实施方案中,所述其它生物活性成分选自包括抗原之一种或多种,其中所述抗原选自微生物抗原或肿瘤抗原,以及其中所述微生物抗原为选自源于以下微生物组之一种或多种的抗原:细菌,例如化脓性链球菌、豁质沙雷菌、卡介苗、破伤风梭菌、丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌;病毒,例如乙肝病毒、腺病毒、单纯疤疹病毒、牛痘病毒、腮腺炎病毒、新城鸡瘟病毒、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、西尼卡谷病毒、柯萨奇病毒、呼肠孤病毒;寄生虫,例如疟原虫;所述肿瘤抗原为选自以下组之一种或多种:乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、肠癌、口腔癌、胃癌、结直肠癌、支气管癌、喉癌、睾丸癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、恶性黑色素瘤、脑瘤、肾细胞癌、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤。
在一个实施方案中,所述其它生物活性成分选自包括免疫调节类抗体之一种或多种。在一个实施方案中,所述免疫调节类抗体选自以下组之一种或多种:针对抑制性受体的抗体阻断剂,例如针对CTLA-4分子和PD-1分子的阻断性抗;针对抑制性受体的配体的抗体阻断剂、针对免疫反应细胞表面刺激分子的激活性抗体,例如抗OX40抗体、抗CD137抗体、抗4-1BB抗体;针对局部病变疾病微环境中免疫抑制性分子的中和抗体,例如抗TGF-p1抗体。在一个实施方案中,所述免疫调节类抗体药物在所述组合物中的含量为>0.1%、优选为0.25-10%。
在一个实施方案中,所述其它生物活性成分选自包括免疫调节类抗体之一种或多种,其中所述细胞因子选自以下之一种或多种:肿瘤坏死因子、干扰素、白介素。在一个实施方案中,所述细胞因子在所述疫苗中的含量为>0.1%、优选为0.25-3%。
根据本申请公开的药物组合物的剂型为局部给药剂型。根据本申请公开的药物组合物可以是可包含动物细胞相关组分、且满足使得所述动物细胞相关组分提供所需作用的必需条件的任何局部给药剂型。在一个实施方案中,所述局部给药剂型包括注射剂、涂抹剂或膏剂。
在本发明的范围中,术语“注射剂”是指含活性成分和液体载体并供体内给药的无菌制剂。所述注射剂按给药方式分为局部注射剂、静脉注射剂等,局部注射剂只有在给定局部给药浓度后方可作为局部注射剂使用。注射剂按商品形式分为液体注射剂、半流体注射剂、注射用粉针剂、等。注射用粉针剂包含无菌干粉和溶媒,无菌干粉中包含部分或全部活性成分,溶媒中包含全部液体载体。注射剂中所述活性成分的浓度均为其与全部所述液体载体的混合物中的活性成分浓度,通常是局部给药器械(注射器、穿刺器、注入导管等)终点(例如针孔、导管出口等)的液体药物中的活性成分浓度。对注射用粉针剂而言,所述活性成分的浓度即为无菌干粉和溶媒的混合物(例如复溶液,或所述药物学可接受的液体载体)中的活性成分浓度。
根据本申请公开的药物组合物还可进一步任选地包含赋形剂。所述赋形剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者,其可包括例如以下之一种或多种:分散介质、防腐剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、增溶剂、增粘剂等。所述增粘剂例如为羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、聚乙烯毗咯烷酮或明胶。所述防腐剂例如抗氧化剂例(如抗坏血酸)。
根据本申请公开的药物组合物还可进一步任选地包含示踪剂。所述示踪剂可以是本领域技术人员已知的任意合适者,其可包括例如碘化油。
本申请公开还提供一种药物试剂盒,其包括一个或多个装有根据本申请公开的药物组合物的单独容器。所述单独容器可以例如包括安瓿、小玻璃瓶等。
在一个实施方案中,所述药物试剂盒还可包括如何向有需要的个体施用所述药物组合物的说明书或标签。在一个实施方案中,所述施用包括在所述局部病变内施用,或者在局部病变内和局部病变外施用,其中所述局部病变外施用例如包括在所述个体的腋下皮下注射。在施用时,所述药物组合物的施用量与所述局部病变内靶区体积之比>0.1、0.15-1.5、优选为0.23-1.5或0.5-1.5。或者,根据上述局部病变的具体情况,所述药物组合物的施用量为≥1ml,或局部病变内的施用量为10-150ml或/和局部病变外的施用量为1.5-50ml。
根据本申请公开的药物组合物可如下制备:制备含所述动物细胞相关组分、所述协同成分和任选存在的其它物质的可局部给药的药物制剂。该可局部给药的药物可以是液体药物或半流体药物。而该液体药物可以是溶液(例如为亲水溶媒的溶液、优选为水溶液)、悬浮液、或乳浊液。
在本申请公开中,所述药物组合物以及其它药物的浓度大于或等于其在本发明的药物组合物中的给药浓度。当大于在本发明之药物组合物中的给药浓度时,其可进一步被稀释使用。
在一个实施方案中,包含动物组织半流体类组分的药物组合物的制备包含以下步骤:a.提供动物组织;b.对所述动物组织进行半流体化处理和/或严重损伤处理,以得到包含所述组织或由该组织形成的半流体。
在一个实施方案中,所述半流体化处理包括以下之一种或多种:液体组织的粘稠化、液体组织的凝固化、非液组织的机械破碎、液体组织凝固物的机械破碎、非液组织的软化。在一个实施方案中,所述组织可进行严重损伤处理以获得半流体,或将所述组织制备为半流体后再进行严重损伤处理。在一个实施方案中,所述严重损伤处理包括以下之一种或多种:机械破碎、凝固化、超声损伤、热损伤、冻融损伤、照射损伤、化学损伤。
在一个实施方案中,在提供组织时,可将相应组织来源进行分离。在本发明的范围中,所述分离包括液体组织分离和非液体(固体或半固体)组织分离。液体组织分离是指获得液体组织的分离处理,例如抽取并获得正常血液,以及对抽取的正常血液进行浓缩获得浓缩血液。非液体组织分离包括例如从器官中抽取所需组织,或从包含所需组织的部分中剥离出不需要成分,其中所述不需要成分包括例如下述之一种或多种:脂肪、筋、膜、血管。
在一个实施方案中,当所述组织为固体或半固体时,根据本申请公开的半流体化可以例如如下进行:将所述组织进行本申请公开的机械破碎,制备为包含组织的颗粒化组织。
在一个实施方案中,在对组织进行流体化处理和严重损伤处理前或/和处理中加入本申请公开的活性成分。
根据本发明的制备方法,本发明的包含动物组织细胞组分的药物组合物的制备包含以下步骤:a.提供动物组织细胞;b.对所述动物组织细胞进行处理以得到包含所述细胞或细胞组分的半流体或液体。
在一个实施方案中,所述处理包括浓缩。在一个实施方案中,所述处理包括细胞破碎。
在一个实施方案中,所述包含所述细胞或细胞组分的半流体可通过包括以下之一种或多种方法制备:含细胞液体的粘稠化、含细胞液体的凝固化、含细胞凝固物的机械破碎。
按上述这些方法的原则,本领域技术人员可以采用任意合适的具体方法制备多种包含本发明组合物的具体剂型。例如,本发明的药物组合物中的变化包括:含不同种类和浓度的所述药物组合物、含不同种类和浓度的其它药物、含不同种类和浓度的其他添加剂(例如止痛剂、增活剂等)。
在本申请公开中,所述局部病变疾病包括实体肿瘤、非瘤肿大(例如非瘤结节)、局部炎症(例如宫颈糜烂)、分泌腺功能异常和皮肤病。
在本申请公开的范围中,术语“局部病变疾病”是指具有局部病变症状的疾病。术语“局部病变(亦简称病变)”是指动物(优选人类)身体原生或继生的不正常局部,其包括结构(例如病变组织)、形态或功能上的症状区块及与之相联通的不正常区域。例如,当局部病变疾病为实体肿瘤时,局部病变为为肿瘤细胞所在的瘤体及其组织,而与之相联通的不正常区域为与该瘤体相联通(例如通过淋巴管或血管联通)的、且有或疑似有肿瘤细胞的相邻区域;当局部病变疾病为非瘤肿大时,局部病变为异常的非瘤肿块,例如增生、囊肿、结节等;当局部病变疾病为局部炎症时,局部病变为发炎区,例如发炎面或发炎体;当局部病变疾病为分泌异常时,局部病变为异常源或其所在的分泌腺体。又例如,当疾病为胰岛素分泌异常时,异常源在胰岛,局部组织则为胰岛或胰岛所在的胰腺;当疾病为皮肤病时,局部组织为病变皮肤或病变皮肤的附属器官。
在本发明的范围中,术语“肿瘤”是指由于细胞或变异的细胞异常增殖形成的肿块,其包括实体肿瘤。术语“实体肿瘤”是指具有瘤体的肿瘤,其可以是由于任何病理(恶性和非恶性)和处于任何阶段的肿瘤,包括例如按照肿瘤细胞类型进行分类的以下组:上皮细胞肿瘤、肉瘤、淋巴瘤、生殖细胞肿瘤、胚细胞瘤;以及包括按照肿瘤细胞集中区所在的器官或组织来命名的肿瘤,包括例如按照以下器官或组织来命名的肿瘤:脑、皮肤、骨、肌肉、乳腺、肾、肝、肺、胆囊、胰腺、脑、食道、膀肌、大肠、小肠、脾、胃、前列腺、翠丸、卵巢或子宫。
具体而言,所述肿瘤包括恶性肿瘤和非恶性肿瘤。所述恶性肿瘤包括例如乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、肠癌、口腔癌、食道癌、胃癌、喉癌、睾丸癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、恶性淋巴瘤、恶性脑瘤等。所述非恶性肿瘤包括例如乳腺瘤、胰腺瘤、甲状腺瘤、前列腺瘤、肝瘤、肺瘤、肠瘤、口腔瘤、食道瘤、胃瘤、鼻咽瘤、喉瘤、睾丸瘤、阴道瘤、子宫瘤、输卵管瘤、卵巢瘤、淋巴瘤、脑瘤等。
在一个实施方案中,所述局部病变疾病选自非瘤肿大(例如非瘤结节)。在一个实施方案中,所述非瘤肿大包括例如分泌腺非瘤结节。在一个实施方案中,所述分泌腺包括例如甲状腺、乳腺、肝、肺、肠(例如息肉)等。
在一个实施方案中,所述局部病变疾病选自局部炎症(包括糜烂)。在一个实施方案中,所述非瘤肿大包括例如分泌腺局部炎症。在一个实施方案中,所述分泌腺包括例如甲状腺、乳腺、肝、肺、肠、宫颈、阴道等。
在一个实施方案中,所述局部病变疾病选自皮肤病。在一个实施方案中,所述皮肤病包括例如慢性粘膜皮肤念珠菌病、各种癣。
本申请公开的所述药物组合物是一种治疗药物,当其用于治疗疾病时,还可与其它介入疗法、全身化疗、免疫疗法、光动力疗法、声动力疗法、手术干预或此类疗法的组合相组合施用,以进一步提高疗效。
本申请公开包括以下实施方案:
1、动物非致病性细胞相关组分在制备用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物中的应用。
2、根据项目1的应用,其中所述药物组合物还可任选地包含能够与所述动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述动物非致病性细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
3、一种用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物,其包含作为治疗活性成分的动物非致病性细胞相关组分。
4、根据项目3的药物组合物,其还包含能够与所述动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述动物非致病性细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
5、一种用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物,其包含作为治疗活性成分的动物非致病性细胞相关组分以及能够与该动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
6、根据项目1-5之一的应用或药物组合物,其中所述药物组合物还可任选地包含其它生物活性成分。
7、根据项目1-6之一的应用或药物组合物,其中所述动物为选自动物免疫原性最小化者,优选为选自自体或/和移植反应最小化的同种异体动物;所述细胞相关组分为选自动物组织组分或/和动物细胞组分之一种或多种,其中所述动物组织组分选自以下组之一种或多种:动物组织、动物组织的组织破碎物、动物组织的细胞破碎物;所述动物细胞组分选自以下组之一种或多种:动物天然细胞、天然细胞破坏组分、以及所述天然细胞或天然细胞破坏组分的衍生物或工程类似物。
8、根据项目1-7之一的应用或药物组合物,其中所述动物非致病性细胞相关组分在该药物组合物中的浓度(细胞比容)为>20%、≥30%、30-90%、优选为45-90%或75-85%。
9、根据项目1-8之一的应用或药物组合物,其中所述动物非致病性细胞相关组分包括可使得该组合物为半流体类组合物的动物细胞相关半流体类组分,其中所述半流体类组分选自动物组织半流体类组分或/和动物细胞半流体类组分之一种或多种,且其中所述动物组织半流体类组分选自以下组之一种或多种:动物组织半流体、动物组织的组织破碎物半流体、动物组织的细胞破碎物半流体;所述动物细胞半流体类组分选自以下组之一种或多种:动物天然细胞半流体类浓缩物、天然细胞破坏组分半流体类浓缩物、天然细胞或天然细胞破坏组分的衍生物或工程类似物半流体类浓缩物。
10、根据项目9的应用或药物组合物,其中所述组织选自结缔组织或/和非结缔组织之一种或多种,其中所述结缔组织例如是血液、骨髓、脊髓;以及所述非结缔组织例如是以下器官所含组织:肠、胃、肉、胰腺、脾脏、肝脏、肺、软骨、关节、皮、胎盘、脐带,优选为脾脏、胎盘或/和脐带。
11、根据项目9的应用或药物组合物,其中所述细胞包括以下组之一种或多种:血液细胞、免疫器官细胞、所述组织富含的其它细胞。
12、根据项目11的应用或药物组合物,其中所述血液细胞选自包括以下细胞及其衍生物之一种或多种:红细胞、白细胞、血小板;所述免疫器官细胞选自包括以下细胞及其衍生物之一种或多种:淋巴细胞、T细胞、CD细胞;所述其它细胞选自包括以下细胞及其衍生物之一种或多种:皮肤细胞、肌肉细胞、分泌腺细胞、干细胞。
13、根据项目2或4-12之一的应用或药物组合物,其中所述化学活性成分选自包括弱局部作用化合物和/或细胞毒药物之一种或多种,以及其中当所述化学活性化合物包括细胞毒药物时,所述动物非致病性细胞相关组分和细胞毒药物的量比(V动物细胞相关组分/W细胞毒药物)为(2-100)/(0.1-1);当所述化学活性化合物包括弱局部作用化合物时,所述动物非致病性细胞相关组分和弱局部作用化合物的量比(V动物细胞相关组分/W弱局部作用化合物)为(1.5-40)/(0.1-1)。
14、根据项目13的应用或药物组合物,其中所述弱局部作用化合物选自包括以下组之一种或多种:氨基酸类营养素、活体染料、奎宁类化合物。
15、根据项目14的应用或药物组合物,其中所述弱局部作用化合物包括所述氨基酸营养素,且所述动物细胞相关组分和氨基酸营养素的量比(V动物细胞相关组分/W氨基酸营养素)为(1.5-7)/(0.1-1)。
16、根据项目14的应用或药物组合物,其中所述弱局部作用化合物包括所述活体染料,且所述动物细胞相关组分和活体染料的量比(V动物细胞相关组分/W活体染料)为(2-40)/(0.1-1)。
17、根据项目14的应用或药物组合物,其中所述弱局部作用化合物包括所述奎宁类化合物,且所述动物细胞相关组分和和奎宁类化合物的量比(V动物细胞相关组分/W奎宁类化合物)为(1-40)/(0.1-1)。
18、根据项目14的应用或药物组合物,其中所述化学活性成分为选自活体染料和一种或多种其它所述化学活性成分。
19、根据项目14的应用或药物组合物,其中所述化学活性成分为选自所述细胞毒药物和一种或多种氨基酸类营养素和/或活体染料。
20、根据项目14的应用或药物组合物,其中所述氨基酸类营养素选自以下组中的氨基酸或其盐或者包含或由以下氨基酸构成的寡肽和多肽:精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸,以及在所述组合物中,所述氨基酸类营养素的浓度为>2.5%、或5-30%、优选为5-25%。
21、根据项目14的应用或药物组合物,其中所述活体染料为选自包括孟加拉红或/和以下亚甲蓝类染料之一种或多种:亚甲蓝、专利蓝、异硫蓝、新亚甲蓝,且其中所述孟加拉红的浓度为2.5%-20%;所述亚甲蓝类染料的浓度为≥0.25%、或0.25-2.5%、优选为0.5-2.5%。
22、根据项目13的应用或药物组合物,其中所述细胞毒药物选自以下组之一种或多种:破坏DNA结构和功能的药物,例如环磷酰胺、卡莫司汀、金属铂络合物、多柔比星类药物、拓扑替康、伊立替康;嵌入DNA中干扰转录RNA的药物,例如抗肿瘤抗生素药物;干扰DNA合成的药物,例如5-氟尿嘧啶(5-Fu)、呋氟尿嘧啶、双呋氟尿嘧啶、阿糖胞苷、环胞苷、5-氮杂胞苷;影响蛋白质合成的药物,例如秋水仙碱类药物、长春碱类药物、紫杉烷类药物,以及在所述药物组合物中,所述细胞毒药物的浓度为≥0.1%、0.1-15%。
23、根据项目5或6的应用或药物组合物,其中所述其它生物活性成分选自以下组之一种或多种:抗原、免疫调节类抗体、细胞因子、佐剂。
24、根据项目23的应用或药物组合物,其中所述抗原选自微生物抗原或肿瘤抗原,以及其中所述微生物抗原为选自源于以下微生物组之一种或多种的抗原:细菌,例如化脓性链球菌、豁质沙雷菌、卡介苗、破伤风梭菌、丁酸梭菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌;病毒,例如乙肝病毒、腺病毒、单纯疤疹病毒、牛痘病毒、腮腺炎病毒、新城鸡瘟病毒、脊髓灰质炎病毒、麻疹病毒、西尼卡谷病毒、柯萨奇病毒、呼肠孤病毒;寄生虫,例如疟原虫;所述免疫调节类抗体选自以下组之一种或多种:针对抑制性受体的抗体阻断剂,例如针对CTLA-4分子和PD-1分子的阻断性抗;针对抑制性受体的配体的抗体阻断剂、针对免疫反应细胞表面刺激分子的激活性抗体,例如抗OX40抗体、抗CD137抗体、抗4-1BB抗体;针对实体肿瘤微环境中免疫抑制性分子的中和抗体,例如抗TGF-p1抗体;所述细胞因子选自以下之一种或多种:肿瘤坏死因子、干扰素、白介素。
25、包含动物非致病性细胞相关组分以及药物学可接受的合适载体的药物组合物,其是用于治疗局部病变疾病,其中所述局部病变疾病包括实体肿瘤。
26、一种治疗局部病变疾病的方法,其包括以下步骤:向有此需要的个体的局部病变内或/和病变外局部施用治疗有效量的根据项目3-24之一的药物组合物。
27、根据项目30的方法,其包括以下步骤:向所述个体的局部病变内、或局部病变内和局部病变外施用治疗有效量的所述药物组合物。
28、根据项目30的方法,其中所述个体为选自以下之一种或多种个体:免疫抑制个体、具有可内部给药的局部病变的个体、具有可化学消融或类化学消融的局部病变组织的个体、具有经局部作用可产生原位抗原或原位佐剂的局部病变的个体、病变外给药区域内局部作用可形成原生或次生的抗原或佐剂的个体。
29、根据项目26-28之一的方法,其中所述药物组合物的施用量与所述局部病变内靶区体积之比(v/v)>0.1、0.15-1.5、优选为0.23-1.5或0.5-1.5。
30、根据项目26-29之一的方法,其中所述药物组合物的施用量为≥1ml,或局部病变内的施用量为10-150ml或/和局部病变外的施用量为1.5-50ml。
31、根据项目26-30之一的方法,其还包括在施用所述药物组合物之前、期间或之后还任选进行一种或多种其它治疗,例如化疗、免疫疗法、放射疗法、手术、化学消融、物理消融。
32、根据项目1-31之一的应用、药物组合物或方法,其中所述治疗作用为包括涉及局部作用(或局部协同作用)的局部治疗或/和免疫治疗,以及其中所述局部作用(或局部协同作用)包括局部化学作用(或局部化学协同作用)和任选存在的其它作用;所述局部治疗包括一处或多处局部病变的类化学消融和任选存在的其它化疗;所述免疫治疗包括所述病变内或/和病变外所述局部作用(或局部协同作用)的次生免疫作用和任选存在的其它免疫作用。
33、根据项目1-32之一的应用、药物组合物或方法,其中所述治疗的适用个体选自包括以下组之一种或多种:免疫抑制个体、可局部病变内给药的个体、局部病变组织可类化学消融的个体、局部病变内可产生次生免疫物质的个体、病变外给药区域内可产生次生免疫物质的个体。
34、药物试剂盒,其包括一个或多个装有根据项目3-24之一所述的药物组合物的单独容器。
35、根据项目34的药物试剂盒,其中还可包括如何向有需要的个体施用所述药物组合物的说明书或标签。
36、根据项目35的药物试剂盒,其中所述施用包括在所述局部病变内施用,或者在局部病变内和局部病变外施用,其中所述局部病变外施用例如包括在所述个体的腋下皮下注射。
37、根据项目34或35的试剂盒,其中所述药物组合物的施用量与所述局部病变内靶区体积之比>0.1、0.15-1.5、优选为0.23-1.5或0.5-1.5。
38、根据项目34或35的试剂盒,其中所述药物组合物的施用量为≥1ml,或局部病变内的施用量为10-150ml或/和局部病变外的施用量为1.5-50ml。
39、根据项目1-38之一的应用、药物组合物、方法或试剂盒,其中所述局部病变疾病包括肿瘤、非瘤肿大、局部炎症、分泌腺功能异常和皮肤病,其中所述肿瘤包括恶性和非恶性实体肿瘤。
40、根据项目39的应用、药物组合物、方法或试剂盒,其中所述实体肿瘤包括以下肿瘤及其次生肿瘤一种或多种:乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、肠癌、口腔癌、食道癌、胃癌、喉癌、睾丸癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、脑瘤、淋巴瘤。
基于在下文中更详细描述的研究,尽管具体机理尚待进一步研究,本发明的药物组合物显示出促进瘤体组织的有效破坏、同时对个体正常组织仅有最小化的损害,从而达到安全、有效治疗实体肿瘤的药学效果。
实施例
通过以下具体实施例对本发明作进一步的说明,但不作为对本发明的限制。
以下实施例中,所用动物细胞相关组分选自动物组织组分或/和动物细胞组分之一种或多种,其中所述动物组织组分选自以下组之一种或多种:动物组织、动物组织的组织破碎物、动物组织的细胞破碎物;所述动物细胞组分选自以下组之一种或多种:动物天然细胞、天然细胞破坏组分、天然细胞或天然细胞破坏组分的衍生物或工程类似物。其中:
所用实验动物组织均为通过实验动物公司购入或用实验动物依规作常规制备,包括:血液、骨髓、脊髓、皮、肠、胃、肉、胰腺、脾、肝、肺、软骨。人血液、人血细胞浓缩物等则从自愿者依规合法获得。其中所述组织优选为选自自体或/和移植反应可接受的同种异体组织
所用细胞或细胞衍生物可从动物组织经现有技术制备。例如,按照现有技术从天然血液分离获得的细胞沉淀、白细胞沉淀、红细胞沉淀、血小板沉淀。又例如,按照现有技术从骨髓等组织提取和制备的造血干细胞等。又例如,按照现有技术从动物脾经红细胞裂解去除处理后获得淋巴细胞:将动物处死后取脾并温和破碎,再分别加入无血清DMEM培养液、红细胞裂解液(0.0075%氯化铵/0.0026%Tris除菌水溶液解并稀释至500mL),温和搅拌后静止5钟,进行离心洗涤3次(离心条件为1 000rpm/min,沉淀重悬液为无血清DMEM),最后获得淋巴细胞沉淀。又例如,通过体外诱导、激活、扩增自体或异体的血细胞,例如DC细胞、LAK细胞、TIL细胞、CIK细胞、DC-CIK、CTL细胞,TCR-T细胞、CAR-T细胞、NK细胞,γδ干细胞等。
以下实施例中所用的其它化合物,均可从商业途径得到,部分列于表1中。
表1
在本发明中,L-氨基酸均简写为氨基酸(例如L-精氨酸均简写为精氨酸)。
以下实施例中所用的实验动物均为通过专业实验动物公司购入,均为SPF(Specific Pathogen Free,无特定病原体)级动物。小鼠均为6-8周龄健康雌性、体重17.5-20.5g。
在以下实施例中,除非另有说明,皮下移植瘤动物试验均依据药管当局颁发的试验指南、按常规的实体瘤细胞皮下接种方法进行。除非另有说明,实体瘤长至所需体积(例如小鼠荷瘤50-500mm3)则为建模成功,然后采用PEMS 3.2软件(四川大学华西公共卫生学院编制)随机分为若干个实验组,每组6只动物。试验观察、测量和分析的项目,包括一般状态、体重、摄食量、动物移植物抗宿主病、实体瘤体积、瘤重、生存时间等。
肿瘤体积V、相对肿瘤增殖率R、抑瘤率r的计算公式分别如下:
肿瘤体积V=l/2×a×b2,其中a表示肿瘤长,b表示肿瘤宽。
相对肿瘤增殖率R(%)=TRTV/CRTV×100,其中TRTV和CRTV分别为研究组和阴性对照组的相对肿瘤体积,相对肿瘤体积=Vt/V0,其中V0为分组给药当天(即第一天)测得的平均肿瘤体积;Vt为分组给药后第t天测得的平均肿瘤体积。
抑瘤率r(%)=(CW-TW)/CW×100%,其中TW为研究组的平均瘤重;CW为阴性对照组的平均瘤重。
在以下实施例中,药物i的药效记为Ei,其中Ei可以为(100-Ri)%或ri%。
在以下实施例中,实验结果(例如瘤重、瘤体积)采用均数±标准差(x±s)表示,两个实验动物组与组均数之间的差别采用统计学软件SPSS 13.0或SPSS 19.0软件进行显著性检验来比较,检验选用统计量t来进行,检验水准α=0.05,P<0.05表示差异有统计学意义,P>0.05则无统计学意义。
在以下实施例中,药物作用类型(药理)通过药物效应、尤其是比较同一研究药物在不同技术方案中的药物效应来进行研究。例如,当药物i在方案X和Y之间的药物效应差异并非不寻常地大(例如EiX/EiY<200%)时,其很可能是基本相同的药物作用类型(药理)中不同动力学条件(作用浓度)所致;而当该药物效应差异超乎寻常地大(例如EiX/EiY>200%)时,药物i在方案X中的药物效应之大应当超过了其在方案Y中的药物作用类型(药理)的动力学预期范围,从而很可能涉及与方案Y不同的药物作用类型(药理)。当两个药物显示出显然不同的EiX/EiY关系,则它们很可能涉及显然不同的药理;而当两个药物显示出相似的EiX/EiY关系,则它们很可能涉及相同的药理、至少涉及相似的药理(例如类化学消融药理和化学消融药理)。
在以下实施例中,研究药物的疗效通过比较其与阳性对照物在相同技术方案中的疗效差异来进行评价。例如,当研究药物组与阳性对照组之间的瘤重差异或体积差异无统计学意义(P>0.05)、且研究药物组的药效不低于阳性对照组的50%(例如E阳性对照组/E研究药物组≤200%),则该研究药物的疗效被评价为具有与阳性对照物类似疗效(或有治疗意义的药效);当研究药物组与阳性对照组之间的瘤重差异或体积差异有统计学意义(P<0.05)、且研究药物组的药效大于阳性对照物的200%(例如E研究药物组/E阳性对照组>200%),则该研究药物的疗效被评价为具有超过阳性对照物类似药理预期的疗效,这也往往说明有新药理产生。
在以下实施例中,化疗阳性对照物包括经典细胞毒药物(例如0.5-1%5-氟尿嘧啶,其在以下实施例条件下的抑瘤率为≥30%)和经典化学消融剂(例如75-99%乙醇,其在以下实施例条件下的抑瘤率为≥15%)。免疫增强阳性对照物包括经典免疫增强剂(例如白细胞介素-12,其在以下实施例条件下的抑瘤率为≤10%)。
在以下实施例中,组合物共用作用的判断通过q判断进行。在本发明的范围內,A药和B药的组合物记为B/A。A、B的单用药效分别记为EA和EB,A/B的实际协同成分效记为EA+B。
药物联合使用产生的作用具有高度的不确定性,业内往往依据以下q判断进行:
q=实际共用作用/理论单纯相加预期作用。
q计算式中理论单纯相加预期药效的计算方法很多,大多针对细胞实验效应。通常认为,当q=1时,实际共用作用符合理论预期,显示为相加作用;当q<1时,实际共用作用弱于理论预期,显示为拮抗作用;当q>1时,实际共用作用超理论预期,显示为协同作用。
一种判断动物实验中合并用药效应的方法是Burgi法(Burgi Y.Pharmacology;Drug actions and reactions.Cancer res.1978,38(2),284-285)。金正均对Burgi法进行了改进(金正均,等概率和曲线和“Q50”,上海第二医学院学报;1981,1,75-86),其q计算式为:
q=EA+B/(EA+EB-EA·EB),
其中(EA+EB-EA·EB)为A药和B药理论单纯相加预期效应。通常认为q=1.00反映单纯相加预期作用。
在上述金正均法的q计算基础上,张效文、金正均等进一步使q判断更适合实验实际(张效文等,用Q值估计合并用药效果的新方法:“双30法”,上海第二医学院学报,1985,5,p353-354)。他们以q=0.85-1.15反映单纯相加预期作用。本发明以下实施例中根据该金正均改良法进行联合给药的共用作用判断如下:
当组合物组并不显示有治疗意义的药效时,其联合给药的也就未显示有治疗意义的共用作用。当组合物组显示有治疗意义的药效时,如果q在0.85与1.15之间则该组合物的共用作用为相加作用(符合理论单纯相加预期),q>1.15则该组合物的共用作用为明显协同作用(超理论单纯相加预期),q<0.85则该组合物的共用作用为明显拮抗作用(不及理论单纯相加预期);而组合物组与阴性对照组之间的瘤重差异无统计学意义,则该组合物未显示出明显协同作用。
实施例1:组合物的制备
按照上述本发明的组合物的制备方法,可以配制出本发明众多不同的组合物。本实施例制备的部分本发明的组合物的组成列于表2(包含动物组织组分的组合物)和表3(包含动物细胞组分的组合物)。表中非病变组织的细胞比容由相关动物实验公司的兽医提供,血液和细胞浓缩物的细胞比容按血常规测定方法测定(例如使用全自动血液细胞分析仪BC5000)。
表2
以下列出几个表2中的制备试验例子。
实施例1A:按所需(例如局部化学作用所需)细胞比容选择非病变组织(例如猪脊髄),并从动物器官或组织制备(例如从含膜猪脊髄经组织穿刺提取或从解剖剥离除去外膜)获得所需组织(例如猪脊髄组织)。如果按所需药物体积/靶区体积比(例如临床上常见的实体肿瘤的平均体积为的30cm3)对该液体混合物进行分装(例如10ml/瓶)和封盖,即可获得可提供病变内局部作用的药物组合物剂型和规格。该制备物即为上表中A1。
如将A1制备中所获组织(例如猪脊髄组织)与其它活性成分(例如多西紫杉醇)按所需量比(例如98/2)搅拌混合再进行分装,所获制备物即为上表中A17。
实施例1B:按所需(例如局部化学作用所需)细胞比容选择非病变组织(例如人胎盘组织),并从动物器官或组织制备(例如将所获人胎盘剥离除去脂肪、膜、筋、血管)获得所需组织(例如人胎盘组织)。然后将该组织置于搅拌机中进行以组织破碎为主的破碎(例为转速3000-5000转/分、总时间1-3分钟),便获得由横截面平均尺寸小于1mm×1mm的、肉眼可辨的组织颗粒形成的组织半流体。如果按所需药物体积/靶区体积比(例如临床上常见的实体肿瘤的平均体积为的30cm3)对该组织半流体进行分装(例如10ml/瓶)和封盖,即可获得可提供病变内局部作用的药物组合物剂型和规格。所获制备物即为上表中A2。使用与A2制备相同的方法,可分别从不同非病变组织进行不同组合物(例如上表中制备物A3-A5)的制备。
如将A2制备中所获组织(例如人胎盘组织)与其它活性成分(例如还原型谷胱甘肽)按所需量比(例如95/5)进行以组织破碎为主的破碎(例为转速3000-5000转/分、总时间1-3分钟),或将A2制备中所获组织半流体与其它活性成分(例如还原型谷胱甘肽)按所需量比(例如95/5)搅拌混合,然后再进行A2制备中所述分装,所获制备物即为上表中A13。使用与A13制备相同的方法,可分别从不同非病变组织和协同成分进行不同组合物(例如上表中制备物A14-A17)的制备。
实施例1C:按血站标准方法获得预置抗凝剂枸橼酸钠的人血液200ml,分别盛于多个20ml烧杯中,杯以锡萡纸封口后加温(例如放置在蒸汽中20-150分钟),便获得热凝固血液。如果按所需药物体积/靶区体积比(例如临床上常见的实体肿瘤的平均体积为的30cm3)对该液体混合物进行分装(例如10ml/瓶)和封盖,即可获得可提供病变内局部作用的药物组合物剂型和规格。所获制备物即为上表中A6。使用与A6制备相同的方法,可分别从不同动物血液进行不同组合物(例如上表中制备物A7)的制备。
如将A6制备中所获组织(例如人血液)与其它活性成分(例如亚甲蓝)按所需量比(例如99/1)混合均匀后再进行所述加温,或将A6制备中所获凝固血液与其它活性成分(例如亚甲蓝)按所需量比(例如99/1)搅拌混合,然后再进行A6制备中所述分装,所获制备物即为上表中A19。使用与A19制备相同的方法,可分别从不同非病变组织和活性成分进行不同组合物(例如上表中制备物A20-A22)的制备。
实施例1D:按所需(例如局部化学作用所需)细胞比容选择非病变组织(例如人胎盘组织),并从动物器官或组织制备(例如将所获人胎盘剥离除去脂肪、膜、筋、血管)获得所需组织(例如人胎盘组织)。然后将该组织置于匀浆机中进行以细胞破碎为主的破碎(例如转速10000-25000转/分钟,转时0.5-1分钟,匀漿次数2-10次),可获得横截面平均尺寸小于0.3mm×0.3mm的细胞破碎物半流体。如果按所需药物体积/靶区体积比(例如临床上常见的实体肿瘤的平均体积为的30cm3)对该组织半流体进行分装(例如10ml/瓶)和封盖,即可获得可提供病变内局部作用的药物组合物剂型和规格。所获制备物即为上表中A11。使用与A11制备相同的方法,可分别从不同非病变组织进行不同组合物(例如上表中制备物A9、A10)的制备。
如将A8-A10制备中所获组织(例如人胎盘组织)与其它活性成分(例如还原型谷胱甘肽)按所需量比(例如95/5)加入后再进行所述细胞破碎,或将A8-A10制备中所获细胞破碎物半流体与其它活性成分(例如亚甲蓝)按所需量比(例如99/1)搅拌混合,然后再进行所述分装,该制备物即为包含细胞破碎物半流体与其它活性成分的组合物。
实施例1E:按血站标准方法获得预置抗凝剂枸橼酸钠的人血液200ml,进行上表中A6制备中相同的所述加温后再进行上表中A8制备中相同的所述细胞破碎,或进行上表中A8制备中相同的细胞破碎后再进行上表中A6制备中相同的所述加温,便获得细胞破碎物半流体。如果按所需药物体积/靶区体积比(例如临床上常见的实体肿瘤的平均体积为的30cm3)对该液体混合物进行分装(例如10ml/瓶)和封盖,即可获得可提供病变内局部作用的药物组合物剂型和规格。所获制备物即为上表中A11。使用与A11制备相同的方法,可分别从不同动物血液进行不同组合物(例如上表中制备物A12)的制备。
如将A11或A12制备中所获组织(例如血液)与其它活性成分(例如亚甲蓝)按所需量比(例如99/1)混合均匀后再进行所述再进行所述细胞破碎和所述加温,或将A11或A12制备中所获细胞破碎物半流体与其它活性成分(例如亚甲蓝)按所需量比(例如99/1)搅拌混合,然后再进行A11或A12制备中所述分装,所获制备物即为包含细胞破碎物半流体与其它活性成分的组合物。
在上述制备中,含所述细胞的非病变组织或其破碎组分均为半流体状态,而制备所得组合物均为可局部给药的半流体注射剂。
表3
以下列出几个表3中的制备试验例子。
实施例1F:获取组织(例如血液)后经现有技术(例如离心法)按所需(例如局部化学作用所需)细胞比容获得细胞浓宿物(例如人白细胞浓缩物)。如果按所需药物体积/靶区体积比(例如临床上常见的实体肿瘤的平均体积为的30cm3)对该液体混合物进行分装(例如10ml/瓶)和封盖,即可获得可提供病变内局部作用的药物组合物剂型和规格。该制备物即为上表中B1(悬浊液)。使用与B1制备相同的方法,可分别从不同动物血液进行不同组合物(例如上表中制备物B2-B4)的制备。使用B1制备中所获细胞浓宿物中含有足量血浆(例如10%以上)时,该制备物经加热(例如容器放置于蒸汽中10分钟以上),即获得上表中B5(半流体)。
如按所需(例如局部协同所需)量比将B1制备中的细胞浓缩物与协同成分(例如精氨酸)搅拌混合,然后再进行所述分装,该制备物即为上表中B12。使用与B12制备相同的方法,可分别从不同细胞浓缩物、协同成分、任选存在的其它活性成分进行不同组合物(例如上表中制备物B13-B16)的制备。
实施例1G:获取组织(例如血液)后经现有技术(例如离心法)按所需(例如局部化学作用所需)细胞比容获得细胞浓宿物(例如人白细胞浓缩物),再将其置于匀浆机中进行细胞破碎(例如转速10000-25000转/分钟,转时0.5-1分钟,匀漿次数2-10次),可获得横截面平均尺寸小于0.3mm×0.3mm的破碎细胞。如果按所需药物体积/靶区体积比(例如临床上常见的实体肿瘤的平均体积为的30cm3)对该液体混合物进行分装(例如10ml/瓶)和封盖,即可获得可提供病变内局部作用的药物组合物剂型和规格。该制备物即为上表中B6。使用与B6制备相同的方法,可分别从不同动物细胞进行不同组合物(例如上表中制备物B7-B9)的制备。
如按所需(例如局部协同所需)量比将B6制备中的破碎细胞浓缩物与协同成分(例如精氨酸)搅拌混合,然后再进行所述分装,该制备物即为上表中B17。使用与B17制备相同的方法,可分别从不同细胞浓缩物、协同成分、任选存在的其它活性成分进行不同组合物(例如上表中制备物B18-B21)的制备。
实施例1H:使用与B6制备相同的方法获得破碎细胞浓宿物(例如破碎人白细胞浓缩物),再将其置于离心机中进行离心分离。通过调整离心机转速(例如1000-25000转/分钟)、离心时间(例如0.5-30分钟)和离心分离次数(例如2-4次)可以获得不同离心程度的破碎细胞上清成分和破碎细胞沉淀成分。破碎细胞沉淀成分可按所需(例如局部化学作用所需)细胞比容配制为悬浊液。如果按所需药物体积/靶区体积比(例如临床上常见的实体肿瘤的平均体积为的30cm3)对这两个液体进行分装(例如10ml/瓶)和封盖,即可获得可提供病变内局部作用的药物组合物剂型和规格。这两个制备物即为上表中B10和B11。
如按所需(例如局部协同所需)量比将B10制备中的破碎细胞上清成分与协同成分(例如吉西它滨)搅拌混合,然后再进行所述分装,该制备物即为上表中B22。使用与B22制备相同的方法,可分别从不同细胞破碎组分、协同成分、任选存在的其它活性成分进行不同组合物(例如上表中制备物B23)的制备。
上述制备物均为可注射悬浊液或可注射半流体,均可制备为可局部给药的注射剂。
如果将上述制备物(例如A1-A22、B1-B23)放入巴斯德灭活櫃式机中进行巴斯德灭菌(60℃,48小时),即可获得灭菌液体注射剂。
如果将上述制备物冷冻干燥,即可获得可注射用冻干粉瓶。所述冷冻干燥的工艺条件例如包括:预冻条件为在预冻温度-45℃保持4小时;升华干燥条件为升温速率为0.1℃/分钟、且升至-15℃时至少保持10小时;解吸附干燥条件为30℃保持6小时。按所需动物非致病性动物细胞相关组分浓度对液体载体(例如注射用水)进行分装(例如7.5ml/瓶)和封盖,即可获得可注射用溶媒瓶。使用时,将该瓶中的无菌溶媒抽入上述可注射用冻干粉瓶中混合均匀形成液体药物(例如1.5%酿酒酵母菌破碎组分/20%氨基酸),其即可用作注射药物。
以下实施例2-8利用免疫抑制的动物模型(裸小鼠)对动物细胞相关组分可提供的治疗作用或/进行了药理研究。裸小鼠为先天性无胸腺的nude小鼠的位于第11对染色体上的隐性突变基因“nu”导入BALB/c小鼠所获小鼠。其胸腺仅有残迹或异常上皮,不能使T细胞正常分化,缺乏成熟T细胞的辅助、抑制和杀伤功能,免疫力低下。在现有技术中,荷瘤裸小鼠被广泛用于化疗而非免疫治疗的药物研究。
实施例2:免疫抑制动物模型中的药理研究及技术方案优选
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为人肝癌HepG2细胞,以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。成功建模的试验动物(瘤体平均体积151.3mm3)随机分为如下表所示的14个组,这些组进一步分为系列1(阴性对照组01、研究药物组1-6)和系列2(阴性对照组02、药物研究组7-12)。阴性对照物为生理盐水,研究药物如下表所示,均按实施例1的制备方法配置而成,除细胞相关组分均为半流体外,其它药物均为液体。其中的动物组织组分(1)为裸小鼠肉组织破碎物(如表2中A5的制备,细胞比容>55%),动物细胞组分(2)为裸小鼠血细胞浓缩物(如表3中B4的制备,细胞比容73%),动物细胞组分(3)为人血细胞浓缩物(如表3中B4的制备,细胞比容75%)。系列1中动物的用药方式均为静脉注射,系列2中动物的用药方式均为瘤内注射。各组均用药1次,注射量150μl/只。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从各系列阴性对照组计算抑瘤率,结果示于下表。
表4
组别 | 药物 | 用药方式 | 瘤重(x±s g) | 抑瘤率 |
01 | 生理盐水 | 静脉注射 | 0.237±0.139 | - |
1 | 1%5-氟尿嘧啶 | 静脉注射 | 0.147±0.075 | 37.9% |
2 | 无水乙醇 | 静脉注射 | 0.226±0.114 | 4.7% |
3 | 4×104U/ml白细胞介素-12 | 静脉注射 | 0.228±0.106 | 3.6% |
4 | 动物组织组分(1) | 静脉注射 | 0.225±0.108 | 5.1% |
5 | 动物细胞组分(2) | 静脉注射 | 0.230±0.100 | 2.8% |
6 | 动物细胞组分(3) | 静脉注射 | 0.228±0.103 | 3.6% |
02 | 生理盐水 | 瘤内注射 | 0.254±0.174 | - |
7 | 1%5-氟尿嘧啶 | 瘤内注射 | 0.146±0.080 | 42.7% |
8 | 无水乙醇 | 瘤内注射 | 0.134±0.095 | 47.3% |
9 | 4×104U/ml白细胞介素-12 | 瘤内注射 | 0.242±0.091 | 4.6% |
10 | 动物组织组分(1) | 瘤内注射 | 0.139±0.088 | 45.1% |
11 | 动物细胞组分(2) | 瘤内注射 | 0.156±0.081 | 38.7% |
12 | 动物细胞组分(3) | 瘤内注射 | 0.160±0.103 | 36.9% |
通常认为,5-氟尿嘧啶在常规用药条件下(研究组1)可提供常规化学作用,在局部给药条件下(研究组8)可提供普通局部化学作用,两者之间的药效差异主要是细胞毒动力学差异(作用于瘤内肿瘤细胞的药物的低浓度vs高浓度)。在上表中,研究组7与研究组1相比,其抑瘤率提高并未超过基于后者的动力学提高预期极限(E8/E1<200%)。这些结果也说明,同一种物质(5-氟尿嘧啶)在不同作用条件(全身性用药vs局部用药)下可以作为同一种活性成分(细胞毒药物)应用。
通常认为,高浓度(75-99%)乙醇在常规用药条件下(研究组2)可提供的化学作用为醉酒样反应,在局部给药条件下(研究组8)则可提供致瘤体组织坏死从而抑瘤的化学消融作用。在上表中,研究组2中50%以上动物在注射后5分钟以内可观察到醉酒样反应,而在实验期内未观察到基于细胞实验结果所预期的细胞毒作用结果。研究组8与研究组2相比,其抑瘤率提高远远超过基于后者的动力学提高预期极限(E9/E2>200%),显示出药理差异。实际上,这些结果也说明,同一种物质(乙醇)在不同作用条件(全身性用药vs局部用药)下可以作为不同的活性成分(醉酒剂vs化学消融剂)应用。
白细胞介素-12在临床上作为免疫增强剂应用。众所周知,既使在免疫背景正常的荷瘤动物模型中,免疫增强剂的单独使用也几乎观察不到明显的瘤体疗效。上表中研究组3和9的结果合乎免疫增强剂或许有辅助治疗作用却无治疗作用的预期。
在现有技术中,所用动物细胞相关组分均未见用作化疗活性成分,则其适用症不应当包括荷瘤裸小鼠的肿瘤治疗、尤其是其瘤体的有效破坏。在上表中,研究组4和研究组3一样未显示出明显的瘤体疗效,似乎符合其现有技术预期。出人意料的是,使用相同药物,研究组10和研究组4之间的抑瘤率差异远远超过相同药物的动力学提高预期极限(E11/E4>200%)。此外,研究组10的抑瘤率不低于研究组7和8的50%、且组与组之间的瘤重差异无统计学意义(均为P>0.05)。此外,研究组4注射后不久各出现一只动物死亡,显示动物组织相关组分的静注可能有不可忽略的安全性风险。
在上表中,研究组5和研究组4一样,未显示出明显的瘤体疗效;研究组11和研究组10一样,显示出与研究组8之间的瘤重差异无统计学意义(P>0.05)、以及抑瘤率不低于研究组8的50%。研究组6和研究组4、5一样,未显示出明显的瘤体疗效;研究组12和研究组10、11一样,显示出与研究组8之间的瘤重差异无统计学意义(P>0.05)、以及抑瘤率不低于研究组8的50%。在现有技术中,异种动物细胞相关组分具有比自体动物细胞相关组分更强的免疫作用。然而,研究组12显示的抑瘤率却并不明显高于研究组11。实际上,在研究组10-12中,任意两组之间的瘤重差异均无统计学意义(均为P>0.05)。
根据以上结果,在现有技术方案中本应当提供明显不同作用(例如免疫作用较强或较弱)从而产生不同药效的不同种属动物的不同动物细胞相关组分,却出乎预期地在本发明的技术方案显示出同类药物作用。以上研究说明,必须排除常规给药技术方案(口服、静注、等),而且仅仅使用局部、尤其是病变内给药技术方案,才有可能使得动物细胞相关组分为上述荷瘤患者提供它在现有技术中所不能提供的新功能(例如上表中E10/E4>200%)。以下实施例对该新功能进行进一步研究。
在一个实验中,试验动物为裸小鼠,随机分为2个研究组(1和2),每个研究组6只。研究组1和2的研究药物分别为化学消融剂(75%乙醇水溶液)和动物细胞相关组分(上一实验中的动物组织组分)。各组均用药1次,给药至右腿外侧肌肉块内,注射量100μl/只。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖取出裸小鼠右腿外侧肌肉块标本,切片洗滌后测量区别于正常肌肉的异常(例如坏死、结节等)区域面积。
研究组1和2的异常区域面积分别为32.27±16.05mm2和33.74±15.71mm2,两者之间的差异无统计学意义(P>0.05)。所提供的局部作用类似于乙醇,其主要是、或至少不可忽略地包括局部化学作用、尤其是类化学消融作用,且该类化学消融作用独立于常规作用(免疫作用、细胞毒作用、或瘤体血管破坏作用),其主要是、或至少不可忽略地包括药物渗透区组织破坏作用。
药理功能是药物的根本特征,任何物质缺乏了药理功能则不可能应用为药物,而老药物发现了新药理功能便可以创造性地产生与新药物一样的新应用。根据以上研究及更多的类似研究的结果,本发明技术方案中的动物细胞相关组分可提供上述局部作用。该局部作用的药理功能使得本发明组合物至少在给药区域内可提供大大超过动物细胞相关组分现有抭肿瘤技术预期的药物效应,从而成为治疗药物而非现有技术的免疫增强剂;该药理功能也使得本发明组合物可提供大大超过动物细胞相关组分现有抭肿瘤技术预期的医药用途,例如用于类化学消融局部病变组织从而治疗包含该病变组织的任何局部病变疾病。而该局部作用的实现也要求本发明组合物须具有不同于现有技术的药理特性。例如,除了上述特殊的药理方法外,还要求特殊的药理组成。
首先,本发明组合物中的动物细胞相关组分优选方案不同于现有技术的方案。例如,在现有技术中,细胞相关组分提供药理功能(免疫增强作用)的预期为:异种强于同种、同种异体强于自体、成块组织强于破碎组织、组织强于细胞。而如以上研究及更多的类似研究所示,本发明组合物中提供上述局部作用的动物细胞相关组分选择方案却超过了现有技术上述选择次序预期:可提供包括局部作用在内的所述治疗作用的任何动物细胞相关组分。更进一步,在异种和同种之间优选后者、在移植反应强和移植反应弱的同种异体之间优选后者、在同种异体和自体之间优选后者、在成块组织和破碎组织之间优选后者、在组织和细胞之间优选后者。
更多的类似研究还显示,动物细胞相关组分除了作为可提供上述局部作用的活性组分之外,其还可以任选存在地作为缓释载体与大范围的药物(几乎包括所有的化疗药物和生物药物)产生缓释协同作用。
实施例3:局部作用药理研究及其药理浓度优选
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为乳腺癌细胞(MDA-MB231),以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。成功建模的试验动物(瘤体平均体积157.1mm3)随机分为如下表所示的4个对照组(0、01-03)和6个研究组(1-6)。阴性对照物为生理盐水,阳性对照物为乙醇,研究药物如下表所示。药物均按实施例1的制备方法配置而成,其中的动物组织组分为裸小鼠肉组织破碎物(如表2中A5的制备,细胞比容>55%),动物细胞组分为裸小鼠血细胞浓缩物(如表3中B4的制备,细胞比容63%),研究药物为它们的注射用水稀释物(细胞比容如下表所示)。各组均用药1次,注射量如下表所示。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从阴性对照组计算抑瘤率,结果示于下表。
表5
组别 | 药物 | 注射量 | 瘤重(x±s g) | 抑瘤率 |
0 | 生理盐水 | 150μl | 0.241±0.193 | - |
01 | 50%乙醇 | 150μl | 0.225±0.111 | 6.8% |
02 | 75%乙醇 | 107μl | 0.185±0.099 | 23.1% |
03 | 无水乙醇 | 75μl | 0.141±0.084 | 41.7% |
1 | 动物细胞相关组分(细胞比容10%) | 300μl | 0.223±0.106 | 7.6% |
2 | 动物细胞相关组分(细胞比容20%) | 200μl | 0.190±0.061 | 21.3% |
3 | 动物细胞相关组分(细胞比容30%) | 100μl | 0.163±0.072 | 32.3% |
4 | 动物组织组分(细胞比容10%) | 300μl | 0.221±0.103 | 8.5% |
5 | 动物组织组分(细胞比容20%) | 200μl | 0.182±0.089 | 24.3% |
6 | 动物组织组分(细胞比容30%) | 100μl | 0.141±0.092 | 41.7% |
研究组01-03将相同剂量不同浓度的乙醇注射入相同体积瘤体。众所周知,乙醇只有超过一个浓度阀值(例如70%)才能作为化学消融剂应用。在上表中,研究组01的结果证实该技术方案中的乙醇类似于静注乙醇,未能作为提供化学消融作用的活性成分。研究组02与研究组01的抑瘤率差异非常大(E02/E01>200%)、而与03的差异不大(E03/E02〈200%),显示出预料中的化学消融作用。
研究组1-3将相同剂量不同浓度的动物细胞相关组分注射入相同体积瘤体。在上表中,研究组2与研究组02的抑瘤率差异不大(E3/E02=92%)、且它们之间的瘤重差异无统计学意义(P>0.05),显示出动物细胞相关组分在研究组2的技术方案中提供了所述治疗作用所需局部作用、以及该局部作用类似于阳性对照组02中的化学消融作用。研究组5也获得与研究组02类似的结果。而研究组3和6的结果进一步显示该局部作用的给药浓度依赖性。
通常认为,同一药物(例如癌细胞抑制药物、肿瘤血管抑制药物、免疫药物的同一药物)的给药剂量相同,则其药物效应相同。然而,细胞相关组分可在不同技术方案中通过提供不同药理作用而获得不同药效。例如,现有技术中,细胞相关组分例如红细胞浓缩液可以通过静脉注射实现其药理功能(例如免疫增强),可见其药理浓度并非给药浓度而是血药浓度(通常非常之低,例如0.25×10-5%),只需满足给药剂量即可提供其药理作用。因而其组合物必须组成只需其必需组分即可限定,其制剂组成于是仅受制剂学(例如高浓度制剂可以节约运输、储存成本,适当高浓度的注射可以减小注射体积从而减小时间)限制。众所周知,制剂浓度可以较为宽广,但其在本质上不同于药理作用(因而适应症)所需给药浓度。例如,静注时往往通过用前稀释来使得给药浓度远小于(例如5倍以上稀释)制剂浓度,以避免药物集中快速进入血液引起安全性风险。
根据以上研究及更多的类似研究,既使瘤内给药,相同剂量不同给药浓度的细胞相关组分的药物效应差异甚至可以超过动力学差异预期(例如上表中E2/E1>200%)。因而,本发明组合物中的细胞相关组分的给药浓度不是其它作用(例如兔疫增强)之所需,而是所述局部作用之所需,因而是药理浓度。动物细胞相关组分提供包括所述局部作用在内的治疗作用的一个必要条件是,它在组合物中的含量必须使得它的药理浓度(局部给药浓度,细胞比容)为>20%、≥30%、30-90%、优选为45-90%或75-85%。该药理浓度不仅作为一个特征限制了其组成,且其还必须作为药理条件出现在新药报批中,也必须作为应用条件出现在药物的使用说明书之中。实际上,就所述治疗作用对该给药浓度技术方案之所必需而言,本发明组合物更类似于化学消融剂,而非其它(例如癌细胞抑制药物、肿瘤血管抑制药物、或免疫药物)。
实施例4:局部作用药理研究及其药理体积优选
众所周知,不同药理的药物组合物的组分含量通常需要用不同的特征来限定。尽管常规药物组合物在给药剂量之外并无病变靶区体积依赖性的药理体积,以下实验却对此研究。
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为人胰腺癌细胞(PANC-1),以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。成功建模的试验动物(瘤体平均体积209.2mm3)随机分为5个试验组(3个对照组和2个研究组)。阴性对照物为生理盐水,阳性对照物为75%乙醇,研究药物如下表所示,均按实施例1的制备方法配置而成,其中的动物细胞相关组分(细胞比容如下表所示)分别为裸小鼠血细胞浓缩物(如表3中B4的制备)及其注射用水2倍稀释物。各组均用药1次,注射量为按下表所示的给药体积/瘤体体积比(V注/V瘤)计得。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从阴性对照组计算抑瘤率,结果示于下表。
表6
组别 | 注射浓度 | (V<sub>注</sub>/V<sub>瘤</sub>) | 瘤重(x±s g) | 抑瘤率 |
0 | (生理盐水) | 0.50 | 0.249±0.213 | - |
01 | 75%乙醇 | 0.1 | 0.230±0.111 | 7.6% |
02 | 75%乙醇 | 0.20 | 0.201±0.105 | 19.3% |
1 | 动物细胞相关组分(细胞比容75%) | 0.1 | 0.232±0.106 | 6.8% |
2 | 动物细胞相关组分(细胞比容38%) | 0.20 | 0.206±0.098 | 17.4% |
研究组01和02将不同给药体积/靶区体积比的乙醇注射入相同体积瘤体。众所周知,乙醇只有超过一个给药体积/瘤体体积比阀值(例如0.15)才能作为化学消融剂应用。在上表中,研究组01的结果证实该技术方案中的乙醇类似于静注乙醇,未能作为提供化学消融作用的活性成分。研究组02与研究组01的抑瘤率差异非常大(E02/E01>200%),显示出预料中的化学消融作用。
研究组1和2将相同剂量不同给药体积/靶区体积比的动物细胞相关组分注射入相同体积瘤体。在上表中,研究组2与研究组02的抑瘤率差异不大(E2/E02=90%)、且它们之间的瘤重差异无统计学意义(P>0.05),显示出动物细胞相关组分在研究组2的技术方案中提供了所述治疗作用所需局部作用、以及该局部作用类似于阳性对照组02中的化学消融作用。
通常认为,同一药物(例如癌细胞抑制药物、肿瘤血管抑制药物、免疫药物的同一药物)的给药剂量相同则其药物效应相同。然而,根据以上研究及更多的类似研究,即便瘤内给药较高浓度的组合物,相同剂量不同给药体积/靶区体积比的动物细胞相关组分的药物效应差异甚至可以超过动力学差异预期(例如上表中E2/E1>200%)。因而,本发明中的动物细胞相关组分给药体积/靶区体积比以经不再是药效动力学问题,而是药理问题。
现有技术中,动物细胞相关组分的药理作用可以通过其血药浓度(通常非常之低,例如0.25×10-5%)来实现,其给药体积只与该血药浓度所需剂量有关,而与瘤内靶区体积无关。因而,其组合物必须组成只需其必需组分即可限定,其制剂组成于是仅受制剂学(例如高浓度制剂可以节约运输、储存成本,适当高浓度的注射可以减小注射体积从而减小时间)限制,并没有必须给药体积/靶区体积比的限制。众所周知,临床上往往尽可能减小注射时间以提高患者顺应性。
然而,在上表中,以上研究及更多的类似研究显示,动物细胞相关组分提供所述治疗作用的一个必要条件是,它在组合物中的含量必须使得它的给药体积/靶区体积比为>0.1、0.15-1.5、优选为0.23-1.5或0.5-1.5。由该给药体积/靶区体积比确定的药理体积不仅作为一个特征限制了其组成(犹其是其含量),且该特征还必须作为组合物组成的药理条件出现在新药报批中,也必须作为其应用条件出现在药物的使用说明书之中。实际上,就该药理体积作为组分含量特征而言,本发明组合物更类似于化学消融剂,而非其它(例如癌细胞抑制药物、肿瘤血管抑制药物、或免疫药物)。
在临床上,尽管很多瘤体体积为≥30cm3,但基于免疫增强药理的药物(例如某些细胞因子)在瘤区内的给药体积普遍很低(例如≤2ml)。于是,这类药物单位制剂(例如注射液瓶、或粉针剂瓶)的规格体积通常不大。然而,本发明的组合物只能够以满足上述给药体积(或给药体积/靶区体积比)的条件给药。例如,设常用的肿瘤靶区体积为≥30cm3,给药体积/靶区体积比被选择为≥0.2,则本发明的药物组合物的所需给药体积为≥6.0cm3,则单位制剂的体积可以是6ml及其倍数体积。众所周知,药物规格实质上也可以是活性成分实现所需药理作用的常用所需含量的形式之一。例如,每片包含不同含量阿司匹林的“拜阿司匹灵”便可以有不同的适应症范围。
实施例5:免疫抑制动物模型中的共用药理研究及技术方案优选
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为肺肿瘤细胞(A549),以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。成功建模的试验动物(瘤体平均体积154.7mm3)随机分为如下表所示的18个组,这些组进一步分为系列1(阴性对照组01、研究药物组1-7)和系列2(阴性对照组02、药物研究组8-16)。阴性对照物为生理盐水,研究药物如下表所示。药物均为液体制剂,均按实施例1的制备方法配置而成,其中的动物细胞相关组分为裸小鼠血细胞浓缩物(如表3中B4的制备,细胞比容63%)。系列1中动物的用药方式均为静脉注射;系列2中动物的用药方式均为瘤内注射,其中研究究组16用药为注射动物细胞相关组分约2小时后再注射10%精氨酸。各组均每个药物用药1次,注射量为每个药物150μl/只。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从各系列阴性对照组计算抑瘤率,结果示于下表。
表7
在上表中,静脉注射时,组合物研究组5和7并未显示有治疗意义的药效,这些组合物于是并非治疗药物组合物。组合物研究组6显示出与研究组2相似药效,但未显示出明显协同作用(q=1.05)。这些结果说明,在动物细胞相关组分不能提供包括化学作用在内的局部作用时,其与化学活性物质的共用似乎不会产生局部协同作用。
瘤内注射时,组合物研究组12-16与化学消融剂阳性对照组8相比均显示有治疗意义的药效。组合物研究组12的结果显示,作为类化学消融药物的动物细胞相关组分(参考实施例2)和化学消融剂的共用并未如所预期地显示出明显协同作用(q=1.11)。组合物研究组13的结果显示,动物细胞相关组分和细胞毒药物的共用显示出明显协同作用(q=1.17)。研究组14的结果显示,动物细胞相关组分和弱局部作用化合物的共用显示出明显协同作用(q=1.28)。尤其是,研究组15与阴性对照组之间的瘤重差异有统计学意义,且该动物细胞相关组分与两种不同化学活性化合物(弱局部作用化合物和细胞毒药物)的三组分共用居然还可以在其二组分协同作用的基础上进一步协同作用(例如q=1.19)。而且,分别以动物细胞相关组分/细胞毒药物组合物(E13)与弱局部作用化合物(E10)共用、或动物细胞相关组分/弱局部作用化合物组合物(E14)与细胞毒药物(E9)共用计算的q均为>1.15。此外,研究组16的协同成分尽管与研究组14药物成分相同却不在同一个药剂之中,未显示出明显协同作用(q=0.72)。
在其它实验中,其它动物细胞相关组分(例如其它细胞组分、组织组分)与化学活性化合物的共用也有与上表一致的结果。以下实验对动物细胞相关组分的组合物、尤其是三组分组合物进行更多的研究。
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为人胃癌细胞(BGC823),以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。在本研究试验中,成功建模的试验动物(瘤体平均体积161.3mm3)随机分为为12个试验组(1个阴性对照组和11个研究组)。阴性对照物为生理盐水,研究药物1-11如下表所示。药物均按实施例1的制备方法配置而成,例如细胞组分(或组织组分)与化学活性化合物的组合物均为将后者干粉加入前者搅拌获得,其中:细胞组分为人白细胞浓缩物(细胞比容73%)、组织组分为人胎盘破碎颗粒半流体(细胞比容>55%)、协同成分1为1%亚甲蓝、协同成分2为1%5-氟尿嘧啶、协同成分3为1%亚甲蓝/1%5-氟尿嘧啶组合物。各组均用药1次,注射量150μl/只。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从阴性对照组计算抑瘤率,结果示于下表。
表8
组别 | 药物 | 瘤重(x±s g) | 抑瘤率 |
01 | 生理盐水 | 0.239±0.197 | - |
1 | 协同成分1 | 0.207±0.109 | 13.2% |
2 | 协同成分2 | 0.146±0.085 | 39.1% |
3 | 协同成分3 | 0.083±0.011 | 65.3% |
4 | 细胞组分 | 0.157±0.087 | 34.2% |
5 | 细胞组分/协同成分1 | 0.087±0.030 | 63.4% |
6 | 细胞组分/协同成分2 | 0.069±0.039 | 71.2% |
7 | 细胞组分/协同成分3 | 0.012±0.028 | 95.1% |
8 | 组织组分 | 0.148±0.064 | 38.2% |
9 | 组织组分/协同成分1 | 0.092±0.033 | 61.4% |
10 | 组织组分/协同成分2 | 0.060±0.016 | 74.8% |
11 | 组织组分/协同成分3 | 0.005±0.070 | 97.9% |
瘤内注射时,二组分组合物研究组5和6均显示出明显协同作用(q分别为1.48和1.19),三组分组合物研究组7视作细胞组分与化学活性化合物1/化学活性化合物2组合物(协同成分3)的组合物时显示出明显协同作用(q分别为1.23)。当它们分别视作细胞组分/化学活性化合物1(协同成分1)协同组合物与化学活性化合物2(协同成分2)的组合物、或细胞组分/化学活性化合物2(协同成分2)协同组合物与化学活性化合物1(协同成分1)的组合物,也都同样显示出明显协同作用(q均为>1.15)。组合物研究组9-11的结果与组合物研究组5-7完全一致。
根据以上研究及更多的类似研究的结果,动物细胞相关组分可提供的药物共用作用与使用它的给药技术方案密切相关:必须排除常规给药技术方案(口服、静注、等),而且仅仅使用瘤内给药技术方案,才有可能使得动物细胞相关组分为上述荷瘤患者提供它在现有技术中所不能提供的新的药物共用作用。以下实施例对该新功能的药物效应进行进一步研究。
在一个实验中,试验动物为裸小鼠,随机分为3个研究组(1、2和3),每个研究组6只。研究组1、2和3的研究药物分别为化学消融剂(75%乙醇水溶液)、动物细胞相关组分/弱局部作用化合物(上一实验中的细胞组分/协同成分2)、弱局部作用化合物/细胞毒药物组合物(上一实验中的细胞组分/协同成分3)。各组均用药1次,给药至右腿外侧肌肉块内,注射量100μl/只。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖取出裸小鼠右腿外侧肌肉块标本,并进行大体病理分析,切片测量区别于正常肌肉的异常(例如坏死、结节等)区域面积。
研究组1、2和3的异常区域面积分别为35.37±13.84mm2、48.37±13.91mm2和73.46±23.91mm2。该结果说明,动物细胞相关组分所提供的的局部协同作用类似于但强于乙醇,其主要是、或至少不可忽略地包括局部化学协同作用。该局部化学协同作用显示为类化学消融作用,而化学消融作用主要是、或至少不可忽略地包括独立于常规作用的皮下药物渗透区组织破坏作用(组织毒作用)。
根据以上研究及更多的类似研究的结果,本发明技术方案中的细胞相关组分可提供上述局部协同作用。该局部协同作用的药理功能使得本发明组合物至少在给药区域内可提供大大超过细胞相关组分单药的现有抭肿瘤技术预期的药物效应,也可提供大大超过细胞相关组分单药和协同成分单药的加和作用所能预期的药物效应,从而成为可提供类化学消融的治疗药物;该药理功能也使得本发明组合物可提供大大超过细胞相关组分单药或细胞相关组分/协同成分的现有现有技术预期的医药用途,例如用于类化学消融局部病变组织从而治疗包含该病变组织的任何局部病变疾病。而该局部作用的实现也要求本发明组合物须具有不同于现有技术的药理特性。例如,除了上述特殊的药理方法外,还要求特殊的药理组成。
首先,本发明组合物中的细胞相关组分优选方案超出现有技术预期,即使用实施例2中本发明的可提供所述局部作用的动物细胞相关组分的选择原则。
其次,本发明组合物中的细胞相关组分所能提供上述协同作用的协同成分的优选方案也超出现有技术协同成分方案的预期。以上研究及更多的类似研究还显示,既使将协同成分限制在化学活性化合物、甚至于可提供局部化学作用的化学活性化合物范围内,上述协同作用的共用药(协同成分)的选择仍然难以预测。出人意料地,可提供类化学消融作用的动物细胞相关组分并未向可提供化学消融作用的乙醇、却可以向弱局部作用化合物或/和药理不同的细胞毒药物提供局部协同作用。其中,所述弱局部作用化合物包括例如氨基酸类营养剂、浓度<3%的亚甲蓝类染料、浓度<7%的奎宁类药物。更进一步,动物细胞相关组分唯有与其协同成分组合在一个药剂之中给药,才有可能提供所述协同作用。
再其次,本发明组合物中的细胞相关组分所能提供上述协同作用的协同成分的优选方案也超出现有技术共用方案的预期。众所周知,在实体肿瘤领域内获得一个协同组合物(动物细胞相关组分/化学活性化合物组合物)以经超过期望。犹为难得的是,该协同组合物居然还可以与化学活性化合物形成进一步协同的组合物,即动物细胞相关组分/化学活性化合物1(例如弱局部作用化合物)/化学活性化合物2(例如细胞毒药物)组合物。这也是本发明组合物的一个优选方案。本发明组合物的一个更优选方案为动物细胞相关组分/亚甲蓝类染料/其它化学活性化合物,其中所述动物细胞相关组分的细胞比容为30-85%,所达亚甲蓝类染料的浓度为0.5-1.5%,所述其它化学活性化合物的浓度为0.1-35%。
更多的类似研究还显示,动物细胞相关半流体组分除了作为可提供上述局部协同作用的活性组分之外,其还可以任选存在地作为缓释载体与大范围的药物(几乎包括所有的化疗药物和生物药物)产生缓释协同作用。
实施例6:局部协同作用药理研究及其药理量比优选
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为人肝癌细胞(HepG2),以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。在本研究试验中,成功建模的试验动物(瘤体平均体积152.9mm3)随机分为阴性对照组和12个研究组。阴性对照物为生理盐水,研究药物的组成如下表所示包括:4种变化浓度的动物细胞相关组分单药、4种变化浓度的弱局部作用化合物单药、以及4种变化浓度的动物细胞相关组分和4种变化浓度的弱局部作用化合物的组合物,其中:弱局部作用化合物为亚甲蓝;动物细胞相关组分1-4为裸小鼠血细胞浓缩物(如表3中B4的制备,其浓度(细胞比容)变化为以注射用水稀释而来。药物均为含水液体,按实施例1的制备方法配置而成。各组均用药1次,注射量150μl/只。用药后7日对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从阴性对照组计算抑瘤率。各研究药物组抑瘤率示于下表。
表9
在上表中,组合物组9和12未显示出明显协同作用(q分别为1.05和1.04),组合物组10和11却显示出明显协同作用(q分别为1.71和1.69),其协同量比(V动物细胞相关组分/W活体染料)在69.9/0.15和4.8/3之间。这些结果说明,动物细胞相关组分提供局部化学协同作用似乎并不以弱局部作用化合物提供的局部化学作用的強弱为条件。
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为人肝癌细胞(HepG2),以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。在本研究试验中,成功建模的试验动物(瘤体平均体积162.1mm3)随机分为阴性对照组和12个研究组。阴性对照物为生理盐水,研究药物的组成如下表所示包括:4种变化浓度的动物细胞相关组分单药、4种变化浓度的弱局部作用化合物单药、以及4种变化浓度的动物细胞相关组分和4种变化浓度的弱局部作用化合物的组合物,其中:弱局部作用化合物为赖氨酸;动物细胞相关组分为裸小鼠血细胞浓缩物(如表3中B4的制备),其浓度(细胞比容)变化为以注射用水稀释而来。药物均为含水液体,按实施例1的制备方法配置而成。各组均用药1次,注射量150μl/只。用药后7日对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从阴性对照组计算抑瘤率。各研究药物组抑瘤率示于下表。
表10
在上表中,组合物组9和12未显示出明显协同作用(q分别为1.10和1.08),组合物组10和11却显示出明显协同作用(q分别为1.46和1.65),其协同量比(V动物细胞相关组分/W协同成分)在12.8/15和69/1之间。这些结果进一步说明,动物细胞相关组分提供局部化学协同作用似乎并不以弱局部作用化合物提供的局部化学作用的強弱为条件。
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为人胰腺癌细胞(PANC-1),以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。在本研究试验中,成功建模的试验动物(瘤体平均体积106.5mm3)随机分为阴性对照组和12个研究组。阴性对照物为生理盐水,研究药物的组成如下表所示包括:4种变化浓度的动物细胞相关组分单药、4种变化浓度的化疗药物单药、以及4种变化浓度的动物细胞相关组分和4种变化浓度的化疗药物的组合物,其中:化疗药物为吉西它滨;动物细胞相关组分为裸小鼠血细胞浓缩物(如表3中B4的制备),其浓度(细胞比容)变化为以注射用水稀释而来。药物均为含水液体,按实施例1的制备方法配置而成。各组均用药1次,注射量100μl/只。用药后7日对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从阴性对照组计算抑瘤率。各研究药物组抑瘤率示于下表。
表11
在上表中,组合物组9和12未显示出明显协同作用(q分别为1.02和1.04),组合物组10和11却显示出明显协同作用(q分别为1.16和1.32),其协同量比(V动物细胞相关组分/W细胞毒药物)在70/0.05和4.8/5之间。这些结果说明,动物细胞相关组分提供局部化学协同作用似乎并不以细胞毒药物提供的局部化学作用的強弱为条件。
细胞相关组分如前所述可在不同技术方案中提供不同药理作用,例如不同协同作用。根据以上研究及更多的类似研究,本发明组合物中的细胞相关组分协同量比不是其它协同作用(例如兔疫增强协同)之所需,而是所述局部协同作用之所需,因而是药理量比。在本发明的应用、组合物、或方法中,动物细胞相关组分的局部协同作用技术方案的一个必要条件是:所述动物细胞相关组分与所述化学活性化合物协同成分的药理量比(V动物细胞相关组分/W化学活性化合物)为(1.5-100)/(0.1-1),其中:当所述化学活性化合物包括细胞毒药物时,所述动物细胞相关组分和细胞毒药物的药理量比(V动物细胞相关组分/W细胞毒药物)优选为(2-100)/(0.1-1);当所述化学活性化合物包括弱局部作用化合物时,所述动物细胞相关组分和弱局部作用化合物的药理量比(V动物细胞相关组分/W弱局部作用化合物)优选为(1.5-40)/(0.1-1),其中当所述弱局部作用化合物为氨基酸营养素时,该药理量比(V动物细胞相关组分/W氨基酸营养素)优选为(1.5-7)/(0.1-1);当所述弱局部作用化合物为活体染料时,该药理量比(V动物细胞相关组分/W活体染料)优选为(2-40)/(0.1-1),其中V动物细胞相关组分为动物细胞相关组分在组合物中的细胞比容。
实施例7:局部协同作用药理研究及其药理浓度优选
在一个试验中,试验动物为裸小鼠,建模细胞为人胰腺癌细胞(PANC-1),以1×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。成功建模的试验动物(荷瘤小鼠,瘤体平均体积156.4mm3)随机分为如下表所示的1个对照组(0)和9个研究组(1-9)。阴性对照物为生理盐水,研究药物如下表所示。药物均为液体制剂,按实施例1的制备方法配置而成,其中:协同成分为精氨酸;动物细胞相关组分为人红细胞浓缩物(如表3中B7的制备),其浓度(细胞比容)变化为以注射用水稀释而来。各组均用药1次,注射量如下表所示。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从阴性对照组计算抑瘤率,结果示于下表。
表12
在上表中,研究组7-9将相同组分、相同量比和相同剂量但不同浓度的动物细胞相关组分/化学活性化合物注射入相同体积瘤体。其中,组合物组7未显示出有治疗意义的结果,然而组合物组8显示出明显协同作用(q=1.60),而研究组9的结果(q=1.20)进一步显示该协同作用的给药浓度依赖性。
通常认为,同一药物组合物(例如癌细胞抑制药物、肿瘤血管抑制药物、免疫药物的同一药物组合物)的活性成分的量比相同、给药剂量相同,则其药物共用效应相同。然而,细胞相关组分组分有可能在不同技术方案中通过提供不同共用药理作用而获得不同共用药效。现有技术中,动物细胞相关组分与其它药物的共用(假如有的话)可以通过静脉注射动物细胞相关组分实现其药理作用,可见所需的是其血药浓度(通常非常之低,例如0.25×10-5%),只需满足给药剂量和量比即可提供该药理作用。因而,其组合物必须组成只需其必需组分(例如动物细胞相关组分、协同成分、必需赋形剂、必需渗透压提高剂)和必需量比即可限定。如实施例3中所述,其制剂组成于是仅受制剂学(例如高浓度制剂可以节约运输、储存成本,适当高浓度的注射可以减小注射体积从而减小时间)限制。
根据以上研究及更多的类似研究,既使瘤内给药,相同剂量不同给药浓度的细胞相关组分的药物效应差异甚至可以超过动力学差异预期(例如上表中E2/E1>200%)。因而,本发明组合物中的细胞相关组分的给药浓度不是其它作用(例如兔疫增强)之所需,而是所述局部协同作用之所需,因而是药理浓度。细胞相关组分提供包括所述局部协同作用在内的治疗作用的一个必要条件是,它在组合物中的含量必须使得它的局部给药浓度(细胞比容)为>20%、≥30%、30-90%、优选为45-90%或75-85%。本发明的组合物必须的动物细胞相关组分给药浓度不仅作为一个特征限制了其组成,且该特征还必须作为药理条件出现在新药报批中,也必须作为应用条件出现在药物的使用说明书之中。
此外,更多的研究显示,类似于实施例4中所述,既使在本发明的给药技术方案、甚至加上本发明的量比技术方案和给药浓度技术方案中,相同剂量不同给药体积/靶区体积比的动物细胞相关组分也可以提供不同的共用共用药理作用。在本发明的应用、组合物、或方法中,细胞相关组分的局部协同作用技术方案的一个条件是:包含它的组合物的组成必须使得它的给药体积/靶区体积比为>0.1、0.15-1.5、优选为0.23-1.5或0.5-1.5。由该给药体积/靶区体积比确定的药理体积不仅作为一个特征限制了其组成(犹其是其含量),且该特征还必须作为组合物组成的药理条件出现在新药报批中,也必须作为其应用条件出现在药物的使用说明书之中。实际上,就该药理体积作为组分含量特征而言,本发明的组合物更类似于化学消融剂,而非其它(例如癌细胞抑制药物、肿瘤血管抑制药物、或免疫药物)。
实施例8:普通动物模型中病变区给药的短期单用药理/共用药理研究及技术方案优选
在一个试验中,试验动物为BALB/c小鼠,建模细胞为乳腺癌4T1细胞,以0.5×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。成功建模的试验动物(瘤体平均体积153.2mm3)随机分为如下表所示的21个组,这些组进一步分为系列1(阴性对照组01、研究药物组1-6)和系列2(阴性对照组02、药物研究组7-19)。阴性对照物为生理盐水,研究药物如下表所示,均按实施例1的制备方法配置而成。其中:动物细胞相关组分1为细胞组分1(人血细胞浓缩物,如表3中B1的制备,细胞比容73%)、动物细胞相关组分2为细胞组分2(小鼠血细胞浓缩物,如表3中B4的制备,细胞比容75%)、动物细胞相关组分3为组织组分1(人胎盘组织破碎物,如表3中A2的制备,细胞比容大于55%)、动物细胞相关组分4为组织组分2(小鼠肉组织破碎物,如表3中A5的制备,细胞比容大于55%),协同成分干粉加入动物细胞相关组分则可制备其组合物。系列1中动物的用药方式均为腹腔注射,系列2中动物的用药方式均为瘤内注射。各组均用药2次,第2次用药在第1次用药后7日,每次注射量150μl/只。第2次用药结束后7日,对动物进行安乐死,解剖后剥离出肿瘤组织测定瘤重,并从各系列阴性对照组计算抑瘤率,结果示于下表。
表13
众所周知,在实体肿瘤的药物治疗中,只有化疗药物一进入靶区就可以攻击其靶,从而在短期内即显示出化疗药效。在上表中,研究组1-3和7-9与它们在免疫抑制动物模型(实施例2和5)中的治疗结果完全一致,分别符合细胞毒作用、化学消融作用和免疫增强作用的预期。
在上表中,研究组5和6的抑瘤率均与研究组3一致,似乎符合动物细胞相关组分现有技术(非治疗用药、尤其是非化学作用治疗用药)预期。研究组11与研究组5之间的抑瘤率差异却远远超过相同药物的动力学提高预期极限(E11/E5>200%),而与研究组8(经典化学消融剂组)的抑瘤率差异却不大(E11/E8<200%%)。研究组12-14的情况与研究组11一样。组合物研究组15-18的抑瘤率明显大于它们各自的动物细胞相关组分单药组11-14,且它们均显示出明显协同作用(q分别为1.19、1.24、1.18、和1.17)。与一种化学活性化合物组成协同组合物(研究组15)的动物细胞相关组分进一步与另一种化学活性化合物(研究组7)形成的三组分组合物(研究组19)也显示出明显协同作用(q=1.22)。这些结果与实施例5中的治疗结果完全一致。
根据以上实施例2、5和本实施例研究及更多的类似研究的结果,动物细胞相关组分在普通动物模型中和在免疫抑制动物模型中一样,其可提供的短期药物作用与使用它的给药技术方案密切相关:必须排除常规给药技术方案(口服、静注、等),而且仅仅使用瘤内给药技术方案,才有可能使得动物细胞相关组分为荷瘤患者提供它在现有技术中所不能提供的新功能(例如上表中E11/E5>200%)。以下实施例对该新功能进行进一步研究。
在一个实验中,试验动物为BALB/c小鼠,随机分为4个研究组(1、2、3和4),每个研究组6只。研究组1、2、3和4的研究药物分别为化学消融剂(75%乙醇水溶液)、动物细胞相关组分(上一实验中的动物细胞相关组分1)、动物细胞相关组分/化学活性物质(上一实验中的动物细胞相关组分1/1%5-氟尿嘧啶)、和动物细胞相关组分/化学活性物质1/化学活性物质2(上一实验中的动物细胞相关组分1/1%5-氟尿嘧啶/10%精氨酸)。各组均用药1次,给药至右腿外侧肌肉块内,注射量100μl/只。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖取出小鼠右腿外侧肌肉块标本,并进行大体病理分析,切片测量区别于正常肌肉的异常(例如坏死、结节等)区域面积。
研究组1、2和3的异常区域面积分别为31.24±13.75mm2、32.84±15.61mm2和53.18±23.07mm2、75±4.21mm2。这些结果与实施例2和5中类似实验的结果高度一致。
根据以上实施例2-9的研究及更多的类似研究的结果,本发明技术方案中的动物细胞相关组分类似于高浓度乙醇,无论是对免疫抑制患者还是普遍患者,在给药后首先显示的药物效应主要是、或至少不可忽略地包括局部作用(或局部协同作用),且该局部作用(或局部协同作用)主要是、或至少不可忽略地包括局部化学作用(或局部化学协同作用)、尤其是类似于化学消融作用的局部化学作用(或局部化学协同作用),而化学消融作用主要是、或至少不可忽略地包括独立于常规作用的皮下药物渗透区组织破坏作用。该局部作用(或局部协同作用)的药理功能使得本发明组合物至少在任何患者给药区域内可提供大大超过细胞相关组分现有技术预期的药物效应,从而成为治疗药物而非现有技术的免疫增强剂;该药理功能也使得本发明组合物可提供大大超过细胞相关组分现有技术预期的医药用途,例如用于类化学消融局部病变组织从而治疗包含该病变组织的任何局部病变疾病。更进一步,本发明的组合物可用于现有技术中的抗局部病变疾病药物(例如细胞毒药物、抗病毒药物、抗细菌药物、血管抑制药物、免疫药物等)所难以治疗的局部病变(例如瘤体)的治疗。例如,相对于这些主要基于抗病原体的抗局部病变疾病药物,本发明的组合物可以作为组织毒药物用于治疗上述适应症。
该局部作用(或局部协同作用)的实现也要求本发明组合物须具有不同于现有技术的药理特性。除了上述特殊的药理方法外,还要求特殊的药理组成,例如其在实施例2-7中的药理组成优选技术方案(例如细胞相关组分的选择、协同成分的选择、药理量比、药理浓度、药理体积等等)。
实施例9:普通动物模型中病变区给药的中长期单用药理/共用药理研究及技术方案优选
在一个试验中,试验动物为BALB/c小鼠,建模细胞为乳腺癌4T1细胞,以0.5×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。成功建模的试验动物(瘤体平均体积115.6mm3)随机分为1个阴性对照组(01)和16个药物研究组(1-16)。阴性对照物为生理盐水,研究药物如下表所示。药物均按实施例1的制备方法配置而成,其中的动物细胞相关组分1为人白细胞浓缩物(细胞比容75%)、动物细胞相关组分2为小鼠血细胞浓缩物(细胞比容75%)、动物细胞相关组分3为小鼠肉组织破碎物(细胞比容>55%),各动物细胞相关组分与协同成分的组合物均为将协同成分干粉加入动物细胞相关组分中搅拌均匀而成,各药物的稀释物为1体积药物加入2体积注射用水的3倍稀释物。各组均注射用药2次,第2次给药为第一次给药起第7日行瘤体体积测定前。研究组13和14每次用药量均为300μl/只,其它各组每次用药量均为100μl/只。研究组15为右前肢腋下给药,其它各组均为瘤内给药。研究组16分别第一次瘤内给药动物细胞相关组分3/20%耐氨酸,第二次瘤内给药动物细胞相关组分1,其它各组两次给药均为同一药物。自第2次给药第7和21日分别测量各组瘤体体积(V7、V21),并从阴性对照组计算相对肿瘤增殖率(R),结果示于下表。
表14
在上表中,在第7日,研究组1-12的药物效应与上一实施例表中研究组7-18完全一致,进一步说明本发明技术方案中的动物细胞相关组分在给药后即不可避免地、甚至于可能主要是提供所述局部作用(研究组5-7)或局部协同作用(研究组8-12)。研究组13和14给药浓度均未满足其药理优选浓度,以至于分别与研究组5和6(给药组分相同剂量相同)的药效差异非常大(均为>200%)。研究组15给药方式未满足局部协同作用所需给药方式,以至于其与研究组8(给药药物完全相同)药效差异非常大(E8/E15>200%)。研究组16的第一次给药药物与研究组11相同,显示出与研究组11相似的局部协同作用。
众所周知,化疗药物效应动力学的特征为药物在攻击在、药物代谢后攻击不再。上表中第21日的结果与第7日比较,研究组1和2的相对肿瘤增殖率上升较大(例如21日R/7日R均大于1.50),显示短期药物效应的效果明显减小。研究组3的相对肿瘤增殖率仍旧很高,符合单独使用免疫增强剂并不显示明显中期疗效的预期。研究组5-7的相对肿瘤增殖率上升较小(例如21日R/7日R均小于1.25),明显不同于研究组1-3。研究组8-12的相对肿瘤增殖率上升也较小(例如21日R/7日R均小于1.25),类似于研究组5-7。研究组13-15的相对肿瘤增殖率仍旧很高,类似于研究组3。研究组16的相对肿瘤增殖率上升也较小,类似于研究组11。
上述结果显示,本发明技术方案的组合物研究组5-12和16显示出研究组1-3所未显示的中长期作用、即与化学作用或免疫增强作用不同的新药理。按照研究组5-12、16与研究组13-15的显著差异,该新药理显然与本发明技术方案中的动物细胞相关组分所提供的局部作用或局部协同作用有关。
以上研究及更多类似研究的结果说明,病变内给药本发明的组合物后的短期作用主要为、或至少不可忽略地包括局部作用(或局部协同作用),其中长期疗效则主要是、或至少不可忽略地包括该局部作用(或局部协同作用)产生的次生作用,而次生作用主要是、或至少不可忽略地包括免疫作用(例如疫苗作用)。于是,本发明的组合物完全不同于经典免疫药物(例如疫苗),其中起抗原作用的物质很可能主要是、或至少不可忽略地包括给药后产出的原位免疫物质(例如原位抗原)。除此之外,动物细胞相关组分如同其它外源物质一样还可能具有非特异性抗原作用,该作用也可能加強该原位疫苗作用的药效。
根据以上研究,包括该局部作用(或局部协同作用)及其次生免疫作用的化学/免疫药理功能使得本发明组合物可提供大大超过细胞相关组分现有技术预期的药物效应,从而成为治疗药物而非现有技术的免疫增强剂;该药理功能也使得本发明组合物可提供大大超过细胞相关组分现有技术预期的医药用途,例如用于任何局部病变疾病,优选为类化学消融局部病变组织及其次生免疫作用相关的机体免疫刺激可治疗的局部病变疾病。更进一步,本发明的组合物可用于现有技术中的抗局部病变疾病药物(例如细胞毒药物、抗病毒药物、抗细菌药物、血管抑制药物、免疫药物等)所难以治疗的局部病变疾病(例如实体肿瘤)的治疗。例如,相对于这些主要基于抗病原体的抗局部病变疾病药物,本发明的组合物可以作为组织毒/免疫药物用于治疗上述适应症。
该局部作用(或局部协同作用)及其次生免疫作用的实现也要求本发明组合物须具有不同于现有技术的药理特性。除了上述特殊的药理方法外,还要求特殊的药理组成,例如其在实施例2-8中的药理组成优选技术方案(例如细胞相关组分的选择、协同成分的选择、药理量比、药理浓度、药理体积等等)。
实施例10:普通动物模型中病变区外局部给药的单用药理/共用药理研究及技术方案优选
在一个试验中,试验动物为BALB/c小鼠,建模细胞为乳腺癌4T1细胞,以0.25×106个细胞/只在动物右侧腋部皮下进行移植瘤建模。建模后5日,目测明显出瘤的试验动物随机分为1个阴性对照组(01)和11个药物研究组(1-11),每组10只动物。阴性对照物为生理盐水,药物研究组1-11的研究药物如下表所示,均按实施例1的制备方法配置而成,包含细胞相关组分的组合物除稀释物外均为半流体外,其它药物均为液体。其中的动物细胞相关组分1为裸小鼠肉组织破碎物(如表2中A5的制备,细胞比容>55%)、动物细胞相关组分2为小鼠血细胞浓缩物(细胞比容75%),各动物细胞相关组分与协同成分的组合物均为将协同成分干粉加入动物细胞相关组分中搅拌均匀而成,各药物的稀释物为1体积药物加入3体积注射用水的4倍稀释物。除研究组11以外,其余各组均注射用药2次,第2次给药为第一次给药起第7日行瘤体体积测定前。研究组9和10每次用药量均为400μl/只,其它组每次用药量均为100μl/只。研究组11第一次瘤内给药动物细胞相关组分1/10%精氨酸,同时在动物左侧腋下皮内给药动物细胞相关组分1,其它各组两次给药均为同一药物。自研究组1-10第2次给药第7和21日分别测量各组瘤体体积(V7、V21),并从阴性对照组计算相对肿瘤增殖率(R),结果示于下表。
表15
在上表中,在第7日,研究组1和2的结果分别符合细胞毒药物和化学消融剂的药理预期,研究组3的结果符合免疫增强剂既使进入体内也不提供有治疗意义的作用的预期,研究组5-10的结果类似于研究组2或3,研究组11的结果符合类化学消融药物瘤内局部给药有疗效的预期。这些结果进一步说明,本发明组合物(研究组5-8)的短期药效的主要成因是局部作用(或局部协同作用),而非其它作用(例如免疫作用)。这种局部作用(或局部协同作用)于瘤内时(研究组11)可以显示出短期疗效、于瘤外(研究组5-8)则与不符合本发明组合物技术方案(药理浓度)的组合物(研究组9和10)一样显示不出短期疗效。
在上表中,第21日的结果与第7日比较,研究组1的化疗效应明显减小,研究组2和3依然观察不到治疗效应,研究组9和10仍然类似于研究组2和3。出人意料地,研究组5-8的相对肿瘤增殖率均有明显下降(例如研究组5相对肿瘤增殖率从97%下降为78%),显示出有别于研究组1-3、9和10的一种新药理作用。研究组11的相对肿瘤增殖率仍然在一个疗效较高的水平,显示动物细胞相关组分提供的瘤内局部协同作用及其次生作用(例如原位疫苗作用)和上述新药理作用结合使用的药物效应。
在上表中,研究组5与9、7与10之间的用药差异在于给药浓度,而该给药浓度又是实施例2-10中的包括局部作用(或局部协同作用)的短期作用的必需条件。研究组5和7(以及6和8)的中期药物效应显示的新药理作用于是应当包括、甚至于可能主要是该短期作用的次生作用。以下实施例对该短期作用进行进一步研究。
在一个实验中,试验动物为BALB/c小鼠,随机分为2个研究组(1和2),每个研究组6只。研究组1和2的研究药物分别为上一实验中的动物细胞相关组分1和动物细胞相关组分1/10%精氨酸。各组均用药1次,给药至右前腿腋下皮内,注射量100μl/只。用药后7日,对动物进行安乐死,解剖取出小鼠右前腿腋下皮内节结标本,切片冲洗后测量区别于正常肌肉的异常(例如坏死、结节等)区域(例如结节横切面)面积。
研究组1、2的异常区域面积分别为37.27±12.14mm2和47.14±12.26mm2。这些结果与实施例9中类似实验的结果高度一致。这些结果说明,本发明技术方案中的动物细胞相关组分类似于高浓度乙醇,在局部给药后首先显示的药物效应主要为局部作用(或局部协同作用),且该局部作用(或局部协同作用)主要是、或至少不可忽略地包括局部化学作用(或局部化学协同作用)、尤其是类似于化学消融作用的局部化学作用(或局部化学协同作用),而化学消融作用主要是、或至少不可忽略地包括独立于这些作用的皮下药物渗透区组织破坏作用。这些局部作用(或局部协同作用)与实施例2、5和9中的瘤内给药显示的局部作用(或局部协同作用)完全一致。
以上研究及更多的类似研究的结果说明,瘤外局部(优选为免疫有利的局部)给药本发明的组合物后的短期作用主要为、或至少不可忽略地包括局部作用(或局部协同作用),其中长期疗效则主要是、或至少不可忽略地包括该局部作用(或局部协同作用)产生的次生作用,而次生作用主要是、或至少不可忽略地包括疫苗作用。于是,可提供瘤外疫苗作用的本发明的组合物完全不同于经典疫苗,其中起抗原作用的物质很可能主要是、或至少不可忽略地包括给药后产出的结节性抗原。除此之外,动物细胞相关组分如同其它外源物质一样还可能具有非特异性抗原作用,该作用也可能加強该疫苗作用的药效。
根据以上研究,包括该次生免疫作用的免疫药理功能使得本发明组合物可提供大大超过细胞相关组分现有技术预期的药物效应,从而成为治疗药物(类疫苗)而非现有技术的免疫增强剂;该药理功能也使得本发明组合物可提供大大超过细胞相关组分现有技术预期的医药用途,例如用于任何局部病变疾病,优选为与局部作用(或局部协同作用)的次生免疫作用相关的机体免疫刺激可治疗的局部病变疾病。更进一步,本发明的组合物可用于现有技术中的抗局部病变疾病药物(例如细胞毒药物、抗病毒药物、抗细菌药物、血管抑制药物、免疫药物等)所难以治疗的局部病变疾病(例如实体肿瘤)的治疗。例如,相对于这些主要基于抗病原体的抗局部病变疾病药物,本发明的组合物可以作为免疫药物(类疫苗)用于治疗上述适应症。
该次生免疫作用的实现也要求本发明组合物须具有不同于现有技术的药理特性。除了上述特殊的药理方法外,还要求特殊的药理组成,例如其在实施例2-8中的局部作用(或局部协同作用)药理组成优选技术方案(例如细胞相关组分的选择、协同成分的选择、药理量比、药理浓度、药理体积等等)。例如,尽管尚无给药体积和瘤内靶区体积关系的发现,但其给药体积的一个必要条件显然是形成作为抗原所需的结节,例如:当瘤体总体积≥2.85cm3,用药量为大于0.01ml/kg人、0.015-0.25ml/kg人、优选为0.020-0.25ml/kg人,这就要求本发明的用于瘤外局部注射的动物细胞相关组分(或包含它的药物组合物)的给药体积白>2倍、或3-100倍、优选5-100倍(例如≥1ml、或1.5-50ml)于常规疫苗体积给药体积。
利用实施例1方法制备的一些其它本发明的组合物,在上述各实施例的类似实验中也可以获得类似结果。
除本文中描述的那些外,根据前述描述,本发明的多种修改对本领域技术人员而言会是显而易见的。这样的修改也意图落入所附权利要求书的范围内。本申请中所引用的各参考文献(包括所有专利、专利申请、期刊文章、书籍及任何其它公开)均以其整体援引加入本文。
Claims (10)
1.动物非致病性细胞相关组分在制备用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物中的应用。
2.根据权利要求1的应用,其中所述药物组合物还可任选地包含能够与所述动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述动物非致病性细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
3.一种用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物,其包含作为治疗活性成分的动物非致病性细胞相关组分。
4.根据权利要求3的药物组合物,其还包含能够与所述动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述动物非致病性细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
5.一种用于治疗局部病变疾病的可局部给药的药物组合物,其包含作为治疗活性成分的动物非致病性细胞相关组分以及能够与该动物非致病性细胞相关组分产生协同作用的化学活性成分,并且所述细胞相关组分与所述化学活性成分的量比(细胞比容/化学活性成分浓度)为(1.5-100)/(0.1-1)。
6.根据权利要求1-5之一的应用或药物组合物,其中所述动物非致病性细胞相关组分在该药物组合物中的浓度(细胞比容)为>20%、≥30%、30-90%、优选为45-90%或75-85%。
7.根据权利要求2或4-6之一的应用或药物组合物,其中所述化学活性成分选自包括弱局部作用化合物和/或细胞毒药物之一种或多种,以及其中当所述化学活性化合物包括细胞毒药物时,所述动物非致病性细胞相关组分和细胞毒药物的量比(V动物细胞相关组分/W细胞毒药物)为(2-100)/(0.1-1);当所述化学活性化合物包括弱局部作用化合物时,所述动物非致病性细胞相关组分和弱局部作用化合物的量比(V动物细胞相关组分/W弱局部作用化合物)为(1.5-40)/(0.1-1)。
8.药物试剂盒,其包括一个或多个装有根据权利要求3-7之一所述的药物组合物的单独容器。
9.根据权利要求1-8之一的应用、药物组合物或试剂盒,其中所述局部病变疾病包括肿瘤、非瘤肿大、局部炎症、分泌腺功能异常和皮肤病,其中所述肿瘤包括恶性和非恶性实体肿瘤。
10.根据权利要求9的应用、药物组合物或试剂盒,其中所述实体肿瘤包括以下肿瘤及其次生肿瘤之一种或多种:乳腺癌、胰腺癌、甲状腺癌、鼻咽癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、肠癌、口腔癌、食道癌、胃癌、喉癌、睾丸癌、阴道癌、子宫癌、卵巢癌、脑瘤、淋巴瘤。
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