CN115894241A - 咖啡活性酚、组合物及其在制备具有促进肠蠕动作用和/或缓解便秘作用的产品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种咖啡活性酚、组合物及其在制备具有促进肠蠕动作用和/或缓解便秘作用的产品中的应用。所述的咖啡活性酚，其具有式Ⅰ或式Ⅱ所示的结构。所述的组合物和提取物，包含式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚。由于式Ⅰ或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚或其组合物具有促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用；因此，将式Ⅰ或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚或其组合物或含有式Ⅰ和/或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的提取物作为活性成分，用于制备促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用的食品、膳食补充剂或药品具有重要的应用价值。

Description

咖啡活性酚、组合物及其在制备具有促进肠蠕动作用和/或缓解便秘作用的产品中的应用

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种咖啡活性酚、组合物及其在制备具有促进肠蠕动作用和/或缓解便秘作用的产品中的应用。

背景技术

肠道健康对人体机能至关重要，便秘是一种胃肠道功能失调症，其中功能性便秘较为多见，以排便困难、排便次数减少、排便不尽为主要临床表现。调查显示，年龄越大则发病率相对越高，长期便秘会引起腹胀、腹痛、食欲不振、失眠甚至肿瘤等，严重影响生活质量。

咖啡具有较高的药用、食用价值，在神经保护、抗炎、抗氧化、保肝等方面有着较大的潜力。研究发现，烘焙过程中咖啡豆会生成酚类物质，如愈创木酚等。酚类化合物如咖啡酸、阿魏酸奎宁酸内酯作为咖啡的主要活性成分，具有抗炎、抗肿瘤、预防前列腺疾病等功效。然而咖啡豆中是否具有促进肠蠕动，是否具有缓解便秘的作用的成分却鲜有研究及报道。

因此，从咖啡豆中开发一种具有促进肠蠕动和/或缓解便秘作用的有效部分或单体化合物，具有重要的应用价值。

发明内容

为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明首先提供了一种咖啡活性酚；研究表明，所述的咖啡活性酚具有促进肠蠕动和/或缓解便秘作用。

本发明的技术方案如下：

一种咖啡活性酚，其具有式Ⅰ或式Ⅱ所示的结构；

发明人在研究中惊奇的发现，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物不仅具有促进肠蠕动作用，同时还具有缓解便秘作用。

本发明还提供了一种组合物，其包含式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚。

发明人在研究中进一步惊奇的发现，将式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚组合后形成的组合物，其促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用得到了进一步提高，其促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用要显著高于单独的式Ⅰ或式Ⅱ所示结构的咖啡二萜类化合物。

优选地，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的重量比为1～100:1～100。

进一步优选地，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的重量比为1～10:1～10。

最优选地，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的重量比为1:1。

本发明还提供了一种提取物，其包含式Ⅰ和/或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚。

优选地，式Ⅰ和/或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚在提取物中的重量含量为1～99％。

优选地，所述的提取物为咖啡提取物。

本发明还提供了上述咖啡活性酚、组合物或提取物在制备具有促进肠蠕动作用的产品中的应用。

本发明还提供了上述咖啡活性酚、组合物或提取物在制备具有缓解便秘作用的产品中的应用。

优选地，所述的产品为食品、膳食补充剂或药品。

本发明提供了一种全新结构的咖啡活性酚；研究表明所述的咖啡活性酚同时具有促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用；尤其是将式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚组合后形成的组合物，其促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用得到了进一步提高，具有更加优异的促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用；其促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用要显著高于单独的式Ⅰ或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚。由于式Ⅰ或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚或其组合物具有促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用；因此，将式Ⅰ或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚或其组合物或含有式Ⅰ和/或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的提取物作为活性成分，用于制备促进肠蠕动作用以及缓解便秘作用的食品、膳食补充剂或药品具有重要的应用价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为式Ⅰ所示结构的咖啡活性酚的¹H NMR谱。

图2为式Ⅰ所示结构的咖啡活性酚的¹³C NMR谱。

图3为式Ⅰ所示结构的咖啡活性酚的DEPT 135谱。

图4为式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的¹H NMR谱。

图5为式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的¹³C NMR谱。

图6为式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的DEPT 135谱。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的制备

(1)咖啡豆(生)1kg，粉碎，用15倍量的体积分数为50％的乙醇的渗漏提取，合并减压浓缩提取液，得浸膏。

(2)将浸膏用水混悬得混悬液，并分别用乙酸乙酯、氯仿萃取。萃取物冻干，分别得到乙酸乙酯、氯仿及水层浸膏。

(3)将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇(100∶10；100∶30；100∶50；100∶70；100∶90)等5个梯度进行梯度洗脱分别获得5个馏分(Fr.1～5)。

(4)将Fr.3(30g)再用氯仿-甲醇(100∶20；100∶40；100∶60；100∶80；100∶100)等5个梯度进行梯度洗脱分别获得5个馏分(Fr.3-1～3-5)；取Fr.3-3用制备型HPLC分离纯化，得到式Ⅰ所示结构的咖啡活性酚(414mg))和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚(663mg)；

制备型HPLC的具体条件为：

RP-HPLC(安捷伦1200HPLC)在Zorbax，SB C-18柱(9.4×250mm，5μm)上分离。洗脱溶剂系统由水-三氟乙酸(溶剂A；100:0.1，v/v)和乙腈-三氟乙酸(溶剂B；100:0.1，v/v)组成。使用30％至45％溶剂B的梯度洗脱，以5.0mL/min的流速25min，检测波长设置为300nm；收集9.46min处的色谱峰对应的洗脱液浓缩干燥后得式Ⅰ所示结构的咖啡活性酚；收集8.59min处的色谱峰对应的洗脱液浓缩干燥后得式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚。

式Ⅰ所示结构的咖啡活性酚的结构解析如下：

黄色油状物，HR-ESI-MS m/z 339.1205[M+Na]⁺(calcd for C₁₈H₂₀NaO₅，339.1203)。

¹H NMR(300MHz,CDCl₃,图1)谱提示该化合物有7个芳氢质子信号[δ_H8.01(2H,d,J＝7.7Hz),7.54(1H,t,J＝7.6Hz),7.41(2H,t,J＝7.5Hz),6.40(2H,s)]。

¹³C NMR(75MHz,CDCl₃,图1)谱则提示该化合物含有12个苯环碳信号(δ_C 147.2×2,133.1×2,132.4,130.5,129.7×2,128.5×2,105.2×2)，由此猜测化合物中含有两个苯环。此外，化合物的¹H NMR谱中还有2个甲氧基单峰质子信号[δ_H3.82(6H,s)]。而其¹³C NMR谱中还包含1个羰基碳信号(δ_C 166.8)。再结合化合物的不饱和度(9)，除去1个羰基，可知化合物结构中含有2个苯环。综上所述，鉴定化合物为3′-(4″-Hydroxy-3″,5″-dimethoxyphenyl)-propyl Benzoate；即式Ⅰ所示结构的咖啡活性酚(简称为咖啡活性酚-α)。

式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的结构解析如下：

黄色油状物,HR-ESI-MS m/z 369.1319[M+Na]⁺(calcd for C₁₉H₂₂NaO₆，369.1309,图4)。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃,图5)谱提示该化合物有7个芳氢质子信号[δ_H8.00(2H,d,J＝7.3Hz),7.54(1H,t,J＝7.5Hz),7.42(2H,t,J＝8.0Hz),6.52(2H,s)]，而其¹³C NMR(100MHz,CDCl₃,图6)谱则提示该化合物含有12个苯环碳信号(δ_C 147.4×2,134.4,133.1,132.7,130.5,129.7×2,128.6×2,103.3×2)，推测化合物中含有两个苯环。此外，化合物的¹H NMR谱中还有3个甲氧基单峰质子信号[δ_H 3.85(6H,s),3.20(3H,s)]。而其¹³C NMR中还包含1个羰基碳信号(δ_C166.7)。再结合化合物的不饱和度(9)，除去1个羰基，可知化合物结构中含有2个苯环。综上所述，鉴定化合物为7-Methoxydihydrosynapyl alcohol 9-O-benzoyl ester；即式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚(简称为咖啡活性酚-β)。

实施例2咖啡提取物的制备

(1)咖啡豆(生)1kg，粉碎，用15倍量的体积分数为50％的乙醇的渗漏提取，合并减压浓缩提取液，得浸膏。

(2)将浸膏用水混悬得混悬液，并分别用乙酸乙酯、氯仿萃取；萃取物冻干，分别得到乙酸乙酯、氯仿及水层浸膏；取乙酸乙酯浸膏即得所述的咖啡提取物。

实施例3组合物的制备

将式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚按重量比1:1混合均匀后即得所述的组合物。

实验例咖啡活性酚组合物促进肠蠕动、缓解便秘的应用

将小鼠随机分为对照组、模型组、咖啡活性酚-α组、咖啡活性酚-β组、咖啡提取物组和组合物组，每组10只。第1～4天，对照组以常规饲料喂养，模型组和各给药组喂食大米并禁水建立便秘模型。第5～8天，各组以常规饲料喂养，各给药组灌胃相应药物(0.2mL,药物剂量-20mg/kg)，对照组和模型组灌胃等剂量的生理盐水，1次/d。第8天，各组小鼠灌胃碳末混悬液(10mL/kg)再灌胃相应药物，记录每只小鼠首粒黑便的时间，6h内排便总数和黑便数，测定粪便含水率。小鼠眼球取血1.5mL，4℃、3500r/min离心10min，取上层血清，按照ELISA试剂盒测定血清中胃动素、内皮素、胃泌素和一氧化氮(NO)水平。各组小鼠脱颈椎处死后，取全胃组织，称定胃全质量、净质量；分离肠系膜，剪取肠管，测量小肠总长度和碳末推进长度，并计算胃排空率和小肠推进率。

①胃排空率＝1-(胃全质量-胃净质量)/0.6

②小肠推进率＝墨汁推进长度/小肠总长度。

实验结果如表1所示，与空白对照组相比，模型组小鼠体重显著降低(p＜0.01)，首粒黑便时间显著延长(p＜0.01)，6h排便数与黑便数明显减少(p＜0.01)，粪便含水率显著降低(p＜0.01)，此数据说明本实验的小鼠便秘模型制备成功。而与模型组相比，咖啡活性酚及其组合物给药组的小鼠首粒黑便时间显著降低(p＜0.01)，小鼠粪便含水率显著升高(p＜0.01)；咖啡活性酚组合物组小鼠6h排便数明显增加(p＜0.01)；咖啡活性酚组合物组小鼠黑便数明显增加(p＜0.01)。

表1

^##，与空白对照组比较，p<0.01；^*，与模型组比较，p<0.05；^**，与模型组比较，p<0.01。

实验结果如表2所示，与空白对照组相比，模型组小鼠胃排空率显著降低(p＜0.01)；同样的，模型组小鼠碳末推进率也显著降低(p＜0.01)；而与模型组相比，咖啡提取物、咖啡活性酚及其组合物组小鼠胃排空率及碳末推进率均有一定程度的升高，表明咖啡提取物、咖啡活性酚及其组合物可加速便秘小鼠的胃排空及肠道蠕动。其中，相比于咖啡提取物及咖啡活性酚，咖啡活性酚组合物的促进胃排空及碳末推进活性比同等剂量条件下的咖啡提取物或咖啡活性酚效果更好。

表2

^##，与空白对照组比较，p<0.01；^*，与模型组比较，p<0.05；^**，与模型组比较，p<0.01。

实验结果如表3所示，与空白对照组相比，模型组小鼠血清中胃动素(p＜0.01)水平显著降低，内皮素(p＜0.01)水平显著降低，以及胃泌素水平显著降低(p＜0.01)，而NO水平显著升高(p＜0.01)；而与模型组相比，咖啡提取物、咖啡活性酚及其组合物组小鼠血清中胃动素、内皮素和胃泌素含量均有一定程度的升高，而咖啡提取物、咖啡活性酚及其组合物组NO含量降低，表明咖啡提取物、咖啡活性酚及其组合物能够通过调节血清因子水平，进而缓解便秘。

其中，相比于咖啡提取物及咖啡活性酚，咖啡活性酚组合物的促进小鼠血清中胃动素、内皮素和胃泌素含量升高，抑制便秘小鼠NO含量升高活性比同等剂量条件下的咖啡提取物或咖啡活性酚效果更好。我们推测，两种咖啡活性酚可通过协同作用进而发挥更好的活性。

表3

^##，与空白对照组比较，p<0.01；^*，与模型组比较，p<0.05；^**，与模型组比较，p<0.01。

最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种咖啡活性酚，其特征在于，具有式Ⅰ或式Ⅱ所示的结构；

2.一种组合物，其特征在于，包含式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的重量比为1～100:1～100。

4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的重量比为1～10:1～10；

最优选地，式Ⅰ和式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚的重量比为1:1。

5.一种提取物，其特征在于，包含式Ⅰ和/或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚。

6.根据权利要求5所述的提取物，其特征在于，式Ⅰ和/或式Ⅱ所示结构的咖啡活性酚在提取物中的重量含量为1～99％。

7.根据权利要求5所述的提取物，其特征在于，所述的提取物为咖啡提取物。

8.权利要求1～7任一项所述的咖啡活性酚、组合物或提取物在制备具有促进肠蠕动作用的产品中的应用。

9.权利要求1～7任一项所述的咖啡活性酚、组合物或提取物在制备具有缓解便秘作用的产品中的应用。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述的产品为食品、膳食补充剂或药品。

Images