CN114340793A - 活动细胞分选装置 - Google Patents

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Abstract

公开一种活动细胞分选装置。该装置包括腔室(4)、与该腔室流体连通的入口(5)和出口(6)以及设置在该腔室中的多个分立阻隔件(8)。每个分立阻隔件包括至少一个壁部(15、16)和至少一个朝向出口的锐角边缘(17)。

Description

活动细胞分选装置
技术领域
本发明涉及活动细胞分选装置。
背景技术
越来越多地，夫妻倾向于等到他们上了年纪才尝试家庭生活。然而，一对夫妇的等待越长，成功受孕的机会越低。因此，辅助生殖治疗变得越来越重要(来自个人角度和从更广泛的社会层面而言)，因为它们能够帮助增加受孕的机会。
辅助生殖治疗通常归属于两个类别。
宫内人工授精(IUI)是使用导管将制备精子样品引入(女性)子宫中并在子宫中受精的过程。这种方法可用于同时治疗男性因素和女性因素生育问题。虽然它通常比其他类似治疗创面更小，但由于成功率较低，而较少使用。
体外人工授精(IVF)是一种包括将制备的精子样品与卵母细胞(卵子)结合以在实验室设施中形成胚胎的过程。IVF可以进一步分为两个不同的治疗过程，即常规IVF包括在实验室器皿中将卵母细胞与制备的精子样品(通常为50,000至100,000个精子细胞)结合，其中进行受精和IVF具有卵母细胞胞浆内单精子注射(ICSI)，ICSI包括从制备的精子样品中挑选单个精子细胞并将其直接注入卵母细胞中。如果成功，IVF过程的结果是受精卵，其允许在受控环境中的特殊培养基中三至五天内发育成胚胎，然后将其被转移到子宫实现可能的着床和胚胎发育。
辅助生殖一般通常采用精子制备或“精子洗涤”步骤。该步骤的目的包括从精液中分离出精子细胞，精液中可能含有非期望的污染物(包括细胞碎片、细菌、免疫细胞、粘液和其他可能对成功受精的机会产生不利影响的化学物质)，去除任何冷冻保存的化学物质(如果精子样品已经冷冻)，并从样品中仅挑选活动精子细胞，优选地挑选最活动的精子细胞。
通常，有三种方法执行精子分离。
简单洗涤包括使精子悬浮在适合的精子洗涤介质中，然后进行离心分离来以收集精子细胞。虽然这种方法成功地稀释了化学污染物，但往往不会去除死细胞或细胞碎片，并且不会将死细胞与活细胞分离。
在密度梯度离心分离法(DGC)中，样品在试管中被离心分离，包含不同密度的流体。对流体进行校准使得仅正确密度的细胞被收集，而留下细胞碎片或严重受损的细胞。完整且游动的细胞通常具有稍高的密度，并且因此可以使用这种方法基于密度差分离细胞，而不是直接基于活动性特性来分离。
在所谓的“游动”中，使适合的精子洗涤介质样品小心地漂浮在通过离心分离轻轻沉淀的精液样品上。活动细胞向上到洗涤介质中，并且非活动细胞保留在在沉淀中。
目前的洗涤方法往往存在一个或多个问题。
首先，它们往往包括至少一种离心分离步骤，该步骤被认为导致细胞的DNA损伤。其次，向上游动并不针对向前活动性具有选择性，因此可以导致所选精子的品质较低。第三，虽然DGC能够以某种程度的特异性分离出活动细胞，但是该过程的效率是参差不齐，并且这取决于许多因素，包括例如，使用多少不同的流体，这些流体的密度、离心机速度以及技术人员的技能。还据已经显示的，DGC可能增加DNA损伤，这可能进一步影响胚胎存活率。
许多替代洗涤方法在被开发出来。
一种方法是使用微流体分离。精子分离装置的示例包括可从ZyMōt生育公司(美国马里兰州盖瑟斯堡)可提供的ZyMōt(TM)Multi和ZyMōt(TM)ICSI。这些装置通过沿着窄通道使用精子细胞的壁反射或使用薄膜来辅助向上游动来发挥作用。
另一种方法包括趋流性分离，趋流性分离包括将细胞暴露于温和流体流，精子细胞沿着该流体流自行定向，从而促使它们游动到收集室。
再一种方法电泳使用电场基于细胞的介电常数来分离细胞。还可以使用磁分离，但这种方法主要依赖于将磁性颗粒与特定细胞结合，然后分离细胞。
在WO 2016/035799 A1中描述一种分离活动精子的方法。
还参考了WO 2017/127775 A1。
发明内容
根据本发明的第一方面，提供一种活动细胞分选装置。运动细胞可以是精子，可以是人类、马的、牛的、猪的或禽的精子。该装置包括腔室、与该腔室流体连通的入口和出口以及设置在该腔室中的多个分立阻隔件。每个分立阻隔件包括至少一个壁部和至少一个朝向出口的锐角边缘。
这能够使不仅最具活动性的细胞，而且逐渐活动的细胞被隔离并浓缩，同时最小化或甚至避免化学、电、热和/或重力梯度，因此有助于降低细胞损伤的风险；这些类型的细胞往往与妊娠成功率和更低的流产率密切相关。这也能够帮助优先分离被认为具有可接受的形态和结构的细胞。
阻隔件(在平面图中)优选为新月形或箭头形状。然而，这些阻隔件可以是泪滴形状、半圆形状或V形的。
该至少一个壁部可以包括第一和第二壁部，并且至少一个锐角边缘可以包括第一和第二壁部之间的第一锐角边缘。第一壁部可以是凸面的、平直的或凹面的。第二壁部可以是凹面的或平直的。该至少一个锐角边缘还可以包括第二锐角边缘。例如，第二锐角边缘可以位于第一壁部和第二壁部之间，例如形成新月形阻隔件。该至少一个壁部可以包括第三壁部以及第二锐角边缘可以位于第二和第三壁部之间。
锐角边缘由大于0°的角度和小于90°的角度相接的两个壁部(或壁部的两个部分)定义。优选地，该角度小于30°。每个锐角边缘的曲率可以大于0μm且小于或等于50μm，优选小于20μm。
该装置的直径可以介于2.5cm和3.5cm之间。
该装置的通道4可以小于100μm。
该腔室可以包括通道，该通道穿行于分别设在第一和第二端处的入口和出口之间，并且该通道包括第一和第二腔室壁。该腔室可以是具有周边和中心的碟形，并且其中该入口是环形的且围绕该腔室的周边布置，并且该出口布置在该中心处。该腔室优选地具有50至300μm之间的高度。优选地，该腔室高度大于100μm。
该入口和/或出口的直径可以为介于1到8mm之间。该入口的直径可以是3mm。该入口的直径可以是5mm。该出口的直径可以是5mm。
每个分立阻隔件优选地具有介于10至500μm之间，或介于100和150μm之间的宽度。每个分立阻隔件可以具有125μm的宽度。每个分立阻隔件优选地具有介于10到1000μm或介于100至250μm之间的长度。每个分立阻隔件可具有175μm的长度。每个分立阻隔件优选地在第一方向(例如，行中)上与相邻阻隔件分开介于20至500μm或介于100至500μm之间的第一间隙。每个分立阻隔件优选地在不同的第二方向(例如，在线或列中)上与相邻阻隔件分开介于20至500μm或介于100至500μm之间的第二间隙。这些分立阻隔件可以从底面或顶面突出到腔室中。这些分立阻隔件可以是相同形状的。这些分立阻隔件可以布置成周期性阵列，可以是矩形或六边形阵列。
根据本发明的第二方面，提供一种包含第一方面的装置的宫内人工授精试剂盒。
根据本发明的第三方面，提供一种使用第一方面的装置的方法，该方法包括将包含活动细胞的样品提供到入口，等待至少1分钟的时间段，然后在等待该时间段之后，从出口收集精制样品。
该时间段可以是至少5分钟，优选为至少10分钟。该时间段可以介于10至200分钟或介于10至120分钟或介于10到60分钟之间。该方法还可以包括使装置被加热至用于孵育的温度。该用于孵育的温度可以是37℃。
可以使用一种或多种缓冲液冲洗和/或洗涤该样品和/或装置。
可以用缓冲液洗涤样品以降低彼此粘附的精子细胞的概率。
附图说明
现在将参考附图通过举例描述本发明的某些实施例，其中：
图1是具有第一和第二端口的微流体芯片，以及穿行于第一和第二柱之间且包含夹带结构的微通道的透视图；
图2是夹带结构阵列的透视图；
图3是第一类型的夹带结构的平面图；
图4是第二类型的夹带结构；
图5是包含第一类型的夹带结构阵列的微通道的平面图；
图6是包含第二类型的夹带结构的微通道的平面图；
图7a和图7b是夹带结构的又一些示例的平面图；
图8是夹带结构的再一个示例的平面图；
图9a至图9c是壁部结构的平面图；
图10a是第一装置和夹带结构的照片；
图10b是第二装置的照片和夹带结构的照片；
图11是分选和提取精子的方法的过程流程图；
图12是分选和提取精子的方法的过程流程图；
图13是样品分析结果表；
图14是样品分析结果表；
图15是样品分析结果表；
图16是样品分析结果表；
图17是样品分析汇总结果表；
图18是样品分析汇总结果表；
图19是精子活动性的条形图；
图20是精子活动性的条形图；
图21是精子形态的条形图；
图22是精子形态的条形图；
图23是精子碎片的条形图；
图24是精子碎片的条形图；
图25是精子DNA碎片的照片；
图26是精子DNA碎片的照片。
具体实施方式
参照图1，其中示出用于分选样品3中的活动细胞2，例如精子的装置1。
装置1包括腔室4，该腔室例如采用低高度通道的形式或与通道4流体连通的碟、入口5和出口6的形式。腔室4具有比其横向尺寸(例如长度和宽度)小，优选地小很多(至少小于10倍数或甚至100倍数)的高度。腔室4优选地具有介于50至300m之间的高度h。腔室4、入口5和出口6被布置成使得当含有活动细胞2的样品3被提供到入口5时，活动细胞2穿过4游向出口6。随着这些活动细胞游动穿过腔室4时，活动细胞2基于其活动性被分选并分离，使得较少活动性的细胞2(例如，不活动细胞)往往滞留在腔室4中，而更具活动性的细胞2往往沿着腔室4向前行进。
再参考图2，装置1包括设置在腔室4中的分立阻隔件8(或“棘轮”)的布置7，其从第一内表面9，例如腔室4的底部从对置的第二内表面，例如其顶面突出到腔室4中。布置7优选地采用周期性二维阵列的形式，例如六边形或立方晶格。阻隔件8与侧边相邻阻隔件相距介于10至500μm之间的第一间隙g1以及与前后相邻阻隔件相距介于10至500μm之间的第二间隙g2。
每个阻隔件8通常是非对称的，具有不同形状的第一面13和第二面14，该第一面和第二面分别朝向和远离第一端口5。第一面13包括至少一个壁部15，第二面14优选地包括至少一个壁部16。此处，壁部15、16可以被称为“侧壁”。壁部15、16或壁部15的相对端部相接于一个或多个锐角边缘17(本文称为“间断点”)。壁部15、16之间的角度大于0°且小于90°，优选小于30°。每个边缘17的曲率可以大于0μm且小于或等于50μm微米，优选小于20μm。
腔室4、入口5、出口6和阻隔件8被构造成使得活动细胞2花费介于10至60分钟之间，优选为约20分钟的时间T从入口5游动穿过腔室4。
装置1可以在环境温度，即室温下工作。然而，装置1可以设有加热器(未示出)，例如采用热板、烘箱或水浴的形式，以将该装置的工作温度提升到合适于孵育的温度，例如约37℃。
具体地参考图1，装置1优选地采用微流体芯片的形式。装置1可以包括第一和第二平面部分(未示出)的组装件，该第一和第二平面部分由玻璃和/或聚合物材料形成，例如聚二甲基硅氧烷(PDMS)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)或聚辛醇-共柠檬酸酯(POC)。第一部分(可以被称为“基部”)可以具有界定腔室4的底部(或“底面”)和侧部的和阻隔件8的图案面(未示出)。第二部分(可以被称为“封盖”)可以是无特征的(例如，平坦的)并且可以界定腔室4的顶部(或“顶面”)。封盖部还可以包括可以分别提供未精制样品并收集精制样品的第一和第二端口(未示出)。第一和第二部分(未示出)可以由相同的材料或不同的材料组成。装置1可以采用不同的方式制造，例如，通过模制或3D打印。
阻隔件8利用表面夹带，由此活动细胞2倾向于沿着表面游动，从而以对活动细胞分选。阻隔件8具有锐角间断点的弧形表面15、16，其以沿着期望的运动方向重定向游动细胞。
参考图3和图4，其中示出第一和第二阻隔件形状81、82。
具体参考图3，第一形状61通常具有箭头状几何形状，其具有连接在第一边缘171,1的两个凸面段151,1、151,2和通过尖锐第二和第三边缘171,2、171,3连接到凸面段91,1、91,2的一个凹面段161。为了分选细胞，阻隔件81朝向设为使得具有单个边缘171,1的侧面朝向装置81的入口5。朝期望方向游动的细胞沿着阻隔件81缓缓地被引导，而走错方向的细胞则被凹面段161调转方向重新朝向出口6。
第一阻隔件81由第一和第二交叉虚拟圆181、182的相交部分一半再被第三个圆183切除来界定。凸面壁151,1、151,2由各具有第一半径r1的第一和第二重叠虚拟圆181、182中截取的弧界定。凹面壁161由具有第二半径r2的第三虚拟圆183中截取的弧界定。在此例子中，r2<r1。第一阻隔件81的宽度w1介于10至500μm之间，长度l1介于10至1000μm之间。在该示例中，r1＝450μm，r2＝82μm，w1＝150μm和l1＝177μm。
具体参考图4，第二形状82通常具有新月形的几何形状，其具有通过锐角边缘172,1、172,2连接的一个凸面段152和一个凹面段162。边缘172,1、172,2朝向该装置的出口6。遇到凸面侧的细胞只会顺势被引导，而遇到凹面侧的细胞被重新定向朝向出口。
第二阻隔件82由第三和第四重叠虚拟圆183、184界定。凸面壁152和凹面壁162分别由具有第三半径r3和第四半径r4的第三圆183和第四圆184的第四和第五弧段界定。第一阻隔件81的宽度w2介于10至500μm之间，长度l2介于10至1000μm之间。在该示例中，r3＝125μm，r4＝137μm，w2＝250μm以及这两个圆错位39μm。
参照图5，腔室4采用通常采用大致直线的通道的形式，沿入口5和出口6之间的路径(其可以是直线的、弧线的或包括弯折)。通道4具有重复倒钩20的壁部19，在本例子中具有鲨鱼鳍的形状。使用第一形状81的阻隔件8的矩形阵列7。不同类型的阵列，例如，六边形和/或不同的阻隔件形状，例如，第二形状82，均可供使用。通道4可以具有不同的形状。
参照图6，腔室4可以是辐射状的(或“圆形”)，由此活动细胞沿着周向环形入口5被引入并朝中心出口6向内游动。腔室4由具有扇形22的大致圆形壁部21界定。使用第二形状82的阻隔件8的辐射状阵列7。不同类型的阵列，例如六边形，和/或不同的阻隔件形状，例如第一形状81，均可使用。
再次参考图3，阻隔件的第一形状61通常具有箭头状几何形状，其具有第一面13，该第一面包括两个凸面壁部151,1、151,2。然而，这些壁部可以具有其他不同的形状。
参照图7a至图7b，第一面13可以具有平直壁153,1、153,2或甚至凹面壁154,1、153,2，其在锐角边缘173,2、173,3、174,2、174,3与凹面壁163、164相接。例如，倒钩可能是半个箭头、半个新月或半个改形的箭头(完整改形的箭头具有两个凹面壁)。
参照图8，如果第一面13中存在两个或更多个壁部，则壁部155,1、155,2不一定具有相同的形状。例如，一个壁部155,1可以是平直的，另一壁部155,2可以是凸面的。因此，边缘175,2、175,3可以具有不同的尖锐度。
参照图9a至图9c，腔室4的壁部191、192、193可以具有不同形状的倒钩201、202、203，其可以基于本文描述的阻隔件的形状。
参考图10a和图10b，其中示出与如图6所示相似的装置1的照片和这些装置中所使用如图3所示的阻隔件81的照片。图10a示出装置1具有直径di为3mm的入口5，以及直径do为5mm的出口6。装置1也称为5*3或5*3mm装置。装置1的直径d介于2.5cm和3.5cm之间。5*3装置1包括阻隔件81，如图3所示，这些阻隔件按大于100μm的间距隔开，然而，具体根据所用的样品，阻隔件可以具有更大或更小的间距。在图10a和图10b的下部中示出装置1中的阻隔件81的更高倍放大的照片。具有这些箭头状阻隔件81的装置也可以称为“棘轮1”，或更简单地称为“R1”。3*5装置1的通道4可以小于100μm。图10b示出装置1具有直径di为5mm的入口5，以及直径do为5mm的出口6。装置1也称为5*5或5*5mm装置。装置1的直径d为3.5厘米。阻隔件8结构、间距和通道4在3*5装置与5*5装置中是相同的。
5*3装置可以产生更好的结果，因为在提取阶段中除去更少非期望的细胞和其他碎片，但是，从5*3装置中要比从5*5装置中更难提取样品。5*5装置可以得到比5*5装置所得到的品质更低的样本，但是从该装置中能够更容易提取样品。
入口5直径di和出口直径do可以介于1到8mm之间。该装置的直径d可以介于1到10cm之间。可以针对每个样本的品质和/或类型优化入口和出口的尺寸。
再次参照图3，图10a和图10b中的装置中的阻隔件81可以具有宽度w1为125μm和长度l1为175μm。
3*5器件1被用于在使用60μl的精液样品时将精液中高品质的精子与正常品质的精子隔离开，以及5*5装置被用于在使用100μl的精液样品时将精液中高品质的精子与正常品质和差品质的精子隔离开。
参照图11和图12，收集正常品质和差品质的精液样本并将其注入装置1中以隔离出较高品质的精子。
精液是从14次射精中回收的。按照世界卫生组织标准，基于精子向前活动性(PR)，将射精分成正常组和异常组。在通过所有方法从精液样品中选择的精子中(使用末端脱氧核苷酸转移酶TDT DUTP缺口末端标记(TUNEL)测定法)测量精子浓度、向前活动性、总体活动性、形态和DNA碎片率。
具体参考图11，其中示出使用装置1在正常精子质量样本中隔离出高品质精子的方法步骤。在步骤S1中，使用缓冲液清洗样品，例如Earle公司的平衡盐溶液(1XEBSS)。可以使用其他合适的缓冲液，并且类型和浓度将取决于该过程的样品和期望的结果。在步骤S2中，使用缓冲液冲洗样品以减少精子彼此粘附的机会，例如1XEBSS中的0.2％牛血清白蛋白(BSA)。然而，也可以使用降低精子彼此粘附概率的其他合适的缓冲液。在步骤S3中，如果该阶段中样品中存在过量的流体，则可以在装入装置之前从样品中除去该流体。在步骤S4中，在37℃的热板上将样品和/或装置升温。在步骤S5中，将精液样品分成四个相等的部分并加载到装置1的四个入口5中，然而，可能仅一些入口5有将部分精液装入其中。在步骤S6中，将包含样品的装置1在37℃下孵育5分钟，并且使用显微镜手动或者自动使用显微镜和摄像机观察到精子迁移，以确认样品已正确地被加载。可以使用其他确认已经正确加载样品的方法，例如在步骤S7开始时使用光学或移动传感器。在步骤S7中，将含有样品的装置孵育60分钟。在步骤S8中，在孵育后手动或自动观察精子。在步骤S9中，使用移液管经由出口6从装置1提取精子。从出口6抽取的容积可以介于35和60μl之间。
具体参考图12，其中示出使用装置1在精子品质差的样本中隔离出高品质精子的方法步骤。对于品质差的精子样品，步骤S1至S6与正常品质的精子样品相同。在步骤S7中，将含有样品的装置孵育120分钟。步骤S8和S9与正常品质的精子样本相同。从出口6抽取的容积可以介于40和75μl之间。
在作业装置中可以使用备选过程。可以对上面概述的过程中的步骤进行修改或省去，例如，步骤S3可以完全被省去。还可以增设附加的步骤，例如，利用附加的缓冲液附加性地洗涤或冲洗样品和/或装置。与过程中的步骤相关联的样品的定时、温度和容积可以针对具体的样本、物种或过程目标进行优化，例如，在步骤S7中孵育时间可以更长或更短，具体取决于精子的样本类型、尺寸和速度。该过程结束时从装置中提取的容积可以更高或更低，具体取决于所使用的样品的类型和容积和添加到样品中的缓冲液的类型和容积。在高吞吐量系统中，还可以省去步骤S6，或者将去与步骤S8组合，其中在步骤S8开始时执行样本的观察。
参考图13，一个表格指示精液样品过程成功(以勾选表示)或未成功(以打叉表示)。取自正常品质精子的10个个例(N1至N10)和具有差品质精子的6个个例(A1至A6)的样本，执行5种用于隔离高品质精子的方法。这些方法是密度梯度离心分离法(DGC)、向上游动(SU)、使用5*3装置的方法和具有阻隔件81的5*5装置，如图2和图3所示(也标记为“R1”)以及使用图4中所示的阻隔件82的装置(标记为“R2”)的方法。从该表可以看出，使用5*3装置1成功地处理正常品质精子的九个样本，并使用5*5装置1成功地处理差品质精子的五个样本。使用R2方法成功地处理正常品质组和差质量组中的总共4个样品。
参考图14至图16，表中给出样品分析中的结果。结果显示浓度、百分比向前活动性(％PR)、百分比活动性(％活动性)、提取的容积、提取的浓度、显示正常和异常形态(基于世界卫生组织分类)的精子百分比和基于TUNEL方法的完整或碎片化的精子的百分比。
具体参考图16，详细描述差品质精子的果的表也显示精子是否具有归类为乏力精子的低活动性状况。
参考图17和图18，其中以汇总形式呈现图13至图16中给出的这些方法的结果。
参考图19，条形图图示百分比向前活动性和百分比运动活动性±均值标准误差(±SEM)，其对应于图13所示的表中的方法得到的正常品质精子以及还有未处理的精液的结果。该图还包含统计分析的结果，其中显示使用具有LSD的单向ANOVA(单向分析方差与最小显著差异的方差)，R1的5*3装置得到与原始样本、经过密度梯度离心分离的样品和经过向上游动的样品相比运动性和向前活动性显著更高的样本。
参考图20，条形图图示百分比向前活动性和百分比活动性±均值标准误差(±SEM)，其对应于由图13所示的表中的三种方法得到的差品质精子以及未处理的精液的结果，具体为密度梯度离心分离和使用R1 5*5装置的方法。具有LSD的单向ANOVA也显示由R15*5装置提取的样品与未处理的精液和经过密度梯度离心分离的样品之间在向前活动性和活动性百分比上的显著差异。
参考图21，条形图图示百分比正常形态±均值标准误差(±SEM)，其对应于图13所示的表中的方法得到正常品质精子以及还有未处理的精液的结果。具有LSD的单向ANOVA也显示由R5*3装置提取的样品以及未处理的精液在百分比正常形态上的显著差异。
参考图22，条形图图示百分比正常形态±均值标准误差，其对应于经过密度梯度离心分离和使用R1 5*5装置处理的差品质精子以及还有未处理的精液的结果。
参考图23，条形图图示百分比精子碎片率±均值标准误差(±SEM)，其对应于图13所示的表中的方法得到正常品质精子以及还有未处理的精液的结果。具有LSD的单向ANOVA也显示由R1 5*3和R1 5*5装置提取的样品较之于其他方法和未处理的精液在百分比碎片率上的显著差异。
参考图24，条形图图示百分比精子碎片率±均值标准误差，其对应于经过密度梯度离心分离和使用R1 5*5装置处理的差品质精子以及还有未处理的精液的结果。具有LSD的单向ANOVA也显示由R1 5*5装置提取的样品较之于经过密度梯度离心分离的样本以及未处理的精液在百分比碎片率上的显著差异。
参照图25，其中示出200×放大的碎片化精液的照片，这些照片对应于未处理的精液，以及经过密度梯度离心分离、向上游动和使用R1 5*3装置处理的样品。碎片经染色呈现为浅蓝色并标记为“LB”。
参照图26，其中示出在600×放大的碎片化精液的照片，这些照片对应于未处理的精液，以及经过密度梯度离心分离、向上游动和使用R2 5*3装置处理的样品。碎片被染色为绿色(本文中以“G”指示)，部分碎片化的精子被染色为橙色(本文中以“O”指示)，以及未碎片化且未受损的精子被染色为红色，(本文中以“R”指示)。
修改
应当认识到，可以对前文描述的实施例进行多种修改。此类修改可以包括活动细胞分选装置及其部件的设计、制造和使用中已经公知的以及可替代为或补充以本文已描述的特征的等效物和其他特征。实施例的特征可以被另一个实施例的特征替代或补充。
凹面或凸面表面不一定界定为圆弧形。例如，表面可以由椭圆形，双曲线或其他合适的曲线的弧界定。该表面上曲率可以变化。
尽管本申请中将权利要求解释为多个特征的特定组合，但是应该理解，本发明公开的范围还包括任何新颖的特征或本文明示或隐含地公开的特征的任何新颖组合或其任何泛化，无论是否涉及在任何权利要求中当前主张权利的同一个发明，以及无论是否减轻缓解了任何或所有与本发明所实现相同的技术问题。申请人由此声明，在本申请或据此派生的任何后续申请的授予程序期间可以将新权利要求解释为此类特征和/或此类特征的组合。

Claims (25)

1.一种活动细胞分选装置，包括：
腔室；
与所述腔室流体连通的入口和出口；以及
设在所述腔室中的多个分立阻隔件，其中，每个分立阻隔件包括至少一个壁部和至少一个朝向所述出口的锐角边缘。
2.根据权利要求1所述的装置，其中，所述至少一个壁部包括：
第一壁部和第二壁部；以及
其中，所述至少一个锐角边缘包括：
所述第一壁部和第二壁部之间的第一锐角边缘。
3.根据权利要求2所述的装置，其中，所述第一壁部是凸面的、平直的或凹面的。
4.根据权利要求2或3所述的装置，其中，所述第二壁部是凹面的。
5.根据权利要求2或3所述的装置，其中，所述第二壁部是平直的。
6.根据权利要求2至5中任一项所述的装置，所述至少一个锐角边缘还包括：
第二个锐角边缘。
7.根据权利要求6所述的装置，其中，所述第二锐角边缘位于所述第一壁部和所述第二壁部之间。
8.根据权利要求7所述的装置，其中，所述至少一个壁部包括：
第三壁部；
其中，所述第二锐角边缘位于所述第二壁部和所述第三壁部之间。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的装置，其中，所述腔室包括通道，所述通道穿行于分别设在第一和第二端处的所述入口和所述出口之间，并且所述通道包括第一和第二通道壁。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的装置，其中，所述腔室是具有周边和中心的碟形，并且其中，所述入口是环形的且围绕所述腔室的所述周边布置，并且所述出口布置在所述中心处。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的装置，其中，所述腔室的高度介于50至300μm之间。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的装置，其中，所述分立阻隔件的宽度介于10与500μm之间。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的装置，其中，所述分立阻隔件的长度介于10与1000μm之间。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的装置，其中，所述分立阻隔件在第一方向上与相邻分立阻隔件间隔开介于10至500μm之间的第一间隙。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的装置，其中，所述分立阻隔件在不同的第二方向上与相邻分立阻隔件间隔开介于10至500μm之间的第二间隙。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的装置，其中，所述分立阻隔件从底面或顶面突出到所述腔室中。
17.根据权利要求1至16中任一项所述的装置，其中，所述分立阻隔件具有相同的形状和/或相同的尺寸。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的装置，其中，所述分立阻隔件布置成周期性阵列。
19.根据权利要求18所述的装置，其中，所述阵列是矩形阵列。
20.根据权利要求18所述的装置，其中，所述阵列是六边形阵列。
21.一种宫内人工授精试剂盒，包括根据权利要求1至20中任一项所述的装置。
22.一种使用根据权利要求1至20中任一项所述的装置的方法，所述方法包括：
将包含活动细胞的样品提供到所述入口；
等待至少1分钟的时段；以及
等待所述时段后，从所述出口收集精制样品。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述时段至少为5分钟。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中，所述时段介于10至60分钟之间。
25.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，还包括：
使所述装置被加热至用于孵育的温度，例如37℃。
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