CN114343183A - 一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明提出一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,该组合物为沙棘多酚、活性多糖、膳食纤维及益生菌的组合物;活性多糖包含山楂多糖、枸杞多糖;膳食纤维包含芹菜膳食纤维、甘薯膳食纤维;益生菌包含两双歧杆菌、乳双歧杆菌,这种组合物用于调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘有非常显著的作用,它们的药效作用比单一的使用活性多糖或膳食纤维或益生菌更好,以便更好的改善肠道功能。
Description
技术领域
本发明涉及药物配方技术领域,尤其涉及一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物。
背景技术
便秘是指以排便次数减少,同时伴排便困难,粪便硬结为特征的临床疾病,多发于老年人。长期的便秘会导致痔疮、肛裂及直肠炎等疾病的发生,严重时可诱发心脑疾病,也会使体内毒素蓄积,而使肝脏的功能降低,最终导致代谢性疾病的发生。临床上治疗便秘的药物有很多,主要包括化学药物和中药复方制剂。化学药物主要有刺激性泻药、润滑性泻剂、高渗性泻剂等。这些化学药物对肠道均有较强的刺激性,长期使用可导致病情加重,易导致胃肠道功能紊乱,且停药后容易复发。与化学药物相比,中药复方制剂治疗便秘具有更好地疗效,不仅能改善肠道功能,而且可以减少便秘的复发。
益生菌是一类定植于肠道对宿主有益的活性微生物,可有效促进肠道蠕动,以快速缓解便秘状态。此外,与药物治疗便秘相比,长期使用益生菌不良反应发生概率极低。
对中药天然产物进行提取、分离,用于便秘的治疗,是开发促进肠蠕动、抗便秘等功能食品、药品的重要途径,以便更好的改善肠道,虽然水果提取物、活性多糖、膳食纤维及益生菌均报道,但它们间组合在一起是否可以达到更理想的效果,是否有协同作用还未有过研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,通过构建小鼠便秘模型,采用活性追踪方法提取中药天然产物活性成分,优化提取工艺,来发挥其协同时最佳的抗便秘功效。
本发明为解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,该组合物为沙棘多酚、活性多糖、膳食纤维及益生菌的组合物;
活性多糖包含山楂多糖、枸杞多糖;膳食纤维包含芹菜膳食纤维、甘薯膳食纤维;益生菌包含两双歧杆菌、乳双歧杆菌。
进一步,组合物的制备方法为包括如下步骤:
1)山楂多糖;
山楂多糖溶解于10-20倍重量的水,溶液用透析袋孔径为1kD、3kD、5kD、10kD透析,分别收集透析液,冻干,基于构建的小鼠便秘模型评价不同分子量山楂多糖的促进肠蠕动及抗便秘的活性;
实验结果显示,分子量在1-3kD之间的山楂多糖抗便秘及促进肠蠕动的活性最佳;
2)枸杞多糖;
枸杞多糖溶解于10-20倍重量的水,溶液用透析袋孔径为1kD,3kD,5kD,10kD透析,收集透析液,冻干,基于构建的小鼠便秘模型评价不同分子量枸杞多糖的促进肠蠕动及抗便秘的活性;
实验结果显示,分子量在3-5kD之间的枸杞多糖抗便秘及促进肠蠕动的活性最佳;
3)沙棘多酚;
沙棘提取物经硅胶柱层析,收集石油醚洗脱组分,乙酸乙酯洗脱组分,乙醇洗脱组分,分别冻干基于构建的小鼠便秘模型评价不同组分的促进肠蠕动、抗便秘活性,活性最佳组分经HPLC分离,分离获得的活性多酚进一步基于构建的小鼠便秘模型评价不同组分的促进肠蠕动及抗便秘的活性;
实验结果显示,沙棘多酚-1抗便秘及促进肠蠕动的活性最佳;
4)益生菌筛选:
基于构建的小鼠便秘模型评价不同益生菌的促进肠蠕动、抗便秘活性;
实验结果显示,两双歧杆菌、乳双歧杆菌促进肠蠕动、抗便秘活性最佳;
5)组合物制备:
将分子量在1-3kD之间的山楂多糖和分子量在3-5kD之间的枸杞多糖与芹菜膳食纤维、甘薯膳食纤维、沙棘多酚-1混匀,加去离子水调成固含量为10-15%的浆状液体,经过冻干制成组合物粉末,组合物粉末加两双歧杆菌、乳双歧杆菌,混匀,再次冻干。
进一步,该组合物为肠道制剂。
进一步,制剂包括硬胶囊、软胶囊、片剂、冲剂口服溶液、混悬剂、乳化剂。
进一步,所述组合物中的分子量在1-3kD之间的山楂多糖和分子量在3-5kD之间的枸杞多糖、菜膳食纤维、甘薯膳食纤维、两双歧杆菌、乳双歧杆菌、沙棘多酚-1的质量比为1:1~10:1~10:1~10:0.005~0.1:0.005~0.1:0.005~0.1。
进一步,组合物中的在1-3kD之间的山楂多糖和分子量在3-5kD之间的枸杞多糖、菜膳食纤维、甘薯膳食纤维、两双歧杆菌、乳双歧杆菌、沙棘多酚-1的质量比为1:1:5:5:0.01:0.01:0.005。
进一步,所述沙棘多酚为沙棘多酚-1,如式I所示
进一步,所述两双歧杆菌、乳双歧杆菌为益生菌活菌冻干粉。
进一步,该组合物应用在促进肠蠕动及抗便秘的食品或保健品或药物中。
本发明的优点在于:
本发明的有益效果在于:本发明通过小鼠便秘动物模型活性评价、优化分离、提取的方法进一步富集具有调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性的活性多酚、不同分子量大小的山楂多糖、枸杞多糖最佳活性组分;通过小鼠便秘模型活性评价的方法进一步评价具有调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性的益生菌;然后将沙棘多酚-1、2种活性多糖、2种益生菌活菌冻干粉复配芹菜膳食纤维、甘薯膳食纤维得到组合物。将这种组合物用于调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘有非常显著的作用,它们的药效作用比单一的使用活性多糖或膳食纤维或益生菌更好,以便更好的改善肠道功能。
附图说明
图1为本发明沙棘多酚-1的HR-ESI-MS图;
图2为本发明沙棘多酚-1的1H NMR图;
图3为本发明沙棘多酚-1的13C NMR图;
图4为本发明沙棘多酚-1的DEPT-135图;
图5为本发明沙棘多酚-1的HMBC图;
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解,下面结合图示与具体实施例,进一步阐述本发明。
实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规技术或知识所建议的条件。
一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,原料包括:沙棘多酚、山楂多糖、枸杞多糖、芹菜膳食纤维、甘薯膳食纤维、两双歧杆菌、乳双歧杆菌。
山楂多糖制备方法
取山楂多糖100g,加入1000g的水溶解山楂多糖,山楂多糖溶液用孔径为(1kD,3kD,5kD,10kD)透析袋进行透析,分别收集透析液,冻干。基于构建的小鼠便秘模型评价不同分子量山楂多糖调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性。
实验结果显示,分子量在1-3kD之间的山楂多糖调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性最佳。
枸杞多糖的制备方法:
取枸杞多糖100g,加入1000g的水溶解枸杞多糖,枸杞多糖溶液用孔径为(1kD,3kD,5kD,10kD)透析袋进行透析,分别收集透析液,冻干。基于构建的小鼠便秘模型评价不同分子量枸杞多糖调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性。
实验结果显示,分子量在3-5kD之间的枸杞多糖调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性最佳。
沙棘多酚的分离制备、鉴定:
沙棘提取物20g,经硅胶(200-300目)柱层析,收集石油醚洗脱组分(2000mL),乙酸乙酯洗脱组分(4000mL),乙醇洗脱组分(4000mL),分别冻干。基于构建的小鼠便秘模型评价不同组分的促进肠蠕动、抗便秘活性。乙醇洗脱组分促进肠蠕动、抗便秘活性,最佳,进一步经HPLC分离,分离获得的活性多酚进一步基于构建的小鼠便秘模型评价不同组分的促进肠蠕动、抗便秘活性。
实验结果显示,沙棘多酚-1调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性最佳。
沙棘多酚-1:
淡黄色油状物,薄层层析后,香草醛-浓硫酸加热反应显红色。
HR-ESI-MS显示准分子离子峰m/z 359.1825[M+Na]+(C19H28O5Na,理论计算值:359.1828)确定分子式为C19H28O5,不饱和度为6,如图1所示。
1H NMR(400MHz,CDCl3)谱中共显示27个质子信号。该化合物含有1个烯烃质子信号δH5.21(1H,t,J=6.9Hz);3组亚甲基质子信号[δH3.33(2H,d,J=6.9Hz),2.59(2H,d,J=6.8Hz),1.76(2H,overlapped)];6个甲基质子信号[δH 3.69(3H,s),2.47(3H,s),1.83(3H,s),1.76(3H,s),1.30(6H,s)],其中2个是连氧甲基信号[δH3.69(3H,s),2.47(3H,s)],如图2所示。
如图3所示,13C NMR(100MHz,CDCl3)谱中共出现19个碳信号,结合DEPT-135谱可知其分别为9个季碳、1个次甲基、3个亚甲基和6个甲基。如图4所示,低场区可见δC 202.6的1个酮羰基信号;δC122.3,135.8为1对双键碳信号;δC 155.0,154.1,150.8,118.3,111.0,105.3可推测为苯环的碳信号。根据以上数据,推测化合物AO-17可能是酰基间苯三酚类化合物。
在HMBC谱中,可以观察到H-1″(δH3.33)与C-4′(δC155.0),C-5′(δC111.0),C-6′(δC154.1)有相关,可推断该异戊二烯基片段连接在C-5′位。同时还可以观察到,H-1″′(δH2.59)与C-2′(δC150.8),C-3′(δC105.3),C-4′(δC155.0)有相关,可证实3-甲基-3-丁醇片段连接在C-3′位,如图5所示。
综合以上数据,证实了苯环上的取代基团的结构,从而推断出该化合物结构。结合1D和2D NMR谱信息进行了全归属。综合以上的结构解析,鉴定化合的结构如式I所示,
1D and 2D NMR data of沙棘多酚-1(CDCl3,δin ppm)
益生菌的制备方法:
基于构建的便秘小鼠模型评价多种益生菌调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性。
实验结果显示,两双歧杆菌、乳双歧杆菌调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性最佳。
沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物制备方法:
配方:1-3kD山楂多糖1g,3-5kD枸杞多糖1g,芹菜膳食纤维5g,甘薯膳食纤维5g,两双歧杆菌0.05g,乳双歧杆菌的质量0.05g,沙棘多酚-1 0.005g。
进行沙棘多酚-1、活性多糖的制备及益生菌的筛选,将制备好的沙棘多酚-1、活性多糖复配膳食纤维及益生菌,按照上述配方比进行混合均匀,制得沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物。
沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘的应用。
将小鼠随机分为空白对照组、模型组、酚酞(0.05g/kg)组及活性多糖组(分子量在1-3kD之间的山楂多糖与分子量在3-5kD之间的枸杞多糖质量比为1:1,0.5g/kg)、膳食纤维组(芹菜膳食纤维与甘薯膳食纤维质量比为1:1,0.5g/kg)和益生菌组(两双歧杆菌与乳双歧杆菌质量比为1:1,0.05g/kg)及沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物组(0.5g/kg),每组10只。第1~4天,空白对照组以常规饲料喂养,模型组和各给药组喂食大米并禁水建立便秘模型。第5~8天,各组以常规饲料喂养,各给药组灌胃相应药物(10mL/kg),空白对照组和模型组灌胃等剂量的生理盐水,1次/d。第8天,各组小鼠灌胃碳末混悬液(10mL/kg)再灌胃相应药物,记录每只小鼠首粒黑便的时间,6h内排便总数和黑便数,测定粪便含水率。小鼠眼球取血1.5mL,4℃、3500r/min离心10min,取上层血清,按照ELISA试剂盒测定血清中胃动素、内皮素、胃泌素、小鼠多肽YY(PYY)、胰高血糖素样肽(GLP-1)、丙二醛(MDA)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量。
分离肠系膜,剪取肠管,测量小肠总长度和碳末推进长度,并计算胃排空率和小肠推进率。
胃排空率=1-(胃全质量-胃净质量)/0.6;
小肠推进率=墨汁推进长度/小肠总长度。
表1沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物对便秘小鼠粪便参数的影响
如表1所示,与空白对照组比较,模型组小鼠体质量显著降低(p<0.01),小鼠活动次数减少、毛色暗淡,首粒黑便时间显著增加(p<0.01),6h排便数与黑便数明显减少(p<0.01),粪便含水率显著降低(p<0.01),表明失水燥结模型制备成功。与便秘模型组比较,沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物给药组小鼠首粒黑便时间显著降低(p<0.01),粪便含水率显著升高(p<0.01);沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物组小鼠6h排便数明显增加(p<0.01);沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物组小鼠黑便数明显增加(p<0.01)。
表2沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物对便秘小鼠胃肠运动的影响
由表2可看出,与空白对照组比较,模型组小鼠胃排空率和碳末推进率显著降低(p<0.01);与便秘模型组比较,各给药组小鼠胃排空率和碳末推进率均升高,表明沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物可以改善肠道功能、加速便秘小鼠胃排空和肠道蠕动。其中,沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物用于治疗比单独使用活性多糖或膳食纤维或益生菌效果更显著。
表3沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物对便秘小鼠血清中胃动素、内皮素、胃泌素的影响
由表3可看出,与空白对照组比较,模型组小鼠血清中胃动素、内皮素和胃泌素水平显著降低(p<0.01);与便秘模型组比较,各给药组小鼠血清中胃动素、内皮素和胃泌素水平升高(p<0.01),表明沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物能够通过调节血清因子水平,从而缓解便秘。其中,沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物用于治疗比单独使用活性多糖或膳食纤维或益生菌效果更显著。
表4沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物对便秘模型小鼠血清脂质水平的影响
由表4可看出,与空白对照组小鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)等脂质水平显著增加(p<0.05)。沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物组小鼠比便秘模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平降低(p<0.05),HDL水平增高(p<0.05)。结果表明,沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物可以有效控制便秘小鼠TC、LDL-C、TG水平,可以升高HDL-C水平,从而发挥调控肠道功能,发挥抗便秘功效。
表5沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物对便秘模型小鼠PPY、GLP-1、MDA、GSH-PX的影响
由表5可看出,与空白对照组相比,便秘模型组PYY、GSH-PX、GLP-1含量显著下降,而MDA含量显著升高,干扰了小鼠胰岛素的分泌。而通过将沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌进行组合用于治疗,与便秘模型组相比,PYY、GSH-PX、GLP-1含量显著增加,MDA含量显著降低。且沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌进行组合用于治疗比单独使用膳食纤维或活性多糖或益生菌效果显著。
本发明沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维、益生菌及沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物的慢性毒性试验。
1、试验动物:昆明种小鼠,体重21±2g,由广东省实验动物中心提供
2、药物:本发明的沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维、益生菌及沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物。
3、试验方法:根据国家药品监督管理局颁布修订的“中药新药研究技术要求”,对本发明的沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维、益生菌及沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物进行慢性毒性实验。因受药物浓度及体积限制,无法测定LD50,故进行最大给药量实验。取昆明种小鼠20只,雌性各半,分别灌胃给予沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维、益生菌及沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物1g/mL,每只0.8mL,即小鼠的最大灌胃体积用药后观察小鼠活动状态、饮食、粪便、呼吸、体重及死亡情况,连续观察14d。
4、试验结果:各组小鼠灌胃给药后生长良好,体重增加,行为正常,均未见死亡及明显反应。将动物处死后,肉眼观察各主要脏器无异常现象。
结果表明,本发明的沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维、益生菌及沙棘多酚-1、活性多糖、膳食纤维及益生菌组合物最大剂量口服应用,对动物无明显损害,未发现对机体产生的毒性反应,是一种安全可靠的药物(膳食补充剂)。
本发明通过小鼠便秘动物模型活性评价、优化分离、提取的方法进一步富集具有调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性的活性多酚、不同分子量大小的山楂多糖、枸杞多糖最佳活性组分;通过小鼠便秘模型活性评价的方法进一步评价具有调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘活性的益生菌;然后将沙棘多酚-1、2种活性多糖、2种益生菌活菌冻干粉复配芹菜膳食纤维、甘薯膳食纤维得到组合物。将这种组合物用于调控肠道功能、促进肠蠕动、抗便秘有非常显著的作用,它们的药效作用比单一的使用活性多糖或膳食纤维或益生菌更好。
以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点,其目的在于让本领域的技术人员了解本发明的内容并加以实施,并不能以此限制本发明的保护范围,凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰,都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (9)
1.一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,其特征在于,该组合物为沙棘多酚、活性多糖、膳食纤维及益生菌的组合物;
活性多糖包含山楂多糖、枸杞多糖;膳食纤维包含芹菜膳食纤维、甘薯膳食纤维;益生菌包含两双歧杆菌、乳双歧杆菌。
2.根据权利要求1所述的一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,其特征在于,组合物的制备方法为包括如下步骤:
1)山楂多糖;
山楂多糖溶解于10-20倍重量的水,溶液用透析袋孔径为1kD、3kD、5kD、10kD透析,分别收集透析液,冻干,基于构建的小鼠便秘模型评价不同分子量山楂多糖的促进肠蠕动及抗便秘的活性;
实验结果显示,分子量在1-3kD之间的山楂多糖抗便秘及促进肠蠕动的活性最佳;
2)枸杞多糖;
枸杞多糖溶解于10-20倍重量的水,溶液用透析袋孔径为1kD,3kD,5kD,10kD透析,收集透析液,冻干,基于构建的小鼠便秘模型评价不同分子量枸杞多糖的促进肠蠕动及抗便秘的活性;
实验结果显示,分子量在3-5kD之间的枸杞多糖抗便秘及促进肠蠕动的活性最佳;
3)沙棘多酚;
沙棘提取物经硅胶柱层析,收集石油醚洗脱组分,乙酸乙酯洗脱组分,乙醇洗脱组分,分别冻干基于构建的小鼠便秘模型评价不同组分的促进肠蠕动、抗便秘活性,活性最佳组分经HPLC分离,分离获得的活性多酚进一步基于构建的小鼠便秘模型评价不同组分的促进肠蠕动及抗便秘的活性;
实验结果显示,沙棘多酚-1抗便秘及促进肠蠕动的活性最佳;
4)益生菌筛选:
基于构建的小鼠便秘模型评价不同益生菌的促进肠蠕动、抗便秘活性;
实验结果显示,两双歧杆菌、乳双歧杆菌促进肠蠕动、抗便秘活性最佳;
5)组合物制备:
将分子量在1-3kD之间的山楂多糖和分子量在3-5kD之间的枸杞多糖与芹菜膳食纤维、甘薯膳食纤维、沙棘多酚-1混匀,加去离子水调成固含量为10-15%的浆状液体,经过冻干制成组合物粉末,组合物粉末加两双歧杆菌、乳双歧杆菌,混匀,再次冻干。
3.根据权利要求1所述的一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,其特征在于,该组合物为肠道制剂。
4.根据权利要求3所述的一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,其特征在于,制剂包括硬胶囊、软胶囊、片剂、冲剂口服溶液、混悬剂、乳化剂。
5.根据权利要求1所述的一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,其特征在于,所述组合物中的分子量在1-3kD之间的山楂多糖和分子量在3-5kD之间的枸杞多糖、菜膳食纤维、甘薯膳食纤维、两双歧杆菌、乳双歧杆菌、沙棘多酚-1的质量比为1:1~10:1~10:1~10:0.005~0.1:0.005~0.1:0.005~0.1。
6.根据权利要求1所述的一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,其特征在于,组合物中的在1-3kD之间的山楂多糖和分子量在3-5kD之间的枸杞多糖、菜膳食纤维、甘薯膳食纤维、两双歧杆菌、乳双歧杆菌、沙棘多酚-1的质量比为1:1:5:5:0.01:0.01:0.005。
8.根据权利要求1所述的一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,其特征在于,所述两双歧杆菌、乳双歧杆菌为益生菌活菌冻干粉。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的一种调控肠道抗便秘活性的多糖、益生菌组合物,其特征在于,该组合物应用在促进肠蠕动及抗便秘的食品或保健品或药物中。
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