CN114341198B - 植物性蛋白聚糖及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种植物性蛋白聚糖，其特征在于，所述植物性蛋白聚糖是从获自金合欢属植物(Acacia Senegal Willdenow或者Acacia Seyal Delile)的树干或树枝的阿拉伯树胶中获得的，重均分子量为90万～350万，并且总醛含量为2.0μmol当量/g及以下。根据本发明，能够提供具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性的植物性蛋白聚糖。

Description

植物性蛋白聚糖及其用途
技术领域
本发明涉及植物性蛋白聚糖。具体地，本发明涉及具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性的植物性蛋白聚糖。
背景技术
近年来，已明确糖蛋白具有显著的生理活性。作为糖蛋白之一的动物性蛋白聚糖是由多条葡糖胺聚糖糖链和1个核心蛋白共价键合而成的化合物的总称，由于其高保湿性、细胞增殖促进作用而被广泛用作化妆品成分。作为动物性蛋白聚糖，已知例如来源于鲑鱼鼻软骨、鲨鱼鳍软骨以及乌贼头部软骨的动物性蛋白聚糖。但是，由于动物性蛋白聚糖是微量存在于软骨的物质，因此，存在制造成本高的问题。此外，在化妆品市场、食品市场中，植物来源成分比动物来源成分具有更佳的形象，因此，寻求动物性蛋白聚糖也用植物来源成分来代替。
植物中包含具有类似于动物性蛋白聚糖的结构的阿拉伯半乳聚糖蛋白。阿拉伯半乳聚糖蛋白是由阿拉伯半乳聚糖糖链和核心蛋白共价键合而成的化合物的总称，是蛋白聚糖。已知乳化性作为阿拉伯半乳聚糖蛋白所具有的效果(非专利文献1)。阿拉伯树胶是阿拉伯半乳聚糖蛋白、阿拉伯半乳聚糖和糖蛋白的混合物(非专利文献1)。阿拉伯树胶是从金合欢(Acacia)的渗出物中回收的树液。阿拉伯树胶由于其具有增粘作用、乳化作用，因此广泛应用于化妆品用途，日本国内每年进口约2千吨。阿拉伯树胶在日本国内很容易买到，并且，作为化妆品原料在“医药部外品原料规格2006”中注册，作为食品原料注册在“第8版食品添加物公定书”中注册等，在安全性等方面也具有大量的实际成果，可以说可用作植物性蛋白聚糖的原料。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2000-166489号公报
专利文献2：日本特公平05-41642号公报
专利文献3：日本特公平3-16169号公报
非专利文献
非专利文献1：Carbohydrate Research，246(1993)p.303-318
发明内容
发明所要解决的问题
专利文献1示出了通过在60℃～140℃下将阿拉伯树胶加热30分钟及以上从而成为乳化力增强的改性阿拉伯树胶。专利文献2示出了若用阳离子交换树脂对阿拉伯树胶进行处理，进一步地在100℃～160℃下加热改性，则粘度显著增加。这些改性阿拉伯树胶与改性前的阿拉伯树胶相比重均分子量增加，预想生理活性也较优异，但根据本发明人等的研究，通过该方法获得的改性阿拉伯树胶的总醛含量高，因此生理活性低。此外，该改性阿拉伯树胶的重均分子量过高而具有发粘感，涂布至肌肤时的使用感差，会产生臭味。由此可知，其不能成为动物性蛋白聚糖的替代品。
专利文献3示出了用阳离子交换树脂对阿拉伯树胶进行处理，提高乳化稳定性。根据本发明人等的研究可知，通过该方法获得的纯化阿拉伯树胶不含有足够量的阿拉伯半乳聚糖蛋白，因此生理活性低，不能成为动物性蛋白聚糖的替代品。
因此，尚未发现具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性、涂布至肌肤时的使用感优异且没有臭味问题的植物性蛋白聚糖。
本发明是鉴于上述情况而完成的，其目的在于提供一种具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性、涂布至肌肤时的使用感优异且没有臭味问题的植物性蛋白聚糖。
用于解决问题的技术手段
为了解决上述问题，本发明人等多次进行了深入研究，结果发现，从获自金合欢属植物(Acacia Senegal Willdenow或者Acacia Seyal Delile)的树干或树枝的阿拉伯树胶中，能够获得具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性的植物性蛋白聚糖，从而完成本发明。
即，本发明如下所述。
[1]一种植物性蛋白聚糖，其特征在于，
所述植物性蛋白聚糖是从获自金合欢属植物(Acacia Senegal Willdenow或者Acacia Seyal Delile)的树干或树枝的阿拉伯树胶中获得的，重均分子量为90万～350万，并且总醛含量为2.0μmol当量/g及以下。
[2]一种[1]所述的植物性蛋白聚糖的制造方法，其特征在于，
所述制造方法包括以下工序(A)以及工序(B)，
工序(A)：制备浓度为0.5％(w/w)～40％(w/w)的阿拉伯树胶水溶液的工序；以及
工序(B)：将阿拉伯树胶水溶液供给至多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂的工序。
[3]一种细胞增殖促进剂，包含上述[1]所述的植物性蛋白聚糖。
[4]一种化妆品，包含上述[1]所述的植物性蛋白聚糖。
[5]一种化妆品，包含上述[3]所述的细胞增殖促进剂。
发明效果
本发明的植物性蛋白聚糖具有与已知的动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性，对人的皮肤发挥优异的保湿效果以及细胞增殖促进效果。此外，由于是植物性的，通过将其用于化妆品原料，能够实现具有优异的保湿效果以及细胞增殖促进效果、形象也佳的化妆品。
附图说明
图1是示出关于在实施例1中，对阿拉伯树胶基于多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理得到的纯化物，通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的图。
图2是示出关于在实施例2中，对阿拉伯树胶基于高多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理得到的纯化物，通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的图。
图3是示出关于在实施例3中，对阿拉伯树胶基于高多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理得到的纯化物，通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的图。
图4是示出关于比较例1的阿拉伯树胶，通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的图。
图5是示出关于比较例2的脱盐阿拉伯树胶，通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的图。
图6是示出关于在比较例3中，对阿拉伯树胶基于多孔型I型强碱性阴离子交换树脂处理得到的纯化物，通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的图。
图7是示出关于在比较例4中，对阿拉伯树胶基于凝胶型强酸性阳离子交换树脂处理得到的纯化物，通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的图。
图8是示出关于在比较例8中得到的改性阿拉伯树胶，通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的图。
具体实施方式
以下，参照实施方式对本发明进行说明。
本发明中提及的“植物性蛋白聚糖”是指从获自金合欢属植物(Acacia SenegalWilldenow或者Acacia Seyal Delile)的树干或树枝的阿拉伯树胶中，主要去除了阿拉伯半乳聚糖及糖蛋白后的纯化物，包含有效量的阿拉伯半乳聚糖蛋白成分，抑制细胞增殖活性的醛化合物的含量少，由此，表现出与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性。
本发明的植物性蛋白聚糖由通过尺寸排阻色谱法测量的重均分子量以及总醛含量来规定。即，其特征在于，满足如下关系：在求取通过尺寸排阻色谱法获得的色谱图的所有峰的重均分子量时，其值为90万～350万，并且，在通过醛定量试剂盒求取总醛含量时，其值为2.0μmol当量/g及以下。
上述的重均分子量优选为100万～300万，更优选为130万～250万，进一步优选为150万～200万。此外，上述的总醛含量优选为0.005μmol当量/g～2.0μmol当量/g，更优选为0.005μmol当量/g～1.7μmol当量/g，进一步优选为0.005μmol当量/g～1.0μmol当量/g，特别优选为0.005μmol当量/g～0.8μmol当量/g。
需要说明的是，在重均分子量超过350万的情况下，存在如下情况：虽然阿拉伯半乳聚糖蛋白成分增加，但粘度变高。因此，例如，在将本发明的植物性蛋白聚糖作为生理活性成分来制备化妆品时，存在操作变难的情况。
(SEC测量)
重均分子量能够通过使用由多角度光散射检测器和示差折光检测器在线连接而成的凝胶渗透色谱求出。需要说明的是，在本说明书中，还将多角度光散射检测器称为“MALS检测器”，将示差折光检测器称为“RI检测器”，将由多角度光散射检测器以及示差折光检测器在线连接而成的尺寸排阻色谱法称为“SEC测量”。根据该SEC测量，通过该RI检测器计算测量对象物的浓度，并通过该MALS检测器计算绝对分子量，因此能够求出重均分子量。
本发明中采用的SEC测量的条件如下。
(i)系统：Prominence HPLC系统(株式会社岛津制作所制造)
(ii)色谱柱：Superose 6 10/300 GL(GE HealthyCare株式会社制造)
(iii)流速：0.5mL/min
(iv)洗脱溶剂：0.2M氯化钠水溶液
(v)样品制备：将分析样品用洗脱溶剂稀释后，混合1小时，在25℃下静置18小时，将用0.45μm乙酸纤维素膜过滤器去除不溶物后的溶液作为测量用样品。
(vi)样品浓度：0.4％(w/v)
(vii)样液注入量：100μL
(viii)色谱柱烘箱温度控制：30℃
(ix)RI检测器：Optilab T-rEX(温度控制25℃)(WYATT Technology Corporation制造)
(x)MALS检测器：DAWN HELEOS II 8+(WYATT Technology Corporation制造)
(xi)dn/dc：0.141
(xii)数据曲线模型：Berry
(重均分子量)
使用Astra Ver.6.1.2.84(WYATT Technology Corporation制造)等对通过在上述条件下进行的SEC测量获得的数据进行处理，由此，能够求出重均分子量。本发明中提及的重均分子量意味着将通过SEC测量使用RI检测器以及MALS检测器获得的色谱图的洗脱起点至洗脱终点连结而成的直线上方的所有峰的重均分子量。
(总醛含量)
总醛含量能够通过使用醛定量试剂盒Amplite(Trade Mark)ColorimetricAldehyde Quantitation Kit(Product Number 10051)(AAT Bioquest社)来求出。
本发明中采用的总醛含量的测量条件如下。
(i)检测容器：96孔透明底微孔板
(ii)标准溶液制备：使用试剂盒附带的缓冲水溶液来稀释试剂盒附带的AdlehydeStandard。
(iii)标准溶液浓度：0、1、3、10、30、100、300、1,000μM
(iv)标准溶液量：50μL
(v)样品制备：用超纯水稀释测量样品。
(vi)样品浓度：5.0％(w/v)
(vii)样液量：50μL
(viii)反应溶液量：50μL
(ix)反应条件：25℃/避光
(x)反应时间：30分钟
(xi)测量波长：405nm
在上述条件下进行的总醛含量的测量中，根据获得的标准溶液的吸光度，绘制校准曲线。通过将获得的样品的吸光度对应于校准曲线，求出每1g样品的总醛含量。
重均分子量意味着在样品中作为有效成分的阿拉伯半乳聚糖蛋白(高分子量成分)所占的比例，总醛含量意味着对生理活性产生不良影响的醛化合物在纯化物中的残留度。
本发明的植物性蛋白聚糖满足如下关系：重均分子量为90万～350万，并且总醛含量为2.0μmol当量/g及以下。即，由于对生理活性产生不良影响的醛化合物的残留量少，且含有足够量的阿拉伯半乳聚糖蛋白(后述的实施例1～3)，因此，由后述的[评价试验]所示的结果可知，在细胞增殖活性效果、保湿性以及官能试验结果的任一个中均获得了优异的结果，具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性(参见表1)。
后述的比较例1、2为未纯化的阿拉伯树胶，均不满足重均分子量为90万及以上这一关系，且包含大量的对生理活性产生不良影响的醛化合物，因此，其生理活性远低于动物性蛋白聚糖，表明无法成为本发明的植物性蛋白聚糖(参见表1)。
后述的比较例3为对阿拉伯树胶基于多孔型I型强碱性阴离子交换树脂处理得到的纯化物，重均分子量为142万。但是，由于对生理活性产生不良影响的醛化合物的残留量大，因此不具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性，树脂的臭味转移至纯化物，涂布至肌肤时的使用感差，表明无法成为本发明的植物性蛋白聚糖(参见表1)。
后述的比较例4为对阿拉伯树胶基于凝胶型强酸性阳离子交换树脂处理得到的纯化物，对生理活性产生不良影响的醛化合物的残留量小，但是不满足重均分子量为90万及以上这一关系，不含有足够量的阿拉伯半乳聚糖蛋白。因此，不具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性，表明无法成为本发明的植物性蛋白聚糖(参见表1)。
后述的比较例5为对阿拉伯树胶基于凝胶型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理得到的纯化物，对生理活性产生不良影响的醛化合物的残留量小，但是不满足重均分子量为90万及以上这一关系，不含有足够量的阿拉伯半乳聚糖蛋白。因此，不具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性，表明无法成为本发明的植物性蛋白聚糖(参见表1)。
后述的比较例6为对阿拉伯树胶基于多孔型II型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理得到的纯化物，对生理活性产生不良影响的醛化合物的残留量小，但是不满足重均分子量为90万及以上这一关系，不含有足够量的阿拉伯半乳聚糖蛋白。因此，不具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性，表明无法成为本发明的植物性蛋白聚糖(参见表1)。
后述的比较例7为对阿拉伯树胶基于多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及弱酸性阳离子交换树脂处理得到的纯化物，重均分子量为142万。但是，由于对生理活性产生不良影响的醛化合物的残留量大，因此不具有与动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性，表明无法成为本发明的植物性蛋白聚糖(参见表1)。
后述的比较例8为：通过专利文献1中记载的方法，即，通过在60℃～140℃下将阿拉伯树胶加热30分钟及以上的方法进行了改性的阿拉伯树胶，与比较例1、2的未纯化的阿拉伯树胶相比，细胞增殖活性效果变得更低(参见表1)。需要说明的是，虽然重均分子量为399万，包含大量的高分子量成分，但是由于阿拉伯树胶的加热会产生醛化合物，因此醛化合物的含量高，该醛化合物会抑制生理活性，因此不发挥有效的生理活性。此外，由于重均分子量过高，因此具有发粘感，涂布至肌肤时的使用感差。
(原料)
用作本发明的植物性蛋白聚糖的原料的阿拉伯树胶是获自属于作为豆科植物的Acacia属的Acacia Senegal Willdenow或者Acacia Seyal Delile的树干、树枝的天然渗出物。特别优选将获自Acacia Senegal Willdenow的阿拉伯树胶作为原料。阿拉伯树胶的来源不限，可以是任意产地来源的阿拉伯树胶。此外，阿拉伯树胶能够以脱盐物、块状物、球状物、粗粉碎物、颗粒状、粒状或粉末状(包含喷雾干燥粉末)的形态买到，但在本发明中，与这些形状无关地，任意形态的阿拉伯树胶均能够用作本发明中的作为处理对象的阿拉伯树胶原料。
本发明的植物性蛋白聚糖是将阿拉伯树胶水溶液供给至离子交换树脂处理、并进行纯化而得到的。特别优选将阿拉伯树胶溶解于水形成水溶液，并对该水溶液进行离子交换树脂处理的方法。
(阴离子交换树脂)
在本发明中，通过阴离子交换树脂处理，能够去除阿拉伯树胶中的低分子杂质，增加高分子含有率。
作为阴离子交换树脂的树脂母体，可举出例如苯乙烯-二乙烯苯等苯乙烯系、(甲基)丙烯酸系、以及水凝胶系等，但从低分子杂质的去除效率的观点来看，优选苯乙烯系。
此外，作为阴离子交换树脂的母体结构，一般而言，可举出凝胶型以及多孔型。凝胶型是指，仅具有由于溶胀而产生的细孔(即,微孔)的母体结构；多孔型是指，除了微孔之外还具有在干燥状态下也不会消失的物理细孔(即,大孔)的母体结构。但从低分子杂质的去除效率的观点来看，阴离子交换树脂为多孔型是重要的。需要说明的是，在本发明中，“多孔型”是包含“高多孔型”、“MR型(Macro-Reticular Type)”的概念。“高多孔型”是指，具有与多孔型相比细孔更发达的结构；MR型是指，凝胶微珠的聚集体。
作为阴离子交换树脂的形态，可举出例如粉状、球状、纤维状、膜状等。
此外，在阴离子交换树脂中一般存在I型强碱性、II型强碱性以及弱碱性阴离子交换树脂，但从低分子杂质的去除效率的观点来看，使用I型强碱性阴离子交换树脂是重要的。
在本发明中使用的多孔型I型强碱性阴离子交换树脂既可以是通过公知的方法制造的，也可以是市售产品。
作为市售的多孔型I型强碱性阴离子交换树脂，可举出例如DIAION PA306、PA308、PA312、PA316、PA318；作为高多孔型I型强碱性阴离子交换树脂，可举出HPA25、HPA25L(以上为三菱化学株式会社制造)；作为MR型I型强碱性阴离子交换树脂，可举出AmberliteIRA900J、IRA904、IRA958(以上为Organo株式会社制造)。
阴离子交换树脂也可以是切除了小粒径部的类型、切除了大粒径部的类型、进行了脱臭处理的类型、进行了防缠结处理的类型。作为阴离子交换树脂的抗衡离子，可举出氢氧根离子、氯离子、亚硫酸氢根离子等，但没有特别限定。
此外，对于阴离子交换树脂的总交换容量没有特别限定，但从低分子杂质的去除效率的观点来看，优选为0.1meq/mL～3.0meq/mL，更优选为0.2meq/mL～2.0meq/mL，进一步优选为0.3meq/mL～1.5meq/mL，特别优选为0.4meq/mL～1.2meq/mL。从低分子杂质的去除效率的观点来看，相对于1kg阿拉伯树胶，阴离子交换树脂的使用量优选为1.0L～20L，更优选为2.0L～15L，进一步优选为4.0L～10L。
(阳离子交换树脂)
在本发明中，通过强酸性阳离子交换树脂处理，能够降低醛化合物含量。
作为强酸性阳离子交换树脂的树脂母体，可举出例如苯乙烯-二乙烯苯等苯乙烯系、(甲基)丙烯酸系、以及水凝胶系等，但从醛化合物去除效率的观点来看，优选苯乙烯系。
此外，作为强酸性阳离子交换树脂的母体结构，可举出例如凝胶型、多孔型，但没有特别限定。
作为强酸性阳离子交换树脂的形态，可举出例如粉状、球状、纤维状、膜状等。
需要说明的是，在阳离子交换树脂中存在弱酸性阳离子交换树脂，但从醛化合物去除效率的观点来看，使用强酸性阳离子交换树脂。
在本发明中使用的强酸性阳离子交换树脂既可以通过公知的方法制造，也可以是市售产品。
作为市售的凝胶型强酸性阳离子交换树脂，可举出例如DIAION SK104、SK1B、SK1BH、SK110、SK112、UBK08、UBK510；作为多孔型强酸性阳离子交换树脂，可举出PK208、PK212、PK216、PK220、PK228、RCP160M、HPK25(以上为三菱化学株式会社制造)、AmberliteIR120B、IR124、200CT、252(以上为Organo株式会社制造)。
阳离子交换树脂也可以是切除了小粒径部的类型、切除了大粒径部的类型。
作为阳离子交换树脂的抗衡离子，可举出氢离子、钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、钡离子等，但没有特别限定。
此外，对于强酸性阳离子交换树脂的总交换容量没有特别限定，但从醛化合物去除效率的观点来看，优选为0.5meq/mL～5.0meq/mL，更优选为1.0meq/mL～4.0meq/mL，进一步优选为1.5meq/mL～3.0meq/mL，特别优选为1.8meq/mL～2.5meq/mL。
从醛化合物去除效率的观点来看，相对于1kg阿拉伯树胶，强酸性阳离子交换树脂的使用量优选为0.05L～0.50L，更优选为0.1L～0.40L，进一步优选为0.15L～0.30L。
吸附杂质后吸附能力降低的离子交换树脂(多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂)能够通过公知的方法，即普通酸/碱清洗、用酶洗涤剂清洗、醇清洗、表面活性剂清洗、螯合剂清洗、次氯酸清洗、过氧化氢清洗等化学清洗、刷洗、反洗操作等物理清洗等来恢复吸附能力。
作为用离子交换树脂对阿拉伯树胶水溶液进行处理的方法，只要是批量法、色谱柱法等能够在离子交换树脂与阿拉伯树胶水溶液之间进行离子交换的方法即可。
在采用批量法的情况下，可以用阴离子交换树脂与阳离子交换树脂的混合物对阿拉伯树胶水溶液进行处理，还可以分别用阴离子交换树脂以及阳离子交换树脂，以任意的顺序进行处理。
另一方面，在采用色谱柱法的情况下，可以向填充了阴离子交换树脂与阳离子交换树脂的混合物的色谱柱中，供给阿拉伯树胶水溶液来进行处理，也可以向分别填充了阴离子交换树脂和阳离子交换树脂的不同的色谱柱中，以任意的顺序供给阿拉伯树胶水溶液来进行处理。此外，还能够向将填充了阴离子交换树脂和阳离子交换树脂的各色谱柱串联连接而成的色谱柱中，供给阿拉伯树胶水溶液来进行处理。
供给至离子交换树脂处理的阿拉伯树胶水溶液的温度优选为60℃及以下，更优选为2℃～60℃，进一步优选为2℃～50℃，阿拉伯树胶水溶液的浓度优选为40％(w/w)及以下，更优选为0.5％(w/w)～40％(w/w)，特别优选为1.0％(w/w)～20％(w/w)。
若阿拉伯树胶水溶液的温度超过60℃，则存在在处理期间阿拉伯树胶发生改性而产生凝集体的情况、超过离子交换树脂的耐热温度的情况。此外，若阿拉伯树胶水溶液的浓度超过40％(w/w)，则溶液的粘度变高，处理变得困难。
此外，若阿拉伯树胶水溶液的pH为10及以上，则会发生阿拉伯树胶的分解，因此优选将阿拉伯树胶水溶液的pH设为小于10。
在使用了多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂的纯化处理后，能够获得含有植物性蛋白聚糖的水溶液。
也可以通过任意的有机溶剂、含有有机溶剂的溶剂，进一步对该含有植物性蛋白聚糖的水溶液进行纯化处理。此外，还可以进一步进行离子交换树脂处理、载体处理、脱臭处理、脱盐处理、膜分离处理、pH调节处理等来进行纯化。
在获得了含有植物性蛋白聚糖的水溶液的情况下，也可以进一步以脱盐、杀菌等为目的，实施膜处理等。
还能够通过对水溶液进行冷冻干燥处理、蒸发干固处理等，从而获得含有植物性蛋白聚糖的固体。
对于本发明的植物性蛋白聚糖的形状没有特别限制，也可以是水溶液等液状物、块状物、球状物、粗粉碎物、颗粒状、粒状、以及粉末状等任意的形状。
上述那样获得的本发明的植物性蛋白聚糖具有高的生理活性，特别是具有高的细胞增殖活性作用。而且，来源于天然的植物，安全性非常高。因此，本发明的植物性蛋白聚糖能够作为细胞增殖促进剂使用。
本发明的细胞增殖促进剂能够适合用作调配医药部外品、化妆品、食品等的成分，特别适合用作化妆品用的成分(化妆品)。
本发明的细胞增殖促进剂能够直接、或者根据需要添加一般的添加剂制成医药部外品、化妆品、食品等。
作为添加剂，可举出赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、主剂、溶剂、溶解辅助剂、增溶剂、悬浮剂、分散剂、乳化剂、稳定剂、抗氧化剂、增稠剂、防腐剂、pH调节剂、矫味剂、香料、着色剂等，并且可以使用它们中的1种或者2种及以上。
实施例
以下，列举实施例进一步对本发明进行详细说明。本发明不限于以下实施例。
[实施例1]基于多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理的纯化
将50g阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”、Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)溶解于离子交换水以制备4.0％(w/w)阿拉伯树胶水溶液1250g。将该阿拉伯树胶水溶液、170g(251mL)多孔型I型强碱性阴离子交换树脂“DIAION PA308”(三菱化学株式会社制造、总交换容量＝1.1meq/mL)、以及10g(12mL)强酸性阳离子交换树脂“DIAIONSK1BH”(三菱化学株式会社制造、凝胶型、总交换容量＝1.9meq/mL)放入罐内，通过搅拌机搅拌3小时(液温＝40±2℃)。
接着，通过过滤对离子交换树脂进行分离，回收滤液。向滤液中添加1M NaOH，将pH调节至4.0。对所述滤液进行冷冻干燥处理，回收包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体31.7g。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。图1示出该色谱图。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[实施例2]基于高多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理的纯化
将3.6kg阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”、Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)溶解于离子交换水以制备4.0％(w/w)阿拉伯树胶水溶液90kg。将该阿拉伯树胶水溶液、17.24kg(25L)高多孔型I型强碱性阴离子交换树脂“DIAION HPA25L”(三菱化学株式会社制造、总交换容量＝0.7meq/mL)、以及0.7kg(0.8L)强酸性阳离子交换树脂“DIAION SK1BH”(三菱化学株式会社制造、凝胶型、总交换容量＝1.9meq/mL)放入罐内，通过搅拌机搅拌3小时(液温＝20±2℃)。
接着，通过过滤对离子交换树脂进行分离，回收滤液。向滤液中添加1M NaOH，将pH调节至4.0。对所述滤液进行冷冻干燥处理，回收包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体2.2kg。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。图2示出该色谱图。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[实施例3]基于高多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理的纯化
将50g阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”、Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)溶解于离子交换水以制备4.0％(w/w)阿拉伯树胶水溶液1250g。将该阿拉伯树胶水溶液、102g(150mL)高多孔型I型强碱性阴离子交换树脂“DIAION HPA25L”(三菱化学株式会社制造、总交换容量＝0.7meq/mL)、以及5.0g(6.0mL)强酸性阳离子交换树脂“DIAIONSK1BH”(三菱化学株式会社制造、凝胶型、总交换容量＝1.9meq/mL)放入罐内，通过搅拌机搅拌3小时(液温＝40±2℃)。
接着，通过过滤对离子交换树脂进行分离，回收滤液。向滤液中添加1M NaOH，将pH调节至4.0。对所述滤液进行冷冻干燥处理，回收包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体37.9g。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。图3示出该色谱图。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例1]阿拉伯树胶
对阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”，Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。图4示出该色谱图。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例2]脱盐阿拉伯树胶
对脱盐阿拉伯树胶(商品名：“San Arabic”，Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。图5示出该色谱图。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例3]基于多孔型I型强碱性阴离子交换树脂处理的纯化
将50g阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”，Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)溶解于离子交换水以制备4.0％(w/w)阿拉伯树胶水溶液1250g。将该阿拉伯树胶水溶液、以及170g(251mL)多孔型I型强碱性阴离子交换树脂“DIAION PA308”(三菱化学株式会社制造、总交换容量＝1.1meq/mL)放入罐内，通过搅拌机搅拌3小时(液温＝40±2℃)。
接着，通过过滤对离子交换树脂进行分离。回收滤液并进行冷冻干燥处理，回收包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体32.2g。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。图6示出该色谱图。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例4]基于凝胶型强酸性阳离子交换树脂处理的纯化
将50g阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”(三荣药品贸易株式会社制造)，Acacia Senegal种)溶解于离子交换水以制备4.0％(w/w)阿拉伯树胶水溶液1，250g。将该阿拉伯树胶水溶液、以及10g(12mL)强酸性阳离子交换树脂“DIAION SK1BH”(三菱化学株式会社制造、凝胶型、总交换容量＝1.9meq/mL)放入罐内，通过搅拌机搅拌3小时(液温＝40±2℃)。
接着，通过过滤对离子交换树脂进行分离，回收滤液。向滤液中添加1M NaOH，将pH调节至4.0。对所述滤液进行冷冻干燥处理，回收包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体49.7g。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。图7示出该色谱图。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例5]基于凝胶型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理的纯化
将50g阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”，Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)溶解于离子交换水以制备4.0％(w/w)阿拉伯树胶水溶液1250g。将该阿拉伯树胶水溶液、170g(251mL)凝胶型I型强碱性阴离子交换树脂“DIAION SA10A”(三菱化学株式会社制造、总交换容量＝1.4meq/mL)、以及10g(12mL)强酸性阳离子交换树脂“DIAIONSK1BH”(三菱化学株式会社制造、凝胶型、总交换容量＝1.9meq/mL)放入罐内，通过搅拌机搅拌3小时(液温＝40±2℃)。
接着，通过过滤对离子交换树脂进行分离，回收滤液。向滤液中添加1M NaOH，将pH调节至4.0。对所述滤液进行冷冻干燥处理，回收包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体49.5g。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例6]基于多孔型II型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂处理的纯化
将50g阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”，Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)溶解于离子交换水以制备4.0％(w/w)阿拉伯树胶水溶液1250g。将该阿拉伯树胶水溶液、170g(251mL)多孔型II型强碱性阴离子交换树脂“DIAION PA408”(三菱化学株式会社制造、总交换容量＝1.0meq/mL)、以及10g(12mL)强酸性阳离子交换树脂“DIAIONSK1BH”(三菱化学株式会社制造、凝胶型、总交换容量＝1.9meq/mL)放入罐内，通过搅拌机搅拌3小时(液温＝40±2℃)。
接着，通过过滤对离子交换树脂进行分离，回收滤液。向滤液中添加1M NaOH，将pH调节至4.0。对所述滤液进行冷冻干燥处理，回收包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体49.2g。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例7]基于多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及弱酸性阳离子交换树脂处理的纯化
将50g阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”，Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)溶解于离子交换水以制备4.0％(w/w)阿拉伯树胶水溶液1250g。将该阿拉伯树胶水溶液、170g(251mL)多孔型I型强碱性阴离子交换树脂“DIAION PA308”(三菱化学株式会社制造、总交换容量：1.1meq/mL)、以及10g(12mL)弱酸性阳离子交换树脂“DIAION WK10”(三菱化学株式会社制造、甲基丙烯酸系、总交换容量＝2.6meq/mL)放入罐内，通过搅拌机搅拌3小时(液温＝40±2℃)。
接着，通过过滤对离子交换树脂进行分离，回收滤液。向滤液中添加1M NaOH，将pH调节至4.0。对所述滤液进行冷冻干燥处理，回收包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体32.5g。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例8]改性阿拉伯树胶
将2.0g阿拉伯树胶(商品名：“Arabiccol SS”，Acacia Senegal种，三荣药品贸易株式会社制造)放入设定为110℃的烘箱中，加热24小时。加热后，回收固体1.9g。
对该固体进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。图8表示该色谱图。
此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[比较例9]动物性蛋白聚糖
对动物性蛋白聚糖(和光纯药工业株式会社制造)进行SEC测量，在所得到的色谱图中求出重均分子量。此外，通过醛定量试剂盒求出总醛含量。
[评价试验]
以在上述实施例1～3及比较例3～7中获得的包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体、比较例1的阿拉伯树胶、比较例2的脱盐阿拉伯树胶、比较例8的改性阿拉伯树胶以及比较例9的动物性蛋白聚糖为样品，供给至以下试验。
＜细胞增殖活性试验＞
使用含有10μg/mL胰岛素、0.5μg/mL氢化可的松的HuMedia-KG2培养基(Kurabo制造)，以2×104cells/mL的浓度将人正常表皮角质细胞(Kurabo制造)各100μL接种在96孔培養微孔板上，并在5％(v/v)CO2、37℃的条件下培养24小时。然后，添加各样品以使终浓度为250μg/mL，分别添加100μL用0.20μm乙酸纤维素膜过滤器去除不溶物后的所述培养基，培养96小时。
接着，通过BrdU(5-溴-2’-脱氧尿苷(5-bromo-2’-deoxyuridine))化学发光试剂盒(Abcam株式会社制造)测量活细胞数，对将未添加样品时的活细胞数设为100时的表皮细胞增殖促进作用进行分析。
＜保湿性试验＞
准备分别包含2.0％(w/w)的各样品的水溶液，并将各水溶液分别滴加100μL至培养皿。将该培养皿在室温＝25±1℃、湿度＝20±1％RH的环境下静置60分钟，求出60分钟后的样品水溶液的重量除以初始的样品水溶液的重量而得到的比例(％)。
＜官能试验＞
将分别包含1.0％(w/w)各样品的水溶液，分别涂布在20名专业评价人员的前臂内侧，并按照以下的评价基准，对使用感进行官能评价。进行小数点以下四舍五入求出评价结果的平均值。
(1)发粘感
3：不发粘、2：稍微发粘、1：发粘、0：强烈发粘
(2)臭味
3：无臭味、2：稍有臭味、1：有臭味、0：有强烈的臭味
下述表1示出了全部实施例及全部比较例的参数(重均分子量、总醛含量)以及上述评价试验的结果。
【表1】
Figure BDA0003521455960000111
如表1所示，实施例1～3中得到的包含阿拉伯半乳聚糖蛋白的固体的重均分子量均为90万～350万，并且总醛含量均为2.0μmol当量/g及以下。这些被评价为显示与动物性蛋白聚糖(比较例9)同等或更高的细胞增殖活性以及保湿性，没有观察到发粘感以及臭味。
比较例1的阿拉伯树胶、比较例2的脱盐阿拉伯树胶、比较例4～6中得到的固体的重均分子量小于90万，比较例8的改性阿拉伯树胶的重均分子量超过350万。此外，比较例1的阿拉伯树胶、比较例2的脱盐阿拉伯树胶、比较例3、7中得到的固体以及比较例8的改性阿拉伯树胶的总醛含量超过2.0μmol当量/g。关于这些，没有观察到与动物性蛋白聚糖(比较例9)同等的细胞增殖活性以及保湿性，关于比较例1的阿拉伯树胶、比较例2的脱盐阿拉伯树胶、比较例3、7中得到的固体，被评价为有臭味或者臭味强烈，关于比较例8的改性阿拉伯树胶，被评价为有发粘感以及臭味强烈。
产业上的可利用性
如以上详细描述的那样，通过本发明，能够提供具有与已知的动物性蛋白聚糖同等或更高的生理活性，对人的皮肤能够发挥优异的保湿效果以及细胞增殖促进效果的植物性蛋白聚糖。
本发明的植物性蛋白聚糖可用作细胞增殖促进剂，能够适合用于医药部外品、化妆品、食品等。

Claims (2)

1.一种植物性蛋白聚糖的制造方法，其特征在于，
所述植物性蛋白聚糖是从获自金合欢属植物的树干或树枝的阿拉伯树胶中获得的，重均分子量为90万～350万，并且总醛含量为2.0μmol当量/g及以下，
所述制造方法包括以下工序(A)以及工序(B)，
工序(A)：制备浓度为0.5w/w％～40w/w％的阿拉伯树胶水溶液的工序；以及
工序(B)：将阿拉伯树胶水溶液供给至多孔型I型强碱性阴离子交换树脂及强酸性阳离子交换树脂的工序。
2.根据权利要求1所述的制造方法，其中，所述金合欢属植物为Acacia SenegalWilldenow或者Acacia Seyal Delile。
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