CN114340654A - 阿尔茨海默病和轻度认知障碍的生物标志物和治疗 - Google Patents
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Abstract
本披露提供了用于治疗阿尔茨海默病或轻度认知障碍的免疫原性肽、组合物、手段和方法。本披露进一步提供了用于诊断患者、选择患者进行治疗和/或评估治疗阿尔茨海默病或轻度认知障碍的功效的手段和方法。
Description
交叉引用
本申请要求2019年9月9日提交的美国临时专利申请号62/897,940和2020年4月1日提交的美国临时专利申请号63/003,585的优先权；它们各自的全部内容通过援引并入本文。
技术领域
本披露涉及用于治疗阿尔茨海默病或轻度认知障碍的免疫原性肽、组合物、手段和方法。本披露进一步描述了用于诊断和/或选择用于治疗阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的手段和方法，以及用于评估治疗阿尔茨海默病或轻度认知障碍的功效的手段和方法。
背景技术
阿尔茨海默病(AD)是进行性神经退行性障碍，其可破坏大脑高级结构，例如与记忆和认知有关的结构。这种疾病导致认知功能缺陷和记忆力、学习能力、语言能力以及进行有意图和有目的的运动的能力下降。需要用于治疗和预防AD的有效方法和组合物。
AD在组织学上的典型特征是脑中存在神经元外斑块以及细胞内和细胞外神经原纤维缠结。斑块主要由β淀粉样蛋白(Aβ)构成，而缠结包含tau的病理形式，例如病理tau构象异构体及其聚集体。许多研究证明了tau在AD病理学中的公认作用。例如，Braak表明与AD神经变性最密切相关的是tau缠结的存在，而不是淀粉样蛋白斑块的存在(Braak,H.等人Neuropathological staging of Alzheimer-related changes[阿尔茨海默病相关变化的神经病理学分期].Acta Neuropathol[神经病理学学报]82:239-259(1991))。许多研究证明了tau在AD病理学中的公认作用。
Tau属于本质上乱序的蛋白质家族，其特点是在其生理环境中缺乏刚性的三维结构(Zilka等人,2008)。然而，tau截短和过度磷酸化会导致从本质上乱序状态到多重可溶性和不溶性乱序结构(包括成对的螺旋丝(PHF)和其他聚集体)的病理转变(Wischik等人,1988a；Wischik等人,1988b；Novak等人,1993；Skrabana等人,2006；Zilka等人,2008；Kovacech等人,2010)。这些结构变化导致毒性功能增加，或天然蛋白质生理功能的丧失，或两者兼而有之(Zilka等人,2008；Kovacech等人,2010)。
尽管tau似乎在AD的临床表现中发挥了病理作用，但对针对tau的药物的开发一直很缓慢，部分原因是tau在生理微管动力学中的重要性及其复杂的生物学(Dickey和Petrucelli,2006)。然而，对作为tau病理转化基础的分子机制的增进了解开辟了特异性靶向tau的病理修饰用于治疗目的的可能性。因此，出现了许多直接或间接靶向tau级联反应的治疗方法(评论文章参见例如Dickey和Petrucelli,2006；Schneider和Mandelkow,2008；Zilka等人,2008)，包括防止或逆转tau聚集的化合物(Wischik等人,1996；Necula等人2005；Pickhardt等人,2005；Taniguchi等人,2005a；Larbig等人,2007)，抑制tau激酶或激活tau磷酸酶的小分子类型药物(Iqbal和Grundke-Iqbal,2004；Noble等人,2005；Iqbal和Grundke-Iqbal,2007)，微管稳定药物(Zhang等人,2005)，促进错误折叠的tau蛋白水解降解的药物(Dickey等人,2005,Dickey等人2006；Dickey和Petrucelli,2006)和免疫抑制药物(Zilka等人,2008)，以及包括主动和被动免疫在内的免疫治疗策略(Schneider和Mandelkow等人,2008；Zilka等人,2008:Tabira,T.Immunization Therapy for Alzheimerdisease:A Comprehensive Review of Active Immunization Strategies[阿尔茨海默病的免疫疗法：主动免疫策略的综合回顾].Tohoku J.Exp.Med.[东北实验医学杂志],220:95-106(2010))。
Novak等人的国际公开号WO 2013/041962(通过引用以其整体并入本文)描述了发现促进AD中tau-tau聚集的tau的四个区域，以及通过结合四个区域来防止tau聚集的疫苗和抗体。
在几项针对AD的APP转基因小鼠研究中，发现一种主动免疫方法(即，患者身体自身产生针对靶标的免疫性的方法)可有效清除Aβ沉积物和逆转神经病理学病损(参见例如Schenk等人,1999；Janus等人,2000；Morgan等人,2000；Sigurdsson等人,2001)。最近，使用磷酸化tau表位(Tau 379-408[P-Ser 396,404])的主动免疫疗法降低了tau在脑中聚集的程度，并减缓了tau缠结病理学小鼠模型中行为表型的进展(Asuni等人,2007；Boutajangout等人2010；US 2008/0050383；US/2010/00316564)。经治疗的动物产生抗tau抗体，这些抗体在脑中被检测到并与识别病理性tau的抗体共定位(Asuni等人,2007)。这种免疫治疗方法在动物中功能障碍的早期阶段(5个月)比后期(8个月)更有效，这表明清除早期病理性tau可能具有治疗益处(Asuni等人,2007；Zilka等人,2008)。事实上，人们意识到并非所有tau都容易受到影响或可能甚至适合破坏和清除。一些人认为破坏tau聚集体可能会增加有毒中间物质的丰度，而另一些人则认为可检测到的tau聚集体不一定有毒，甚至可以起到保护作用(Lee等人,2005)。
因此，尽管靶向tau的免疫治疗方法已显示出临床前前景，但仍需要经过验证的产生改进的持久的益处的治疗剂和方法。
发明内容
在一些实施例中，本披露涉及用于诊断患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)检测该患者或来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或量；b)其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明该受试者中的阿尔茨海默病；c)根据步骤(b)诊断该患者中阿尔茨海默病的存在或不存在。在一些实施例中，检测一种或多种上述mRNA生物标志物的存在和/或量包括：a)从患者获取脑脊液(CSF)、血清或血浆样品；b)任选地从该患者的CSF、血清或血浆提取hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种；c)任选地进行cDNA合成；以及d)例如，使用定量聚合酶链式反应(qPCR)检测hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或量。在一些实施例中，对照样品来自健康个体或患有阿尔茨海默病的患者。
在一些实施例中，该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、或hsa-miR-21-5p的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、或hsa-miR-21-5p的量比对照样品中的低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％，80％、90％或100％。在一些实施例中，该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、或hsa-miR-21-5p的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％，80％、90％、100％、200％或500％。在一些实施例中，患者的诊断在体外进行。
在一些实施例中，相对于对照样品或阈值，hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、或至少7或更多种的存在和/或改变的量表明受试者中的阿尔茨海默病。在一些实施例中，检测hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量。在一些实施例中，向诊断患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者施用一个或多个剂量的免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，本披露涉及用于诊断患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)检测该患者血浆、血清或脑脊液(CSF)中一种或多种代谢物的存在和/或量，例如2,4-二羟基丁酸、磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂或甾醇；b)其中一种或多种代谢物的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明受该试者中的阿尔茨海默病；c)根据步骤(b)诊断该患者中阿尔茨海默病的存在或不存在。在一些实施例中，检测一种或多种代谢物的存在和/或量包括：a)从患者获取脑脊液(CSF)、血清或血浆样品；b)从患者的CSF、血清或血浆中提取一种或多种代谢物；c)确定一种或多种代谢物的量，例如使用质谱法。在一些实施例中，质谱法是飞行时间质谱法或串联质谱法/质谱法。在一些实施例中，对照样品来自健康个体或患有阿尔茨海默病的患者。
在一些实施例中，来自患者的样品中的代谢物的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中代谢物的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％或500％。在一些实施例中，来自患者的样品中代谢物的量比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施例中，患者的诊断在体外进行。
在一些实施例中，相对于对照样品或阈值，至少2、至少3、至少4、至少5、至少6或至少7种或更多种代谢物的存在和/或改变的量表明受试者中的阿尔茨海默病。在一些实施例中，向诊断患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者施用一个或多个剂量的免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：a)检测来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；b)当相对于对照样品或阈值来自该患者的样品具有hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种或hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的水平改变时，选择该患者进行治疗；以及c)选择该患者通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物进行治疗，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，来自患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p的量比对照样品中低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中hsa-miR-15a-5p的量比对照样品中低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中hsa-miR-23a-3p的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，相对于对照样品或阈值，hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的至少2、至少3或至少4种的存在和/或改变的量表明受试者中的阿尔茨海默病。在一些实施例中，相对于对照样品或阈值，hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的至少2、至少3或至少4种的存在和/或改变的量表明选择受试者用一个或多个剂量的免疫原性组合物进行治疗，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：a)检测来自患者的样品中神经丝轻链(NfL)的存在和/或量；b)当来自该患者的样品相对于对照样品或阈值含有NfL和/或NfL的改变(例如，增加)的量时，选择该患者进行治疗；以及c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，患者中NfL的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中NfL的量比约20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50pg/ml的阈值更多。在一些实施例中，患者中的NfL的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施例中，对照样品是血浆样品。在一些实施例中，来自患者的样品是血浆样品。在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：a)确定患者的简易精神状态检查(MMSE)得分；b)将步骤a)的得分与阈值得分进行比较；b)选择患者进行治疗，其中患者的MMSE得分高于阈值；以及d)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，患者的MMSE得分是至少29、至少28、至少27、至少26、至少25、至少24、至少23、至少22、至少21、至少20、至少19、至少18、至少17、至少16、至少15、至少14、至少13或至少12。在一些实施例中，患者的MMSE得分是或大于29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13或12的阈值。在一些实施例中，患者的MMSE得分是24-26。在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：a)确定患者中存在的ApoE基因的两个等位基因中的每一个的基因型；b)当该患者具有至少一个ApoE-ε4等位基因时选择该患者进行治疗；以及c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。在一些实施例中，患者具有两个ε4等位基因。在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：a)检测患者样品中神经粒蛋白的存在和/或量；b)当该患者或来自该患者的样品相对于对照样品或阈值含有神经粒蛋白和/或增加的量时，选择该患者进行治疗；以及c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，来自患者的样品中的神经粒蛋白的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中的神经粒蛋白的量高于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50或100pg/ml的阈值。在一些实施例中，来自患者的样品中神经粒蛋白的量比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施例中，来自患者的样品中神经粒蛋白的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。
在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)确定来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤(a)的治疗前的存在和/或量，其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的改变的量表示治疗功效；以及e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
在一些实施例中，治疗后hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p的量减少表示功效。在一些实施例中，治疗后hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p减少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍表示功效。在一些实施例中，治疗后hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量增加表示功效。在一些实施例中，治疗后hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23增加约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍表示功效。
在一些实施例中，在步骤(b)中患者已经用至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、或15个剂量的免疫原性肽治疗。在一些实施例中，在步骤(e)中用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的免疫原性肽治疗患者。
在一些实施例中，治疗患者包括以2周间隔、3周间隔、4周间隔、5周间隔、6周间隔、7周间隔、8周间隔、9周间隔、10周间隔、11周间隔、12周间隔、13周间隔、14周间隔、15周间隔、20周间隔、25周间隔、30周间隔、35周间隔，或40周间隔施用剂量。
在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)确定该患者中NfL的存在和/或量；b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；c)在施用该一个或多个剂量后，确定患者中NfL的存在和/或量；d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中NfL的改变的量表示治疗功效；以及e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
在一些实施例中，治疗后NfL的量稳定或减少表示功效。在一些实施例中，治疗后NfL的量增加不超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。在一些实施例中，治疗后NfL的量减少超过约30％、25％、20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。在一些实施例中，治疗后NfL的量增加不超过约6pg/mL、5pg/mL、4pg/mL、3pg/mL或2pg/mL表示功效。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，患者中NfL的量增加不超过约3.2pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，患者中NfL的量增加约1至约3.2pg/mL。在一些实施例中，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，施用一个或多个剂量的免疫原性组合物的患者中NfL水平的增加与未接受一个或多个剂量的免疫原性组合物的年龄匹配患者中NfL水平的增加相比低约10％、约20％、约30％，约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约100％。在一些实施例中，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，施用一个或多个剂量的免疫原性组合物的患者中NfL水平的增加与施用安慰剂的年龄匹配患者中NfL水平的增加相比低约10％、约20％、约30％，约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％或约100％。
在一些实施例中，在步骤(b)中患者已经用至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、或15个剂量的免疫原性肽治疗。在一些实施例中，在步骤(e)中用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的免疫原性肽治疗患者。在一些实施例中，一个或多个剂量的免疫原性组合物包括至少6个剂量。在进一步的实施例中，一个或多个剂量的免疫原性组合物包括6个每月剂量，随后是至少5个加强剂。
在一些实施例中，治疗患者包括以2周间隔、3周间隔、4周间隔、5周间隔、6周间隔、7周间隔、8周间隔、9周间隔、10周间隔、11周间隔、12周间隔、13周间隔、14周间隔、15周间隔、20周间隔、25周间隔、30周间隔、35周间隔，或40周间隔施用剂量。
在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)确定该患者中神经粒蛋白的存在和/或量；b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；c)在施用该一个或多个剂量后，确定患者中神经粒蛋白的存在和/或量；d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中神经粒蛋白的改变的量表示治疗功效；以及e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
在一些实施例中，治疗后神经粒蛋白的量稳定或减少表示功效。在一些实施例中，治疗后神经粒蛋白的量增加不超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。在一些实施例中，治疗后神经粒蛋白的量减少超过约30％、25％、20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。在一些实施例中，治疗后神经粒蛋白的量增加不超过约20pg/mL、18pg/mL、16pg/mL、14pg/mL、12pg/mL、10pg/mL、8pg/mL、6pg/mL、5pg/mL 4pg/mL、3pg/mL或2pg/mL表示功效。
在一些实施例中，在步骤(b)中患者已经用至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、或15个剂量的免疫原性肽治疗。在一些实施例中，在步骤(e)中用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的免疫原性肽治疗患者。
在一些实施例中，治疗患者包括以2周间隔、3周间隔、4周间隔、5周间隔、6周间隔、7周间隔、8周间隔、9周间隔、10周间隔、11周间隔、12周间隔、13周间隔、14周间隔、15周间隔、20周间隔、25周间隔、30周间隔、35周间隔，或40周间隔施用剂量。
在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)确定患者的简易精神状态检查(MMSE)得分；b)将来自步骤(a)的得分与阈值得分进行比较，其中任选地，阈值得分是20-26；c)选择患者进行治疗，其中患者的MMSE得分高于阈值；d)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；e)在施用该一个或多个剂量后，确定患者的MMSE得分；f)比较来自步骤(e)的治疗后的MMSE得分与来自步骤(a)的治疗前的MMSE得分，其中改变的MMSE得分表示治疗功效；以及g)当该患者在步骤(f)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)确定该患者中的AD生物标志物特征(例如，总tau蛋白>400pg/mL；pT181 tau蛋白>60pg/mL；Aβ42<600pg/mL；和Aβ42:Aβ40比率<0.089中的一个或多个)；b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中的AD生物标志物特征；d)将来自步骤(c)的治疗后的生物标志物特征与来自步骤(a)的治疗前的生物标志物特征进行比较，其中改变的生物标志物特征表示治疗功效；以及e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT181降低至少8.1pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，总tau降低至少71.8pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT217降低至少69.2pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，Aβ40降低至少888pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，Aβ42保持稳定(例如，与基线相比不超过1％、5％、10％、15％、20％或25％的变化)。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，Aβ42保持稳定(例如，与基线相比变化，例如降低，约25pg/mL、约20pg/mL、约15pg/mL，约10pg/mL，或约5pg/mL)。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，患者中的Aβ42水平降低约20pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT181降低至少8.1pg/mL，pT217降低至少69.2pg/mL，总tau降低至少71.8pg/mL，并且Aβ40降低至少888pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT181降低至少8.1pg/mL，pT217降低至少69.2pg/mL，总tau降低至少71.8pg/mL，Aβ40降低至少888pg/mL，以及Aβ40保持稳定。在一些实施例中，使用协方差分析(ANCOVA)模型计算在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后AD生物标志物特征与基线相比的变化。
在一些实施例中，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT181降低(与基线相比)。例如，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT181可降低至少约2至约15pg/mL、约5至约15pg/mL、约2至约10pg/mL、或约5至约10pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT181降低至少约5至约10pg/mL。
在一些实施例中，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，总tau降低(与基线相比)。例如，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，总tau可减少至少约40至约100pg/mL、约50至约90pg/mL、约55至约85pg/mL、约60至约80pg/mL、或约65至约75pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，总tau降低至少约65至约75pg/mL。
在一些实施例中，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT217降低(与基线相比)。例如，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT217可减少至少约40至约100pg/mL、约50至约90pg/mL、约55至约85pg/mL、约60至约80pg/mL、或约65至约75pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT217降低至少约65至约75pg/mL。
在一些实施例中，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，Aβ40降低(与基线相比)。例如，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，Aβ40降低至少约700至约1100pg/mL、约750至约1050pg/mL、约800至约1000pg/mL、或约850至约950pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，Aβ40降低至少约850至约950pg/mL。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，Aβ42保持稳定(例如，与基线相比不超过1％、5％、10％、15％、20％或25％的变化)。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，Aβ42保持稳定(例如，与基线相比降低约25pg/mL、约20pg/mL、约15pg/mL，约10pg/mL，或约5pg/mL)。在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT181降低至少约5至约10pg/mL，pT217降低至少约65至约75pg/mL，总tau降低至少约65至约75pg/mL，以及Aβ40降低约850至约950pg/mL。
在一些实施例中，与基线相比，在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后两年，pT181降低至少约5至约10pg/mL，pT217降低至少约65至约75pg/mL，总tau降低至少约65至约75pg/mL，Aβ40降低约850至约950pg/mL，以及Aβ40保持稳定。在一些实施例中，使用协方差分析(ANCOVA)模型计算在施用一个或多个剂量的免疫原性组合物后AD生物标志物特征与基线相比的变化。
在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)确定根据患者脑MRI评估的内侧颞叶萎缩的体积；b)如果内侧颞叶萎缩高于阈值(例如Scheltens得分≥2)，则施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；c)在施用该一个或多个剂量后，确定患者颞叶萎缩的体积；d)比较在步骤(c)中治疗后评估的颞叶萎缩与在步骤(a)中治疗前评估的颞叶萎缩，其中改变的颞叶萎缩表示治疗功效；以及e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括向样品中表达hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的患者施用一个或多个剂量的包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽的免疫原性组合物。在一些实施例中，患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量相对于对照样品或阈值差异是约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量比对照样品或阈值中高约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，来自患者的样品中的hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p的量比对照样品或阈值中低约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，对照样品来自健康个体或患有阿尔茨海默病的患者。在一些实施例中，对照样品是血浆或CSF。
在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括向样品中具有NfL的患者施用一个或多个剂量的包含含有SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2的免疫原性肽的免疫原性组合物。在一些实施例中，患者中的NfL的量低于10、20、30、40、50、60、70、80、90或100pg/ml的阈值。在一些实施例中，患者中NfL的量高于20pg/ml。
在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括向MMSE得分高于23的患者施用一个或多个剂量的包含含有SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2的免疫原性肽的免疫原性组合物。在一些实施例中，患者的MMSE得分是26、27、28、29或30。
在一些实施例中，本披露涉及治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括向具有ApoE基因的至少一个ε4等位基因的患者施用一个或多个剂量的包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽的免疫原性组合物。
在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：a)确定患者中一种或多种代谢物的存在和/或量；b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；c)在施用该一个或多个剂量后，确定患者中一种或多种代谢物的存在和/或量；d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中神经粒蛋白的改变的量表示治疗功效；以及e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。在一些实施例中，治疗后一种或多种代谢物的改变的量表示功效。在一些实施例中，一种或多种代谢物的量增加超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。在一些实施例中，一种或多种代谢物的量减少超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。在一些实施例中，治疗后至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种或至少7种代谢物的改变的量表示功效。在一些实施例中，在步骤(b)中患者已经用至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、或15个剂量的免疫原性肽治疗。在一些实施例中，在步骤(e)中用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的免疫原性肽治疗患者。在一些实施例中，治疗患者包括以2周间隔、3周间隔、4周间隔、5周间隔、6周间隔、7周间隔、8周间隔、9周间隔、10周间隔、11周间隔、12周间隔、13周间隔、14周间隔、15周间隔、20周间隔、25周间隔、30周间隔、35周间隔，或40周间隔施用剂量。
在一些实施例中，本披露涉及用于选择患有阿尔茨海默病的患者以用免疫原性组合物治疗的方法，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽，该方法包括：a)检测该患者或来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或量；b)与对照样品或阈值进行比较，其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明该受试者中的阿尔茨海默病；以及c)基于步骤(b)选择患者进行治疗。在一些实施例中，本披露涉及用于选择患有阿尔茨海默病的患者以用免疫原性组合物治疗的方法，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽，该方法包括：a)检测该患者血浆、血清或脑脊液(CSF)中2,4-二羟基丁酸、磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂和/或甾醇存在和/或量；b)与对照样品或阈值进行比较，其中一种或多种代谢物的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明受该试者中的阿尔茨海默病；以及c)基于步骤(b)选择患者进行治疗。
在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括向该患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，其中该免疫原性组合物以有效产生至少100ng/mL的针对病理性tau的抗体的抗体滴度的量施用。在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括向该患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，其中该免疫原性组合物以有效产生至少100ng/mL的针对p108 tau肽的抗体的抗体滴度的量施用肽。在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括向该患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，其中该免疫原性组合物以有效产生至少1000ng/mL的针对p108 tau肽的抗体的抗体滴度的量施用肽。在一些实施例中，本披露涉及治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括向该患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，其中该免疫原性组合物以有效产生结合p108 tau肽的抗体(例如IgG、IgM抗体)的滴度的计算曲线下面积(AUC)为至少100,000的量施用。在一些实施例中，抗体是IgG抗体。在一些实施例中，该方法包括施用六个剂量的免疫原性肽或组合物的初始给药方案，随后施用至少五个加强剂。在一些实施例中，施用的加强剂的数量是固定的、六个或七个。
在一些实施例中，免疫原性肽诱导至少一种抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约10nM或更小。在一些实施例中，免疫原性肽诱导至少一种抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约4.2nM或更小(例如，约4.2nM至约0.01nM)。在一些实施例中，免疫原性肽诱导至少一种抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约1nM或更小(例如，约1nM至约0.01nM)。在一些实施例中，病理性tau包含tau151-391/4R。
在一些实施例中，该方法包括初始给药方案，该方案包括每月一次施用一个剂量的免疫原性组合物，持续例如六个月。
在一些实施例中，该方法还包括在初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个(例如，五个、六个、七个等)加强剂。
在一些实施例中，如果针对病理性tau的抗体滴度低于100ng/mL，则该方法还包括在初始给药方案之后以有效恢复针对病理性tau的抗体滴度至至少100ng/mL的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂后，从初始给药方案(例如，六个剂量的免疫原性肽)开始测量，针对病理性tau的抗体的平均滴度为至少100ng/mL持续至少两年。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。在一些实施例中，该方法包括施用至少六个加强剂。在一些实施例中，该方法包括施用至少七个加强剂。在一些实施例中，患者患有阿尔茨海默病。
在一些实施例中，如果针对p108 tau肽的抗体滴度低于100ng/mL，则该方法还包括在初始给药方案之后以有效恢复针对p108 tau肽的抗体滴度至至少100ng/mL的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂后，从初始给药方案(例如，六个剂量的免疫原性肽)开始测量，针对p108 tau肽抗体的平均滴度为至少100ng/mL持续至少两年。在一些实施例中，如果针对p108 tau肽的抗体滴度低于1000ng/mL，则该方法还包括在初始给药方案之后以有效恢复针对p108 tau肽的抗体滴度至至少1000ng/mL的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂后，从初始给药方案(例如，六个剂量的免疫原性肽)开始测量，针对p108tau肽抗体的平均滴度为至少1000ng/mL持续至少两年。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。在一些实施例中，该方法包括施用至少六个加强剂。在一些实施例中，该方法包括施用至少七个加强剂。在一些实施例中，患者患有阿尔茨海默病。
在一些实施例中，如果结合p108 tau肽的抗体(例如IgG、IgM抗体)的滴度的计算的曲线下面积(AUC)低于100,000，则该方法进一步包括在初始给药方案之后以有效地将结合p108 tau肽的抗体(例如，IgG、IgM抗体)的滴度的计算的AUC恢复到至少100,000的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂之后，从初始给药方案(例如，六个剂量的免疫原性肽)开始测量，结合p108 tau肽的抗体(例如，IgG、IgM抗体)的滴度的平均计算的AUC为至少100,000持续至少两年。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。在一些实施例中，该方法包括施用至少六个加强剂。在一些实施例中，该方法包括施用至少七个加强剂。在一些实施例中，患者患有阿尔茨海默病。
在一些实施例中，相对于血浆中神经丝轻链的基线积累，以有效稳定或减少血浆中神经丝轻链积累的量施用免疫原性组合物。在一些实施例中，在初始给药方案后，相对于基线积累，患者血浆中的神经丝轻链浓度稳定(例如，神经丝轻链浓度增加不超过1％、5％、10％、15％、20％或25％)在一些实施例中，在初始给药方案之后，相对于基线积累，患者血浆中神经丝轻链的积累减少。在一些实施例中，该方法还包括在初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，如果患者在初始给药方案后具有相对于基线积累增加的血浆中神经丝轻链的积累(例如，超过约25％的增加)，该方法进一步包括在初始给药方案之后以有效稳定或减少血浆中神经丝轻链积累的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂后，从初始给药方案开始测量，患者在血浆中具有稳定的神经丝轻链浓度或减少的神经丝轻链积累持续至少两年。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
在一些实施例中，在施用免疫原性组合物之后(例如，在施用初始给药方案之后)：如果患者为50-67岁，血浆中神经丝轻链浓度增加不超过2pg/mL，优选不超过1.8pg/mL，持续至少两年；或者如果患者是68-85岁，血浆中神经丝轻链的浓度增加不超过2.3pg/mL持续至少两年。在一些实施例中，该方法还包括在初始给药方案之后施用一个或多个加强剂，条件是如果：在该初始给药方案后的两年期间，血浆中神经丝轻链的平均浓度增加超过2pg/mL(例如，如果患者是50-67岁)，或增加超过2.3pg/mL(例如，如果患者年龄是58-85岁)；其中该一个或多个加强剂以有效维持血浆中神经丝轻链平均增加不超过2pg/mL(例如，如果患者为50-67岁)或不超过2.3pg/mL(例如，如果患者是58-85岁)的量施用。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
在一些实施例中，相对于施用免疫原性组合物之前CSF中的总tau(t-tau)水平，以有效稳定或降低CSF中t-tau水平的量施用免疫原性组合物。在一些实施例中，相对于初始给药方案施用前的t-tau水平，患者在初始给药方案后在CSF中具有稳定的t-tau水平。在一些实施例中，相对于初始给药方案施用前的t-tau水平，患者在初始给药方案后在CSF中具有降低的t-tau水平。在一些实施例中，在施用免疫原性组合物后两年(例如，在施用初始给药方案后两年)，CSF中t-tau的浓度降低至少2ng/L，任选地降低至少2.5ng/L，并且进一步任选地降低至少2.7ng/L。
在一些实施例中，该方法还包括在初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，如果在初始给药方案后，例如初始给药方案后两年，CSF中t-tau的浓度没有降低至少2ng/L，任选地没有降低至少2.5ng/L，或者进一步任选地没有降低至少2.7ng/mL，该方法进一步包括在初始给药方案之后以有效稳定或减少CSF中t-tau水平的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂之后，从初始给药方案或从加强剂施用之日起测量，患者具有稳定或降低的t-tau水平持续至少两年，其中，进一步任选地，初始给药方案后两年或加强剂施用后两年，CSF中t-tau的浓度降低至少2ng/L，任选地降低至少2.5ng/L，并且进一步任选地降低至少2.7ng/L。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
在一些实施例中，免疫原性组合物以有效抑制病理性tau扩散的量施用。在一些实施例中，病理性tau包含tau151-391/4R。
在一些实施例中，免疫原性组合物在初始给药方案后有效抑制病理性tau的扩散。在一些实施例中，该方法还包括在初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，病理性tau的扩散增加，该方法进一步包括在初始给药方案之后以有效抑制病理性tau扩散的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂后，从初始给药方案开始测量，病理性tau的扩散被抑制至少两年。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
在一些实施例中，免疫原性组合物以如下量施用，该量有效地：a)相对于施用免疫原性组合物之前CSF中的pT181 tau水平，降低CSF中苏氨酸181(pT181 tau)处磷酸化的tau蛋白水平；和/或b)相对于施用免疫原性组合物之前CSF中的pT217 tau水平，降低CSF中苏氨酸217(pT217 tau)处磷酸化的tau蛋白水平。在一些实施例中，患者在初始给药方案后在CSF中具有降低的pT181 tau水平和/或降低的pT217水平。在一些实施例中，到在施用免疫原性组合物后两年，a)与施用免疫原性组合物之前的浓度相比，CSF中pT181 tau的浓度降低至少5ng/L，任选地降低至少5.3ng/L；和/或b)与施用免疫原性组合物之前的浓度相比，CSF中pT217 tau的浓度降低至少30ng/L，任选地降低至少34ng/L。
在一些实施例中，该方法还包括在初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，如果患者在初始给药方案后具有CSF中增加的pT181tau水平和/或增加的pT217水平，则该方法进一步包括在初始给药方案之后以有效降低CSF中pT181 tau水平和/或降低pT217水平的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂后，从初始给药方案开始测量，患者在CSF中具有降低的pT181 tau水平和/或降低的pT217水平持续至少两年。在一些实施例中，如果初始给药方案后两年，CSF中的pT181 tau浓度没有降低至少5ng/L(任选地至少5.3ng/L)和/或CSF中的pT217 tau浓度没有降低至少30ng/L(任选地至少34ng/L)，则该方法进一步包括在初始给药方案之后以有效将CSF中pT181 tau的浓度降低至少5ng/L(任选地至少5.3ng/L)和/或将CSF中pT217 tau的浓度降低至少30ng/L(任选地至少34ng/L)的量施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
在一些实施例中，相对于施用免疫原性组合物之前的白质降解，以有效停止该患者穹窿和/或胼胝体膝部中的白质降解的量施用免疫原性组合物。在一些实施例中，白质降解通过各向异性分数或平均扩散率来测量。
在一些实施例中，免疫原性组合物以有效增加白质中各向异性分数的量施用。在一些实施例中，白质中各向异性分数的增加在施用免疫原性组合物后维持或继续改善(例如，进一步增加)持续至少两年。在一些实施例中，免疫原性组合物以有效降低白质中的平均扩散率的量施用。在一些实施例中，白质中平均扩散率的降低在免疫原性组合物给药后维持或继续改善(例如，进一步降低)持续至少两年。在一些实施例中，检测穹窿的各向异性分数增加。在一些实施例中，检测穹窿的平均扩散率降低。不受理论限制，各向异性分数(FA)反映了水扩散方向性的程度，并趋于在AD患者中随时间降低，而平均扩散率(MD)描述在每个主要方向上的总体扩散，并趋于随时间在AD患者中增加。
在一些实施例中，相对于施用免疫原性组合物之前的轴突降解，以有效停止轴突变性的量施用免疫原性组合物。在一些实施例中，轴突变性通过各向异性分数或平均扩散率来测量。在一些实施例中，免疫原性组合物以有效增加轴突各向异性分数的量施用。在一些实施例中，轴突中各向异性分数的增加在施用免疫原性组合物后维持或继续改善(例如，进一步增加)持续至少两年。在一些实施例中，免疫原性组合物以有效降低轴突中的平均扩散率的量施用。在一些实施例中，轴突中平均扩散率的降低在免疫原性组合物给药后维持或继续改善(例如，进一步降低)持续至少两年。在一些实施例中，在初始给药方案施用后，白质降解停止和/或轴突降解停止。
在一些实施例中，该方法还包括在初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，如果患者在初始给药方案后白质降解增加和/或轴突降解增加，则该方法进一步包括在初始给药方案后以有效停止白质变性和/或停止轴突变性的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用一个或多个加强剂后，从初始给药方案开始测量，白质降解停止和/或轴突降解停止至少两年。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
在一些实施例中，免疫原性组合物以有效防止海马体萎缩的量施用(例如，有效防止海马体体积相对于施用免疫原性组合物之前的海马体体积减少)。在一些实施例中，该方法包括施用初始给药方案，该方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月，任选地随后施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，如果患者的海马体体积在初始给药方案后相对于在初始给药方案施用之前患者的海马体体积减少(该初始给药方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月)，该方法进一步包括以有效防止进一步海马体萎缩的量的施用一个或多个加强剂，其中任选地以以下量施用一个或多个加强剂，该量有效防止进一步海马体萎缩持续至少两年。
在一些实施例中，患者是50-67岁，并且施用免疫原性组合物后两年，患者的海马体体积相对于在施用免疫原性组合物之前患者的海马体体积减少不超过10％，优选不超过8％。
在一些实施例中，如果患者的海马体体积在初始给药方案后相对于在初始给药方案施用之前患者的海马体体积减少超过10％(该初始给药方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月)，则该方法进一步包括以有效防止进一步海马体萎缩(例如，防止海马体体积进一步减少超过10％)任选地持续至少两年的量施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
在一些实施例中，免疫原性组合物以有效防止皮层萎缩的量施用(例如，有效防止皮层体积相对于施用免疫原性组合物之前的皮层体积减少)。在一些实施例中，该方法包括施用初始给药方案，该方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月，任选地随后施用一个或多个加强剂。
在一些实施例中，如果患者的皮层体积在初始给药方案后相对于在初始给药方案施用之前患者的皮层体积减少(该初始给药方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月)，该方法进一步包括以有效防止进一步皮层萎缩的量的施用一个或多个加强剂，其中任选地以有效防止进一步皮层萎缩持续至少两年的量施用一个或多个加强剂。
在一些实施例中，患者是50-67岁，并且施用免疫原性组合物后两年，患者的皮层体积相对于在施用免疫原性组合物之前患者的皮层体积减少不超过5％，优选不超过4％。在一些实施例中，如果患者的皮层体积在初始给药方案后相对于在初始给药方案施用之前患者的皮层体积减少超过5％(该初始给药方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月)，则该方法进一步包括以有效防止进一步皮层萎缩(例如，防止皮层体积进一步减少超过5％)任选地持续至少两年的量施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
在一些实施例中，萎缩(例如，体积)通过MRI容积测定法测量。
在一些实施例中，患者为50-67岁并且免疫原性组合物以有效减缓患者认知衰退速率的量施用。在一些实施例中，该方法包括施用初始给药方案，该方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月，任选地随后施用一个或多个加强剂。在一些实施例中，该患者的认知衰退速率使用以下来测量：临床痴呆评定量表记录总和(CDR-SB)测试、阿尔茨海默病合作研究轻度认知障碍日常生活活动(ADCS-MCI-ADL)问卷、简易精神状态检查(MMSE)和/或认知成套测验，该认知成套测验包括Cogstate国际购物清单任务、Cogstate一卡学习和一卡返任务(Cogstate One Card Learning and One Card Back Tasks)、字母流利度测试和类别流利度测试和/或数字符号编码测试。
在一些实施例中，到施用免疫原性组合物后(例如，施用初始给药方案后)两年，相对于免疫原性组合物的施用之前患者的CDR-SB测试得分，患者的CDR-SB测试得分增加不超过4。在一些实施例中，到施用免疫原性组合物后(例如，施用初始给药方案后)两年，相对于免疫原性组合物的施用之前患者的MMSE得分，患者的MMSE得分降低不超过7分，优选不超过6.5分。在一些实施例中，到施用免疫原性组合物后(例如，施用初始给药方案后)两年，相对于免疫原性组合物的施用之前患者的ADCS MCI ADL问卷得分，患者的ADCS MCI ADL问卷得分降低不超过14分，优选不超过13.5分。
在一些实施例中，该方法进一步包括施用一个或多个加强剂，条件是如果：a)相对于施用免疫原性组合物(例如，初始给药方案)之前患者的CDR-SB测试得分，患者的CDR-SB得分增加超过4；b)相对于施用免疫原性组合物(例如，初始给药方案)之前患者的MMSE得分，患者的MMSE得分降低超过6.5分或超过7分；和/或c)相对于施用免疫原性组合物(例如，初始给药方案)之前患者的ADCS MCI ADL问卷得分，患者的ADCS MCI ADL问卷得分降低超过13.5分或超过14分。在一些实施例中，一个或多个加强剂以以下量施用，该量有效防止：a)相对于施用免疫原性组合物(例如，初始给药方案)之前患者的CDR-SB测试得分，患者的CDR-SB得分增加超过4；b)相对于施用免疫原性组合物(例如，初始给药方案)之前患者的MMSE得分，患者的MMSE得分降低超过6.5分或超过7分；和/或c)相对于施用免疫原性组合物(例如，初始给药方案)之前患者的ADCS MCI ADL问卷得分，患者的ADCS MCI ADL问卷得分降低超过13.5分或超过14分。在一些实施例中，一个或多个加强剂每三个月施用一次。在一些实施例中，该方法包括施用至少五个加强剂。
对于任何上述实施例：在一些实施例中，免疫原性肽进一步包含载剂蛋白或肽。在一些实施例中，载剂包含血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵清蛋白、破伤风类毒素和/或来自另一种病原菌如白喉、大肠杆菌、霍乱弧菌或幽门螺杆菌的类毒素、减毒毒素衍生物、细胞因子如IL-1、IL-1α或IL-1β肽、IL-2、IFNγ、IL-10、GM-CSF或趋化因子如MIP1α、MIP1β、或RANTES中的至少一种。在一些实施例中，载剂包含钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段。在一些实施例中，KLH或其片段通过马来酰亚胺接头与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2偶联。在一些实施例中，马来酰亚胺接头包含GMBS。在一些实施例中，马来酰亚胺接头是磺基-GMBS。在一些实施例中，剂量包含约20-50μg，例如至少约20μg、至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的免疫原性肽。在一些实施例中，每个剂量包含约40μg的免疫原性肽。在一些实施例中，免疫原性组合物进一步包含佐剂，例如铝化合物。在一些实施例中，铝化合物包括氢氧化铝(Al(OH)3)。在一些实施例中，佐剂包含约0.1mg至约10mg铝(Al3 +)，任选地，约0.5mg铝(Al3+)。在一些实施例中，免疫原性组合物进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。在一些实施例中，免疫原性组合物包含通过马来酰亚胺接头(例如，磺基-GMBS)与KLH偶联的含有SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。在一些实施例中，治疗患者包括施用至少5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、15个剂量、20个剂量、25个剂量、50个剂量、或100个剂量的免疫原性肽。在一些实施例中，治疗患者包括以2周间隔、3周间隔、4周间隔、5周间隔、6周间隔、7周间隔、8周间隔、9周间隔、10周间隔、11周间隔、12周间隔、13周间隔、14周间隔、15周间隔、20周间隔、25周间隔、30周间隔、35周间隔，或40周间隔施用剂量。在一些实施例中，治疗患者包括以4周的间隔施用一个或多个(例如，6个)剂量的免疫原性组合物，然后以20周的间隔施用一个或多个(例如，5、6个)剂量的免疫原性组合物。在一些实施例中，对照样品来自健康个体或患有阿尔茨海默病的患者。在一些实施例中，对照样品是CSF样品或血浆样品。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2组成。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ ID NO:1和N和/或C末端的1、2、3、4或5个另外残基组成，其中当与tau 2N4R比对时，这些另外残基与紧邻SEQ ID NO:1的那些残基相同。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ ID NO:2和N和/或C末端的1、2、3、4或5个另外残基组成，其中当与tau 2N4R比对时，这些另外残基与紧邻SEQ IDNO:2的那些残基相同。
对于任何上述实施例：在一些实施例中，一个或多个加强剂包含免疫原性肽，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。在一些实施例中，免疫原性肽进一步包含载剂蛋白或肽。在一些实施例中，载剂包含血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵清蛋白、破伤风类毒素和/或来自另一种病原菌如白喉、大肠杆菌、霍乱弧菌或幽门螺杆菌的类毒素、减毒毒素衍生物、细胞因子如IL-1、IL-1α或IL-1β肽、IL-2、IFNγ、IL-10、GM-CSF或趋化因子如MIP1α、MIP1β、或RANTES中的至少一种。在一些实施例中，载剂包含钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段。在一些实施例中，KLH或其片段通过马来酰亚胺接头与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2偶联。在一些实施例中，马来酰亚胺接头包含GMBS。在一些实施例中，马来酰亚胺接头是磺基-GMBS。在一些实施例中，加强剂进一步包含佐剂，例如铝化合物。在一些实施例中，铝化合物包括氢氧化铝(Al(OH)3)。在一些实施例中，佐剂包含约0.1mg至约10mg铝(Al3+)，任选地，约0.5mg铝(Al3+)。在一些实施例中，加强剂进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。在一些实施例中，加强剂包含通过马来酰亚胺接头(例如，磺基-GMBS)与KLH偶联的含有SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。在一些实施例中，加强剂的剂量包含至少约20μg、至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的免疫原性肽，任选地约20至50μg的免疫原性肽。在一些实施例中，加强剂的剂量包含约40μg的免疫原性肽。在一些实施例中，加强剂在组成上与作为初始给药方案的一部分施用的免疫原性组合物相同。在一些实施例中，以与作为初始给药方案的一部分施用的免疫原性组合物相同的剂量施用加强剂。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2组成。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQID NO:1和N和/或C末端的1、2、3、4或5个另外残基组成，其中当与tau 2N4R比对时，这些另外残基与紧邻SEQ ID NO:1的那些残基相同。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ ID NO:2和N和/或C末端的1、2、3、4或5个另外残基组成，其中当与tau 2N4R比对时，这些另外残基与紧邻SEQ ID NO:2的那些残基相同。
对于任何上述实施例：在一些实施例中，根据修订的2011NIA-AA标准，患者诊断为很可能的阿尔茨海默病。在一些实施例中，根据修订的2018NIA-AA标准，患者诊断为很可能的阿尔茨海默病。在一些实施例中，患者的简易精神状态检查总得分≥20且≤26。在一些实施例中，患者的脑MRI发现与阿尔茨海默病的诊断一致。在一些实施例中，患者具有在脑MRI上评估的并且根据≥2的Scheltens得分(在更萎缩的一侧以0-4的等级评定)的内侧颞叶萎缩。在一些实施例中，患者在CSF中具有阳性AD生物标志物特征(例如，总tau蛋白>400pg/mL；pT181 tau蛋白>60pg/mL；Aβ42<600pg/mL；和Aβ42:Aβ40比率<0.089中的一个或多个)。在一些实施例中，患者为50-85岁，例如50-67岁、50-70岁、68-85岁或71-85岁。在一些实施例中，患者为50-67岁。在一些实施例中，患者为50-70岁。在一些实施例中，患者为68-85岁。在一些实施例中，患者在治疗开始前已接受乙酰胆碱酯酶抑制剂的稳定疗法至少3个月。在一些实施例中，患者在治疗开始前已接受稳定剂量的美金刚治疗至少3个月。在一些实施例中，患者是男性。在一些实施例中，在施用免疫原性肽之前，患者具有脑脊液(CSF)中小于600pg/mL的Aβ42浓度，CSF中大于60pg/mL的磷酸化tau(p-tau)T181浓度，以及CSF中大于400pg/mL的总tau(t-tau)浓度。在一些实施例中，在治疗之前，患者年龄小于80岁，其血浆神经丝轻链浓度高于10pg/mL，在CSF中具有可检测的tau蛋白，并且没有出现微出血、开始或大的融合半球深部白质病损(Fazekas2或3级)、严重的海马体萎缩(Scheltens得分为4)和幻觉。在一些实施例中，患者的诊断在体外进行。
在一些实施例中，患者诊断为阿尔茨海默病。在一些实施例中，患者患有阿尔茨海默病。在一些实施例中，患者诊断为轻度认知障碍。在一些实施例中，患者具有轻度认知障碍。
附图说明
本专利或申请文件含有至少一幅彩色附图。应请求并且支付必要的费用后，具有一幅或多幅彩色附图的本专利或专利申请披露的副本将由专利局提供。
图1：筛选就诊时患者群体中总MMSE得分的分布。
图2：V01和V05时每位患者的总MMSE比较。
图3：在研究过程中，与基线相比，CDR-SB(50-70和71-85岁)的平均变化。
图4：在研究过程中，与基线相比，CDR-SB(50-67和68-85岁)的平均变化。
图5：在研究过程中，与基线相比，MMSE(50-70岁和71-85岁)的平均变化。
图6：在研究过程中，与基线相比，MMSE(50-67岁和68-85岁)的平均变化。
图7：在研究过程中，与基线相比，ADCS-MCI-ADL 24(50-70和71-85岁)的平均变化。
图8：在研究过程中，与基线相比，ADCS-MCI-ADL 24(50-67和68-85岁)的平均变化。
图9：与AADvac1肽相比，IgG和IgM滴度的水平。
图10：抗KLH抗体滴度的水平。
图11：对AADvac1的抗体应答
图12：治疗后针对tau151-391/4R和AADvac1的抗体的分布。
图13：V08时的IgG滴度和年轻(50-70岁)和老年(71-85岁)亚群之间的曲线下面积比较。
图14：V16时IgG曲线下面积与患者年龄的相关性。
图15：V08时的IgG滴度和年轻(50-67岁)和老年(68-85岁)亚群之间的曲线下面积比较。
图16：不同神经系统病症患者中的pT217和pT181 tau的水平。
图17：pT217 tau水平从V02到V16的变化。
图18：pT181 tau水平从V02到V16的变化。
图19：pT181 tau阳性患者的总tau、pT217 tau和pT181 tau水平从V02到V16的变化。
图20：基线时NfL在患者群体中的分布。
图21：NfL水平从V02到V16的变化。
图22：患者年龄组(51-70岁和71-85岁)中NfL水平从V02到V16的变化。
图23：患者年龄组(51-67岁和68-85岁)中NfL水平从V02到V16的变化。
图24：tau水平从V02到V16的变化。
图25：神经粒蛋白水平从V02到V16的变化。
图26：Aβ1-42:Aβ1-40比率和Aβ1-42和Aβ1-40水平从V02到V16的变化。
图27：筛选就诊时患者中的Scheltens萎缩得分和左海马体体积分布。
图28：筛选就诊时左右海马体体积的比较。
图29：患者群体中左右海马体体积的分布。
图30：筛选就诊时患者群体中Fazekas白质病变得分的分布。
图31：筛选就诊时微出血的分布。
图32：V16时较年轻亚组(<71岁)中的目的区域中的脑体积的变化。
图33：V16时较年轻亚组(<68岁)中的目的区域中的脑体积(纵向皮层体积(CVL)、纵向颞叶体积(TLVL)和纵向侧脑室(LVVL))的变化。
图34：V16时较年轻亚组(<68岁)中的目的区域中的脑体积(左海马体纵向体积(LHVL)、右海马体纵向体积(RHVL)和全脑体积(WBV))的变化。
图35：脑的不同区域的各向异性分数的变化。
图35：与对照相比，AD患者中的微小RNA水平。
图36：与V02相比，在V11或V16测量的用AADvac1或安慰剂治疗后患者中微小RNA水平的变化。
图37：与基线相比，在V11或V16测量的微小RNA水平。
图38：AD和对照患者的代谢物(酰基肉碱)的水平。
图39：AD和对照患者的代谢物(甘油磷脂)的水平。
图40：AD和对照患者的代谢物(甘油磷脂)的水平。
图41：AD和对照患者的代谢物(甘油磷脂、鞘脂和糖)的水平。
图42：AD和对照患者的代谢物(氨基酸和生物胺)的水平。
图43：AD和对照患者中的肽的水平。
图44A-44I：AADvac1和安慰剂组的安全终点数据。
图45A-45C：AADvac1和安慰剂组的CSF生物标志物(tau)水平。
图46A-46E：AADvac1和安慰剂组中的扩散张量成像(DTI)MRI结果。
图47A-47D：AADvac1疗法的CDR-SB得分和皮层萎缩。
图48A-48N：用于AADvac1疗法的CDR-SB得分、MMSE得分、ADCS-MCI-ADS得分、MRI容积测定法和血浆NfL水平。
图49A-49D：针对tau肽和病理性tau的抗体应答。
图50：老年群体的抗体应答。
图51A-51B：对病理性tau的血清抗体亲和力，以及与竞争性tau单克隆抗体的比较。
图52：AD生物标志物(CSF)阳性患者亚组标准和人口统计学特征。
图53A-53P：AD生物标志物(CSF)阳性患者亚组中的免疫应答和治疗功效的图。
图54：AD很可能的患者亚组人口统计学特征。
图55A-55J：AD很可能的患者亚组中免疫应答与治疗功效的相关性。
具体实施方式
为了更好地理解本披露，本文讨论了某些示例性实施例。此外，还讨论了某些术语以帮助理解。
除非另外定义，本文所用的全部技术术语和科学术语具有与本披露所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。本文所引用的所有参考文献均通过引用以其全文结合于此。如果参考文献中的条款或讨论与本披露内容相冲突，则以后者为准。
如本文所使用的，单词的单数形式还包括所述单词的复数形式，除非上下文另外明确指示；作为示例，术语“一个(a)”、“一种(an)”和“该”被理解为单数或复数。举例来说，“一个要素”意指一个或多个要素。除非具体上下文另有说明，否则术语“或”应表示“和/或”。
术语“包含(comprising)”或变体如“包含(comprises)”应当被理解为暗示包括所陈述的要素、整体或步骤或者要素、整体或步骤的组，但不排除任何其他的要素、整体或步骤或者要素、整体或步骤的组。在整个说明书中，词语“由……组成(consisting of)”或变体如“由以下组成(consists of)”应当被理解为暗示包括所陈述的要素、整体或步骤或者要素、整体或步骤的组，并且排除任何其他的要素、整体或步骤或者要素、整体或步骤的组。在整个说明书中，词语“基本上由……组成(consisting essentially of)”或变体如“基本上由以下组成(consists essentially of)”应当被理解为暗示包括所陈述的要素、整体或步骤或者要素、整体或步骤的组，以及不实质上影响本披露和/或权利要求的基本和新颖特征的任何其他的要素、整体或步骤或者要素、整体或步骤的组。
约可以被理解为在规定的值的+/-10％以内，例如+/-10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、或0.01％之内。当参考百分比值使用时，“约”可理解为±1％以内(例如，“约5％”可理解为4％-6％以内)或±0.5％以内(例如，“约5％”可理解为4.5％-5.5％以内)。除非另外从上下文清楚可见，否则在此提供的所有数值被术语“大约”修饰。本文使用的所有范围都包含端点。
如本文所用，术语“治疗”(“treatment”、“treating”)等是指获得所需的药理和/或生理作用。该作用就首先完全或部分预防疾病或其症状发生而言可以是预防性的和/或就疾病的一种或多种症状和/或可归因于该疾病的不利影响的至少部分补救、延迟、减缓、减少或逆转而言可以是治疗性的。例如，如本文所用，术语“治疗”等包括对哺乳动物，特别是人的阿尔茨海默病(AD)或相关的tau蛋白病的任何治疗，并且包括：(a)防止疾病在受试者中发生，例如，被确定为易患该疾病或有患该疾病的风险但尚未被诊断为患有该疾病的受试者；(b)延迟疾病的发作或进展，例如，与在没有治疗的情况下预期的疾病发作或进展相比；(c)抑制疾病，例如阻止其发展；和/或(d)缓解疾病，即导致疾病消退。在一些实施例中，“治疗”是指例如皮下将有效剂量或有效多个剂量的组合物例如包含本文披露的免疫原性肽的组合物施用于怀疑患有或已经患有AD或其他tau蛋白病的动物(包括人)。它还可以指减少、消除或至少部分抑制疾病的和/或与疾病相关的一种或多种症状和/或其并发症以及对它们施加任何有益作用。
“预防”是指对易患特定疾病或有患特定疾病风险的患者施用。一般群体中的任何人都可能有患AD等tau蛋白病的风险。在一些实施例中，受试者通过一种或多种标志物(例如一种或多种遗传标志物)被鉴定为与一般群体中的风险相比对tau蛋白病例如AD具有增加的风险或易感性。“Tau蛋白病”是指与病理性tau形成相关的疾病。有些人患AD的遗传风险增加。在一些实施例中，如本文所用的预防包括在患者中(例如，在具有增加的tau蛋白病风险的患者中)消除或降低的疾病发作风险，或延迟疾病发作。可以测量发病或进展的延迟，例如，基于相似群体或个体中疾病进展的标准时间。
“生理性tau”是指正常人tau的6种异构体中的任何一种，即：2N4R(SEQ ID NO:3)、1N4R(SEQ ID NO:4)、2N3R(SEQ ID NO:5)、0N4R(SEQ ID NO:6)、1N3R(SEQ ID NO:7)和0N3R(SEQ ID NO:8)。从这个定义中排除的是携带与阿尔茨海默病和其他tau蛋白病相关的任何一种磷酸化修饰的那些。
表1：
“病理性tau”包括各种病理性tau构象异构体和结构，并涵盖以下所有：IA、IB、IIA和IIB型Tau，乱序的、错乱的tau(单体、二聚体、三聚体、寡聚体)，错乱的可溶性tau，肌氨酰不溶性tau，细胞外tau沉积物，tau聚集体，成对螺旋丝，神经原纤维病理学，包括神经原纤维病变、缠结、线、原纤维、轴突球体、高度磷酸化形式的截短tau和全长tau，或与AD或其他tau病相关的任何其他形式的tau。
“连接的”是指一种部分与免疫原性肽、抗体或化合物的连接。该部分可以偶联或复合，或共价或非共价连接。该部分可以化学交联或表达或合成为与肽或抗体的融合物。“部分”是指能够与免疫原性肽、抗体或结合蛋白连接的任何化合物(例如，任何有机分子、肽、蛋白质、核酸、载剂、佐剂等)。“载剂”是指可以与免疫原性肽连接以增加其大小并帮助引发免疫应答的药剂。不受理论的束缚，在某些情况下，小肽可能是不太有效的免疫原，因为它们充当缺乏必要的Th细胞表位和/或被抗原呈递细胞(APC)以低效率捕获的半抗原。因此，在一些实施例中，肽免疫原可以与合适的载剂连接以帮助引发免疫应答。在某些实施例中，合适的载剂包括血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵清蛋白、破伤风类毒素和/或来自另一种病原菌例如白喉、大肠杆菌、霍乱弧菌或幽门螺杆菌的类毒素或减毒毒素衍生物。用于刺激或增强免疫应答的其他载剂包括细胞因子，例如IL-1、IL-1α或IL-1β肽、IL-2、IFNγ、IL-10、GM-CSF和趋化因子，例如MIP1α、MIP1β或RANTES。如O'Mahony、WO 97/17613和WO 97/17614中所述，免疫原性肽也可以与增强跨组织转运的药剂连接。在一些实施例中，免疫原性肽进一步包含载剂肽或蛋白质。在一些实施例中，载剂是钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段，例如提供增强的免疫应答的片段。在一些实施例中，免疫原性肽包含具有与KLH偶联的KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列的肽或由其组成。在一些实施例中，免疫原性肽包含具有与KLH偶联的CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)序列的肽或由其组成。
“免疫原性”是指可以引发免疫应答的东西。免疫应答可以是抗体或细胞介导的，或两者。
“佐剂”是指能够增加、放大或调节对伴随肽的免疫应答的物质。
如本文所用，术语“分离的”应表示从自然环境的一种或多种成分中去除。例如，基因组、cDNA或合成来源的多核苷酸或其某种组合可以是分离的，条件是如果它(1)与其中“分离的多核苷酸”见于自然中的多核苷酸的全部或一部分无关联，(2)可操作地连接至在自然中未连接的多核苷酸，(3)作为更大的并不存在于自然中的序列的一部分，和/或(4)以其他方式与其自然环境的其他组分分离开来。
如本文所用，“轻度认知障碍”(MCI)是指正常衰老的预期认知障碍和与痴呆相关的认知障碍，例如阿尔茨海默病之间的阶段。在本申请的上下文中，MCI的根本原因被理解为阿尔茨海默病(AD)病理学。MCI可以通过对心理表现的评估来鉴定患者的MCI，该评估例如但不限于韦氏记忆量表修订版、精神状态简短测试、蒙特利尔认知评估(MoCA)或简易精神状态检查(MMSE)。参见Kokmen等人A short test of mental status:description andpreliminary results[精神状态简短测试：描述和初步结果].Mayo Clinic Proceedings[梅奥诊所会议录].1987；62；281-88；Ziad等人The Montreal Cognitive Assessment,MoCA:A Brief Screening Tool for Mild Cognitive Impairment[蒙特利尔认知评估，MoCA：轻度认知障碍的简要筛查工具].Journal of the American Geriatrics Society[美国老年医学会杂志].2005；53(4):695-99；Hua等人,Tensor-based morphometry as aneuroimaging biomarker for Alzheimer’s disease:an MRI study of 676AD,MCI,andnormal subjects[基于张量的形态计量学作为阿尔茨海默病的神经影像学生物标志物：676名AD、MCI和正常受试者的MRI研究].NeuroImage[神经成像].2008；43(3):458-69；Wechsler,D.,1987.WMS-R Wechsler Memory Scale-Revised Manual[WMS-R韦氏记忆量表修订版手册].The Psychological Corporation[美国心理公司].Harcourt BraceJovanovich,Inc.,纽约。在一些实施例中，使用阿尔茨海默病合作研究轻度认知障碍日常生活活动(ADCS MCI ADL)清单评估MCI。
如本文所用，“阿尔茨海默病”(AD)(本文可与“阿尔茨海默病痴呆”或“AD痴呆”互换使用)和“轻度认知障碍”(MCI)均可由AD病理学引起。可以使用NIA-AA标准(例如，NIA-AA研究框架的ATN标准，参见Jack等人,Alzheimer’s&Dementia[阿尔茨海默病和痴呆症],(2018))以及用于鉴定MCI的一种或多种神经心理学检查(例如，韦氏记忆量表修订版(Wechsler Memory Scale-revised)、精神状态短期测试(Short Test of MentalStatus)、MoCA和/或MMSE)将AD与MCI区分开来。
免疫原性肽
本文披露了用于诱导对病理性tau的免疫应答的tau片段。一方面，本文披露了包含一个或多个tau蛋白区域的免疫原性肽。免疫原性肽可来衍生自参与成对螺旋丝(PHF)核心形成并在体外促进PHF组装的tau蛋白区域。在一些实施例中，免疫原性肽包含以下或由以下组成：来自tau蛋白的片段，这些片段包含四个治疗性表位，包括tau 267-273(SEQ IDNO:9)、tau 298-304(SEQ ID NO:11)、tau 329-335(SEQ ID NO:13)，或tau 361-367(SEQID NO:15)，根据最长的人tau异构体tau 2N4R编号。在一些实施例中，免疫原性肽包含以下或由以下组成：来自tau蛋白的片段，这些片段包括tau268-273(SEQ ID NO:10)、tau 299-304(SEQ ID NO:12)、tau 330-335(SEQ ID NO:14)，或tau 362-367(SEQ ID NO:16)，根据最长的人tau异构体tau2N4R编号。在一些实施例中，免疫原性肽包含以下或由以下组成：来自tau蛋白的片段，这些片段包括tau 314-342(SEQ ID NO:17)、tau 352-380(SEQ ID NO:18)，或tau 357-368(SEQ ID NO:19)。在一些实施例中，免疫原性肽包含CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的肽序列。在一些实施例中，免疫原性肽是病理性tau蛋白的片段，其包含以下或由以下组成：CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)。在一些实施例中，免疫原性肽是病理性tau蛋白的片段，其包含或由以下组成：CKDNIKHVPGGGS(SEQID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)，具有多达5个、多达4个、多达3个、多达2个或多达1个突变。在一些实施例中，免疫原性肽是病理性tau蛋白的片段，其包含或由以下组成：CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)，并且进一步包含1、2、3、4或5另外的氨基酸，例如插入到序列的末端和/或内部。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ IDNO:1和N和/或C末端的1、2、3、4或5个另外残基组成，其中当与tau 2N4R比对时，这些另外残基与紧邻SEQ ID NO:1的那些残基相同。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ ID NO:2和N和/或C末端的1、2、3、4或5个另外残基组成，其中当与tau 2N4R比对时，这些另外残基与紧邻SEQ ID NO:2的那些残基相同。在一些实施例中，免疫原性肽是病理性tau蛋白的片段，其与CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)具有至少99％、95％、92％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％或50％序列同一性。
表2：
| 名称 | SEQ ID NO | 序列 |
| tau 294-305 | SEQ ID NO:1 | KDNIKHVPGGGS |
| C-tau 294-305 | SEQ ID NO:2 | CKDNIKHVPGGGS |
| tau 267-273 | SEQ ID NO:9 | KHQPGGG |
| tau 268-273 | SEQ ID NO:10 | HQPGGG |
| tau 298-304 | SEQ ID NO:11 | KHVPGGG |
| tau 299-304 | SEQ ID NO:12 | HVPGGG |
| tau 329-335 | SEQ ID NO:13 | HHKPGGG |
| tau 330-335 | SEQ ID NO:14 | HKPGGG |
| tau 361-367 | SEQ ID NO:15 | THVPGGG |
| tau 362-367 | SEQ ID NO:16 | HVPGGG |
| tau 314-342 | SEQ ID NO:17 | DLSKVTSKCGSLGNIHHKPGGGQVEVKSE |
| tau 352-380 | SEQ ID NO:18 | SKIGSLDNITHVPGGGNKKIETHKL TFREN |
| tau 357-368 | SEQ ID NO:19 | LDNITHVPGGGN |
在一些实施例中，可以进一步修饰包含上述tau片段或由其组成的免疫原性肽以在序列中插入一个或多个突变，同时保留未突变蛋白的原始结构和/或至少一种功能，例如，在未突变的蛋白质中折叠和呈递表位的能力和/或形成PHF核心的能力。
在一些实施例中，包含上述tau片段或由上述tau片段组成的免疫原性肽可以连接(例如，共价或非共价)至部分，例如，提供增强(例如，与不存在载剂时的免疫原性肽相比)的免疫应答的载剂。示例性载剂包括血清白蛋白、钥孔戚血蓝蛋白(KLH)、免疫球蛋白分子、甲状腺球蛋白、卵清蛋白、破伤风类毒素或来自另一种病原菌如白喉、大肠杆菌、霍乱弧菌或幽门螺杆菌的类毒素、或减毒毒素衍生物、细胞因子如IL-1、IL-1α或IL-1β肽、IL-2、IFNγ、IL-10、GM-CSF和趋化因子如MIP1α、MIP1β、或RANTES。在一些实施例中，载剂包括KLH。
不受理论的束缚，小肽可能是不太有效的免疫原，因为它们可以充当缺乏必要的Th细胞表位和/或被抗原呈递细胞(APC)以低效率捕获的半抗原。因此，肽免疫原可以与合适的载剂连接以帮助引发免疫应答。在一些实施例中，更大的肽，例如tau的至少10、至少15、至少20、至少25、至少30、至少40、至少50、至少60、至少70，至少80、至少90、至少100个氨基酸长度的部分可以通过充当更好的免疫原来提供改善的免疫应答。在一些实施例中，免疫原性肽进一步包含载剂肽或蛋白质。在一些实施例中，免疫原性肽是病理性tau蛋白的片段，其包含以下或由以下组成：与载剂例如KLH或其片段偶联的CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)。在一些实施例中，载剂是钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段，例如提供增强的免疫应答的片段。在一些实施例中，免疫原性肽包含具有与KLH偶联的CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)序列的肽或由其组成。在一些实施例中，免疫原性肽是病理性tau蛋白的片段，其包含或由以下组成：与载剂例如KLH或其片段偶联的CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)，具有多达5个、多达4个、多达3个、多达2个或多达1个突变。在一些实施例中，免疫原性肽是病理性tau蛋白的片段，其包含或由以下组成：CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ IDNO:1)，并且进一步包含1、2、3、4或5另外的氨基酸，例如插入到序列的末端和/或内部，并与载剂例如KLH或其片段偶联。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ ID NO:1和N和/或C末端的1、2、3、4或5个另外残基组成，其中当与tau 2N4R比对时，这些另外残基与紧邻SEQ ID NO:1的那些残基相同，并且其中免疫原性肽与载剂例如KLH或其片段偶联。在一些实施例中，免疫原性肽由SEQ ID NO:2和N和/或C末端的1、2、3、4或5个另外残基组成，其中当与tau 2N4R比对时，这些另外残基与紧邻SEQ ID NO:2的那些残基相同，并且其中免疫原性肽与载剂例如KLH或其片段偶联。
在一些实施例中，免疫原性肽是病理性tau蛋白的片段，其与CKDNIKHVPGGGS(SEQID NO:2)或KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)具有至少99％、95％、92％、90％、85％、80％、75％、70％、65％、60％、55％或50％序列同一性并与载剂例如KLH或其片段偶联。在一些实施例中，免疫原性肽是AADvac1。
在一些实施例中，载剂与免疫原性肽共价连接。在一些实施例中，载剂与免疫原性肽非共价连接。在一些实施例中，免疫原性肽可以在氨基末端、羧基末端或肽内任何位置(内部)连接到载剂。在一些实施例中，免疫原性肽在其N末端或距离末端1、2、3、4或5个氨基酸连接至载剂。在一些实施例中，免疫原性肽在其C末端或距离末端1、2、3、4或5个氨基酸连接至载剂。在一些实施例中，免疫原性肽在内部氨基酸处与载剂连接。
免疫原性剂可以通过化学交联与载剂连接。将免疫原连接到载剂的技术包括使用N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基-硫基)丙酸酯(SPDP)和琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)(例如，如果肽缺少巯基，这可以通过添加半胱氨酸残基来提供)形成二硫键。在一些实施例中，这些试剂在它们自身和蛋白质上的肽半胱氨酸残基之间产生二硫键，以及通过赖氨酸上的ε-氨基或其他氨基酸中的其他游离氨基产生酰胺键。lmmun.Rev.[免疫学综述]62,185(1982)中描述了多种这样的二硫化物/酰胺形成剂。可以使用的其他双功能偶联剂包括，例如，形成硫醚而不是二硫键的那些。许多硫醚形成剂是可商购的并且包括6-马来酰亚胺基己酸、2-溴乙酸和2-碘乙酸、4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸的反应性酯。在一些实施例中，可以通过将羧基与琥珀酰亚胺或1-羟基-2-硝基-4-磺酸钠盐组合来活化羧基。在一些实施例中，免疫原性肽或其片段通过化学交联与载剂连接。在一些实施例中，载剂通过N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基-硫基)丙酸酯(SPDP)或琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)与肽缀合。在一些实施例中，包含KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)或CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的肽序列或由其组成的免疫原性肽通过N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基-硫基)丙酸酯(SPDP)或琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)连接至载剂或其片段。在一些实施例中，包含KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)或CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的肽序列或由其组成的免疫原性肽通过N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基-硫基)丙酸酯(SPDP)或琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)连接至KLH或其片段。
在一些实施例中，载剂通过包含N-[γ-马来酰亚胺丁酰氧基]琥珀酰亚胺酯(GMBS)的交联剂与免疫原性肽缀合。在一些实施例中，交联剂包含或为GMBS。在一些实施例中，载剂通过包含GMBS衍生物的交联剂与免疫原性肽缀合。在一些实施例中，交联剂是N-γ-马来酰亚胺丁酰基-氧基磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-GMBS)。
在一些实施例中，包含KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)或CKDNIKHVPGGGS(SEQ IDNO:2)的肽序列或由其组成的免疫原性肽通过交联剂(例如，包含GMBS或其衍生物的交联剂(例如，磺基-GMBS))连接至载剂或其片段。在一些实施例中，包含KDNIKHVPGGGS(SEQ IDNO:1)或CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的肽序列或由其组成的免疫原性肽通过包含GMBS或其衍生物的交联剂(例如，磺基-GMBS)连接至KLH或其片段。
免疫原性肽可直接或间接连接至载剂，例如通过柔性接头如间隔氨基酸序列，例如刚性接头如(EAAAK)n，或柔性接头如GGGS和(GGGGS)3。
在一些实施例中，免疫原性肽可以表达为与载剂的融合蛋白。免疫原性肽可在氨基末端、羧基末端或肽内的任何位点(内部)直接或通过间隔氨基酸序列(例如刚性接头如(EAAAK)n或柔性接头如GGGS和(GGGGS)3)连接至载剂。
在一些实施例中，免疫原性肽的多个重复可以存在于融合蛋白中。在一些实施例中，免疫原性肽在N末端与载剂蛋白连接。在一些实施例中，免疫原性肽在C末端与载剂蛋白连接。在一些实施例中，免疫原性肽在内部氨基酸残基上与载剂蛋白连接。在一些实施例中，包含KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)或CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的肽序列或由其组成的免疫原性肽在其N末端与KLH连接。在一些实施例中，包含KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)或CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的肽序列的免疫原性肽在其C末端与KLH连接。在一些实施例中，包含KDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:1)或CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的肽序列的免疫原性肽通过内部氨基酸与KLH连接。另外的免疫原性肽、载剂以及如何制备它们的示例可以在PCT/IB 2012/002246中找到，其通过引用以其整体并入本文。
药物组合物
本文披露的免疫原性肽可以制备和/或配制在药物组合物中，例如，适合施用于受试者(例如，患有、有风险患上或需要治疗AD或另一种tau蛋白病的人患者)的那些。药物组合物可以包含治疗剂(例如，免疫原性肽，如上所述)和一种或多种其他药学上可接受的组分，例如赋形剂(溶剂、佐剂等)和/或另外的治疗剂(例如，其他药剂，其靶向病理性tau或其他与AD和/或其他tau病变相关的蛋白质)。本领域已知多种药学上可接受的赋形剂。例如，A.Gennaro(2000)“Remington:The Science and Practice of Pharmacy[雷明顿：药学的科学与实践],”第20版,Lippincott,Williams,&Wilkins；Pharmaceutical Dosage Formsand Drug Delivery Systems[药物剂型和给药系统](1999)H.C.Ansel等人编辑,第7增补版,Lippincott,Williams,&Wilkins；和Handbook of Pharmaceutical Excipients[药用辅料手册](2000)A.H.Kibbe等人编辑,第3版.Amer.Pharmaceutical Assoc.[美国药学协会]。
在一些实施例中，本文披露的药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和/或稀释剂。例如，可以使用任何用于配制用于动物或人施用的药物组合物的媒剂。可以选择稀释剂以不影响组合的生物活性。这种稀释剂的实例是蒸馏水、生理磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液、右旋糖溶液和Hank溶液。本文披露的药物组合物和配制品还可以包括其他赋形剂、佐剂或无毒的、非治疗性的、非免疫原性的稳定剂等。合适的药用赋形剂的示例是本领域已知的并且包括磷酸盐缓冲盐溶液、水、乳剂(例如油/水乳剂)、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。可以通过已知的常规方法配制包含此类赋形剂的组合物。
在一些实施例中，本文披露的免疫原性肽可以在适合皮下施用的药物组合物中提供。在一些实施例中，本文披露的免疫原性肽可以在适合肌肉内施用的药物组合物中提供。
在各种实施例中，药物组合物可以以除了免疫原性肽之外还包含一种或多种非活性成分和/或一种或多种另外的活性成分的配制品提供。在一些实施例中，可以使用本领域已知的组分和技术将本披露的组合物配制成适合在哺乳动物受试者例如人中施用的配制品。
在一些实施例中，本文披露的药物组合物包含免疫原性肽和佐剂。在一些实施例中，佐剂包含铝化合物。在一些实施例中，佐剂包括氢氧化铝。在一些实施例中，佐剂包含约0.1-1.0mg铝(Al3+)，例如约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1.0mg。在一些实施例中，药物组合物包含与钥孔戚血蓝蛋白偶联的具有序列CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的免疫原性肽和氢氧化铝。在一些实施例中，药物组合物在磷酸盐缓冲液中配制。在一些实施例中，药物组合物包含约10-190μg的与钥孔戚血蓝蛋白偶联的具有序列CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的免疫原性肽，例如约10μg、约20μg、约30μg、约40μg、约50μg、约60μg、约70μg、约80μg、约90μg、约100μg、约110μg、约120μg、约130μg、约140μg、约150μg、约160μg、约170μg、约180μg或约190μg。在一些实施例中，药物组合物在磷酸盐缓冲液中包含约40μg与钥孔戚血蓝蛋白偶联的具有序列CKDNIKHVPGGGS(SEQID NO:2)的免疫原性肽和0.5mg Al3+。在一些实施例中，药物组合物在磷酸盐缓冲液中包含约160μg与钥孔戚血蓝蛋白偶联的具有序列CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)的免疫原性肽和0.5mg Al3+。示例性肽疫苗结构和另外配制品的示例以及如何制备它们的描述可以在PCT/IB 2012/002246中找到，其通过引用以其整体并入本文。
佐剂可以作为单一组合物与免疫原一起施用，或者可以在施用免疫原之前、同时或之后施用。免疫原和佐剂可以在同一个小瓶中包装和供应，或者可以在单独的小瓶中包装并在使用前混合。在一些实施例中，免疫原和佐剂与标签一起包装，表明预期的治疗应用。如果免疫原和佐剂分开包装，则包装可能包含使用前的混合说明。
包含免疫原性肽的免疫原性组合物的用途
在多个实施例中，本文披露了用于治疗有需要的患者的方法，该方法包括施用免疫原性肽或包含该免疫原性肽的药物组合物。本文披露的免疫原性肽可以通过肠胃外、局部、皮内、静脉内、口服、皮下、腹膜内、鼻内或肌肉内方式施用，用于预防性和/或治疗性治疗。在一些实施例中，递送是通过皮下递送。在一些实施例中，递送是通过肌肉内递送。
在一些实施例中，免疫原性肽通过皮下递送来递送至上臂。在一些实施例中，免疫原性肽通过皮下递送来递送至腹部。在一些实施例中，免疫原性肽通过皮下递送来递送至大腿。在一些实施例中，免疫原性肽通过皮下递送来递送至上背部。在一些实施例中免疫原性肽通过皮下递送来递送至臀部。
在一些实施例中，免疫原性肽通过肌肉内递送来递送至手臂的三角肌。在一些实施例中，免疫原性肽通过肌肉内递送来递送至大腿的股外侧肌。在一些实施例中，免疫原性肽通过肌肉内递送来递送至臀部的侧臀肌。在一些实施例中，免疫原性肽通过肌肉内递送来递送至臀部的背外侧肌
在各种实施例中，免疫原性肽被施用一次或多次，例如，每次施用使用相同的剂量，在接种之间具有一个或多个间隔。在一些实施例中，免疫原性肽施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20或更多次，例如，每次施用使用相同的剂量。在一些实施例中，免疫原性肽以1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1年、2年、3年或4年间隔施用。在一些实施例中，免疫原性肽以一个间隔施用，然后以不同的间隔施用，例如，以4周间隔的5个剂量，然后以6个月间隔的5个剂量，或以3周间隔的6个剂量，然后以2个月间隔的4个剂量。在一些实施例中，免疫原性肽以6周间隔施用6个剂量，然后以3个月间隔施用5个剂量，例如在第0、6、12、18、24、30、42、54、66、78和90周施用。在一些实施例中，免疫原性肽以4周间隔施用6个剂量，然后以3个月间隔施用5个剂量，例如在第0、4、8、12、16、20、32、44、56、68和80周施用。在一些实施例中，免疫原性肽以4周间隔施用6个剂量，然后以14周间隔施用5个剂量，例如在第0、4、8、12、16、20、34、48、62、76和90周施用。
在各种实施例中，本文披露的方法和材料适用于并且可以用于治疗阿尔茨海默病或相关的tau蛋白病，例如通过皮下或肌肉内施用给表现出该疾病症状的患者。在各种实施例中，本文披露的方法和材料用于治疗阿尔茨海默病，例如通过皮下或肌肉内施用给例如使用本文披露的生物标志物之一和/或通过脑成像被诊断患有阿尔茨海默病的患者，但其中患者尚未表现出疾病的临床症状。在一些实施例中，患者的诊断在体外进行。
在各种实施例中，一种或多种免疫原性肽，例如包含本文披露的序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的肽，可以皮下或肌内施用以治疗阿尔茨海默病。在一些实施例中，提供了治疗AD或另一种tau蛋白病的方法，该方法包括向有需要的患者施用包含有效量的含有如本文所披露的肽的组合物的一个或多个剂量。在一些实施例中，有效剂量是如下剂量，其部分或完全缓和(即，消除或减轻)与所治疗的障碍/疾病状态相关的至少一种症状，减慢、延迟或防止发作或进展为障碍/疾病状态，减慢、延迟或防止障碍/疾病状态进展，减小疾病的程度，逆转一个或多个症状，导致疾病的(部分或完全)缓解和/或延长存活期。在一些实施例中，有效剂量是减少或改善AD的影响的剂量，例如，如一种或多种生物标志物的可检测变化所指示的。在一些实施例中，有效剂量是减少患者脑中tau病变量的剂量。本文列出了考虑用于治疗的疾病状态的实例。在一些实施例中，患者患有AD，或处于发展AD的风险中。
可用于本文披露的方法中的免疫原性组合物的示例包括PCT/IB2012/002246(其通过引用以其整体并入本文)中披露的免疫原性肽和组合物。在一些实施例中，免疫原性组合物包含在磷酸盐缓冲溶液(例如体积约为0.3mL)中的AADvac1(其包含通过马来酰亚胺接头与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联的免疫原性肽CKDNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:2)(例如，约40μg肽))连同氢氧化铝佐剂(例如，含有0.5mg Al3+)。
在一些实施例中，将本文披露的免疫原性肽或药物组合物，例如AADvac1，例如皮下施用至需要治疗阿尔茨海默病的患者。在一些实施例中，患者为40-95岁。在一些实施例中，患者为45-90岁。在一些实施例中，患者为50-85岁。在一些实施例中，患者为50-67岁。在一些实施例中，患者为68-85岁。在一些实施例中，患者为50-70岁。在一些实施例中，患者为71-85岁。在一些实施例中，受试者被修订的国家老衰老阿尔茨海默病协会研究所(NIA-AA)标准确定为很可能患有AD。
还考虑了对适合治疗的患者进行预筛选，例如，根据本文披露的鉴别AD的方法，以及对根据本文披露的标准鉴定的患者施用治疗。
诊断方法-标准
用于用本文披露的免疫原性肽或药物组合物治疗的患有AD的患者的诊断以及患者中AD严重程度的评估可包括反射、协调、眼球运动、言语、记忆、问题解决、注意力、计数和/或语言中的一种或多种神经学或临床测试。基于这些测试确定AD诊断的阈值和/或标准在本领域中是众所周知的。AD诊断标准的示例包括但不限于2011年修订的NIA-AA标准、2018年修订的NIAA-AA标准、修订的国家神经和交流障碍和中风和阿尔茨海默病及相关疾病协会研究所(NINCDS-ADRDA)标准、国际工作组(IWG)标准和修订的IWG-2标准。Dubois等人,Lancet Neurology[柳叶刀神经病学],(2014)13(6):p614-629；McKhann等人,Neurol.[神经元],(1984)34(7):939-944；Jack等人,Alzheimer’s&Dementia[阿尔茨海默病和痴呆症],(2018)14:535-562。
在一些实施例中，受试者通过修订的NINCDS-ADRDA标准被鉴定为患有AD。在一些实施例中，受试者被IWG标准鉴定为患有AD。在一些实施例中，受试者被修订的IWG-2标准鉴定为患有AD。
在一些实施例中，患者的诊断在体外进行。
例如，AD的神经病理学诊断标准之一是修订的国家老龄研究所/里根阿尔茨海默病协会研究所(NIA-AA)标准。McKhann等人,Alzheimer’s&Dementia[阿尔茨海默病和痴呆症],(2011)7:263-269；Hyman等人,Alzheimer’s&Dementia[阿尔茨海默病和痴呆症],(2012)8:1-13。NIA-AA提供了诊断患有痴呆症的患者的标准：(1)很可能AD痴呆，(2)有可能的AD痴呆，和(3)很可能或有可能的AD，并有AD病理生理过程的证据。特别是，当患者出现以下症状时诊断为痴呆，这些症状：
1)干扰工作或日常活动的能力；
2)表示从以前的功能水平和执行水平下降；
3)不能用谵妄或严重的精神障碍来解释；
4)通过以下的组合检测和诊断认知障碍
a.从患者和知识丰富的信息提供者那里获取病史，并
b.客观的认知评估，“床边”精神状态检查或神经心理学测试；
5)认知或行为障碍涉及以下领域中的至少两个：
a.获取和记忆新信息的能力受损-症状包括：重复的问题或对话、丢失个人物品、忘记事件或约会、在熟悉的路线上迷路；
b.复杂任务的推理和处理能力受损，判断力差-症状包括：对安全风险缺乏了解、无法管理财务、决策能力差、无法计划复杂或连续的活动；
c.视觉空间能力受损-症状包括无法识别面部或常见物体，或无法在直视中找到物体，尽管视力良好，无法操作简单的工具或将衣服定向到身体；
d.语言功能、说话、阅读、写作受损-症状包括：说话时难以思考常用词，犹豫不决；口语、拼写和写作错误。
e.性格、行为或举止的变化-症状包括：无典型特征的情绪波动，如激动，受损的积极性、主动性，冷漠，失去动力，社交退缩，对以前活动的兴趣降低，同理心丧失，强制或强迫行为，社会不可接受的行为。
在一些实施例中，诊断为很可能的AD痴呆的人符合上述标准并且还具有以下特征：
A.发作隐匿。症状在数月至数年内逐渐发作，而不是数小时或数天突然发作；
B.通过报告或观察有明确的认知恶化史；以及
C.最初和最突出的认知缺陷在病史和检查中在以下类别之一方面很明显。
a.遗忘型表现：它是AD痴呆最常见的综合征表现。该缺陷应包括学习和对最近学习信息的回忆方面的障碍。如本文前面所定义的，至少在一个其他认知领域还应该有认知功能障碍的证据。
b.非遗忘型表现：
-语言表现：最突出的缺陷是找词，但应该存在其他认知领域的缺陷。
-视觉空间表现：最突出的缺陷是空间认知，包括物体失认、面部识别受损、同时失认和失读。应该存在其他认知领域的缺陷。
-执行功能障碍：最突出的缺陷是推理、判断和解决问题的能力受损。应该存在其他认知领域的缺陷。
D.当有以下的证据时，不应该应用很可能的AD痴呆的诊断：(a)重大伴随脑血管疾病，定义为与认知障碍的发作或恶化暂时性相关的中风病史；或存在多发性或广泛性梗塞或严重的白质高强度负担；或(b)路易体痴呆的核心特征，而不是痴呆本身；或(c)行为变异额颞叶痴呆的突出特征；或(d)语义变异原发性进行性失语症或非流利/语法变异型原发性进行性失语症的突出特征；或(e)另一种并发的活动性神经系统疾病的证据，或非神经系统内科共患病或可能对认知产生重大影响的药物的使用。
在一些实施例中，有可能患有AD的人可以是这样的患者，其：(1)就AD痴呆的认知缺陷的性质而言满足核心临床标准，但是具有认知障碍突然发作或显示出进行性衰退的不充分的病史细节或客观认知记录，或(2)具有符合AD痴呆的所有核心临床标准的病因混合表现，但有具有伴随脑血管疾病的证据，痴呆症本身以外的路易体痴呆症特征，或另一种可能对认知产生重大影响的神经系统疾病或非神经系统医学合并症或药物使用的证据。
在一些实施例中，具有AD病理生理过程证据的很可能或有可能AD的人还具有基于生物标志物的阳性测试结果。这些生物标志物可能包括脑脊液(CSF)中的低AB42、正电子发射断层扫描(PET)淀粉样蛋白和tau成像、CSF tau(总tau和磷酸化tau)升高、根据PET颞顶叶皮层对氟脱氧葡萄糖(FDG)的摄取减少，和/或内侧、根据结构磁共振成像基底和外侧颞叶以及内侧顶叶皮层的不成比例的萎缩。在一些实施例中，在体外进行患者的生物标志物测试。在一些实施例中，使用ELISA测定测量总tau。在一些实施例中，ELISA测定是Innotetest hTAU Ag和磷酸-tau(181P)ELISA测定。在一些实施例中，使用ELISA测定测量pT181 tau。在一些实施例中，ELISA测定是Innotetest hTAU Ag和磷酸-tau(181P)ELISA测定。在一些实施例中，使用ELISA测定测量pT217 tau。在一些实施例中，ELISA测定是数字ELISA测定。在一些实施例中，使用ELISA测定测量Aβ40。在一些实施例中，使用ELISA测定测量Aβ42。在一些实施例中，一种或多种生物标志物通过另一种合适的免疫测定来测量，例如但不限于
测定。Lifke等人，Elecsys
Total-Tau and Phospho-Tau(181P)CSFassays:Analytical performance of the novel,fully automated immunoassays forquantification of tau proteins in human cerebrospinal fluid[
总-Tau和磷酸-Tau(181P)CSF测定：用于定量人脑脊液中tau蛋白的新型全自动免疫测定的分析性能].Clinical Biochemistry[临床生物化学],(2019)72:30-38。在一些实施例中，使用质谱法测量一种或多种生物标志物。例如，Pottiez等人,A mass spectrometry-basedmethod to quantify in parallel Tau and amyloidβ1-42in CSF for the diagnosticof Alzheimer’s Disease[一种基于质谱的方法，用于并行量化CSF中的Tau和淀粉样蛋白β1-42以诊断阿尔茨海默病].J.Proteome Res.[蛋白质组研究杂志],(2017)16(3):1228-1238；Russell等人，,Comprehensive Quantitative Profiling of Tau andPhosphorylated Tau Peptides in Cerebrospinal Fluid by Mass SpectrometryProvides New Biomarker Candidates[通过质谱法对脑脊液中Tau和磷酸化Tau肽进行综合定量分析提供了新的生物标志物候选者].Journal of Alzheimer’s Disease[阿尔茨海默病杂志],(2017)55(1):303-313。
在一些实施例中，患者具有很可能的阿尔茨海默病的诊断，例如，如由2011年修订的国家老衰老阿尔茨海默病协会研究所(NIA-AA)标准所确定的。在一些实施例中，患者具有有可能的阿尔茨海默病的诊断，例如，如由2011年修订的国家老衰老阿尔茨海默病协会研究所(NIA-AA)标准所确定的。在一些实施例中，患者诊断为很可能或有可能的AD，并具有AD病理生理过程的证据，例如，如由2011年修订的国家老衰老阿尔茨海默病协会研究所(NIA-AA)标准所确定的。在一些实施例中，诊断是基于症状的临床评估进行的。在一些实施例中，诊断是基于2011年修订的国家老龄化研究所/里根阿尔茨海默病协会研究所(NIA-AA)标准进行的。在一些实施例中，诊断是基于基于2011年修订的NIA-AA标准的很可能的AD确定而做出的。在一些实施例中，使用一种或多种替代诊断方法。在一些实施例中，使用至少一种另外方法确认诊断。
可用于本文披露的方法中的AD的神经病理学诊断的另一个标准是更新的国家老龄化研究所/里根阿尔茨海默病协会研究所(NIA-AA)研究框架。Jack等人,Alzheimer’s&Dementia[阿尔茨海默病和痴呆症],(2018)14:535-562。更新后的NIA-AA研究框架的诊断不是基于疾病的临床后果，而是侧重于使用活人的生物标志物诊断AD。根据三个生物标志物组将患者置于阿尔茨海默病连续体中：(a)Aβ斑块的生物标志物，例如皮层淀粉样蛋白PET配体结合或低CSF Aβ42(标记为“A”)，(b)纤维tau的生物标志物，例如升高的CSF磷酸化tau(P-tau)和皮层tau PET配体结合(标记为“T”)，以及(c)神经变性或神经元损伤的生物标志物，例如CSF T-tau、FDG PET低代谢和MRI上的萎缩(标记为“N”)。这建立了生物标志物表征的AT(N)系统，其中只有“A”和“T”被认为是AD的潜在生物标志物定义。例如，具有单独Aβ沉积生物标志物证据与正常病理性tau生物标志物(即A+和T-)的个体将被分配“阿尔茨海默病病理变化”标签。另一方面，具有Aβ和病理性tau生物标志物证据的患者将被分配“阿尔茨海默病”标签。生物标志物谱和类别的示例如表3所示。
表3：
在一些实施例中，患者被诊断患有阿尔茨海默病而没有任何可检测的临床症状。在一些实施例中，患者具有仅基于生物标志物的阿尔茨海默病诊断。在一些实施例中，患者诊断为阿尔茨海默病或阿尔茨海默病连续体，例如，如由2018年修订的NIA-AA研究框架所确定。在一些实施例中，患者诊断为阿尔茨海默病病理变化或阿尔茨海默病连续体，例如，如2018年修订的NIA-AA研究框架所确定。在一些实施例中，患者诊断为阿尔茨海默病和伴随的疑似非阿尔茨海默病病理变化或阿尔茨海默氏症连续体，例如由2018年修订的NIA-AA研究框架确定。在一些实施例中，本文所述的2018年修订的研究框架可与本文所述的一种或多种测定或方法组合使用。
在一些实施例中，认知障碍的一种或多种测试用于患者的诊断或评估。可以与本文披露的方法一起使用的认知障碍的示例性测试是简易精神状态检查(MMSE)，其是一种常用于筛查痴呆的问卷。Folstein等人,J.Psychiatr.Res.[精神病学研究杂志],(1975)12:189-198。MMSE最高得分30分，一般5-10分钟即可做完。这些问题通常分为七类，每类代表不同的认知领域或功能：
(a)时间定向力(5分)例如，“是哪一年？季节？日期？一周中的天？月？”；
(b)地点定向力(5分)，例如，“我们现在在哪里：州？县？城镇/城市？医院？地面？”；
(c)记述三个词(3分)，例如，检查者清楚而缓慢地说出三个不相关的物体，然后让患者说出这三个物体的名字。患者的反应用于评分。如果可能，检查者会重复它们，直到患者学会所有它们；
(d)注意力和计算(5分)，例如，“我希望你从100按7倒数。”(93、86、79、72、65,...)五个回答后停止。可替代地：“反向拼写WORLD。”(D-L-R-O-W)；
(e)回忆三个词(3分)，例如，“之前我告诉过你三个东西的名称。你能告诉我那些是什么吗？”；
(f)语言(8分)，例如，让患者说出两个简单的物体的名称，“重复这句话：没有如果、和或但是”或“编造一个关于任何事物的句子”；以及
(g)视觉构建(1分)“请复制这张图片。”(检查者给病人一张白纸，让他/她画符号给他/她看。
患者在MMSE上的得分可能会根据他/她的教育程度进行调整。例如，教育水平为第7级或更低的患者在得分为22或更低时可能有认知障碍，但具有某些大学或更高学历的患者在得分为26或以下时可能有认知障碍。在一些实施例中，患者具有小于18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30的总MMSE得分。在一些实施例中，患者具有至少15、至少16、至少17、至少18、至少19、至少20、至少21、至少22、至少23、至少24、至少25、至少26、至少27、至少28或至少29的总MMSE得分。在一些实施例中，患者具有至多29、至多28、至多27、至多26、至多25、至多24、至多23或至多22的总MMSE得分。在一些实施例中，患者具有大于19且小于27的总MMSE得分。在一些实施例中，患者具有大于20且小于26的总MMSE得分。
在一些实施例中，患者的诊断在体外进行。
诊断方法-生物标志物
在一些实施例中，生物标志物可用于鉴定和/或确认受试者患有AD。生物标志物可以是其浓度、存在和/或活性与疾病相关的药剂，并且还可以用于提供AD的诊断。生物标志物可能存在于身体的任何部位，例如血浆、尿液、脑脊液(CSF)。在一些实施例中，CSF提供了AD生物标志物的来源。在一些实施例中，血浆提供了AD生物标志物的来源。用于AD诊断的蛋白质生物标志物包括但不限于Aβ40、Aβ42、总tau(t-tau)和磷酸化tau(p-tau)，包括在血清、血浆或CSF中鉴定的tau种类，而炎症和氧化应激的生物标志物和基于尿液的生物标志物也可能提供有关AD发展和进展的重要信息。Blennow等人,Lancet Neurology[柳叶刀神经病学],(2003)2(10):605-613；Formichi等人,Journal of Cellular Physiology[细胞生理学杂志],(2006)208(1):39-46；Vandermeeren等人,Journal of Neurochemistry[神经化学杂志].(1993)61(5):1828-1834；Morikawa等人,Alcoholism:Clinical andExperimental Research[酒精中毒：临床和实验研究],(1999)23(4):575-577；Hu等人,American Journal of Pathology[美国病理学杂志],(2002)160(4):1269-1278；Hampel等人,Archives of General Psychiatry[普通精神病学档案],(2004)61(1):95-102；Koopman等人,Neurochemistry International[国际神经化学],(2009)55(4):214-218。
在一些实施例中，AD诊断和/或确定患者适合如本文披露的治疗至少部分基于蛋白质生物标志物的测量。在一些实施例中，生物标志物是血浆中的tau蛋白。在一些实施例中，生物标志物是脑脊液(CSF)中的tau蛋白。在一些实施例中，生物标志物是CSF中的总tau(t-tau)蛋白。在一些实施例中，患有阿尔茨海默病和/或适合治疗的患者在CSF中具有>400pg/mL，例如>500pg/mL、>600pg/mL、>700pg/mL、>800pg/mL、>900pg/mL或>1000pg/mL的总tau蛋白。在一些实施例中，生物标志物在CSF中的苏氨酸181(pT181 tau)处被磷酸化。在一些实施例中，患有阿尔茨海默病和/或适合治疗的患者在CSF中具有>60pg/mL，例如>70pg/mL、>80pg/mL、>90pg/mL、>100pg/mL、>120pg/mL或>150pg/mL的pT181 tau。在一些实施例中，生物标志物是CSF中的Aβ40肽。在一些实施例中，生物标志物是CSF中的Aβ42。在一些实施例中，患有阿尔茨海默病和/或适合治疗的患者在CSF中具有<600pg/mL，例如，<550pg/mL、<500pg/mL、<450pg/mL、<400pg/mL、<350pg/mL或<300pg/mL的Aβ42水平。在一些实施例中，生物标志物是CSF中Aβ42:Aβ40的比率。在一些实施例中，患有阿尔茨海默病和/或适合治疗的患者在CSF中的Aβ42:Aβ40比率<0.089，例如<0.08、<0.075、<0.07、<0.065、<0.06、<0.055、<0.05、<0.045、<0.04、<0.035或<0.03。在一些实施例中，生物标志物在CSF中包含总tau蛋白、病理性tau蛋白、Aβ42肽、Aβ40肽和Aβ42:Aβ40比率中的一种或多于一种的组合。在一些实施例中，患者总tau蛋白>400pg/mL，pT181 tau蛋白>60pg/mL，Aβ42<600pg/mL，和/或Aβ42:Aβ40比率<0.089。。
非编码RNA，例如微小RNA或lncRNA，也可以用作AD的生物标志物。在一些实施例中，至少部分地基于微小RNA的测量来进行AD诊断。Wu等人,Journal of Alzheimer’sDisease[阿尔茨海默病杂志],(2016)49(3):755-766。微小RNA(也缩写为miRNA)是在植物、动物和一些病毒中发现的小的非编码RNA分子(含有约22个核苷酸)。不受任何理论的束缚，miRNA在RNA沉默和基因表达的转录后调节中起作用。miRNA通过与mRNA分子内的互补序列碱基配对起作用。miRNA的水平可能在疾病状态下失调，因此可以用作生物标志物。可作为AD生物标志物的示例性微小RNA如表4所示。在一些实施例中，至少部分基于微小RNA生物标志物的测量来进行AD诊断。在一些实施例中，生物标志物是hsa-let-7a-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-10a-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-145-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-103a-3p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-191-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-374a-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-26a-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-107。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-15a-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-126-3p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-224-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-18a-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-23a-3p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-26b-5p。在一些实施例中，生物标志物是hsa-miR-21-5p。在一些实施例中，使用多于一种微小RNA生物标志物的组合。
表4：针对AD的示例性微小RNA生物标志物
用于测量微小RNA水平的方法是本领域已知的，并且包括但不限于逆转录酶定量PCR(RT-qPCR)、PCR或高通量测序。
在一些实施例中，将患者血浆或CSF中的微小RNA的量与来自对照样品或阈值的量进行比较。对照样品可以是阴性对照样品或阳性对照样品，并且可以来源于健康个体或AD患者。还可以对不同时间点或治疗过程中的疾病进展或疾病状态进行比较。在一些实施例中，对照样品是从未被诊断患有阿尔茨海默病的个体获得的血浆或CSF样品。在一些实施例中，对照样品是从患有阿尔茨海默病的个体获得的血浆或CSF样品。在一些实施例中，阈值是基于尚未被诊断患有阿尔茨海默病的个体确定的。在一些实施例中，阈值是基于患有阿尔茨海默病的个体确定的。
在一些实施例中，诊断患有AD的患者的方法包括：(a)检测该患者或来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或量；(b)其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明该受试者中的阿尔茨海默病；以及(c)根据步骤(b)诊断该患者中阿尔茨海默病的存在或不存在。在一些实施例中，该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
在一些实施例中，该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p的量比对照样品中低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p的量比对照样品中高约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％，80％、90％、100％、200％或500％。在一些实施例中，该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p的量比对照样品中的低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％，80％、90％或100％。在一些实施例中，相对于对照样品或阈值，hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、或至少7或更多种的存在和/或改变的量表明受试者中的阿尔茨海默病。
在一些实施例中，诊断患有AD的患者的方法包括从患者获得CSF或血浆样品。在一些实施例中，该方法还包括从该患者的CSF或血浆提取hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和/或hsa-miR-21-5p中的一种或多种。在一些实施例中，该方法进一步包括从miRNA进行cDNA合成。在一些实施例中，检测hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和/或hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在或量通过qPCR进行。
在一些实施例中，患有阿尔茨海默病的患者的hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p水平比对照样品中高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，患有阿尔茨海默病的患者的hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p水平比对照样品中低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，患有阿尔茨海默病的患者的hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p水平比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％，80％、90％、100％、200％或500％。在一些实施例中，患有阿尔茨海默病的患者的hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和/或hsa-miR-21-5p水平比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％，80％、90％或100％。
代谢物，例如氨基酸或磷脂，也可用作诊断AD的生物标志物。代谢物是代谢的中间终产物。代谢物的示例包括但不限于醇、氨基酸、核苷酸、抗氧化剂、有机酸、多元醇和维生素。在一些实施例中，至少部分地基于一种或多种代谢物的测量来进行AD诊断。Oresic等人,Translational Psychiatry[转化精神病学],(2016)Translational Psychiatry[转化精神病学],(2011)1:e57。可用作AD生物标志物的示例性代谢物包括但不限于2,4-二羟基丁酸、磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂、甾醇、精氨酸、血清素、亚精胺、鞘磷脂、丙酰肉碱。在一些实施例中，至少部分地基于一种或多种代谢物的测量来进行AD诊断。在一些实施例中，代谢物可以包括列于图38-42中的代谢物中的一种或多种。
用于测量代谢物水平的方法是本领域已知的，并且包括但不限于质谱法和酶联免疫吸附测定。在一些实施例中，患者体内代谢物的量通过液相色谱与质谱联用来测量。在一些实施例中，患者中代谢物的量通过飞行时间质谱法测量。在一些实施例中，患者中代谢物的量通过串联质谱法测量。在一些实施例中，将患者血浆或CSF中的代谢物的量与对照样品或阈值进行比较。
在一些实施例中，将患者血浆或CSF中的代谢物的量与来自对照样品或阈值的量进行比较。对照样品可以是阴性对照样品或阳性对照样品，并且可以来自健康个体或来自已知患有阿尔茨海默病的患者。还可以对不同时间点或治疗过程中的疾病进展或疾病状态进行比较。在一些实施例中，对照样品是从未被诊断患有阿尔茨海默病的个体获得的血浆或CSF样品。在一些实施例中，对照样品是从患有阿尔茨海默病的个体获得的血浆或CSF样品。在一些实施例中，阈值是基于尚未被诊断患有阿尔茨海默病的个体确定的。在一些实施例中，阈值是基于患有阿尔茨海默病的个体确定的。
在一些实施例中，诊断患有AD的患者的方法包括：(a)检测患者或来自患者的样品中一种或多种代谢物的存在和/或量；(b)其中一种或多种代谢物的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明受该试者中的阿尔茨海默病；以及(c)根据步骤(b)诊断该患者中阿尔茨海默病的存在或不存在。在一些实施例中，患者中的代谢物的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，患者中代谢物的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，患者中代谢物的量比对照样品中低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，相对于对照样品或阈值，至少2、至少3、至少4、至少5、至少6或至少7种或更多种代谢物的存在和/或改变的量表明受试者中的阿尔茨海默病。
在一些实施例中，诊断患有AD的患者的方法包括从患者获得CSF、血清或血浆样品。在一些实施例中，该方法进一步包括从患者的CSF、血清或血浆中提取一种或多种代谢物。在一些实施例中，通过质谱法检测一种或多种代谢物的存在或量。
在一些实施例中，患者中的代谢物的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。在一些实施例中，患者中代谢物的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、500％或1000％。在一些实施例中，患者中代谢物的量比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。在一些实施例中，相对于对照样品或阈值，至少2、至少3、至少4、至少5、至少6或至少7种或更多种代谢物的存在和/或改变的量表明受试者中的阿尔茨海默病。
在一些实施例中，患有阿尔茨海默病的患者的代谢物水平比对照样品中高至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍。在一些实施例中，患有阿尔茨海默病的患者的代谢物水平比对照样品中低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍。
在一些实施例中，患者的诊断在体外进行。
选择患者的方法-生物标志物
本文披露了可用于选择适合如本文披露的治疗的患者的生物标志物，以及治疗所选患者的方法。在一些实施例中，生物标志物可用于区分将从本文披露的治疗中获得治疗益处的患者亚群。在一些实施例中，生物标志物用于选择将从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益的患者。在一些实施例中，生物标志物用于选择不会受益于免疫原性组合物如AADvac1的治疗的患者。在一些实施例中，患者或来自患者的样品中一种或多种生物标志物的与对照或阈值相比的存在或改变的水平表明患者可能受益于用AADvac1的治疗。在一些实施例中，一种或多种生物标志物与对照或阈值相比的存在或改变的水平表明患者不太可能受益于AADvac1的治疗。
在一些实施例中，用于选择患者以用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)治疗的生物标志物包含hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种。在一些实施例中，hsa-let-7a-5p用于选择患者以进行AADvac1治疗。在一些实施例中，hsa-miR-15a-5p用于选择患者以进行AADvac1治疗。在一些实施例中，hsa-miR191-5p用于选择患者以进行AADvac1治疗。在一些实施例中，hsa-miR-23a-3p用于选择患者以进行AADvac1治疗。在一些实施例中，hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在或改变的水平表明患者可能从治疗中受益。在一些实施例中，一种或多种miRNA生物标志物单独使用或与一种或多种另外的生物标志物(例如本文讨论的一种或多种其他生物标志物)组合使用。
在一些实施例中，选择和/或治疗阿尔茨海默病患者的方法包括：(a)检测该患者或来自该患者的样品(例如，CSF、血浆或血清样品)中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；(b)当该患者或来自该患者的样品相对于对照样品或阈值具有hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种或hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的水平改变时，选择该患者进行治疗；以及(c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，检测hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量和/或将其与对照样品或阈值进行比较。在一些实施例中，患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量与对照样品中差异1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量比对照样品中低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％或500％表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p、和/或hsa-miR-23a-3p中至少2种、至少3种或至少4种的存在和/或改变的量表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。
在一些实施例中，选择和/或治疗阿尔茨海默病患者的方法包括：(a)检测患者或来自该患者的样品(例如血浆或血清样品)中一种或多种代谢物的存在和/或量；(b)当该患者或来自该患者的样品相对于对照样品或阈值具有一种或多种代谢物或一种或多种代谢物水平改变时，选择该患者进行治疗；以及(c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。在一些实施例中，代谢物可以包括列于图38-42中的代谢物中的一种或多种。
在一些实施例中，检测一种或多种代谢物的量和/或将其与对照样品或阈值进行比较。在一些实施例中，患者中代谢物的量与对照样品中差异1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中代谢物的量比对照样品中低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中代谢物的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中代谢物的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％或500％表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中代谢物的量比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中至少2、至少3、或至少4、至少5、至少6、至少7或更多种代谢物的存在和/或改变的量表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。
神经丝轻链(NfL)是神经轴突损伤的生物标志物，不受理论约束，在轻度认知障碍(MCI)和AD患者中可能显示水平升高。Mattsson等人,JAMA Neurol.[美国医学会神经病学],(2017)74(5):557-566；Bergman等人,Neurol.Neuroimmunol.Neuroinflamm.[神经病学-神经免疫学和神经炎症],(2016)3(5):e271。NfL的存在也可能与AD进展(例如未来的萎缩、低代谢和认知能力下降)的其他标志物相关。Mattsson等人,JAMA Neurol.[美国医学会神经病学],(2019)76(7):791-799。不受理论的束缚，NfL可用作生物标志物以选择患者进行治疗或监测或评估本文讨论的治疗的功效。
在一些实施例中，NfL用作生物标志物来选择用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)治疗的患者。在一些实施例中，NfL的存在或改变的水平(单独或与一种或多种另外的生物标志物组合)表明患者可能受益于治疗。
用于测量神经丝轻链水平的方法是本领域已知的，并且包括但不限于Bradford测定、蛋白质印迹、免疫测定，例如ELISA和Simoa 
测定和质谱。在一些实施例中，神经丝轻链水平通过Simoa 
测定来测量。
在一些实施例中，选择要治疗阿尔茨海默病的患者的方法包括：(a)检测患者或来自该患者的样品中NfL的存在和/或量；(b)当该患者或来自该患者的样品相对于对照样品或阈值具有NfL或NfL水平改变时，选择该患者进行治疗；以及(c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，检测NfL的量和/或将其与对照样品或阈值进行比较。在一些实施例中，患者中神经丝轻链的量与对照样品中差异1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中NfL的量大于约20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50pg/ml或100pg/mL的阈值表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，该方法进一步包括在选择患者用于步骤(b)中的治疗之前，通过本文披露的一种或多种方法确认患者的AD。
在一些实施例中，同型半胱氨酸用于选择用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)治疗的患者。在一些实施例中，同型半胱氨酸的存在或改变的水平(单独或与一种或多种另外的生物标志物组合)表明患者可能受益于治疗。
测量同型半胱氨酸水平的方法是本领域已知的，包括但不限于免疫测定和ELISA。
在一些实施例中，选择要治疗阿尔茨海默病的患者的方法包括：(a)检测患者或来自该患者的样品中同型半胱氨酸的存在和/或量；(b)当该患者或来自该患者的样品相对于对照样品或阈值具有同型半胱氨酸或同型半胱氨酸水平改变时，选择该患者进行治疗；以及(c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，检测同型半胱氨酸的量和/或将其与对照样品或阈值进行比较。在一些实施例中，患者中同型半胱氨酸的量与对照样品中差异1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中同型半胱氨酸的量大于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25，50或100μM的阈值表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中同型半胱氨酸的量大于15μM的阈值表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。
神经粒蛋白是钙调蛋白结合蛋白，主要在脑中表达，特别是在树突棘中，并参与蛋白激酶C信号传导通路。神经粒蛋白是调节钙调蛋白可用性的主要突触后蛋白，在没有钙的情况下与钙调蛋白结合。CSF中的神经粒蛋白浓度被认为是年龄相关性神经变性和AD中突触功能障碍的标志物。Casaletto等人,(2017)Neurology[神经病学],89(17):1782-1788；De Vos等人,(2015)Alzheimer's&Dementia[阿尔茨海默病和痴呆症],11(12):1461-1469；Willemse等人,(2018)Clinical Chemistry[临床化学],64(6):927-937。不受理论的束缚，神经粒蛋白可用作生物标志物以选择患者进行治疗或监测如本文所讨论的治疗。
在一些实施例中，选择要治疗阿尔茨海默病的患者的方法包括：(a)检测患者或来自该患者的样品中神经粒蛋白的存在和/或量；(b)当该患者或来自该患者的样品相对于对照样品或阈值具有神经粒蛋白或神经粒蛋白水平改变时，选择该患者进行治疗；以及(c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
在一些实施例中，检测神经粒蛋白的量和/或将其与对照样品或阈值进行比较。在一些实施例中，患者中神经粒蛋白的量与对照样品中差异1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中神经粒蛋白的量大于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25，50或100pg/ml的阈值表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中神经粒蛋白的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％或500％表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，患者中神经粒蛋白的量比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。
在一些实施例中，所选患者患有AD。在一些实施例中，使用本文披露的方法将所选患者诊断为患有AD。
在一些实施例中，所选患者患有MCI。在一些实施例中，使用本文披露的方法将所选患者诊断为患有MCI。
选择患者的方法-基因型
患者的基因型可能会为决定治疗方案提供另外的因素。在一些实施例中，患者的基因型用于选择用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)治疗的患者，是同型半胱氨酸。在一些实施例中，至少一个ε4等位基因的存在表明患者可能受益于治疗。
在一些实施例中，选择要治疗阿尔茨海默病的患者的方法包括：(a)确定患者中存在的ApoE基因的两个等位基因中的每一个的基因型；(b)当该患者具有至少一个ApoE-ε4等位基因时选择该患者进行治疗；以及(c)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
用于确定基因型或等位基因的方法是本领域已知的，并且包括但不限于逆转录酶定量PCR(RT-qPCR)、PCR、高通量测序、桑格测序或荧光原位杂交(FISH)。在一些实施例中，基因型通过桑格测序确定。在一些实施例中，基因型通过全基因组测序确定。在一些实施例中，基因型通过PCR确定。在一些实施例中，一个ApoE-ε4等位基因的存在表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，两个ApoE-ε4等位基因的存在表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。
在一些实施例中，所选患者患有AD。在一些实施例中，使用本文披露的方法将所选患者诊断为患有AD。
在一些实施例中，所选患者患有MCI。在一些实施例中，使用本文披露的方法将所选患者诊断为患有MCI。
选择患者的方法-患者特征
适合或可能受益于本文披露的组合物治疗的患者的选择也可以由患者特征确定。此类特征可包括但不限于年龄、性别、疾病严重程度或疾病发作年龄。在一些实施例中，疾病严重程度用于选择用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)治疗的患者。在一些实施例中，患者MMSE得分用于选择用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)治疗的患者。
在一些实施例中，选择要治疗阿尔茨海默病的患者的方法包括：(a)确定该患者的简易精神状态检查(MMSE)得分；(b)将步骤a的得分与阈值得分进行比较；(c)选择该患者进行治疗，其中该患者的MMSE得分高于该阈值；以及(d)通过施用一个或多个剂量免疫原性组合物治疗该患者，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的肽。
在一些实施例中，确定MMSE得分并将其与对照患者或阈值进行比较。在一些实施例中，比对照或阈值低1、2、3、4、5、6、7、8、9或10分的MMSE得分表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，比对照或阈值高1、2、3、4、5、6、7、8、9或10分的MMSE得分表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，至少为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29的MMSE得分表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，至多为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28或29的MMSE得分表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。在一些实施例中，24-26的MMSE得分表示患者可能从使用本文讨论的治疗性组合物(例如包含免疫原性肽的治疗性组合物，例如包含SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2的治疗性组合物，例如AADvac1)的治疗中受益。
患者的年龄也可用于选择适合或可能受益于本文披露的组合物(例如AADvac1)的治疗的患者。不受理论束缚，用本文披露的靶向病理性tau的组合物，例如AADvac1进行治疗，可能对患有早发性AD的患者更有益，例如在较年轻患者中，此时tau可能在疾病的病理学中发挥更大的作用。在一些实施例中，选择用于治疗的患者患有早发性阿尔茨海默病。在一些实施例中，选择用于治疗的患者小于80岁、78岁、76岁、74岁、72岁、70岁、68岁、66岁、64岁、62岁、60岁、58岁、56岁、54岁、54岁或50岁。在一些实施例中，选择用于治疗的患者是50-68岁。在一些实施例中，选择用于治疗的患者是50-70岁。在一些实施例中，选择用于治疗的患者不超过约60岁、62岁、64岁、66岁、68岁、70岁、72岁、74岁或76岁。
在一些实施例中，所选患者患有AD。在一些实施例中，使用本文披露的方法将所选患者诊断为患有AD。
在一些实施例中，所选患者患有MCI。在一些实施例中，使用本文披露的方法将所选患者诊断为患有MCI。
诊断方法-脑成像
在一些实施例中，AD诊断和/或确定患者适合如本文披露的治疗至少部分基于脑成像技术。脑成像技术可以提供脑的直接结构和功能细节。计算机断层成像(CT)、磁共振成像(MRI)技术和正电子发射断层成像(PET)等技术可能能够可视化AD患者的脑中的脑体积损失、神经元损失、内侧颞区萎缩和/或神经原纤维缠结的存在。Frisoni GB,J.Neurol.Neurosurgery and Psychiatry[神经外科和精神病学杂志],(2001)70(6):711-718；Scheltens等人,Lancet Neurology[柳叶刀神经病学],(2002)1(1):13-21；Barnes等人,Archives of Neurology[神经病学档案],(2006)63(10):1434-1439；Barnes等人,Neurobiology of Aging[衰老的神经生物学],(2007)28(1):20-28；Whitwell等人,Topicsin Magnetic Resonance Imaging[磁共振成像专题],(2005)16(6):409-425；Becker等人,Neurology[神经病学],(1996)46(3):692-700；Grady等人,Brain[脑],(2001)124(4):739-756；Woodard等人,Neuropsychology[神经心理学],(1998)12(4):491-504。
在一些实施例中，AD诊断和/或确定患者适合治疗是基于脑成像测试进行。在一些实施例中，诊断和/或确定是基于对脑的磁共振成像(MRI)扫描进行。在一些实施例中，诊断和/或确定是基于对脑的计算机断层成像(CT)扫描进行的。在一些实施例中，诊断和/或确定是基于对脑的正电子发射断层成像(PET)扫描进行。在一些实施例中，患者在筛选时具有与AD诊断一致的脑MRI发现。在一些实施例中，患者具有AD病理生理过程的证据。
在一些实施例中，放射学分类量表用于评估脑成像。例如，可以在本文披露的方法中使用的一种基于成像的放射学分类量表是内侧颞叶萎缩量表(MTA量表)或Scheltens量表。Scheltens等人,J.Neurol.[神经病学杂志],(1995)242:557-560；Scheltens等人,J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry[神经外科和精神病学杂志],(1992)55:967-972；Dubois等人,Lancet Neurol.[柳叶刀神经病学],(2007)6:734-746。分析是在冠状T1加权图像上进行的，例如，在通过海马体的切片上(前脑桥水平)。该量表可以基于脉络膜裂的宽度、颞角的宽度和海马体结构的高度的视觉得分。得分0表示没有萎缩；1表示脉络膜裂仅变宽；2包括侧脑室颞角变宽；3表示海马体体积中度减小(身高减少)；以及得分4表示海马体体体积严重减小。在一些实施例中，患者具有基于脑MRI的大于或等于2的Scheltens得分，例如2、3或4的Scheltens得分。
在一些实施例中，AD诊断和/或确定患者适合治疗是基于临床量表得分进行。例如，Hachinski缺血得分(HIS)量表是目前用于区分痴呆类型(原发性退行性、血管性或多发性梗塞、混合型)的临床工具。Hachinski等人,Arch.Neurol.[神经病学档案],(1975)32:632-637。这是一项13项测试，其中得分较高的患者更可能患有血管性痴呆，而得分较低的患者更有可能患有阿尔茨海默类型的老年性痴呆。这13个项评估例如突然发作、逐步恶化、波动过程、夜间意识模糊、人格相对保留、抑郁、躯体症状、情绪失禁、高血压史、中风史、相关动脉粥样硬化的证据、局灶性神经系统症状、和局灶性神经系统体征。在一些实施例中，根据本文方法治疗的患者具有小于或等于4的HIS得分，例如4、3、2或1的得分。
脑成像技术还可以帮助预测、诊断和/或监测AD疾病进展。在一些实施例中，脑成像用于监测AD疾病进展。在一些实施例中，脑成像用于监测整个治疗过程中的AD疾病严重程度。在一些实施例中，AD疾病进展通过对脑的磁共振成像(MRI)扫描来监测。在一些实施例中，AD疾病进展通过对脑的计算机断层成像(CT)扫描来监测。在一些实施例中，AD疾病进展通过对脑的正电子发射断层成像(PET)扫描来监测。在一些实施例中，整个治疗过程中的AD疾病进展通过对脑的磁共振成像(MRI)扫描来监测。在一些实施例中，在整个治疗过程中的AD疾病进展通过对脑的计算机断层成像(CT)扫描来监测。在一些实施例中，在整个治疗过程中的AD疾病进展通过对脑的正电子发射断层成像(PET)扫描来监测。任何其他诊断技术也可用于监测疾病的进展，例如生物标志物。
监测疾病进展和治疗功效的方法-生物标志物
在一些实施例中，生物标志物可用于监测阿尔茨海默病的进展，并评估本文所披露的治疗的功效。AD病理特异性的生物标志物可以提供评估疾病严重程度的方法，和/或将AD与其他具有相似症状的神经系统疾病区分开来。
在一些实施例中，通过测量例如血浆和/或CSF中的hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的水平来监测AD的进展。在一些实施例中，通过评估例如血浆、血清和/或CSF中的hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p、和hsa-miR-23a-3p的存在和/或水平来估计治疗的功效。
在一些实施例中，hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量可用于监测治疗的功效。在一些实施例中，治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法包括：(a)确定该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量(例如，通过测量CSF、血清或血浆样品中的一个或多个水平)；(b)施用一个或多个剂量的包含肽的免疫原性组合物，该肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量(例如，通过测量CSF、血清或血浆样品中的一个或多个水平)；(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的改变的量表示治疗功效；以及(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的肽。在一些实施例中，治疗后hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p的量减少表示功效。在一些实施例中，治疗后hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p减少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍表示功效。在一些实施例中，治疗后hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p增加约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍表示功效。
在一些实施例中，在确定hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量之前，患者已接受至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量或15个剂量的AADvac1的治疗。在一些实施例中，在确定hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量之后，施用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的AADvac1。
在一些实施例中，通过测量例如血浆、血清和/或CSF中的一种或多种代谢物的水平来监测AD的进展。在一些实施例中，通过评估例如血浆、血清和/或CSF中的一种或多种代谢物的存在和/或水平来评估治疗的功效。在一些实施例中，代谢物可以包括列于图38-42中的代谢物中的一种或多种。
在一些实施例中，一种或多种代谢物的存在和/或量可用于监测治疗的功效。在一些实施例中，治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法包括：(a)确定患者中一种或多种代谢物的存在和/或量(例如，通过测量CSF、血清或血浆样品中的一个或多个水平)；(b)施用一个或多个剂量的包含肽的免疫原性组合物，该肽包含SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2；(c)在施用该一个或多个剂量后，确定患者中一种或多种代谢物的存在和/或量(例如，通过测量CSF、血清或血浆样品中的一个或多个水平)；(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中一种或多种代谢物的改变的量表示治疗功效；以及(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的肽。在一些实施例中，治疗后一种或多种代谢物的量减少表示功效。在一些实施例中，治疗后代谢物减少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍表示功效。在一些实施例中，治疗后一种或多种代谢物增加约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍表示功效。
在一些实施例中，在确定一种或多种代谢物的存在和/或量之前，患者已接受至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量或15个剂量的AADvac1的治疗。在一些实施例中，在确定一种或多种代谢物的存在和/或量之后，施用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的AADvac1。
NfL的纵向增加与高pT181和总tau(tTau)水平以及CSF中的低Aβ水平、低海马体体积、低FDG-PET和较差的认知能力相关。NfL的更快增加与更快的萎缩、低代谢和认知恶化相关。在一些实施例中，AD的进展通过测量血浆和/或CSF中的NfL水平来监测。在一些实施例中，治疗的功效通过测量血浆和/或CSF中的NfL水平来评估。
在一些实施例中，治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法包括：(a)确定该患者中NfL链的存在和/或数量(例如，在血清、血浆或CSF样品中)；(b)施用一个或多个剂量的包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽；(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中NfL的存在和/或量(例如，在血清、血浆或CSF样品中)；(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中NfL的改变的量表示治疗功效；以及(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的肽。在一些实施例中，治疗后NfL的量稳定或减少表示功效。在一些实施例中，与治疗前的积累(例如，积累的速率)相比，治疗后NfL的积累减少(例如，较低的年或半年积累速率)表示功效。在一些实施例中，与在阿尔茨海默病患者的平均群体中的积累(例如，积累速率)相比，治疗后NfL的积累减少(例如，较低的年或半年积累速率)表示功效。在一些实施例中，治疗后NfL的量增加不超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。在一些实施例中，治疗后NfL的量增加不超过约6pg/mL、5pg/mL、4pg/mL、3pg/mL或2pg/mL表示功效。在一些实施例中，治疗后NfL的量减少超过约30％、25％、20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。
在一些实施例中，在确定NfL的存在和/或量之前，患者已接受至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量或15个剂量的AADvac1的治疗。在一些实施例中，在确定NfL的存在和/或量之后，施用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的AADvac1。
在一些实施例中，治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法包括：(a)确定该患者中神经粒蛋白的存在和/或数量(例如，在血清、血浆或CSF样品中)；(b)施用一个或多个剂量的包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽；(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中神经粒蛋白的存在和/或量(例如，在血清、血浆或CSF样品中)；(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中神经粒蛋白的改变的量表示治疗功效；以及(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQID NO:2的肽。在一些实施例中，治疗后神经粒蛋白的量稳定或减少表示功效。在一些实施例中，治疗后神经粒蛋白的量增加不超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。在一些实施例中，治疗后神经粒蛋白的量增加不超过约20pg/mL、18pg/mL、16pg/mL、14pg/mL、12pg/mL、10pg/mL、8pg/mL、6pg/mL、5pg/mL 4pg/mL、3pg/mL或2pg/mL表示功效。在一些实施例中，治疗后神经粒蛋白的量减少超过约30％、25％、20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。
在一些实施例中，在确定神经粒蛋白的存在和/或量之前，患者已接受至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量或15个剂量的AADvac1的治疗。在一些实施例中，在确定神经粒蛋白的存在和/或量之后，施用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的AADvac1。
在一些实施例中，在治疗之前、期间和/或之后单独使用或与本文讨论的一种或多种生物标志物组合使用行为测量，例如MMSE，以确认功效。在一些实施例中，治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法包括：(a)确定该患者的总MMSE得分；(b)施用一个或多个剂量的包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽；(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者的总MMSE得分；(d)将来自步骤(c)的治疗后总MMSE得分与来自步骤(a)的治疗前MMSE得分进行比较，其中神经粒蛋白的改变的量表示治疗功效；以及(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的肽。在一些实施例中，稳定的总MMSE得分表示功效。在一些实施例中，总MMSE得分降低不超过20分、19分、18分、17分、16分、15分、14分、13分、12分、11分、10分、9分、8分、7分、6分、5分、4分、3分2分、1分表示功效。
在一些实施例中，在确定神经粒蛋白的存在和/或量之前，患者已接受至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量或15个剂量的AADvac1的治疗。在一些实施例中，在步骤(c)中确定总MMSE得分之后。施用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的AADvac1。
在一些实施例中，使用脑成像(例如，脑萎缩的MRI成像)和生物标志物评估的组合来诊断患者患有AD。在一些实施例中，生物标志物评估包括测量来自患者的生物样品中淀粉样蛋白的存在和/或量。在一些实施例中，生物标志物评估包括测量来自患者的生物样品中tau(例如，病理性tau)的存在和/或量。在一些实施例中，生物标志物评估包括与脑成像组合地测量来自患者的生物样品中淀粉样蛋白和tau(例如，病理性tau)的存在和/或量。在一些实施例中，生物标志物评估进一步包括测量来自患者的生物样品中的NfL和/或神经粒蛋白。在一些实施例中，生物标志物评估包括在来自患者的生物样品中测量淀粉样蛋白和/或tau(例如，病理性tau)并且进一步包括测量hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p。
治疗功效评估
在一些实施例中，治疗在预防、减少、减轻、减缓和/或部分或完全逆转AD的一种或多种症状方面是有效的。在一些实施例中，在施用本文披露的免疫原性肽或药物组合物之前、期间和/或之后监测或评估治疗。在一些实施例中，使用本文披露的一种或多种测试监测或评估治疗。在一些实施例中，在治疗前进行测试的基线测量并与治疗后的测试测量进行比较以监测和/或确认治疗。在一些实施例中，基线测试和/或治疗期间和/或之后进行的测试包括之前讨论的用于诊断AD患者和/或适合治疗的任何测试(例如，行为、生物标志物、神经影像学、认知、功能等)。
可以使用的用于评估治疗效果的测试的一个示例是华盛顿大学临床痴呆评分(CDR)，它产生整体得分和总加得分(记录总和(SB)得分)。Hughes等人,Br.J.Psychiatry[英国精神病学杂志],(1982)140:566-572；Berg等人,Ann Neurol.[神经病学年鉴],(1988)23(5):477-484；Lynch等人,Dement.Geriatr.Cogn.Disord.[痴呆症和老年性认知障碍],(2006)21(1):40-43。在一些实施例中，CDR是通过对患者和信息提供者的半结构化访谈获得的，并且认知功能在6个功能领域中被评分：记忆、定向力、判断以及问题解决、社区事务、家庭和爱好，以及个人护理。每个领域都按以下5分的功能评分：0，无障碍；0.5，可疑的障碍；1、轻度障碍；2、中度障碍；和3，严重障碍(个人护理按4分制评分，没有0.5分)。CDR-SB得分是通过将每个领域记录得分相加得到的，得分范围从0到18。Berg等人,Arch.Neurol.[神经病学年鉴],(1993)50(4):349-358；Morris等人,Neurology[神经病学],(1991)41(4):469-478；Morris等人,Neurology[神经病学],(1996)46(3):707-719。在一些实施例中，在一轮或多轮施用本文披露的免疫原性肽或药物组合物后，由CDR-SB评估治疗的功效。在一些实施例中，将标准6领域CDR评估中患者的领域得分相加以获得记录加和得分。在一些实施例中，比较治疗前后患者的CDR-SB得分以确定治疗功效。在一些实施例中，治疗功效通过CDR-SB得分从基线到治疗开始后4周、8周、12周、16周、20周、24周、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、21个月、24个月或104周的平均变化来评估。在一些实施例中，如果患者的CDR-SB得分在治疗后与治疗前的基线相比没有增加，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果患者的CDR-SB得分在治疗后与治疗前的基线相比增加不超过1、2、3、4、5、6、7或8，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果患者的CDR-SB得分在治疗后与治疗前的基线相比在6个领域的每一个中增加不超过1，则治疗是有效的。在一些实施例中，治疗功效通过CDR-SB得分从基线到治疗开始后4周、8周、12周、16周、20周、24周、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、21个月、24个月或104周的变化来评估，如与参考安慰剂得分相比。在一些实施例中，在治疗后第104周，用本文所述的AADvac1治疗的患者与施用安慰剂的患者相比，CDR-SB得分的差异为约-0.60。在一些实施例中，在治疗后第104周，用本文所述的AADvac1治疗的患者与施用安慰剂的患者相比，CDR-SB得分的差异为约0.05。在一些实施例中，在治疗后第104周，用本文所述的AADvac1治疗的患者与施用安慰剂的患者相比，CDR-SB得分的差异为约-0.97。在一些实施例中，在治疗后第104周，用本文所述的AADvac1治疗的患者与施用安慰剂的患者相比，CDR-SB得分的差异为约-0.15。在一些实施例中，在治疗后第104周，用本文所述的AADvac1治疗的患者与施用安慰剂的患者相比，CDR-SB得分的差异为约-0.70。在一些实施例中，在治疗后第104周，用本文所述的AADvac1治疗的患者与施用安慰剂的患者相比，CDR-SB得分的差异为约0.80。在一些实施例中，在治疗后第104周，用本文所述的AADvac1治疗的患者与施用安慰剂的患者相比，CDR-SB得分的差异为约-0.12。在一些实施例中，在治疗后第104周，用本文所述的AADvac1治疗的患者与施用安慰剂的患者相比，CDR-SB得分的差异为约-0.97至约0.80。在一些实施例中，如果患者的CDR-SB得分在治疗后与治疗前的基线相比没有增加，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果患者的CDR-SB得分在治疗后与治疗前的基线相比增加不超过1、2、3、4、5、6、7或8，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果患者的CDR-SB得分在治疗后与治疗前的基线相比在6个领域的每一个中增加不超过1，则治疗是有效的。
也可用于评估治疗功效的其他认知测试包括但不限于记忆、语言、执行功能的测试。一个这样的测试是Cogstate国际购物清单任务(ISLT)，它是一种计算机管理和评分的听觉/语言清单学习测试。Lim等人,Behav.Res.Methods[行为研究方法],(2009)41(4):1190-1200；Lim等人,Arch.Clin.Neuropsychol.[临床神经心理学档案],(2012)27(2):136-147；Ames等人,J.Clin.Exp.Neuropsych.[临床和实验神经心理学杂志],(2012)34(8):853-863。在测试期间，患者尝试记忆12种常见的食物物品，这些食物物品以随机顺序朗读给他们，并评估他们立即(立即自由回忆)或20分钟后(延迟自由回忆)回忆单词的能力。测试执行三次，将回忆的物品数相加得出总回忆ISLT得分和延迟回忆ISLT得分。在一些实施例中，治疗的功效由Cogstate ISLT评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的Cogstate ISLT得分以确定治疗功效。在一些实施例中，如果患者的ISLT得分在治疗后与治疗前的基线相比更高或不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果总回忆ISLT得分在治疗后与治疗前的基线相比不超过1、2、3、4、5、6、7、8或9分恶化，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果延迟回忆ISLT得分在治疗后与治疗前的基线相比不超过1、2、3或4分恶化，则治疗是有效的。在一些实施例中，将患者治疗后相对于基线的Cogstate ISLT得分与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分进行比较。在一些实施例中，如果治疗后的ISLT得分相对于基线与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分相比更高、更多改善或更少恶化，则治疗是有效的。
另一种可能使用的认知测试是Cogstate一卡学习任务(Cogstate One CardLearning Task)，这是一项持续的视觉识别学习任务，其评估视觉识别记忆和注意力。在测试过程中，一张卡面朝下放在电脑屏幕中央，背景为绿色。在随机变化的2.5-3.5秒间隔后，将卡正面朝上，如果卡之前出现在测试中，则要求患者回答“是”，如果尚未出现，则要求患者回答“否”。Fredrickson等人,Met.Neuroepidemiology[神经流行病学会议],(2010),34:66-75。在一些实施例中，表现的准确性被定义为做出的正确响应的数量，表示为尝试的总试验的比例。在一些实施例中，表现的准确度被表示为正确响应比例的平方根的反正弦变换。在一些实施例中，治疗的功效由Cogstate一卡学习任务评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的Cogstate一卡学习任务得分以确定治疗功效。在一些实施例中，如果患者的Cogstate一卡学习任务得分在治疗后与治疗前的基线相比更高或不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，将患者治疗后相对于基线的Cogstate一卡学习任务得分与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分进行比较。在一些实施例中，如果治疗后的Cogstate一卡学习得分相对于基线与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分相比更高、更多改善或更少恶化，则治疗是有效的。
另一种可以使用的认知测试是Cogstate一卡返任务(Cogstate One Back Task)。该测试评估工作记忆和注意力，并使用与单卡学习任务类似的设置。如果该卡与前一张卡完全相同，则要求患者回答“是”，如果与前一张卡不同，则要求患者回答“否”，而不是确定该卡之前是否出现在测试中。Fredrickson等人,Met.Neuroepidemiology[神经流行病学会议],(2010),34:66-75。表现的速度可以测量为正确响应的log10转换反应时间的平均值。在一些实施例中，治疗的功效由Cogstate一卡返任务评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的Cogstate一卡返任务得分以确定治疗功效。在一些实施例中，如果患者的Cogstate一卡返任务得分在治疗后与治疗前的基线相比更低或不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，将患者治疗后相对于基线的Cogstate一卡返任务得分与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分进行比较。在一些实施例中，如果治疗后的Cogstate单反任务得分相对于基线与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分相比更低、更多改善或更少恶化，则治疗是有效的。
另一种可以使用的认知测试是类别流利度测试(Category Fluency Test)和字母流利度测试(Letter Fluency Test)。这些是对执行功能和语言的评估。Lezak等人,Neuropsychological Assessment.[神经心理学评估](2012)纽约,NY:Oxford UniversityPress[纽约：牛津大学出版社]。在类别流利度测试中，要求患者在给定时间内从给定类别(例如动物或水果)中产生尽可能多的单词。在字母流利度测试中，要求患者在给定时间内尽可能多地产生以给定字母开头的单词。在一些实施例中，类别流利度测试得分由产生的可接受单词的数量定义。在一些实施例中，字母流利度测试分数由在三个试验中产生的可接受单词的总数定义。在一些实施例中，治疗的功效通过类别流利度测试来评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的类别流利度测试得分以确定治疗功效。在一些实施例中，治疗的功效由字母流利度测试评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的字母流利度测试得分以确定治疗功效。在一些实施例中，如果与治疗前的基线相比，治疗后类别流利度测试和字母流利度测试得分更高或不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，将患者治疗后相对于基线的类别流利度测试得分与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分进行比较。在一些实施例中，如果治疗后的类别流利度测试得分相对于基线与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分相比更高、更多改善或更少恶化，则治疗是有效的。在一些实施例中，将患者治疗后相对于基线的字母流利度测试得分与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分进行比较。在一些实施例中，如果治疗后的字母流利度测试得分相对于基线与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分相比更高、更多改善或更少恶化，则治疗是有效的。
另一种可以使用的认知测试是数字符号编码测试(Digit Symbol Coding Test)。这是衡量执行功能、工作记忆和处理速度的测量。Boake等人,J.Clin.Exp.Neuropsychol.[临床和实验神经心理学杂志],(2002)24:383-405；Lezak等人,NeuropsychologicalAssessment.[神经心理学评估](2012)纽约,NY:Oxford University Press[纽约：牛津大学出版社]。要求患者根据位于纸张顶部的说明将符号与数字匹配。在允许的时间内(通常是120秒)内正确符号的数量构成得分。在一些实施例中，治疗的功效由数字符号编码测试评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的数字符号编码测试得分以确定治疗功效。在一些实施例中，如果患者的数字符号编码测试得分在治疗后与治疗前的基线相比更高或不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，将治疗后患者相对于基线的数字符号编码测试得分与从安慰剂组获得的参考得分进行比较。在一些实施例中，如果治疗后的数字符号编码测试得分相对于基线与从安慰剂组(例如，提供预期不具有任何治疗价值的治疗的组)获得的参考得分相比更高、更多改善或更少恶化，则治疗是有效的。
在一些实施例中，治疗功效通过认知测试的组合来评估。在一些实施例中，定制认知成套测验包括Cogstate国际购物清单任务、Cogstate一卡学习任务、Cogstate一卡返任务、类别流利度测试、字母流利度测试和数字符号编码测试。在一些实施例中，为定制认知成套测验的每次测试计算z得分。在一些实施例中，综合z得分是从定制认知成套测验测试的结果计算的。在一些实施例中，z得分是根据患者在每次就诊时在定制认知成套测验上的实际综合得分计算的，并通过完整分析集中的平均基线得分和标准偏差进行归一化。在一些实施例中，治疗功效通过定制认知成套测验的综合z得分从基线到治疗开始后4周、8周、12周、16周、20周、24周、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、21个月、24个月或104周的平均变化来评估。
在一些实施例中，治疗功效也可以通过患者日常生活的改善来衡量。例如，可以使用阿尔茨海默病合作研究轻度认知障碍日常生活活动(ADCS MCI ADL)问卷。这是基于访谈的信息提供者报告的测量方法，用于评估AD患者在日常生活的基本活动和工具性活动(例如饮食、处理财务、购物、旅行和记住约会)中的能力。Galasko等人,AlzheimerDis.Assoc.Disord.[阿尔茨海默病相关障碍],(1997)11增补2:S33-39；Pedrosa等人,J.Nutr.Health Aging[营养健康与衰老杂志],(2010)14:703-709。问卷根据他/她对特定任务所需的帮助程度对患者进行评分，例如，0(如果患者在执行某项活动时完全独立)至4(完全无法独立行动)。18项(ADCS-MCI-ADL-18)版本的测试包括关于购物、爱好和个人器具的问题，而24项版本(ADCS-MCI-ADL-24)的测试还有包括开车和组织化用药的另外6项。在一些实施例中，治疗的功效由ADCS-MCI-ADL-18评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的ADCS-MCI-ADL-18得分以确定治疗功效。在一些实施例中，治疗的功效由ADCS-MCI-ADL-24评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的ADCS-MCI-ADL-24得分以确定治疗功效。在一些实施例中，治疗功效由ADCS-MCI-ADL-18和ADCS-MCI-ADL-24两者评估。在一些实施例中，比较治疗前后患者的ADCS-MCI-ADL-18和ADCS-MCI-ADL-24得分以确定治疗功效。在一些实施例中，治疗功效通过ADCS-MCI-ADL-18得分从基线到治疗开始后104周的平均变化来评估。在一些实施例中，治疗功效通过ADCS-MCI-ADL-24得分从基线到治疗开始后104周的平均变化来评估。在一些实施例中，治疗功效通过ADCS-MCI-ADL-18和ADCS-MCI-ADL-24得分两者从基线到治疗开始后4周、8周、12周、16周、20周、24周、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、21个月、24个月或104周的平均变化来评估。
在一些实施例中，治疗功效可以通过患者的抗体滴度和/或免疫原性来测量(单独或与一种或多种替代测试组合，例如本文讨论的测试)。免疫原性肽的施用可在患者中引起抗体应答。在一些实施例中，通过患者是否已经产生针对本文披露的免疫原性肽的IgG抗体应答来评估功效。在一些实施例中，通过患者是否已经产生针对本文披露的免疫原性肽的IgM抗体应答来评估功效。在一些实施例中，通过免疫原性肽诱导的IgG抗体的几何平均滴度来评估功效。在一些实施例中，通过免疫原性肽诱导的IgM抗体的几何平均滴度来评估功效。在一些实施例中，通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量IgG或IgM抗体应答。在一些实施例中，IgG或IgM抗体的平均滴度通过ELISA测量。
在一些实施例中，治疗功效可以通过脑功能水平例如脑代谢的变化来测量。在一些实施例中，氟脱氧葡萄糖-正电子发射断层成像(FDG-PET)。FDG-PET可用于检测AD中的功能性脑变化、鉴定早期AD的变化以及帮助区分AD与其他痴呆原因。使用FDG作为示踪剂，可以测量作为神经元活动指标的静息状态脑葡萄糖代谢速率。Mosconi,Clin.Transl.Imaging[临床和转化成像],(2013)1(4):217-233；Kantarci,Am.J.Neuroradiol.[美国神经放射学杂志],(2014)35(6增补):S12-177。在一些实施例中，治疗功效通过FDG-PET评估。在一些实施例中，治疗功效通过使用FDG-PET测量脑代谢来评估。在一些实施例中，FDG-PET通过脑葡萄糖代谢速率的变化来评估脑代谢。在一些实施例中，脑葡萄糖代谢速率的变化表示为多个目标区域中标准化摄取值比率(SUVR)的变化。在一些实施例中，治疗功效通过由FDG-PET测量的从基线到治疗开始后4周、8周、12周、16周、20周、24周、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、21个月或24个月的脑代谢的变化来评估。
在一些实施例中，治疗功效可以通过海马体萎缩来测量，海马体萎缩是可能与AD神经病理学相关的AD特征。使用MRI可以检测到萎缩，因此使用MRI的解剖容积测定法可以用作AD进展的生物标志物。Fleisher等人,Neurology[神经病学],(2008)70(3):191-199.在一些实施例中，治疗功效通过MRI容积测定法评估。在一些实施例中，治疗功效通过MRI容积测定法从基线到治疗开始后4周、8周、12周、16周、20周、24周、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、21个月或24个月的变化来评估。
在一些实施例中，治疗功效通过一种或多种生物标志物的测量来评估。在一些实施例中，治疗功效通过治疗开始后与治疗前基线相比血浆中tau蛋白的水平来评估。在一些实施例中，治疗功效通过治疗开始后与治疗前基线相比脑脊液(CSF)中tau蛋白的水平来评估。在一些实施例中，治疗功效通过治疗开始后与治疗前基线相比CSF中总tau蛋白的水平来评估。在一些实施例中，基于一种或多种功效测量继续或中止治疗。在一些实施例中，使用ELISA测定测量总tau。在一些实施例中，ELISA测定是Innotetest hTAU Ag和磷酸-tau(181P)ELISA测定。在一些实施例中，使用ELISA测定测量pT181 tau。在一些实施例中，ELISA测定是Innotetest hTAU Ag和磷酸-tau(181P)ELISA测定。在一些实施例中，使用ELISA测定测量pT217 tau。在一些实施例中，ELISA测定是数字ELISA测定。
在一些实施例中，如果CSF中的总tau蛋白浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比降低或保持不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果CSF中的总tau蛋白浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比增加不超过10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果CSF中的总tau(t-tau)蛋白浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，则治疗是有效的。在一些实施例中，治疗功效通过治疗开始后与治疗前基线相比CSF中苏氨酸181处磷酸化的tau蛋白(pT181 tau)的水平来评估。在一些实施例中，如果CSF中的pT181tau浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比降低或保持不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果CSF中的pT181 tau浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比增加不超过10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果CSF中的pT181 tau浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，则治疗是有效的。在一些实施例中，治疗功效通过治疗开始后与治疗前基线相比CSF中苏氨酸217处磷酸化的tau蛋白(pT217 tau)的水平来评估。在一些实施例中，如果CSF中的pT217 tau浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比降低或保持不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果CSF中的pT217 tau浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比增加不超过10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果CSF中的pT217 tau浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比减少至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，则治疗是有效的。在一些实施例中，pT217 tau的浓度如WO 2019/186276 A2(其内容通过引用以其整体并入)中所述测量。
在一些实施例中，治疗功效通过治疗开始后与治疗前基线相比CSF中Aβ42肽水平来评估。在一些实施例中，如果CSF中的Aβ42浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比保持不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果CSF中的Aβ42浓度在治疗开始后与治疗前的基线相比变化不超过10％、20％、30％、40％或50％，则治疗是有效的。在一些实施例中，治疗功效通过治疗开始后与治疗前基线相比CSF中Aβ42:Aβ40的比率评估。在一些实施例中，如果CSF中的Aβ42:Aβ40的比率在治疗开始后与治疗前的基线相比保持不变，则治疗是有效的。在一些实施例中，如果CSF中的Aβ42:Aβ40的比率在治疗开始后与治疗前的基线相比变化不超过10％、20％、30％、40％或50％，则治疗是有效的。在一些实施例中，治疗功效通过与治疗前基线相比，治疗后4周、8周、12周、16周、20周、24周、3个月、6个月、9个月、12个月、15个月、18个月、21个月或24个月时CSF中总tau蛋白、病理性tau蛋白、Aβ42肽、Aβ40肽和/或Aβ42:Aβ40比率中的一种或多种的水平来评估。在一些实施例中，如果通过本文所述的方法和标准认为治疗有效，则继续治疗，例如向患者施用至少一个剂量、两个剂量或更多个另外剂量的包含免疫原性肽的组合物。在一些实施例中，如果本文所述的方法和标准认为治疗有效，则治疗无限期地继续。在一些实施例中，使用ELISA测定测量Aβ40。在一些实施例中，使用ELISA测定测量Aβ42。
患者选择标准
在各种实施例中，用本文披露的一种或多种方法治疗的患者可能正在或之前已经接受过一种或多种其他药物的治疗，例如，在用本文披露的药物组合物治疗之前、期间和/或之后给予。针对认知症状(例如，记忆力减退、混乱以及思维和推理问题)的治疗可能包括但不限于胆碱酯酶抑制剂(Aricept、Exelon、Razadyne)和美金刚(Namenda)。在一些实施例中，在施用本文披露的免疫原性肽之前患者已接受乙酰胆碱酯酶抑制剂(例如Aricept、Exelon、Razadyne)的稳定治疗至少1、2、3、4、5或6个月，例如至少3个月。在一些实施例中，在施用本文披露的免疫原性肽之前患者已接受美金刚(例如，Namenda)的稳定治疗至少1、2、3、4、5或6个月，例如至少3个月。在一些实施例中，在施用本文披露的免疫原性肽之前患者已接受美金刚(例如，Namenda)的稳定剂量方案至少3个月。
还考虑了选择将从此处披露的治疗中受益的患者的方法。在一些实施例中，患者不禁忌进行MRI成像，例如，患者没有MRI不相容的金属内置假体或MRI不相容的支架植入物。在一些实施例中，患者没有梗塞，例如，在一个或多个大的脑血管的范围内，如通过脑MRI检测到的。在一些实施例中，患者不具有多于一个腔隙性梗塞，该腔隙性梗塞被定义为如通过脑MRI检测到的在任何维度上具有小于1.5cm的直径的CSF信号强度的局灶性病变。在一些实施例中，如通过脑MRI检测，患者没有任何腔隙性梗塞，例如在丘脑、任一半球的海马体、左尾状核头部中。Fazekas量表可用于量化脑中白质病变的数量，其中脑区域的病变大小和汇合从0表示无病变到3表示不规则或大汇合区域的病变的分级给出。在一些实施例中，患者没有汇合的半球深部白质病变(Fazekas 3级)，如通过脑MRI检测，例如Fazekas 0、1或2级。在一些实施例中，患者没有影响认知状态的局灶性病变，这些病变源于除AD之外的中枢神经系统疾病，例如当前或急性传染病、占位性病变、正常压力脑积水或脑MRI检测到的与阿尔茨海默病以外的严重中枢神经疾病相关的任何其他异常。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗之前3个月内未经历过手术(在全身麻醉下)。
在一些实施例中，患者目前或过去没有对本文披露的疫苗的一种或多种组分过敏。在一些实施例中，女性患者未怀孕或哺乳。在一些实施例中，患者没有病史和/或当前未患有系统性自身免疫疾病，例如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎(RA)或干燥综合征，或需要免疫抑制或免疫调节疗法的疾病。在一些实施例中，患者在当时或治疗时或将来未接受或预期不接受免疫抑制治疗或免疫调节治疗。在一些实施例中，患者没有近期癌症病史。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗之前少于1个月至10年，例如5年或更短时间未接受癌症(基底细胞癌或上皮内宫颈瘤除外)的特异性治疗。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗之前的零至五年内，例如在两年内，没有发生过心肌梗塞。在一些实施例中，患者未患有经血清学证实的乙型肝炎、丙型肝炎、HIV或梅毒。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗时未患有活动性传染病。在一些实施例中，患者没有免疫缺陷病史。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗时当前没有免疫缺陷。
在一些实施例中，患有除AD之外的另一种全身性疾病的患者可能从本文披露的治疗中获得较少的治疗益处并且可能被排除在治疗之外。例如，患有充血性心力衰竭、高体重指数、糖尿病、肾功能不全或肝病的患者。在一些实施例中，患者未患有可能导致患者状况恶化的另一种临床上重要的全身性疾病。例如，纽约心脏协会功能分类(NYHA)用于根据患者症状的严重程度对患者的心力衰竭进行分类，从1表示没有体力活动限制，2表示体力活动轻微受限，3表示有明显的体力活动受限到4表示不能在无不适的情况下进行任何体力活动。在一些实施例中，患者没有由NYHA定义为2、3或4的控制不佳的充血性心力衰竭。在一些实施例中，患者没有由NYHA定义为大于或等于3，即3或4的控制不佳的充血性心力衰竭。在一些实施例中，患者的体重指数(BMI)不大于48、46、44、42、40、38、36、34或32。在一些实施例中，患者的体重指数(BMI)不大于40。在一些实施例中，患者没有如血液中糖化血红蛋白(HbA1c)水平大于6.0％、6.5％、7.0％、7.5％、8.0％、8.5％、9.0％、9.5％、10.0％、10.5％、11.0％、11.5％、12.0％、12.5％、13.0％、13.5％或14.0％所定义的控制不佳的糖尿病。在一些实施例中，患者没有如血液中糖化血红蛋白(HbA1c)水平大于7.5％所定义的控制不佳的糖尿病。在一些实施例中，患者没有如低于60mL/min、50mL/min、40mL/min、30mL/min、20mL/min或10mL/min的估计肾小球滤过率(eGFR)水平所定义的严重肾功能不全。在一些实施例中，患者没有如小于30mL/min的eGFR水平所定义的严重肾功能不全。在一些实施例中，患者没有如女性中大于50U/L、55U/L、60U/L、65U/L、70U/L、75U/L或80U/L或男性中大于60U/L、65U/L、70U/L、75U/L、80U/L、85U/L、90U/L、95U/L或100U/L的丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平，以及大于60U/L、65U/L、70U/L、75U/L、80U/L、85U/L、90U/L、95U/L或100U/L的天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平所定义的慢性肝病。在一些实施例中，患者没有如女性中大于66U/L或男性中大于80U/L的ALT水平所定义的慢性肝病。在一些实施例中，患者没有如由大于82U/L的AST水平所定义的慢性肝病。
在一些实施例中，患者不患有由超过4.0mIU/L、4.5mIU/L、5.0mIU/mL、5.5mIU/L、6.0mIU/L、7.0mIU/L、8.0mIU/L、9.0mIU/L或10.0mIU/L的促甲状腺激素(TSH)水平和/或低于1.5ng/dL、1.4ng/dL、1.3ng/dL、1.2ng/dL、1.1ng/dL、1.0ng/dL、0.9ng/dL、0.8ng/dL、0.7ng/dL、0.6ng/dL、0.5ng/dL或0.4ng/dL的甲状腺素(FT4)水平所定义的甲状腺功能减退症。在一些实施例中，患者不患有由超过5.0mIU/mL的TSH水平和/或低于0.7ng/dL的FT4水平所定义的甲状腺功能减退症。
在一些实施例中，患者没有诊断出严重的精神疾病，例如精神分裂症、任何类型的精神病性障碍或双相情感障碍。在一些实施例中，患者不具有由大于或等于6的老年抑郁量表(GDS)定义的当前抑郁发作。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗之前一年内没有重度抑郁发作。在一些实施例中，患者没有因一般性医疗病症的代谢性或中毒性脑病或痴呆。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗之前的两年内没有酒精或药物滥用或依赖史。在一些实施例中，患者没有韦尼克脑病。在一些实施例中，患者没有除AD以外任何可能导致痴呆的CNS障碍的病史或证据(例如，感染性或炎性/脱髓鞘性CNS障碍、克雅氏病、帕金森病、亨廷顿病、脑肿瘤、硬膜下血肿)。在一些实施例中，患者没有脑血管疾病(缺血性或出血性中风)病史，或没有诊断为有可能的、很可能的或确定的血管性痴呆。在一些实施例中，患者没有癫痫病史或目前的诊断。在一些实施例中，患者未正在接受包括静脉内免疫球蛋白(IVIg)在内的实验性免疫治疗剂的治疗。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗之前的6个月、5个月、4个月、3个月、2个月或1个月内未接受过用包括IVIg的实验性免疫治疗剂的治疗。在一些实施例中，患者在本文所披露的治疗之前的3个月内未接受过包括IVIg在内的实验性免疫治疗剂的治疗。在一些实施例中，患者未正在接受针对AD的旨在改善疾病的实验性疗法的治疗。在一些实施例中，患者在本文披露的治疗之前的3个月内未接受过针对AD的旨在改善疾病的实验性疗法的治疗。在一些实施例中，患者未正在接受任何针对AD的活性疫苗的治疗。在一些实施例中，患者未接受过任何针对AD的活性疫苗的治疗。在一些实施例中，患者未正在接受免疫抑制药物治疗。在一些实施例中，患者没有由低于250pg/mL、240pg/mL、230pg/mL、220pg/mL、210pg/mL、200pg/mL、190pg/mL、180pg/mL、170pg/mL、160pg/mL或150pg/m的血清维生素B12水平定义的维生素B12缺乏症。在一些实施例中，患者没有由低于191pg/mL的血清维生素B12水平定义的维生素B12缺乏症。在一些实施例中，在本文披露的治疗之前的90天、60天、30天、15天或10天，患者没有改变他/她的先前或当前的由于伴随疾病使用的药物的剂量。在一些实施例中，在本文披露的治疗之前的30天，患者没有改变他/她的先前或当前的由于伴随疾病使用的药物的剂量。
在一些实施例中，患者没有(a)MRI发现与AD的诊断不一致，(b)除了AD之外的任何可导致或显著促成痴呆症状的神经系统疾病，和(c)任何系统性自身免疫性疾病例如系统性红斑狼疮。
治疗耐受性评估
在一些实施例中，测量本文披露的治疗的耐受性，例如以确定是否继续治疗和/或选择合适的剂量。耐受性可以指患者可以耐受药物明显不良反应的程度。患者对治疗方法的耐受性可以在治疗前后使用各种认知技能测试来确定，例如通过MRI进行的脑扫描、身体检查、神经系统检查。在一些实施例中，治疗的耐受性通过患者的在治疗前后测量的生命体征来评估。当治疗后测试参数与治疗前基线相比的绝对或相对变化不超过预定范围时，可以确定治疗方法是耐受的。
在一些实施例中，治疗的耐受性通过患者的在治疗之前和之后测量的心电图(ECG)来评估。在一些实施例中，如果患者的ECG，例如，速率、节律、间隔或波形态在治疗后与治疗前的基线相比没有变化，则确定治疗是耐受的。在一些实施例中，如果与治疗前的基线相比，治疗后患者的ECG未显示局部缺血或梗塞的迹象，则确定治疗是耐受的。在一些实施例中，治疗的耐受性通过患者的在治疗前后测量的实验室测量来评估。在一些实施例中，治疗的耐受性通过在治疗前后测量的患者脑MRI扫描来评估。在一些实施例中，如果患者的MRI在治疗后与治疗前的基线相比没有变化，则确定治疗是耐受的。在一些实施例中，治疗的耐受性通过与治疗前的基线相比治疗后脑区的萎缩没有变化来指示。在一些实施例中，治疗的耐受性通过与治疗前的基线相比治疗后不存在微出血、腔隙、表面含铁血黄素沉积或白质病损或高信号来指示。
在一些实施例中，治疗的耐受性通过在治疗之前和之后测量的患者的身体和/或神经学检查来评估。哥伦比亚-自杀严重程度评定量表(C-SSRS)是一种常用的自杀意念和行为评估方法，其中询问六个问题，以确定患者在过去一个月内是否经历过与自杀有关的多种想法或感受，以及在他/她的生活中和过去3个月中的行为，例如，自杀念头的数量和采取行动的意图。肯定回答的数量可能与自杀风险相关。在一些实施例中，治疗的耐受性通过治疗前后测量的C-SSRS来评估。在一些实施例中，如果治疗后C-SSRS上肯定响应的数量与基线相比没有变化，则确定治疗是耐受的。在一些实施例中，如果治疗后C-SSRS的肯定响应的数量与基线相比增加不超过1、不超过2、不超过3或不超过4，则确定治疗是耐受的。在一些实施例中，如果治疗后C-SSRS上肯定响应的数量少于五、少于四、少于三、少于二或少于一，则确定治疗是耐受的。在一些实施例中，治疗的耐受性通过回顾患者的患者日记将治疗之前和之后进行比较来评估。在一些实施例中，如果本文所述的方法和标准认为治疗是可耐受的，则继续治疗。在一些实施例中，如果本文所述的方法和标准认为治疗不能耐受，则继续治疗但减少施用的剂量。
通过以下实施例进一步说明本披露，不应将所述实施例视为限制。出于所有目的，在本申请中引用的所有参考文献、专利和公开的专利申请的内容以及附图通过引用以其整体并入本文。
实例
实例1：临床试验
进行了一项为期24个月的随机、安慰剂对照、双盲、多中心2期研究，评估40μg合成肽经过两年的治疗的安全性和有效性，该合成肽衍生自tau序列的第294至305位氨基酸，与钥孔戚血蓝蛋白(AADvac1)偶联。
方法：患者纳入标准
1.根据修订的NIA-AA标准(McKhann 2011)，患者诊断为很可能的阿尔茨海默病。
2.患者在筛选就诊时的MMSE总得分≥20且≤26。
3.患者在筛选就诊时的脑MRI发现与阿尔茨海默病的诊断一致。
4.患者在筛选就诊时有AD病理生理过程的证据，定义为以下一项或两项：
a.具有在脑MRI上评估的并且根据≥2的Scheltens得分(在更萎缩的一侧以0-4的等级评定)的内侧颞叶萎缩
b.CSF中的阳性AD生物标志物特征(总tau蛋白>400pg/mL和pT181 tau蛋白>60pg/mL和Aβ42<600pg/mL和Aβ42:Aβ40比率<0.089)
5.患者已完成6年的正规基础教育。
6.患者在筛选就诊时年龄在50-85岁之间。
7.患者流利使用当地语言，并具备足够的听觉和视觉能力，可以进行神经心理学测试。
8.患者能够阅读和理解知情同意书。
9.患者在筛选就诊前至少3个月接受乙酰胆碱酯酶抑制剂的稳定治疗。
10.如果患者正在接受美金刚治疗，则剂量方案必须在筛选就诊前至少3个月稳定。
11.患者在筛选就诊时的Hachinski缺血量表得分≤4。
12.提供有护理人员，其足够了解患者并能够陪同患者进行研究就诊并在需要时参与患者的研究评估。
13.女性患者只有在手术绝育或绝经后至少2年才有资格参加研究。
14.男性患者必须是手术绝育，或者他和他有生育能力的女性配偶/伴侣必须从筛选就诊开始使用高效避孕措施(包括两种生育控制方式(其中一种必须是屏障方法))并且在整个研究期间继续。
15.患者提供书面知情同意书。
方法：患者排除标准
1.怀孕或哺乳的女性患者。
2.患者在筛选就诊前3个月内参加了另一项临床研究。
3.预计患者不会完成临床研究。
4.患者目前或过去已知对疫苗成分过敏，如果研究者认为这是相关的。
5.患者已知有MRI成像的禁忌症，例如MRI不相容的金属内置假体或MRI不相容的支架植入或由研究者判断其他情况。
6.脑MRI检测到以下任何一项：
a)大血管区域内的梗塞；
b)多于一个腔隙性梗塞，该腔隙性梗塞被定义为在任何维度上具有小于1.5cm的直径的CSF信号强度的局灶性病变；
c)策略上重要位置(例如丘脑、任一半球的海马体、左尾状核头部)的任何腔隙性梗塞。
d)汇合的半球深部白质病变(Fazekas 3级)；或
e)其他可能导致患者认知状态的局灶性病变，例如传染病、占位性病变、正常压力脑积水或与阿尔茨海默病以外的有意义的中枢神经疾病相关的任何其他异常。
7.患者在筛选前3个月内接受了手术(全身麻醉)和/或在整个研究期间安排了手术(全身麻醉)。
8.患者具有有临床意义的自身免疫性疾病的病史和/或目前患有有临床意义的自身免疫性疾病，或预计目前或将来会接受免疫抑制或免疫调节治疗。
9.患者近期有癌症病史(最后一次特定治疗≤筛选前5年)(例外：基底细胞癌、上皮内宫颈瘤)。
10.患者在筛选就诊前的最近2年内患有心肌梗塞。
11.患者患有经血清学证实的乙型肝炎、丙型肝炎、HIV或梅毒。
12.患者患有活动性传染病。
13.存在免疫缺陷和/或有免疫缺陷病史。
14.患者目前患有临床上重要的全身性疾病，其可能导致患者病情恶化或在研究期间影响患者安全：
*控制不佳的充血性心力衰竭(NYHA≥3)
*BMI>40
*控制不佳的糖尿病(HbA1c>7.5％)
*严重肾功能不全(eGFR<30mL/min)
*慢性肝病-ALT(丙氨酸氨基转移酶)>66U/L(女性)或>80U/L(男性)，AST(天冬氨酸氨基转移酶)>82U/L
*其他有临床意义的全身性疾病，如果研究者认为这是相关的
15.患者患有甲状腺功能减退症，定义为TSH(促甲状腺激素)升高>5.0mIU/mL，和/或FT4水平<0.7ng/dL。经矫正的甲状腺功能减退症患者有资格参加研究，前提是在进入研究前治疗已稳定3个月。
16.患者具有有效诊断的严重的精神疾病，例如精神分裂症、任何类型的精神病性障碍或双相情感障碍。
17.患者当前具有抑郁发作(第01次就诊时老年抑郁量表GDS≥6)或在过去1年内有重度抑郁发作。
18.患者因一般性医疗病症而患有代谢性或中毒性脑病或痴呆。
19.患者在过去2年内有酒精或药物滥用或依赖史。
20.患者患有韦尼克脑病。
21.患者有除AD以外任何可能导致痴呆的CNS障碍的病史或证据(例如，感染性或炎性/脱髓鞘性CNS障碍、克雅氏病、帕金森病、亨廷顿病、脑肿瘤、硬膜下血肿)。
22.患者有脑血管疾病(缺血性或出血性中风)证据的病史，或诊断为有可能的、很可能的或确定的血管性痴呆。
23.患者有癫痫病史或存在癫痫诊断。
24.患者目前正在接受和/或在筛选就诊前3个月内接受了包括IVIG在内的实验性免疫治疗。
25.患者目前正在接受和/或在筛选就诊前3个月内接受了旨在改善疾病的AD实验性疗法。
26.患者目前正在接受或过去接受了任何AD活性疫苗的治疗。
27.患者目前正在接受免疫抑制药物治疗。
28.根据筛选就诊前最后30天内的病史，患者因伴随疾病而导致服用的先前和当前药物的剂量变化，如果认为这是与临床相关的。
29.患者缺乏维生素B12(血清维生素B12<191pg/mL)。
方法：方案
临床试验按照表5所示的计划进行。
表5：研究计划
结果：
在筛选就诊时选择患者并进行基线测试。选择的患者年龄在50至85岁之间，其服用稳定剂量的乙酰胆碱酯酶抑制剂(最终服用美金刚)。患者在筛选就诊时的MMSE得分在20到26之间，根据McKhann等人,Alzheimer’s&Dementia[阿尔茨海默病和痴呆症],(2011)7:263-269中列出的NIAA-AA诊断标准定义而诊断为阿尔茨海默病。
总共选择了117名患者接受AADvac1治疗，同时选择了79名患者接受安慰剂治疗。其中，100名接受AADvac1治疗的患者和63名接受安慰剂治疗的患者完成了临床研究。患者人口统计学特征如表6所示。
表6：患者资料
在基线时，患者群体具有如表7-12中所示的特征。
表7：患者群体的基线人口统计学特征
表8：患者群体的基线疾病特征
表9：患者资料
表10：患者群体的ApoE4状态(FAS)
表11A和11B：按年龄亚组(50-67和68-85)(FAS)的患者群体的基线人口统计学特征
表11A
表11B
*LHVN：归一化的左海马体体积
*RHVN：归一化的右海马体体积
表12A和12B：按年龄亚组(50-70和71-85)(FAS)的患者群体的基线人口统计学特征
表12A
表12B
实例2：临床试验-认知测试
根据表5中所示的研究计划进行认知测试。认知测试包括临床痴呆评定量表记录总和(CDR-SB)测试、阿尔茨海默病合作研究轻度认知障碍日常生活活动(ADCS-MCI-ADL)问卷、简易精神状态检查(MMSE)和定制认知成套测验，该定制认知成套测验包括Cogstate国际购物清单任务、Cogstate一卡学习和一卡返任务、字母流利度测试和类别流利度测试和数字符号编码测试。
在筛选就诊时测量的患者群体中的总MMSE得分的分布显示在图1中。在治疗过程中跟踪每位患者的总得分。例如，图2显示了从V01到V05的12周时间跨度内每位患者的总MMSE。
通过从基线到第104周CDR-SB得分、ADCS-MCI-ADL得分或MMSE得分的平均变化来评估治疗的功效。也通过定制认知成套测验的标准(综合z得分)从基线到第104周的平均变化来评估治疗的功效。
基线CDR-SB得分、ADCS-MCI-ADL得分和MMSE得分以及其他患者人口统计学信息在表13A中提供。
表13A：患者人口统计学和基线数据
第104周时患者的认知测试与基线相比的结果显示在表13B和13C中。
表13B：第104周时从基线的变化的混合模型重复测量(MMRM)分析
ANCOVA还用于评估两个治疗组之间从基线到第104周的平均变化方面的差异。ANCOVA模拟了从基线到第104周的变化，包括治疗组、汇总国家、性别、年龄、教育年限、ApoE4状态、基线MRI海马体体积和基线CDR-SB的项。对于除CDR-SB以外的终点，给定评估的基线值作为ANCOVA项包括在内。从这个ANCOVA模型中，LS平均治疗差异(AADvac1-安慰剂)与治疗效果的95％CI和双侧p值一起呈现。LS平均值是在连续协变量(年龄、教育年限、基线MRI海马体体积、基线CDR-SB)的平均水平上估计的，其中对分类协变量(性别、汇总国家、ApoE4)进行加权，使其与基线时FAS中每个水平的受试者数量成比例。这些协变量调整时间(就诊)和治疗相互作用的每个水平的平均值。结果显示在表13C中。
表13C：第104周时从基线的变化的ANCOVA分析
患者的CDR-SB得分结果可按亚组进一步分析，如表14中所示。
表14：第104周时的CDR-SB得分(按亚组)
类似地，图3-6显示了不同年龄亚组患者CDR-SB得分随着治疗进展的变化。
ADCS-MCI-ADL得分也在研究过程中进行了评估，如图7-8所示。
实例3：抗体应答
根据表5中所示的研究计划进行用于测试抗体应答的血液采集。通过间接和定量ELISA分析患者血浆中的抗体滴度。
方法：通过间接ELISA测定人抗体滴度
使用连续稀释的血浆样品和间接ELISA测定疫苗诱导的抗体的滴度。AADvac1以5μg/ml的终浓度固定在微量滴定板(高结合条板，格雷纳生物一号公司(Greiner Bio One)，弗里肯豪森(Frickenhausen)，德国)上，KLH以2.5μg/ml的终浓度固定，并在37℃孵育2小时。在25℃用PBS-0.05％Tween 20封闭1小时后，将铺板样品与患者的系列稀释血清样品在4℃孵育过夜。洗涤后，通过与辣根过氧化物酶(赛默飞世尔科技公司(ThermoScientific)，皮尔斯(Pierce)，罗克福德(Rockford)，伊利诺伊州，美国)缀合的抗人免疫球蛋白(IgG和IgM)检测结合的抗体。用显色底物TMB One(KEM-EN-TEC诊断公司(KEM-EN-TEC Diagnostic)，塔斯楚普(Taastrup)，丹麦)检测结合的二抗的量。将得到的信号与在基线收集的患者血清中获得的信号进行比较。血清中抗体的滴度是通过测量最高稀释度来确定的，在该稀释度处，450nm处的吸光度至少是同等稀释的免疫前血清样品吸光度的两倍。为了确保测定的一致性和质量，质量对照样品在所有板上都使用了两种浓度的单克隆抗体DC8E8(AX004)的人源化版本。
结果：AADvac1刺激IgG和IgM的产生
曲线下面积反映了患者在给定时间跨度内产生的积累抗体量。如图9A和9B所示，用6个初始剂量和5个加强剂的40μg AADvac1对患者进行接种刺激了针对肽的IgG和IgM的产生。类似地，在AADvac1治疗的患者的血浆中也检测到高滴度的抗KLH抗体(图10)。
此外，如图11所示，抗AADvac1 IgG和IgM以及抗KLH抗体滴度随各个剂量而增加(初始给药方案为六个剂量，每月一个)并对加强剂(五个加强剂，每三个月一个)有应答。如表15所示，在最初的初始6个剂量接种方案后，高达96.5％的治疗患者会产生IgG应答。总体而言，约98.2％的接受治疗的患者产生了IgG应答。
表15：随着时间的推移对接种方案的应答
方法：用于测定人血清中对肽108特异的抗体的定量ELISA
使用定量ELISA确定对免疫原性肽108特异的人抗体的量。免疫原性肽108以5μg/ml的终浓度固定在微量滴定板(高结合条板，格雷纳生物一号公司(Greiner Bio One)，弗里肯豪森(Frickenhausen)，德国)上并在37℃孵育2小时。单克隆抗体DC8E8(AX004)标准品的人源化版本在标准品稀释剂(正常人血清(IPLA-SER，创新研究公司(InnovativeResearch,Inc.))中稀释，在PBS-0.05％Tween 20、5％BSA和1％酪蛋白中稀释2000x)连续2,3倍稀释，从50pg/ml开始，然后是21.74；9.452；4.109；1.787；0.777；0.338和0.147ng/ml。然后，在25℃用PBS-0.05％Tween20封闭1小时后，将50μl/孔的各稀释度的标准品、血清样品(在样品稀释剂(PBS-0.05％Tween20、5％BSA和1％酪蛋白)中稀释2000x)、阴性对照(标准品稀释剂)和空白(样品稀释剂)添加到肽固定板中，并在4℃孵育过夜。洗涤后，使用显色底物TMB One(KEM-EN-TEC诊断公司，塔斯楚普，丹麦)用与辣根过氧化物酶(赛默飞世尔科技公司，皮尔斯，罗克福德，伊利诺伊州，美国)缀合的抗人免疫球蛋白(IgG，IgM)检测结合的抗体。然后，通过Graphpad Prism软件对结果进行分析。
方法：人血清中对tau 151-391特异的抗体的定量测定
使用荧光tau珠法测定对tau 151-391/4R特异的抗体的量。将标准品在标准品稀释剂(正常人血清(IPLA-SER，创新研究公司)中稀释，在PBS-0.05％Tween 20、5％BSA和1％酪蛋白中稀释500x)连续3倍稀释，从80ng/ml开始，然后是26.6；8.88；2.96；0.98；0.32；0.109和0.036ng/ml。接下来，将标准品、血清样品(在样品稀释剂(PBS-0.05％Tween 20、5％BSA和1％酪蛋白)中稀释1000x)、阴性对照(标准品稀释剂)和空白(样品稀释剂)的各稀释度的50μl/孔应用于Bio-Plex板。然后，将0.5μl/孔的tau偶联磁珠(MagPlex-c-Microspheres 026，伯乐公司(Bio-Rad)，MC10026-01)添加到Bio-Plex板的每个样品中，并在摇床(Titramax 100，过夜/4℃，950rpm)上混合在4℃孵育过夜。洗涤后，将板与二抗IgG/PE(在PBS-T中稀释2000x，西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))在室温孵育1小时，同时在摇床上混合(赛默飞实验室系统公司(Thermo Labsystem)，最大速度)。然后，使用Bio-Plex Manager 6.1软件在BioPlex 200阅读器上进行结果分析。
结果：定量ELISA确认特异性抗体的量
如图12所示，定量ELISA证实40μg AADvac1刺激了针对tau151-394和AADvac1的抗体的产生。
此外，如在图13和14所示，当按年龄组分析结果时，较年轻的亚组(50-70岁)显示出比较年老亚组更高的抗体应答。将较年轻患者(≤67岁)与较年老患者(≥68岁)进行比较时，这种效果更为明显，如图15所示。具体而言，观察到较年轻亚组的IgG滴度曲线下面积(AUC)值高于较年老亚组两倍。AUC的计算如下进行：对于每个受试者，每次就诊计算从基线的滴度曲线下面积(AUC)。如下使用梯形规则计算滴度的AUC：令A0、A4、A8、...、A104表示上述每个时间点的滴度测量值(即每次就诊；A0是在基线测量的值，A4是在第4周测量的值，A8是在第8周，...，A104是在第104周测量的值)和T0，T4，T8，...，T104是相应的时间点(以研究日为单位测量的实际时间)；AUC0-104如下计算：AUC0-104＝[(A0+A4)×(T4-T0)+(A4+A8)×(T8-T4)+…+(A92+A104)×(T104-T92)]/2，即基线和表示为j的就诊之间的AUC(其中i表示上次就诊)如下计算：AUC0-j＝[(A0+A4)×(T4-T0)+…+(Ai+Aj)×(Tj-T i)]/2。直到相关就诊的可用时间点的所有值都用于计算该就诊的AUC。如果在某个时间点(0和j之间)缺少值，则使用下一个可用值和时间点，只要该时间点发生在计算AUC的就诊之前(即就诊j之前)。如果缺少基线样品，则不会得出AUC。如果在时间点j缺少值，则不计算该时间点的AUC。
实例4：阿尔茨海默病的生物标志物
根据表5所示的研究计划收集用于测试生物标志物的血液和脑脊液。根据下述方法测量pT217、pT181、神经丝轻(NfL)和总tau的水平。
总共有60名患者在至少一次研究就诊期间提供了CSF样品；其中27个提供了基线样品和研究结束样品。
方法：脑脊液中总tau和pT181 tau的测定
根据制造商的说明，分别使用Innotest hTAU Ag和phospho-tau(181P)ELISA测定试剂盒进行脑脊液中总tau和pT181 tau的测量。
方法：通过pT217数字ELISA测定法脑脊液中的pT217 tau的测定
使用Simoa HD1分析仪(Quanterix公司)建立了高灵敏度形式的数字ELISA。用于数字ELISA的试剂是根据Quanterix Homebrew测定开发指南(Quanterix Homebrew AssayDevelopment Guide)制备的，详细信息如下。DC2E7抗体用作捕获抗体，DC2E2抗体用作检测抗体。DC2E7以0.5mg/ml的浓度与磁珠(Quanterix)偶联。通过DC2E2的生物素化制备检测抗体，其中使用了超过抗体浓度120倍过量的生物素EZ-Link NHS-PEG4-生物素(赛默飞世尔科技公司，#21329)。DC2E7校准品(携带DC2E7和DC2E2表位的合成肽)在校准品稀释剂(20mM磷酸钠pH 7.4、137mM NaCl、2.7mM KCl、2％BSA)中从20pg/ml开始以连续1.6倍稀释度稀释，以产生2000、1250、781.25、488.28、305.18、190.73、119.21、74.5和0pg/ml的校准物。制备的校准物浓度以3:1的比例与含有异嗜性阻断剂的样品稀释剂(80mM磷酸钠pH 7.4、548mM NaCl、10.8mM KCl、0.04％酪蛋白和0.4％Tween 20)混合。以与所述相同的方式用样品稀释剂稀释来自对照个体的CSF样品。使用1200、700、200和0pg/ml DC2E7校准品加标CSF进行CSF样品加标回收。将稀释的校准品和样品移液到96孔板中，然后插入Simoa HD1分析仪。具体来说，在珠稀释剂中稀释的捕获抗体DC2E7珠、在检测抗体稀释剂中稀释至4μg/ml的检测抗体DC2E2、在SbG稀释剂中稀释至150nM的链霉亲和素β-半乳糖苷酶(SbG)和底物试卤灵-β-D-吡喃半乳糖苷(RGP)全部插入分析仪(所有缓冲液、SBG和RGP均来自Quanterix公司)。该测定被编程到Simoa 1.5软件中并进行分析。分析后评估由Graphpad Prism和/或Simoa 1.5软件中包含的软件完成。
结果：pT217和pT181免疫测定对阿尔茨海默病具有特异性
如图16所示，与对照组患者以及被诊断患有其他神经系统疾病(例如行为变异性额颞叶痴呆(bvFTD)、原发性进行性失语症的非流利文法变体(nfaPPA)、原发性进行性失语症的语义变体(svPPA)、进行性核上性麻痹(PSP)和皮层基底节变性(CBD))的患者相比，阿尔茨海默病患者的脑脊液中pT217和pT181 tau水平升高。
结果：pT217和pT181显示疾病进展
如图17和18所示，与接受安慰剂治疗的患者相比，接受AADvac1治疗的患者的pT217和pT181 tau(ng/L)水平降低。在pT181 tau呈阳性的患者中，在AADvac1治疗的患者中tau、pT217和pT181 tau的水平降低，如图19所示。
方法：血浆中神经丝轻(NfL)的测定
Simoa
测定法-一种数字免疫测定法(Quanterix公司，马萨诸塞州，美国)，用于测量血样中的神经丝轻。根据制造商的方案进行样品测量。该测定的检测下限为0.038pg/mL，而定量下限为0.174pg/mL。
结果：神经丝轻(NfL)是正在进行的神经变性的生物标志物
NfL在测试的患者群体中的分布如图20所示。在基线时，随后接受AADvac1或安慰剂治疗的患者的血浆NfL水平没有差异。从接受AADvac1治疗的患者收集的血浆中NfL水平相对于基线的变化与疾病进展相关。如表16所示，研究群体中NfL水平相对于基线的变化也与脑体积、脑代谢和认知能力的变化相关。
表16：NfL水平相对于基线的变化与脑添加、脑代谢和认知能力的变化相关
如图21和表17所示，在治疗过程中，用AADvac1治疗减少了血浆中NfL的积累，即，与安慰剂相比，血浆中的NfL积累减少了58％，表明它减缓了神经变性的进展。此外，如表18所示，AADvac1减少了所有患者亚组血浆NfL的积累。为了与分别用AADvac1和安慰剂获得的结果进行比较，健康对照的血浆NfL的预期积累约为14％，而AD患者的预期积累约为24％。参见Mattsson等人,2019。
表17：由于AADvac1治疗导致的NfL水平变化方面的差异
表18：所有患者亚组血浆NfL水平从基线的变化
治疗对NfL水平的影响显示在表19-20和图22-23中。治疗后的NfL水平在不同年龄组之间存在差异。
表19：51-70岁和71-85岁年龄组NfL水平的变化
表20：51-67岁和68-85岁年龄组NfL水平相对于基线的变化
| 年龄 | 治疗组 | n | 中值 | 平均值 | SD | 科恩D |
| 51-67 | AADvac1 | 33 | 1.52 | 1.77 | 5.0148 | -0.8819 |
| 51-67 | 安慰剂 | 12 | 5.55 | 6.48 | 6.1946 | |
| 68-85 | AADvac1 | 67 | 2.39 | 2.26 | 5.8266 | -0.3780 |
| 68-85 | 安慰剂 | 51 | 4.08 | 4.56 | 6.4193 |
方法：CSF中人总tau的测定
根据制造商的说明，使用Innotest hTAU Ag ELISA测定试剂盒测量脑脊液中的总tau。
结果：CSF中的总tau是与AD相关的生物标志物
如图24和表21所示，接受AADvac1治疗的患者CSF中的总tau(ng/L)水平稳定，而接受安慰剂治疗的患者中则升高。
表21：总tau、pT181和pT217的CSF水平从V16到V02的变化
方法：CSF中神经粒蛋白的测定
根据Portelius等人,(2018)Acta Neuropathologica[神经病理学学报],136(3):363-376中详述的方法，通过夹心ELISA进行CSF中神经粒蛋白的检测和测量。简而言之，获得抗神经粒蛋白抗体并包被在板上。在引入CSF样品之前，洗涤板并用牛血清白蛋白(BSA)封闭剩余的结合位点。带有GST标签的重组全长神经粒蛋白用于校准。检测抗体是生物素标记的抗神经粒蛋白抗体，其可用链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶检测。结合通过读板器经由在450nm处的吸光度进行测量。
结果：神经粒蛋白是一种可能表明突触变性的生物标志物
如图25所示，接受AADvac1或安慰剂治疗的患者在V02时CSF中的神经粒蛋白水平相似。然而，在V16时，与接受安慰剂治疗的患者相比，接受AADvac1治疗的患者的神经粒蛋白水平显示出更强的下降。效应量适中(科恩D＝-0.327)并且由于样品量小而没有统计学意义。
治疗后治疗组和安慰剂组之间的Aβ1-42、Aβ1-40水平和Aβ42/Aβ40比率未发现显著差异(图26)。
实例5：用于监测疾病进展的生物成像
进行MRI成像以通过对脑的体积分析来评估治疗的安全性。根据表5所示的时间表进行MRI扫描。
对以下目标区域进行了体积分析：全脑、海马体(左右)和侧脑室。
使用SIENAX 2.6计算整个研究过程中不同时间点的全脑体积以及与基线相比全脑体积的百分比变化。使用FREESURFER 6.0计算纵向配准前后任何时间点的叶体积和区域体积。
扩散张量成像(DTI)是一种磁共振成像技术，其可以量化微观结构组织的变化，这些变化在传统的MRI上是不可见的。脑中水的各向异性扩散通过MRI成像，允许计算各向异性分数(FA)，这量化了局部白质束结构的方向性强度。Baykara等人,(2016)Annals ofNeurology[神经病学年鉴],80(4):581-592。进行了MRI和具有42个扩散方向的标准化DTI扫描。进行了包括涡流校正和脑提取在内的数据预处理。然后，从加权的预处理的扩散和参考扫描执行FA图的逐像素计算并且骨架化。将图配准并读出穹窿，胼胝体的膝部、体部和压部的转换后的FA值。
结果：
患者在基线时表现出广范围的脑萎缩程度，如在第01次就诊时的Scheltens得分范围和左海马体体积中可见(图27A和27B)。虽然海马体萎缩看起来是对称的(图28)，但左海马体体积看起来更小(图29)。患者在基线时还表现出与年龄和疾病相适应的白质病变(WML)和微出血数量，分别如图30和31所示。
在组水平上，AADvac1治疗组和安慰剂治疗组之间在基线时没有差异，如MRI容积测定法所示。在较年老的亚组中，在研究期间，患者在脑的大部分区域表现出较低的海马体体积、更多的白质病变和较低的萎缩速率。在作为ApoE4携带者的患者的亚组中，患者在基线时表现出较低的海马体体积(p＝0.0003)和稍高的海马体萎缩速率(p＝0.01)。
用AADvac1治疗后脑体积的变化如表22所示。整个患者队列的容量测定法结果显示出高度异质性。
表22：
在年轻患者(<71岁)的亚组中，在V16时，与安慰剂治疗的患者相比，观察到AADvac1治疗的患者的体积变化百分比方面的微小差异，如图32所示。
在较年轻年龄组之间进行比较时，这种差异更加明显。例如，在年轻患者亚组(<68岁)中，在V16时，AADvac1治疗的患者与安慰剂治疗的患者相比，在多个目标区域(颞叶、脑室和整个皮层体积)中观察到中到大的差异，如图33-34所示。
扩散张量成像(DTI)提供了患者脑中白质数量的映射。如图35和图46所示，通过DTI在脑的四个不同区域(穹窿，胼胝体的膝部、体/体部和压部)测量的从V01到V16的各向异性分数变化显示AADvac1和安慰剂治疗的患者之间的差异，其中在穹窿(其是起源于海马体的通路)上观察到最明显的差异。这表明与安慰剂治疗的患者相比，AADvac1治疗的患者脑中的白质完整性得以保留。
实例6：通过定量实时PCR人血浆中的微小RNA的测定
将人血浆样品(400μL)在冰上解冻并在4℃以3000x g离心5分钟，以沉淀任何可能形成的沉淀物。将得到的上清液(300μL)吸入干净的1.5mL无RNA酶管(安比恩公司(Ambion)，Cat.AM12450)。根据制造商的建议，使用2μg无RNA酶糖原作为载剂(赛默飞世尔科技公司，Cat.R0551)，使用miRNeasy血清/血浆高级试剂盒(凯杰公司(Qiagen)，Cat.217204)进行RNA提取。用20μL的无RNA酶的水将纯化的RNA洗脱到干净的1.5mL无RNA酶管中，并储存在-80℃。
使用miScript II RT试剂盒(凯杰公司，Cat.No.218161)按照制造商的方案将miRNA逆转录为cDNA，并使用1.6μL RNA洗脱液作为模板。cDNA合成方案如下：37℃60分钟，95℃5分钟，4℃1分钟。通过添加80μL无RNA酶水(凯杰公司，Cat.No.129112)稀释20μL的最终反应，并将稀释的cDNA储存在-80℃直至使用。
使用定量实时PCR(qPCR)方法和miScript SYBR Green PCR试剂盒(凯杰公司，Cat.No.218076)进行miRNA水平的转录组分析。每个20μL PCR反应的组成如下：10μL 2xQuantiTect SYBR Green PCR主混合物、2μL 10x miScript通用引物、4μL 5x miRNA特异性引物、2μL无RNA酶水和2μL稀释的cDNA作为模板。将所有组分移液到光学96孔板(应用生物系统公司(Applied Biosystems)，Cat.No.4306737)并用光学胶膜(应用生物系统公司，Cat.No.4311971)密封。通过脉冲涡旋混合板并在室温以1000x g离心1分钟。qPCR循环方案如下：95℃初始变性15分钟，94℃15秒、55℃30秒和70℃35秒的42个循环。循环方案包括熔解曲线(60℃至90℃，升降温速率(1％)＝0.35℃/30秒。
通过qPCR在研究中分析的miRNA是：
·hsa-let-7a-5p
·hsa-miR-10a-5p
·hsa-miR-145-5p
·hsa-miR-103a-3p
·hsa-miR-191-5p
·hsa-miR-374a-5p
·hsa-miR-26a-5p
·hsa-miR-107
·hsa-miR-15a-5p
·hsa-miR-126-3p
·hsa-miR-224-5p
·hsa-miR-18a-5p
·hsa-miR-23a-3p
·hsa-miR-26b-5p
·hsa-miR-21-5p
使用相对定量方法进行miRNA表达水平的评估，其中dCT和2^(-dCT)值使用作为内部校准对照的单个样品的所有miRNA的平均循环阈值(CT)平均值来计算。结果值代表血浆样品中靶miRNA的相对表达。
结果：
评估AD患者中特定miRNA的水平，并与有抑郁症状但pTau水平低的对照患者进行比较。如图36所示，AD患者中的hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p和hsa-miR-21-5p与对照相比不同。
在整个研究过程中还测量了AD患者中特定miRNA的水平，并将接受AADvac1治疗的患者的水平与接受安慰剂治疗的患者的水平进行比较。如图37所示，与安慰剂组相比，治疗组中hsa-let-7a-5p和hsa-miR-15a-5p的水平降低，而与安慰剂组相比，治疗组中hsa-miR-23a-3p和hsa-miR-191-5p的水平增加。
实例7：血浆和脑脊液中代谢物的测定
定量液相色谱-质谱(LC-MS/MS)代谢组学分析通过将直接注射质谱与反相LC-MS/MS(AbsoluteIDQ p180 Kit；生物生命科学公司(Biocrates Life Sciences)，澳大利亚)相组合来进行。样品制备和测量根据制造商的方案进行，并在文献中进行了详细描述，例如Wang-Sattler等人,PLoS ONE[公共科学图书馆综合],(2008)3(12):e3863。
实例8：血浆中硫醇的测定
根据Forgacsova等人,(2019)Journal of Pharmaceutical and BiomedicalAnalysis[医药与生物医学分析杂志]164(2019)442-451对半胱氨酸、同型半胱氨酸、半胱氨酰甘氨酸和谷胱甘肽进行定量LC-MS/MS分析。简而言之，通过将血浆与密理博水(Millipore Water)、内标溶液和10μl TCEP(10g/l)混合来制备样品。所得混合物在室温保持30分钟。添加25μL三氯乙酸(2mol/l)沉淀蛋白质。立即将带有沉淀物的加盖试管涡旋并以30000x g离心10分钟。然后，将磷酸氢二钾(0.5mol/l)添加到上清液中，并在室温用N-苯基马来酰亚胺(ACN中20mmol/l)衍生样品。10分钟后，将样品稀释并加载到预调节的固相萃取(SPE)柱(OASIS HLB 30mg，沃特斯公司(Waters)，布拉格，捷克共和国)上。洗脱液在Savant SpeedVac(赛默飞世尔科技公司,沃尔瑟姆,美国)中干燥2小时。干燥的样品在80％乙腈中复溶。将试管涡旋、离心，将上清液转移到样品瓶中并通过UHPLC-MS/MS进行分析。
实例9：脑脊液中肽的测定
将乙腈添加到500μL人CSF(20％最终v/v)中，并将样品在4℃离心10分钟(20,000×g)。然后根据制造商的说明将CSF样品离心通过MWCO过滤器(10kDa)。所有步骤均在冰上进行，无需添加蛋白酶抑制剂。使用SpeedVac浓缩器(Pragolab公司，布拉迪斯拉发(Bratislava)，斯洛伐克)干燥含有肽级分的滤液，然后在-80℃储存直至分析。使用Acquity M级UHPLC(沃特斯公司)使用nanoEase HSS T3 C18分析柱(250mm长，75μm直径，1.8μm粒径)分离肽。为了彻底分离，以300nL/min的流速应用具有0.1％甲酸的5％-90％乙腈的120分钟梯度。柱出口连接到PicoTip发射器(外径360μm，内径20μm，尖端直径10μm)，样品通过纳米喷雾(3.1kV毛细管电压)进入具有离子迁移的四极杆飞行时间质谱仪SynaptG2-Si(沃特斯公司)。在高分辨率DDA模式下以数据依赖性方式记录光谱。检测到50-2000m/z的离子，其中光谱采集扫描速率MS中为0.2秒，MS/MS中为0.1秒。外部质量校准物Glu1-血纤维蛋白肽B(100fmol/mL)通过参考线以500nL/min的流速注入并用于质量校正。数据在Progenesis QI(沃特斯公司)中处理。
实例10：通过表面等离子共振(SPR)测定人血清抗体对tau 151-391 4R的亲和力
分离与错乱tau反应的血清抗体：
根据制造商的说明，通过过夜孵育，用高度纯化的重组人乱序tau蛋白(tau151-391/4R)包被甲苯磺酰剂活化磁珠(Dynabeads)。将制备的tau珠与患者血清的等分试样在冰上孵育一小时，在冰上洗涤，并通过在低pH值洗脱将与珠结合的所有免疫球蛋白类别的抗tau抗体洗掉。洗脱的亲和分离抗体池立即被中和并储存在-20℃。
SPR生物芯片的制备：
CM-5传感器芯片和BIACORE3000仪器(通用健康医疗集团(GE Healthcare))用于分析。将传感器芯片清洗并根据制造商的说明使用氨基反应性固定化学方法用亲和纯化的抗人免疫球蛋白IgG Fc片段多克隆抗体(Merck)包被。
SPR动力学分析：
在初始步骤中，将10-20倍稀释的亲和分离的抗体池应用在预包被有抗IgG多克隆抗体的生物传感器表面上。因此，仅捕获IgG类抗体以进行进一步的亲和力分析。随后，引入了50nM重组人错乱tau蛋白(tau151-391/4R)溶液，并实时监测结合和解离。为了在测定中记录背景信号，在其他相同条件下注射缓冲液而不是tau。所有分析一式两份进行。生物传感器表面的再生通过注射100mM HCl 10秒进行。作为系统和整个测定的质量对照，进行人源化DC8E8抗体的注射，并记录tau蛋白结合传感图的形状和水平。评估了注射与注射之间和运行与运行之间的可重复性。
动力学传感图的评估：
tau的结合动力学通过Myszka,(1999)J.Mol.Recognit.[分子识别杂志],12:279-284中所述的双重参考方法进行校正。校正后的曲线拟合如在BIAevaluation软件v.4.1.1(通用健康医疗集团)中实施的异质配体(平行反应)结合模型，该模型假设患者血清中存在两个抗体池。拟合参数设置如下：ka1全局拟合，初始值＝5x106M-1s-1；kd1全局拟合，初始值＝0.001s-1；ka2全局拟合，初始值＝1x106M-1s-1；kd2全局拟合，初始值＝0.01s-1；RI＝0RU常数值；Rmax1，Rmax2全局拟合，软件提出的初始值。两个抗体池的平衡结合常数(亲和力，KA)直接在Biaevaluation软件中从动力学速率常数计算。各个抗体池的分数p1、p2由Rmax值计算：
p1＝Rmax1/(Rmax1+Rmax2)
p2＝Rmax2/(Rmax1+Rmax2)＝1-p1
功能性亲和力的计算：
血清中功能性抗体亲和力的无量纲值是使用通过定量ELISA确定的血清中抗体浓度(以μg/ml为单位)计算的，c：
功能性亲和力＝c*(p1*KA1+p2*KA2)/1 000 000
使用GraphPad Prism v.6绘制获得的值。
实例11：2期临床试验的进一步结果和分析。
该实例提供来自例如实例1中描述的2期临床试验的进一步结果和分析。
两年研究期间的低退出率：
该临床研究在24个月内的退出率较低，尤其是在AADvac1组中。具体而言，AADvac1组的退出率为14.5％，安慰剂组为20.3％。
异质性研究样品：
在60名患者中分析了阿尔茨海默病的CSF生物标志物。根据Jack等人,NIA-AAResearch Framework:Toward a biological definition of Alzheimer’s disease[NIA-AA研究框架：迈向阿尔茨海默病的生物学定义].Alzheimer’s Dement.[阿尔茨海默病和痴呆症]2018 14(4):535-562，这些患者中有近30％不符合阿尔茨海默病的生物标志物标准。这一发现表明，研究群体的大约三分之一是tau阴性的，并且没有患阿尔茨海默病。
AADvac1的安全性：
发现AADvac1是安全的且耐受性良好。来自2期临床研究的安全性结果总结在图44A-44I中。与安慰剂相比，在AADvac1组中观察到局部注射部位反应的发生率更高。正如预期的那样，在两组中都观察到了这些，并且不会阻碍未来研究的盲法。
在治疗组之间观察到混乱发生率的临界显著差异(AADvac1 n＝6，安慰剂n＝0，p<0.05，未对多重性进行校正)。随着阿尔茨海默病的进展以及患者的记忆力、定向力和判断力逐渐受损，通常会出现混乱。“混乱”的不良事件通常是护理人员报告的结果，护理人员通知研究人员患者比平时更加混乱。它也可以由研究人员在研究就诊的检查期间确定。如果判断混乱具有临床意义，则将其报告为不良事件。出于统计分析的目的，使用评估预期频率与观察频率之间差异的测试，例如费希尔精确检验或卡方检验，在研究组之间比较经历过一次或多次混乱的患者数量。如上所述，2期临床研究发现安慰剂组出现零例混乱(低于预期)，AADvac1组出现六例混乱(高于预期，并且具有轻微的统计学意义)。由于混乱是AD疾病过程的自然组成部分，因此AADvac1治疗与混乱之间的因果关系尚不确定。混乱目前被认为是一种“潜在风险”，这将被未来更大规模的研究证实或驳斥。
在AADvac1组和安慰剂组之间未观察到不良事件(AE)的发生率和性质有其他显著差异。观察到的AE与未经治疗的AD患者中预期的一致(即背景发生率)，并且任何其他安全性和医学评估均未出现安全性信号。例如，ARIA-H(微出血)没有差异、无ARIA-E(血管性水肿)、无脑膜脑炎和无过敏反应。
CSF生物标志物结果：
CSF中tau(例如，总tau、磷酸化tau)生物标志物结果的进一步分析或作图总结在图45A-45C中。tau生物标志物支持来自上述血浆NfL的阳性信号。例如，图45A显示由于AADvac1治疗，总tau水平稳定，表明神经变性进展减少；图45B显示在AADvac1治疗后pT181tau水平降低，表明tau病理积累减少；以及图45C显示在AADvac1治疗后pT217 tau水平降低，进一步表明tau病理积累减少。
扩散张量成像(DTI)MRI结果：
证明通过AADvac1治疗保留了白质完整性(停止了白质变性)的数据显示在图46A-46E中。MRI测量结果着眼于穹窿和胼胝体。不受理论束缚，穹窿被认为是情景记忆缺陷的成像标志物。图46A显示了使用各向异性分数(FA)获得的结果，而图46B显示使用平均扩散率(MD)获得的结果。结果进一步总结在图46C中。图46D-46E显示相对于CSF p-tau水平绘制的各向异性分数或平均扩散率数据。
血浆、CSF、DTI生物标志物结果总结：
在接受AADvac1治疗的患者中，血浆NfL水平显示积累减少。这些结果表明，AADvac1将神经变性过程的进展减慢到健康老年人中更常见的水平。血浆NfL水平观察到的结果得到了CSF tau生物标志物(总Tau和磷酸化Tau pT181和pT217)数据的支持，表明靶标与tau的接合、tau病理学进展的下降和神经变性过程的停止。血浆NfL水平和CSF NfL水平之间也存在正相关。
DTI MRI结果(例如，评估穹窿和胼胝体中的白质变性)也表明AADvac1抑制tau扩散并停止轴突变性。MRI容积测定法结果表明AADvac1减缓了脑萎缩，例如在皮层和海马体中证明的那样。总体而言，阿尔茨海默病的生物标志物始终支持AADvac1的疾病改善效应(例如，停止神经变性、减少神经元丢损失、停止白质变性等)。
临床结果-年龄组效应：
提供并绘制CDR-SB数据(图47A-47B)和MRI皮层萎缩数据(图47C-47D)以证明AADvac1的年龄组效应大小。上面和图48A-48N中提供了按患者年龄组织的进一步数据(CDR-SB、MMSE、ADCS-MCI-ADL、MRI容积、血浆NfL)。
这些数据进一步总结在表23、24A和24B中，表明用AADvac1治疗的年轻发病患者与施用安慰剂的患者相比有特别显著的改善。此外，由更新的NIA-AA(2018)研究框架定义并总结在表3中的A+/T+患者(具有生物标志物证明存在Aβ和病理性tau的患者)亚组，如使用ANCOVA分析的那样，在用AADvac1治疗后与施用安慰剂的那些相比也表现出特别显著的改善。
表23.AADvac1减少阿尔茨海默病年轻发病患者(年龄≥50岁且≤67岁的患者)的临床衰退
表24A.AADvac1显著降低阿尔茨海默病年轻发病患者(年龄≥50岁且≤67岁的患者)的NfL和脑萎缩水平
表24B.在接受AADvac1治疗的阿尔茨海默病年轻发病患者(≥50且≤67)中观察到较慢的脑萎缩和较少的临床衰退；在AADvac1治疗的A+/T+患者中也观察到较少的认知衰退
*＝ANCOVA，根据给定评估的基线值、年龄和基线血浆NfL进行调整。
AADvac1能够减缓认知能力下降，尤其是较年轻患者的认知能力下降。通过MRI和NfL测量的脑萎缩支持了对认知的效应。AADvac1治疗对NfL的效应在较年轻患者中是较年老患者的两倍。认知和功能评估的结果与生物标志物结果显著相关。
抗体应答：
如图49A-49D所示，针对tau肽的抗体应答和病理tau强烈相关并显示相同谱。老年群体中的抗体应答非常好(图50)。观察到大多数患者的抗体应答强度高于老年群体的预期范围。参见Sankilampi等人,Antibody response in the elderly[老年人中的抗体应答].J Infect Dis.[传染病杂志]1996。AADvac1产生了高应答者率，98％的患者能够产生抗体滴度。在初始(例如，六个剂量)给药方案后，加强剂在维持抗体水平方面是有效的。图50中V08、V11和V14的的数据分别显示在最初的六个剂量方案、第二个加强剂和第四个加强剂后的抗体应答。
抗体亲和力：
测量了AADvac1血清抗体的亲和力并显示在图51A中。亲和力范围为约4.2nM至约0.01nM(图51A)。几乎80％的患者产生了优于1nM的亲和力(例如，在1-0.01nM的范围内)。这种亲和力在文献报道的单克隆抗体的亲和力范围内。参见Jadhav S.等人,A walk throughtau therapeutic strategies[tau治疗策略概览].Acta Neuropathol Commun.[神经病理学通讯学报]2019。
AADvac1血清抗体的亲和力与WO 2016/079597(通过引用以其整体并入本文)中所述的人源化DC8E8抗体相当，并且与其他测试的竞争性tau单克隆抗体相似或更好(图51B)。
免疫应答和功效(阿尔茨海默病生物标志物(CSF)阳性亚组)：
图52、53A-53L描述了AD生物标志物(CSF)阳性患者亚组，并证明了该亚组中免疫应答和治疗效果之间的相关性。在AD生物标志物(CSF)阳性患者亚组中，抗体应答(例如滴度)与皮层和海马体的MRI萎缩以及认知成套测验强烈相关。当考虑到基线疾病的严重程度时，相关性甚至更强。相反，在AD生物标志物阴性亚组中，未观察到抗体应答与MRI容积测定法之间或抗体应答与认知之间的相关性。
与安慰剂相比，抗体应答较高的患者海马体和颞叶皮层萎缩较少。在为期两年的研究中，具有较高抗体应答的患者还表现出稳定的认知。
抗体应答和NfL(2年内的积累水平)之间存在相关性(图53K)，显示具有较高滴度时NfL积累较低，特别是当根据基线疾病严重程度校正数据时。
针对治疗的群体总体观察到的CSF NfL与CSF t-tau和CSF p-tau之间以及CSFNfL与血浆NfL之间的正相关性在AD生物标志物(CSF)阳性组中甚至更强(图53M-53O)。在AD生物标志物(CSF)阳性组中观察到对CSF NfL的治疗效果(图53P)。
免疫应答和功效(探索性阿尔茨海默病很可能亚组)：
对于可以获得CSF样品的患者，使用CSF中的生物标志物(淀粉样蛋白，tau)评估AD病理学(淀粉样蛋白+，tau+)的存在。所有tau和/或淀粉样蛋白阴性的患者都被排除在AD很可能组之外。
从其余患者中，排除了AD可能性较低和/或具有混合病理指标的患者：
·具有幻觉的患者很可能有路易体病变(α-突触核蛋白)，其预计对AADvac1治疗没有应答；
·具有较差脑血管健康指标(Fazekas得分2，微出血)的患者具有明显的血管性痴呆组分，其衰退的不可忽略部分不是由AD病理驱动的；
·具有低NfL水平的患者要么没有神经变性，要么仅患有非常轻微的情况，即使在没有治疗的情况下也不太可能进展，这使结果混杂；
·具有过度海马体萎缩(Scheltens 4)的患者发生海马体硬化(TDP-43病理)的可能性较高，而发生AD病理的可能性较低；
·最老的(80岁及以上)通常患有进展较慢的AD，并且具有经常混合的CNS病理学，其中只有一部分衰退是由AD病理学驱动的，因此使结果混杂。
不受理论束缚，这些排除标准有助于将阿尔茨海默病患者与患有其他疾病、障碍或病症的患者鉴别开来，例如但不限于TDP-43、血管性痴呆、海马体硬化或路易体痴呆(DLB)。与AD生物标志物(CSF)阳性亚组类似，在事后定义的AD很可能亚组中抗体应答与皮层和海马体的MRI萎缩以及认知成套测验的变化强烈相关。当考虑到基线疾病的严重程度时，相关性甚至更强。抗体应答与NfL(2年的积累水平)之间存在相关性。与AD生物标志物(CSF)阳性亚组中所观察到的类似，对组差异也有很强影响。
实例12：进一步的研究
早期AD患者，例如50-70岁患有轻度认知障碍(MCI)或轻度AD的患者，被施用AADvac1或安慰剂。根据2018年NIA-AA标准，这些患者被确诊为阿尔茨海默病，例如：针对以下对患者进行筛查：CSF生物标志物、总tau蛋白>400pg/mL、pT181 tau蛋白>60pg/mL和Aβ42<600pg/mL。对患者进行至少24-30个月的评估。给药方案包括六个初始每月剂量，然后是每三个月的加强剂(例如，对于30个月的研究持续时间，施用七个加强剂)。主要功效终点是CDR-SB得分。次要终点包括其他认知和功能测试、MRI和血浆NfL。进一步的终点可能包括CSF、血浆中的生物标志物评估和/或使用DTI；CSF和/或血浆中的PK评估；tau PET和安全性。
示例性实施例
所披露的实施例可以包括但不限于以下任何一个：
1.一种诊断患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：
(a)检测该患者或来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或量；
(b)其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明该受试者中的阿尔茨海默病；以及
(c)根据步骤(b)诊断该患者中阿尔茨海默病的存在或不存在。
2.如实施例1所述的方法，其中步骤(a)包括：
(a)从该患者获取脑脊液(CSF)、血清或血浆样品；以及
(b)任选地从该患者的CSF、血清或血浆提取hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种；以及
(c)任选地进行cDNA合成；以及
(d)例如，使用定量聚合酶链式反应(qPCR)检测hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或量。
3.如实施例1或实施例2所述的方法，其中该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p或hsa-miR-21-5p的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
4.如实施例1-3中任一项所述的方法，其中该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、或hsa-miR-21-5p的量比对照样品中的低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％，80％、90％或100％。
5.如实施例1-4中任一项所述的方法，其中该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、或hsa-miR-21-5p的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％，80％、90％、100％、200％或500％。
6.如实施例1-5中任一项所述的方法，其中相对于对照样品或阈值，hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、或至少7或更多种的存在和/或改变的量表明受试者中的阿尔茨海默病。
7.如实施例1-6中任一项所述的方法，其中检测hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量。
8.一种诊断患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：
(a)检测该患者血浆、血清或脑脊液(CSF)中一种或多种代谢物的存在和/或量，例如2,4-二羟基丁酸、磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂或甾醇；
(b)其中一种或多种代谢物的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明受该试者中的阿尔茨海默病；以及
(c)根据步骤(b)诊断该患者中阿尔茨海默病的存在或不存在。
9.如实施例8所述的方法，其中步骤(a)进一步包括
(a)从该患者获取脑脊液(CSF)、血清或血浆样品；
(b)从该患者的CSF、血清或血浆中提取一种或多种代谢物；以及
(c)确定一种或多种代谢物的量，例如使用质谱法。
10.如实施例9所述的方法，其中该质谱法是飞行时间质谱法或串联质谱法/质谱法。
11.如实施例1-10中任一项所述的方法，其中该对照样品来自健康个体或患有阿尔茨海默病的患者，其中任选地该对照样品是血浆或CSF。
12.如实施例8-11中任一项所述的方法，其中该患者中的代谢物的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
13.如实施例8-12中任一项所述的方法，其中该患者中代谢物的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％或500％。
14.如实施例8-12中任一项所述的方法，其中该患者中代谢物的量比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。
15.如实施例8-14中任一项所述的方法，其中相对于对照样品或阈值，至少2、至少3、至少4、至少5、至少6或至少7种或更多种代谢物的存在和/或改变的量表明该受试者中的阿尔茨海默病。
16.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：
a.检测来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；
b.当相对于对照样品或阈值来自该患者的样品具有hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种或hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的水平改变时，选择该患者进行治疗；以及
c.向所选患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。
17.如实施例16所述的方法，其中来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
18.如实施例16或实施例17所述的方法，其中来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p的量比对照样品中低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
19.如实施例16-18中任一项所述的方法，其中来自该患者的样品中hsa-miR-15a-5p的量比对照样品中低1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
20.如实施例16-19中任一项所述的方法，其中来自该患者的样品中hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
21.如实施例16-20中任一项所述的方法，其中来自该患者的样品中hsa-miR-23a-3p的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
22.如实施例16-21中任一项所述的方法，其中相对于对照样品或阈值，来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的至少2、至少3或至少4种的存在和/或改变的量表明该患者中的阿尔茨海默病。
23.如实施例16-22中任一项所述的方法，其中相对于对照样品或阈值，来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的至少2、至少3或至少4种的存在和/或改变的量表明选择该患者用一个或多个剂量的免疫原性组合物进行治疗，该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
24.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括向样品中表达hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的患者施用一个或多个剂量的包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽的免疫原性组合物，其中任选地hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的表达与对照样品中的表达或与阈值进行比较。
25.如实施例24所述的方法，其中来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量相对于对照样品或阈值差异是约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
26.如实施例25所述的方法，其中来自该患者的样品中hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量比对照样品或阈值中高约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
27.如实施例25所述的方法，其中来自该患者的样品中的hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p的量比对照样品或阈值中低约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
28.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：
(a)确定患者中存在的ApoE基因的两个等位基因中的每一个的基因型；
(b)当该患者具有至少一个ApoE-ε4等位基因时选择该患者进行治疗；以及
(c)向所选患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。
29.如实施例28所述的方法，其中该患者具有两个ε4等位基因。
30.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括向具有ApoE基因的至少一个ε4等位基因的患者施用一个或多个剂量的包含含有SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2的免疫原性肽的免疫原性组合物。
31.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：
(a)检测来自患者的样品中神经丝轻链(NfL)的存在和/或量；
(b)当来自该患者的样品相对于对照样品或阈值含有NfL和/或NfL的改变的量时选择该患者进行治疗；以及
(c)向所选患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。
32.如实施例31所述的方法，其中来自该患者的样品中NfL的量比对照样品中高1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
33.如实施例31或实施例32所述的方法，其中来自该患者的样品中NfL的量比约20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50pg/ml的阈值更多。
34.如实施例31-33中任一项所述的方法，其中来自该患者的样品中的NfL的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。
35.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括向样品中具有NfL的患者施用一个或多个剂量的包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽的免疫原性组合物。
36.如实施例35所述的方法，其中来自该患者的样品中的NfL的量小于10、20、30、40、50、60、70、80、90或100pg/ml。
37.如实施例35所述的方法，其中来自该患者的样品中NfL的量大于20pg/ml。
38.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：
(a)检测来自患者的样品中神经粒蛋白的存在和/或量；
(b)当来自该患者的样品相对于对照样品或阈值含有神经粒蛋白和/或增加的量时，选择该患者进行治疗；以及
(c)向所选患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。
39.如实施例38所述的方法，其中来自该患者的样品中的神经粒蛋白的量与对照样品中的差异是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100倍或更多倍。
40.如实施例38或权利要求39所述的方法，其中来自该患者的样品中的神经粒蛋白的量高于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50或100pg/ml的阈值。
41.如实施例38-40中任一项所述的方法，其中来自该患者的样品中的神经粒蛋白的量比对照样品中低10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。
42.如实施例38-40中任一项所述的方法，其中来自该患者的样品中的神经粒蛋白的量比对照样品中高10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。
43.如实施例16-42中任一项所述的方法，其中该免疫原性肽进一步包含载剂蛋白或肽。
44.如实施例43所述的方法，其中该载剂是钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段。
45.如实施例44所述的方法，其中该KLH或其片段通过马来酰亚胺接头偶联至SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，其中任选地该马来酰亚胺接头是N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-GMBS)。
46.如实施例16-45中任一项所述的方法，其中剂量包含约20-50μg，例如至少约20μg、至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的该免疫原性肽。
47.如实施例16-46中任一项所述的方法，其中每个剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
48.如实施例16-47中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物进一步包含佐剂。
49.如实施例48所述的方法，其中该佐剂包含铝化合物。
50.如实施例49所述的方法，其中该铝化合物包含氢氧化铝(Al(OH)3)。
51.如实施例48-50中任一项所述的方法，其中该佐剂包含约0.1mg至约10mg铝(Al3+)，任选地，约0.5mg铝(Al3+)。
52.如实施例16-51中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
53.如实施例16-52中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物包含以下：通过马来酰亚胺接头(任选地，磺基-GMBS)与KLH偶联的包含SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
54.如实施例16-53中任一项所述的方法，其中治疗该患者包括施用至少5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、15个剂量、20个剂量、25个剂量、50个剂量、或100个剂量的该免疫原性肽。
55.如实施例16-54中任一项所述的方法，其中治疗该患者包括以2周间隔、3周间隔、4周间隔、5周间隔、6周间隔、7周间隔、8周间隔、9周间隔、10周间隔、11周间隔、12周间隔、13周间隔、14周间隔、15周间隔、20周间隔、25周间隔、30周间隔、35周间隔，或40周间隔施用剂量。
56.如实施例16-55中任一项所述的方法，其中该方法包括以4周的间隔施用一个或多个(例如，6个)剂量的该免疫原性组合物，然后以20周的间隔施用一个或多个(例如，5、6个)剂量的该免疫原性组合物。
57.如实施例16-56中任一项所述的方法，其中该对照样品来自健康个体或患有阿尔茨海默病的患者，其中任选地该对照样品是血浆或CSF。
58.如实施例16-57中任一项所述的方法，其中根据修订的2011年NIA-AA标准或2018年NIA-AA标准，该患者诊断为很可能的阿尔茨海默病。
59.如实施例16-58中任一项所述的方法，其中该患者的简易精神状态检查(MMSE)总得分≥20且≤26。
60.如实施例16-59中任一项所述的方法，其中该患者的脑MRI发现与阿尔茨海默病的诊断一致。
61.如实施例16-60中任一项所述的方法，其中根据脑MRI和Scheltens得分≥2评估，该患者患有内侧颞叶萎缩。
62.如实施例16-61中任一项所述的方法，其中该患者在CSF中具有阳性AD生物标志物特征(例如，总tau蛋白>400pg/mL；pT181 tau蛋白>60pg/mL；Aβ42<600pg/mL；和Aβ42:Aβ40比率<0.089中的一个或多个)。
63.如实施例16-62中任一项所述的方法，其中，治疗前，该患者年龄小于80岁，具有大于10pg/mL的血浆神经丝轻链浓度，具有CSF中可检测的tau蛋白，并且没有出现微出血、开始的或大的汇合的半球深部白质病变(Fazekas 2或3级)、严重的海马体萎缩(Scheltens得分为4)和幻觉。
64.如实施例16-63中任一项所述的方法，其中，在治疗之前，该患者是50-85岁，例如50-67岁、50-70岁、68-85岁或71-85岁。
65.如实施例64所述的方法，其中在治疗之前，该患者是50-70岁。
66.如实施例65所述的方法，其中，在治疗之前，该患者是50-67岁。
67.如实施例16-66中任一项所述的方法，其中该患者在治疗前用乙酰胆碱酯酶抑制剂稳定疗法至少3个月。
68.如实施例16-67中任一项所述的方法，其中该患者在治疗前用稳定剂量的美金刚治疗至少3个月。
69.如实施例16-68中任一项所述的方法，其中该患者是男性。
70.如实施例16-69中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物以有效产生以下的量施用
(a)针对病理性tau的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；
(b)针对p108 tau肽的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；和/或
(c)结合p108 tau肽的IgG抗体的滴度的曲线下面积(AUC)为至少100,000。
71.如实施例70所述的方法，其中该免疫原性肽诱导抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约10nM或更小，任选地约4.2nM或更小(例如，约4.2nM至约0.01nM)。
72.如实施例71所述的方法，其中该免疫原性肽诱导抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约1nM或更小(例如，约1nM至约0.01nM)。
73.如实施例70-72中任一项所述的方法，其中病理性tau包含tau151-391/4R。
74.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括：
(a)确定该患者的简易精神状态检查(MMSE)得分；
(b)将来自步骤(a)的得分与阈值得分进行比较，其中任选地，该阈值得分是20-26；
(c)选择该患者进行治疗，其中该患者的MMSE得分高于该阈值；以及
(d)向所选患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。
75.如实施例74所述的方法，其中该患者的MMSE得分是至少29、至少28、至少27、至少26、至少25、至少24、至少23、至少22、至少21、至少20、至少19、至少18、至少17、至少16、至少15、至少14、至少13或至少12。
76.如实施例74或权利要求75所述的方法，其中该患者的MMSE得分是或大于29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13或12的阈值。
77.如实施例74-76中任一项所述的方法，其中该患者的MMSE得分是24-26。
78.一种治疗阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的方法，该方法包括向MMSE得分高于23的患者施用一个或多个剂量的包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽的免疫原性组合物。
79.如实施例78所述的方法，其中该患者的MMSE得分是26、27、28、29或30。
80.如实施例74-79中任一项所述的方法，其中该免疫原性肽进一步包含载剂蛋白或肽。
81.如实施例80所述的方法，其中该载剂是钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段。
82.如实施例81所述的方法，其中该KLH或其片段通过马来酰亚胺接头偶联至SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，其中任选地该马来酰亚胺接头是N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-GMBS)。
83.如实施例74-82中任一项所述的方法，其中剂量包含约20-50μg，例如至少约20μg、至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的该免疫原性肽。
84.如实施例74-83中任一项所述的方法，其中每个剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
85.如实施例74-84中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物进一步包含佐剂。
86.如实施例85所述的方法，其中该佐剂包含铝化合物。
87.如实施例86所述的方法，其中该铝化合物包含氢氧化铝(Al(OH)3)。
88.如实施例85-87中任一项所述的方法，其中该佐剂包含约0.1mg至约10mg铝(Al3+)，任选地，约0.5mg铝(Al3+)。
89.如实施例74-88中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
90.如实施例74-89中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物包含以下：通过马来酰亚胺接头(任选地，磺基-GMBS)与KLH偶联的包含SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
91.如实施例74-90中任一项所述的方法，其中治疗该患者包括施用至少5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、15个剂量、20个剂量、25个剂量、50个剂量、或100个剂量的该免疫原性肽。
92.如实施例74-91中任一项所述的方法，其中治疗该患者包括以2周间隔、3周间隔、4周间隔、5周间隔、6周间隔、7周间隔、8周间隔、9周间隔、10周间隔、11周间隔、12周间隔、13周间隔、14周间隔、15周间隔、20周间隔、25周间隔、30周间隔、35周间隔，或40周间隔施用剂量。
93.如实施例74-92中任一项所述的方法，其中治疗该患者包括以4周的间隔施用一个或多个(例如，6个)剂量的该免疫原性组合物，然后以20周的间隔施用一个或多个(例如，5、6、7个)剂量的该免疫原性组合物。
94.如实施例74-93中任一项所述的方法，其中该对照样品来自健康个体或患有阿尔茨海默病的患者，其中任选地该对照样品是血浆或CSF。
95.如实施例74-94中任一项所述的方法，其中根据修订的2011年NIA-AA标准或2018年NIA-AA标准，该患者诊断为很可能的阿尔茨海默病。
96.如实施例74-95中任一项所述的方法，其中该患者的脑MRI发现与阿尔茨海默病的诊断一致。
97.如实施例74-96中任一项所述的方法，其中根据脑MRI和Scheltens得分≥2评估，该患者患有内侧颞叶萎缩。
98.如实施例74-97中任一项所述的方法，其中该患者在CSF中具有阳性AD生物标志物特征(例如，总tau蛋白>400pg/mL；pT181 tau蛋白>60pg/mL；Aβ42<600pg/mL；和Aβ42:Aβ40比率<0.089中的一个或多个)。
99.如实施例74-98中任一项所述的方法，其中，治疗前，该患者年龄小于80岁，具有大于10pg/mL的血浆神经丝轻链浓度，具有CSF中可检测的tau蛋白，并且没有出现微出血、开始的或大的汇合的半球深部白质病变(Fazekas 2或3级)、严重的海马体萎缩(Scheltens得分为4)和幻觉。
100.如实施例74-99中任一项所述的方法，其中，在治疗之前，该患者是50-85岁，例如50-67岁、50-70岁、68-85岁或71-85岁。
101.如权利要求100所述的方法，其中治疗前，该患者年龄是50-70岁。
102.如实施例101所述的方法，其中，在治疗之前，该患者是50-67岁。
103.如实施例74-102中任一项所述的方法，其中该患者在治疗前用乙酰胆碱酯酶抑制剂稳定疗法至少3个月。
104.如实施例74-103中任一项所述的方法，其中该患者在治疗前用稳定剂量的美金刚治疗至少3个月。
105.如实施例74-104中任一项所述的方法，其中该患者是男性。
106.如实施例74-105中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物以有效产生以下的量施用
(a)针对病理性tau的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；
(b)针对p108 tau肽的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；和/或
(c)结合p108 tau肽的IgG抗体的滴度的曲线下面积(AUC)为至少100,000。
107.如实施例106所述的方法，其中该免疫原性肽诱导抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约10nM或更小，任选地约4.2nM或更小(例如，约4.2nM至约0.01nM)。
108.如实施例107所述的方法，其中该免疫原性肽诱导抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约1nM或更小(例如，约1nM至约0.01nM)。
109.如实施例106-108中任一项所述的方法，其中病理性tau包含tau151-391/4R。
110.一种治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：
(a)确定该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；
(b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；
(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的改变的量表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
111.如实施例110所述的方法，其中治疗后hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p的量减少表示功效。
112.如实施例110所述的方法，其中治疗后hsa-let-7a-5p和/或hsa-miR-15a-5p减少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍表示功效。
113.如实施例110所述的方法，其中治疗后hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23a-3p的量增加表示功效。
114.如实施例110所述的方法，其中治疗后hsa-miR191-5p和/或hsa-miR-23增加约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、50、100或更多倍表示功效。
115.一种治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：
(a)确定该患者中NfL的存在和/或量；
(b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中NfL的存在和/或量；
(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中NfL的改变的量表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
116.如实施例115所述的方法，其中治疗后NfL的量稳定或减少表示功效。
117.如实施例115所述的方法，其中治疗后NfL的量增加不超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。
118.如实施例115所述的方法，其中治疗后NfL的量减少超过约30％、25％、20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。
119.如实施例115所述的方法，其中治疗后NfL的量增加不超过约6pg/mL、5pg/mL、4pg/mL、3pg/mL或2pg/mL表示功效。
120.一种治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：
(a)确定该患者中神经粒蛋白的存在和/或量；
(b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定患者中神经粒蛋白的存在和/或量；
(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中神经粒蛋白的改变的量表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
121.如实施例120所述的方法，其中治疗后神经粒蛋白的量稳定或减少表示功效。
122.如实施例120所述的方法，其中治疗后神经粒蛋白的量增加不超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。
123.如实施例120所述的方法，其中治疗后神经粒蛋白的量减少超过约30％、25％、20％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。
124.如实施例120所述的方法，其中治疗后神经粒蛋白的量增加不超过约20pg/mL、18pg/mL、16pg/mL、14pg/mL、12pg/mL、10pg/mL、8pg/mL、6pg/mL、5pg/mL 4pg/mL、3pg/mL或2pg/mL表示功效。
125.一种治疗患有阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括：
(a)确定该患者中一种或多种代谢物的存在和/或量；
(b)施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中一种或多种代谢物的存在和/或量；
(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤a的治疗前的存在和/或量，其中神经粒蛋白的改变的量表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
126.如实施例125所述的方法，其中治疗后一种或多种代谢物的改变的量表示功效。
127.如实施例125所述的方法，其中该一种或多种代谢物的量增加超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。
128.如实施例125所述的方法，其中该一种或多种代谢物的量减少超过约25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％表示功效。
129.如实施例125所述的方法，其中治疗后至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种或至少7种代谢物的改变的量表示功效。
130.如实施例110-129中任一项所述的方法，其中该免疫原性肽进一步包含载剂蛋白或肽。
131.如实施例130所述的方法，其中该载剂是钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段。
132.如实施例131所述的方法，其中该KLH或其片段通过马来酰亚胺接头偶联至SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，其中任选地该马来酰亚胺接头是N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-GMBS)。
133.如实施例110-132中任一项所述的方法，其中剂量包含约20-50μg，例如至少约20μg、至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的该免疫原性肽。
134.如实施例110-133中任一项所述的方法，其中每个剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
135.如实施例110-134中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物进一步包含佐剂。
136.如实施例135所述的方法，其中该佐剂包含铝化合物。
137.如实施例136所述的方法，其中该铝化合物包含氢氧化铝(Al(OH)3)。
138.如实施例135-137中任一项所述的方法，其中该佐剂包含约0.1mg至约10mg铝(Al3+)，任选地，约0.5mg铝(Al3+)。
139.如实施例110-138中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
140.如实施例110-139中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物包含以下：通过马来酰亚胺接头(任选地，磺基-GMBS)与KLH偶联的包含SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
141.如实施例110-140中任一项所述的方法，其中在步骤(b)中用至少2个剂量、3个剂量、4个剂量、5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、或15个剂量的该免疫原性肽治疗该患者。
142.如实施例110-141中任一项所述的方法，其中治疗该患者包括以2周间隔、3周间隔、4周间隔、5周间隔、6周间隔、7周间隔、8周间隔、9周间隔、10周间隔、11周间隔、12周间隔、13周间隔、14周间隔、15周间隔、20周间隔、25周间隔、30周间隔、35周间隔，或40周间隔施用剂量。
143.如实施例110-142中任一项所述的方法，其中在步骤(e)中用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个另外剂量的该免疫原性肽治疗该患者。
144.如实施例110-143中任一项所述的方法，其中该对照样品来自健康个体或患有阿尔茨海默病的患者，其中任选地该对照样品是血浆或CSF。
145.如实施例110-144中任一项所述的方法，其中根据修订的2011年NIA-AA标准或2018年NIA-AA标准，该患者诊断为很可能的阿尔茨海默病。
146.如实施例110-145中任一项所述的方法，其中该患者的脑MRI发现与阿尔茨海默病的诊断一致。
147.如实施例110-146中任一项所述的方法，其中根据脑MRI和Scheltens得分≥2评估，该患者患有内侧颞叶萎缩。
148.如实施例110-147中任一项所述的方法，其中该患者在CSF中具有阳性AD生物标志物特征(例如，总tau蛋白>400pg/mL；pT181 tau蛋白>60pg/mL；Aβ42<600pg/mL；和Aβ42:Aβ40比率<0.089中的一个或多个)。
149.如实施例110-148中任一项所述的方法，其中，治疗前，该患者年龄小于80岁，具有大于10pg/mL的血浆神经丝轻链浓度，具有CSF中可检测的tau蛋白，并且没有出现微出血、开始的或大的汇合的半球深部白质病变(Fazekas 2或3级)、严重的海马体萎缩(Scheltens得分为4)和幻觉。
150.如实施例110-149中任一项所述的方法，其中，在治疗之前，该患者是50-85岁，例如50-67岁、50-70岁、68-85岁或71-85岁。
151.如实施例150所述的方法，其中，在治疗之前，该患者是50-70岁。
152.如实施例151所述的方法，其中，在治疗之前，该患者是50-67岁。
153.如实施例110-152中任一项所述的方法，其中该患者在治疗前用乙酰胆碱酯酶抑制剂稳定疗法至少3个月。
154.如实施例110-153中任一项所述的方法，其中该患者在治疗前用稳定剂量的美金刚治疗至少3个月。
155.如实施例110-154中任一项所述的方法，其中该患者是男性。
156.如实施例110-155中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物以有效产生以下的量施用：
(a)针对病理性tau的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；
(b)针对p108 tau肽的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；和/或
(c)结合p108 tau肽的IgG抗体的滴度的曲线下面积(AUC)为至少100,000。
157.如实施例156所述的方法，其中该免疫原性肽诱导抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约10nM或更小，任选地约4.2nM或更小(例如，约4.2nM至约0.01nM)。
158.如实施例157所述的方法，其中该免疫原性肽诱导抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约1nM或更小(例如，约1nM至约0.01nM)。
159.如实施例156-158中任一项所述的方法，其中病理性tau包含tau151-391/4R。
160.一种治疗患有阿尔茨海默病或轻度认知障碍的患者的方法，该方法包括向该患者施用一个或多个剂量的包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2，其中该免疫原性组合物以有效产生以下的量施用：
(a)针对病理性tau的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；
(b)针对p108 tau肽的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；和/或
(c)结合p108 tau肽的IgG抗体的滴度的曲线下面积(AUC)为至少100,000。
161.如实施例160所述的方法，其中该免疫原性肽诱导抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约10nM或更小，任选地约4.2nM或更小(例如，约4.2nM至约0.01nM)。
162.如实施例161所述的方法，其中该免疫原性肽诱导抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd为约1nM或更小(例如，约1nM至约0.01nM)。
163.如实施例160-162中任一项所述的方法，其中病理性tau包含tau151-391/4R。
164.如实施例160-163中任一项所述的方法，其中该方法包括初始给药方案，该方案包括每月一次施用一个剂量的该免疫原性组合物，持续例如六个月。
165.如实施例164所述的方法，其中该方法进一步包括在该初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。
166.如实施例164所述的方法，其中如果针对病理性tau的抗体滴度低于100ng/mL，则该方法进一步包括在该初始给药方案之后以有效恢复针对病理性tau的抗体滴度至至少100ng/mL的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用该一个或多个加强剂后，从该初始给药方案开始测量，针对病理性tau的抗体的平均滴度为至少100ng/mL持续至少两年。
167.如实施例165或实施例166所述的方法，其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
168.如实施例165-167中任一项所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
169.如实施例160-168中任一项所述的方法，其中该患者患有阿尔茨海默病。
170.如实施例160-169中任一项所述的方法，其中根据修订的2011年NIA-AA标准或2018年NIA-AA标准，该患者诊断为很可能的阿尔茨海默病。
171.如实施例160-170中任一项所述的方法，其中该患者的简易精神状态检查总得分≥20且≤26。
172.如实施例160-171中任一项所述的方法，其中该患者的脑MRI发现与阿尔茨海默病的诊断一致。
173.如实施例160-172中任一项所述的方法，其中根据脑MRI评估并且Scheltens得分≥2，该患者具有内侧颞叶萎缩。
174.如实施例160-173中任一项所述的方法，其中该患者在脑脊液(CSF)中具有阳性阿尔茨海默病生物标志物特征(例如，总tau蛋白>400pg/mL；pT181 tau蛋白>60pg/mL；Aβ42<600pg/mL；和Aβ42:Aβ40比率<0.089中的一个或多个)。
175.如实施例160-174中任一项所述的方法，其中该患者是50-85岁，例如50-67岁、50-70岁、68-85岁或71-85岁。
176.如实施例175所述的方法，其中该患者是50-70岁。
177.如实施例176所述的方法，其中该患者是50-67岁。
178.如实施例175所述的方法，其中该患者是68-85岁。
179.如实施例160-178中任一项所述的方法，其中该患者在治疗开始前用乙酰胆碱酯酶抑制剂稳定疗法至少3个月。
180.如实施例160-179中任一项所述的方法，其中该患者在治疗开始前用稳定剂量的美金刚治疗至少3个月。
181.如实施例160-180中任一项所述的方法，其中该患者是男性。
182.如实施例160-181中任一项所述的方法，其中在该施用免疫原性肽之前，该患者具有脑脊液(CSF)中小于600pg/mL的Aβ42浓度，CSF中大于60pg/mL的磷酸化tau(p-tau)T181浓度，以及CSF中大于400pg/mL的总tau(t-tau)浓度。
183.如实施例160-182中任一项所述的方法，其中，治疗前，该患者年龄小于80岁，具有大于10pg/mL的血浆神经丝轻链浓度，具有CSF中可检测的tau蛋白，并且没有出现微出血、开始的或大的汇合的半球深部白质病变(Fazekas 2或3级)、严重的海马体萎缩(Scheltens得分为4)和幻觉。
184.如实施例160-183中任一项所述的方法，其中相对于血浆中神经丝轻链的基线积累，以有效稳定或减少血浆中神经丝轻链积累的量施用该免疫原性组合物。
185.如实施例184所述的方法，其中在该初始给药方案后，相对于基线积累，该患者血浆中的神经丝轻链浓度稳定(例如，神经丝轻链浓度增加不超过1％、5％、10％、15％、20％或25％)。
186.如实施例184所述的方法，其中在该初始给药方案之后，相对于基线积累，该患者血浆中神经丝轻链的积累减少。
187.如实施例185或实施例186所述的方法，其中该方法进一步包括在该初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。
188.如实施例185或实施例186所述的方法，其中如果该患者在该初始给药方案后具有相对于基线积累增加的血浆中神经丝轻链的积累(例如，超过约25％的增加)，该方法进一步包括在该初始给药方案之后以有效稳定或减少血浆中神经丝轻链积累的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用该一个或多个加强剂后，从该初始给药方案开始测量，该患者在血浆中具有稳定的神经丝轻链浓度或减少的神经丝轻链积累持续至少两年。
189.如实施例187或实施例188所述的方法，其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
190.如实施例187-189中任一项所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
191.如实施例160-190中任一项所述的方法，其中在施用该免疫原性组合物之后(例如，在施用该初始给药方案之后)：
(a)如果该患者是50-67岁，血浆中神经丝轻链浓度增加不超过2pg/mL，优选不超过1.8pg/mL，持续至少两年；或
(b)如果患者是68-85岁，血浆中神经丝轻链的浓度增加不超过2.3pg/mL持续至少两年。
192.如实施例191所述的方法，其中该方法进一步包括在该初始给药方案之后施用一个或多个加强剂，条件是如果：
在该初始给药方案后的两年期间，血浆中神经丝轻链的平均浓度增加超过2pg/mL(例如，如果患者是50-67岁)，或增加超过2.3pg/mL(例如，如果患者年龄是58-85岁)；
其中该一个或多个加强剂以有效维持血浆中神经丝轻链平均增加不超过2pg/mL(例如，如果患者为50-67岁)或不超过2.3pg/mL(例如，如果患者是58-85岁)的量施用。
193.如实施例192所述的方法，其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
194.如实施例192或权利要求193所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
195.如实施例160-194中任一项所述的方法，其中相对于该施用免疫原性组合物之前CSF中的总tau(t-tau)水平，以有效稳定或降低CSF中t-tau水平的量施用该免疫原性组合物。
196.如实施例195所述的方法，其中相对于该初始给药方案施用前的t-tau水平，该患者在该初始给药方案后在CSF中具有稳定的t-tau水平。
197.如实施例195所述的方法，其中相对于该初始给药方案施用前的t-tau水平，该患者在该初始给药方案后在CSF中具有降低的t-tau水平。
198.如实施例197所述的方法，其中施用该免疫原性组合物后两年(例如，施用该初始给药方案后两年)，CSF中t-tau的浓度降低至少2ng/L，任选地降低至少2.5ng/L，并且进一步任选地降低至少2.7ng/L。
199.如实施例195-198中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括在该初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。
200.如实施例195-198中任一项所述的方法，其中如果在该初始给药方案后，例如该初始给药方案后两年，CSF中t-tau的浓度没有降低至少2ng/L，任选地没有降低至少2.5ng/L，或者进一步任选地没有降低至少2.7ng/mL，该方法进一步包括在该初始给药方案之后以有效稳定或减少CSF中t-tau水平的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用该一个或多个加强剂之后，从该初始给药方案或从加强剂施用之日起测量，患者具有稳定或降低的t-tau水平持续至少两年，其中，进一步任选地，该初始给药方案后两年或加强剂施用后两年，CSF中t-tau的浓度降低至少2ng/L，任选地降低至少2.5ng/L，并且进一步任选地降低至少2.7ng/L。
201.如实施例199或实施例200所述的方法，其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
202.如实施例199-201中任一项所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
203.如如实施例160-202中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物以有效抑制病理性tau扩散的量施用，其中任选地病理性tau包含tau151-391/4R。
204.如实施例203所述的方法，其中该免疫原性组合物在该初始给药方案后有效抑制病理性tau的扩散。
205.如实施例204所述的方法，其中该方法进一步包括在该初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。
206.如实施例204所述的方法，其中如果病理性tau的扩散增加，该方法进一步包括在该初始给药方案之后以有效抑制病理性tau扩散的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用该一个或多个加强剂后，从该初始给药方案开始测量，病理性tau的扩散被抑制至少两年。
207.如实施例205或实施例206所述的方法，其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
208.如实施例205-207中任一项所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
209.如实施例160-208中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物以以下量施用，该量有效地
(a)相对于施用该免疫原性组合物之前CSF中的pT181 tau水平，降低CSF中苏氨酸181(pT181 tau)处磷酸化的tau蛋白水平；和/或
(b)相对于施用该免疫原性组合物之前CSF中的pT217 tau水平，降低CSF中苏氨酸217(pT217 tau)处磷酸化的tau蛋白水平。
210.如实施例209所述的方法，其中该患者在该初始给药方案后在CSF中具有降低的pT181 tau水平和/或降低的pT217水平。
211.如实施例210所述的方法，其中，施用该免疫原性组合物后两年，
(a)与施用该免疫原性组合物之前的浓度相比，CSF中pT181 tau的浓度降低至少5ng/L，任选地降低至少5.3ng/L；和/或
(b)与施用该免疫原性组合物之前的浓度相比，CSF中pT217 tau的浓度降低至少30ng/L，任选地降低至少34ng/L。
212.如实施例209-211中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括在该初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。
213.如实施例212所述的方法，其中如果该患者在该初始给药方案后具有CSF中增加的pT181 tau水平和/或增加的pT217水平，则该方法进一步包括在该初始给药方案之后以有效降低CSF中pT181 tau水平和/或降低pT217水平的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用该一个或多个加强剂后，从该初始给药方案开始测量，患者在CSF中具有降低的pT181 tau水平和/或降低的pT217水平持续至少两年。
214.如实施例212所述的方法，其中如果该初始给药方案后两年，CSF中的pT181tau浓度没有降低至少5ng/L(任选地至少5.3ng/L)和/或CSF中的pT217 tau浓度没有降低至少30ng/L(任选地至少34ng/L)，则该方法进一步包括在该初始给药方案之后以有效将CSF中pT181 tau的浓度降低至少5ng/L(任选地至少5.3ng/L)和/或将CSF中pT217 tau的浓度降低至少30ng/L(任选地至少34ng/L)的量施用一个或多个加强剂。
215.如实施例212-214中任一项所述的方法，其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
216.如实施例212-215中任一项所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
217.如实施例160-216中任一项所述的方法，其中相对于施用该免疫原性组合物之前的白质降解，以有效停止该患者的穹窿和/或胼胝体膝部中的白质降解的量施用该免疫原性组合物。
218.如实施例217所述的方法，其中白质降解通过各向异性分数或平均扩散率测量。
219.如实施例217或实施例218所述的方法，其中相对于施用该免疫原性组合物之前的轴突降解，以有效停止轴突变性的量施用该免疫原性组合物。
220.如实施例219所述的方法，其中轴突变性通过各向异性分数或平均扩散率测量。
221.如实施例219或实施例220所述的方法，其中在该初始给药方案施用后，白质降解停止和/或轴突降解停止。
222.如实施例221所述的方法，其中该方法进一步包括在该初始给药方案之后施用一个或多个加强剂。
223.如实施例221所述的方法，其中如果该患者在该初始给药方案后白质降解增加和/或轴突降解增加，则该方法进一步包括在该初始给药方案后以有效停止白质变性和/或停止轴突变性的量施用一个或多个加强剂，其中任选地，在施用该一个或多个加强剂后，从该初始给药方案开始测量，白质降解停止和/或轴突降解停止至少两年。
224.如实施例222或实施例223所述的方法，其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
225.如实施例222-224中任一项所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
226.如实施例160-225中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物以有效防止海马体萎缩的量施用(例如，有效防止海马体体积相对于施用该免疫原性组合物之前的海马体体积减少)。
227.如实施例226所述的方法，其中该方法包括施用初始给药方案，该方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月，任选地随后施用一个或多个加强剂。
228.如实施例226所述的方法，其中如果该患者的海马体体积在该初始给药方案后相对于在该初始给药方案施用之前该患者的海马体体积减少(该初始给药方案包括每月一次施用该免疫原性组合物持续六个月)，该方法进一步包括以有效防止进一步海马体萎缩的量的施用一个或多个加强剂，其中任选地以以下量施用一个或多个加强剂，该量有效防止进一步海马体萎缩持续至少两年。
229.如实施例226所述的方法，其中该患者是50-67岁，并且其中施用该免疫原性组合物后两年，该患者的海马体体积相对于在施用该免疫原性组合物之前该患者的海马体体积减少不超过10％，优选不超过8％。
230.如实施例229所述的方法，其中如果该患者的海马体体积在该初始给药方案后相对于在该初始给药方案施用之前该患者的海马体体积减少超过10％(该初始给药方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月)，则该方法进一步包括以以下量施用一个或多个加强剂，该量有效防止进一步海马体萎缩(例如，防止海马体体积进一步损失超过10％)，任选地持续至少两年。
231.如实施例227、228或230所述的方法其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
232.如实施例227、228、230或231所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
233.如实施例160-232中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物以有效防止皮层萎缩的量施用(例如，有效防止皮层体积相对于施用该免疫原性组合物之前的皮层体积减少)。
234.如实施例233所述的方法，其中该方法包括施用初始给药方案，该方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月，任选地随后施用一个或多个加强剂。
235.如实施例233所述的方法，其中如果该患者的皮层体积在该初始给药方案后相对于在该初始给药方案施用之前该患者的皮层体积减少(该初始给药方案包括每月一次施用该免疫原性组合物持续六个月)，该方法进一步包括以有效防止进一步皮层萎缩的量的施用一个或多个加强剂，其中任选地以以下量施用一个或多个加强剂，该量有效防止进一步皮层萎缩持续至少两年。
236.如实施例233所述的方法，其中该患者是50-67岁，并且其中施用该免疫原性组合物后两年，该患者的皮层体积相对于在施用该免疫原性组合物之前该患者的皮层体积减少不超过5％，优选不超过4％。
237.如实施例236所述的方法，其中如果该患者的皮层体积在该初始给药方案后相对于在该初始给药方案施用之前该患者的皮层体积减少超过5％(该初始给药方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月)，则该方法进一步包括以以下量施用一个或多个加强剂，该量有效防止进一步皮层萎缩(例如，防止皮层体积进一步损失超过5％)，任选地持续至少两年。
238.如实施例234、235或237所述的方法其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
239.如实施例234、235、237或238所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
240.如实施例226-239中任一项所述的方法，其中萎缩(例如，体积损失)通过MRI容积测定法测量。
241.如实施例160-240中任一项所述的方法，其中该患者是50-67岁并且该免疫原性组合物以有效减缓该患者的认知衰退速率的量施用。
242.如实施例241所述的方法，其中该方法包括施用初始给药方案，该方案包括每月一次施用免疫原性组合物持续六个月，任选地随后施用一个或多个加强剂。
243.如实施例241或实施例242所述的方法，其中该患者的认知衰退速率使用以下来测量：临床痴呆评定量表记录总和(CDR-SB)测试、阿尔茨海默病合作研究轻度认知障碍日常生活活动(ADCS-MCI-ADL)问卷、简易精神状态检查(MMSE)和/或认知成套测验，该认知成套测验包括Cogstate国际购物清单任务、Cogstate一卡学习和一卡返任务、字母流利度测试和类别流利度测试和/或数字符号编码测试。
244.如实施例243所述的方法，其中施用该免疫原性组合物后(例如，施用该初始给药方案后)两年，相对于该免疫原性组合物的施用之前该患者的CDR-SB测试得分，该患者的CDR-SB测试得分增加不超过4。
245.如实施例243或实施例244所述的方法，其中施用该免疫原性组合物后(例如，施用该初始给药方案后)两年，相对于该免疫原性组合物的施用之前该患者的MMSE得分，该患者的MMSE得分降低不超过7分，优选不超过6.5分。
246.如实施例243-245中任一项所述的方法，其中施用该免疫原性组合物后(例如，施用该初始给药方案后)两年，相对于该免疫原性组合物的施用之前该患者的ADCS MCIADL问卷得分，该患者的ADCS MCI ADL问卷得分降低不超过14分，优选不超过13.5分。
247.如实施例243-246中任一项所述的方法，其中该方法进一步包括施用一个或多个加强剂，条件是如果：
(a)相对于施用该免疫原性组合物(例如，该初始给药方案)之前该患者的CDR-SB测试得分，该患者的CDR-SB得分增加超过4；
(b)相对于施用该免疫原性组合物(例如，该初始给药方案)之前该患者的MMSE得分，该患者的MMSE得分降低超过6.5分或超过7分；和/或
(c)相对于施用该免疫原性组合物(例如，该初始给药方案)之前该患者的ADCS-MCI-ADL问卷得分，该患者的ADCS-MCI-ADL问卷得分降低超过13.5分或超过14分。
248.如实施例243或实施例247所述的方法，其中该一个或多个加强剂以以下量施用，该量有效防止：
(a)相对于施用该免疫原性组合物(例如，该初始给药方案)之前该患者的CDR-SB测试得分，该患者的CDR-SB得分增加超过4；
(b)相对于施用该免疫原性组合物(例如，该初始给药方案)之前该患者的MMSE得分，该患者的MMSE得分降低超过6.5分或超过7分；和/或
(c)相对于施用该免疫原性组合物(例如，该初始给药方案)之前该患者的ADCS-MCI-ADL问卷得分，该患者的ADCS-MCI-ADL问卷得分降低超过13.5分或超过14分。
249.如实施例247或实施例248所述的方法，其中该一个或多个加强剂每三个月施用一次。
250.如实施例247-249中任一项所述的方法，其中该方法包括施用至少五个加强剂。
251.如实施例160-250中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物的免疫原性肽进一步包含载剂蛋白或肽。
252.如实施例251所述的方法，其中该载剂是钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段。
253.如实施例252所述的方法，其中该KLH或其片段通过马来酰亚胺接头偶联至SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，其中任选地该马来酰亚胺接头是N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-GMBS)。
254.如实施例251-253中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物进一步包含佐剂。
255.如实施例254所述的方法，其中该佐剂包含铝化合物。
256.如实施例255所述的方法，其中该铝化合物包含氢氧化铝(Al(OH)3)。
257.如实施例254-256中任一项所述的方法，其中该佐剂包含约0.1mg至约10mg铝(Al3+)，任选地，约0.5mg铝(Al3+)。
258.如实施例251-257中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
259.如实施例251-258中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物包含以下：通过马来酰亚胺接头(例如，磺基-GMBS)与KLH偶联的包含SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
260.如实施例251-259中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物的剂量包含至少约20μg、至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的免疫原性肽，任选地约20至50μg的该免疫原性肽。
261.如实施例251-260中任一项所述的方法，其中该免疫原性组合物的剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
262.如实施例165-168、187-190、192-194、199-202、205-208、212-216、222-225、227、228、230-232、234、235、237-239、242或247-250中任一项所述的方法，其中该加强剂包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽。
263.如实施例262所述的方法，其中该免疫原性肽进一步包含载剂蛋白或肽。
264.如实施例263所述的方法，其中该载剂是钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段。
265.如实施例264所述的方法，其中该KLH或其片段通过马来酰亚胺接头偶联至SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，其中任选地该马来酰亚胺接头是N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-GMBS)。
266.如实施例262-265中任一项所述的方法，其中该加强剂进一步包含佐剂。
267.如实施例266所述的方法，其中该佐剂包含铝化合物。
268.如实施例267所述的方法，其中该铝化合物包含氢氧化铝(Al(OH)3)。
269.如实施例266-268中任一项所述的方法，其中该佐剂包含约0.1mg至约10mg铝(Al3+)，任选地，约0.5mg铝(Al3+)。
270.如实施例262-269中任一项所述的方法，其中该加强剂进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
271.如实施例262-270中任一项所述的方法，其中该加强剂包含以下：通过马来酰亚胺接头(例如，磺基-GMBS)与KLH偶联的包含SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
272.如实施例262-271中任一项所述的方法，其中该加强剂的剂量包含至少约20μg、至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的免疫原性肽，任选地约20至50μg的该免疫原性肽。
273.如实施例262-272中任一项所述的方法，其中该加强剂的剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
274.如实施例262-273中任一项所述的方法，其中该加强剂在组成上与作为初始给药方案的一部分施用的免疫原性组合物相同。
275.如实施例274所述的方法，其中以与作为初始给药方案的一部分施用的免疫原性组合物相同的剂量施用该加强剂。
Claims (111)
1.一种用于在治疗有需要的患者的阿尔茨海默病或轻度认知障碍中使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含含有SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的免疫原性肽，并且其中，在治疗之前，该患者年龄是50-85岁。
2.如权利要求1所述使用的免疫原性组合物，其中，治疗前，该患者年龄是50-70岁。
3.如权利要求1所述使用的免疫原性组合物，其中，治疗前，该患者年龄是50-67岁。
4.如权利要求1-3中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中，治疗前，该患者已接受乙酰胆碱酯酶抑制剂的稳定疗法至少三个月。
5.如权利要求1-4中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中，治疗前，该患者已接受稳定剂量的美金刚治疗至少三个月。
6.如权利要求1-5中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中根据修订的2011年NIA-AA标准或2018年NIA-AA标准，该患者诊断为很可能的阿尔茨海默病。
7.如权利要求1-6中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该患者的脑MRI发现与阿尔茨海默病的诊断一致。
8.如权利要求1-7中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中根据脑MRI和Scheltens得分≥2评估，该患者患有内侧颞叶萎缩。
9.如权利要求1-8中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该患者具有以下中的一项或多项：脑脊液(CSF)中总tau蛋白>400pg/mL，CSF中pT181 tau蛋白>60pg/mL，CSF中Aβ42<600pg/mL，和/或CSF中Aβ42:Aβ40比率<0.089。
10.如权利要求1-9中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中，治疗前，该患者年龄小于80岁，具有大于10pg/mL的血浆神经丝轻链浓度，具有CSF中可检测的tau蛋白，并且没有出现：微出血、开始的或大的汇合的半球深部白质病变(Fazekas 2或3级)、严重的海马体萎缩(Scheltens得分为4)和/或幻觉。
11.如权利要求1-10中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该患者患有阿尔茨海默病。
12.如权利要求1-11中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该患者是男性。
13.如权利要求1-12中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效产生以下的量和给药方案施用于该患者
(a)针对病理性tau的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；和/或
(b)针对p108 tau肽的抗体的抗体滴度至少100ng/mL。
14.如权利要求1-12中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效产生以下的量和给药方案施用于该患者
(a)针对病理性tau的抗体的平均抗体滴度至少100ng/mL持续至少两年；和/或
(b)针对p108 tau肽的抗体的平均抗体滴度至少100ng/mL持续至少两年。
15.如权利要求1-14中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽诱导至少一种抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd是约10nM或更小，任选地约4.2nM或更小，进一步任选地约4.2nM至约0.01nM。
16.如权利要求15所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽诱导至少一种抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd是约1nM或更小，任选地约1nM至约0.01nM。
17.如权利要求13-16中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中病理性tau包含tau151-391/4R。
18.如权利要求1-17中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以相对于血浆中神经丝轻链的基线积累而言有效稳定或减少血浆中神经丝轻链积累的量和给药方案施用于该患者。
19.如权利要求18所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物的施用导致该患者的血浆中神经丝轻链浓度相对于基线增加不超过1％、5％、10％、15％、20％或25％。
20.如权利要求18所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以相对于血浆中神经丝轻链的基线积累而言有效减少血浆中神经丝轻链积累的量和给药方案施用于该患者。
21.如权利要求18所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以相对于血浆中神经丝轻链的基线积累而言有效稳定或减少血浆中神经丝轻链积累持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
22.如权利要求18-21中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效产生以下的量和给药方案施用于该患者
(a)在治疗的50-67岁患者中，血浆中神经丝轻链浓度的增加不超过2pg/mL(优选增加不超过1.8pg/mL)持续至少两年；或
(b)在治疗的68-85岁患者中，血浆中神经丝轻链浓度的增加不超过2.3pg/mL持续至少两年。
23.如权利要求1-22中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以相对于CSF中基线总tau(t-tau)水平有效稳定CSF中t-tau水平的量和给药方案施用于该患者。
24.如权利要求1-22中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以相对于CSF中基线t-tau水平有效降低CSF中t-tau水平的量和给药方案施用于该患者。
25.如权利要求24所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以相对于CSF中的基线t-tau水平有效将CSF中的t-tau水平降低至少2ng/L(任选地至少2.5ng/L，进一步任选地至少2.7ng/L)的量和给药方案施用于该患者，其中任选地该降低持续两年。
26.如权利要求11-25中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效抑制病理性tau扩散的量和给药方案施用于该患者，其中任选地病理性tau包含tau151-391/4R。
27.如权利要求26所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效抑制病理性tau扩散持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
28.如权利要求26或27所述使用的免疫原性组合物，其中病理性tau包含tau151-391/4R。
29.如权利要求1-28中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以以下量和给药方案施用于该患者，该量和给药方案
(a)相对于CSF中的基线pT181 tau水平，有效地降低CSF中苏氨酸181处磷酸化的tau蛋白(pT181 tau)水平，任选地持续至少两年；和/或
(b)相对于CSF中的基线pT217 tau水平，有效地降低CSF中苏氨酸217处磷酸化的tau蛋白(pT217 tau)水平，任选地持续至少两年。
30.如权利要求29所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以以下量和给药方案施用于该患者，该量和给药方案
(a)相对于CSF中pT181 tau的基线浓度，有效地将CSF中的pT181tau浓度降低至少5ng/L，任选地降低至少5.3ng/L，持续至少两年；和/或
(b)相对于CSF中pT217 tau的基线浓度，有效地将CSF中的pT217tau浓度降低至少30ng/L，任选地降低至少34ng/L，持续至少两年。
31.如权利要求1-30中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以相对于基线白质降解有效停止该患者穹窿和/或胼胝体膝部中白质降解任选地持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
32.如权利要求31所述使用的免疫原性组合物，其中白质降解通过各向异性分数或平均扩散率来测量。
33.如权利要求1-32中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以相对于基线轴突变性有效停止轴突变性任选地持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
34.如权利要求33所述使用的免疫原性组合物，其中轴突变性通过各向异性分数或平均扩散率来测量。
35.如权利要求1-34中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止海马体萎缩(例如，有效防止海马体体积相对于基线海马体体积减少)任选地持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
36.如权利要求35所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止治疗的50-67岁患者的海马体萎缩的量和给药方案施用于该患者，其中海马体萎缩由该患者的海马体体积相对于基线减少超过10％来指示。
37.如权利要求35或36所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止海马体萎缩持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
38.如权利要求1-37中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止皮层萎缩(例如，有效防止皮层体积相对于基线皮层体积减少)任选地持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
39.如权利要求38所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止治疗的50-67岁患者的皮层萎缩的量和给药方案施用于该患者，其中皮层萎缩由该患者的皮层体积相对于基线减少超过5％来指示。
40.如权利要求38或39所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止皮层萎缩持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
41.如权利要求35-40中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中萎缩(例如，体积减小)通过MRI容积测定法测量。
42.如权利要求1-41中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效减缓治疗的50-67岁患者中的患者认知衰退速率的量和给药方案施用于该患者。
43.如权利要求42所述使用的免疫原性组合物，其中该患者的认知衰退速率使用以下来测量：临床痴呆评定量表记录总和(CDR-SB)测试、阿尔茨海默病合作研究轻度认知障碍日常生活活动(ADCS-MCI-ADL)问卷、简易精神状态检查(MMSE)和/或认知成套测验，该认知成套测验包括Cogstate国际购物清单任务、Cogstate一卡学习和一卡返任务、字母流利度测试和类别流利度测试和/或数字符号编码测试。
44.如权利要求43所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止该患者的CDR-SB测试得分相对于该患者的基线CDR-SB测试得分增加超过4任选地持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
45.如权利要求43或44所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止该患者的MMSE得分相对于该患者的基线MMSE得分下降超过7分，优选地有效防止下降超过6.5分任选地持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
46.如权利要求43-45中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效防止该患者的ADCS MCI ADL问卷得分相对于该患者的基线ADCS MCIADL问卷得分下降超过14分，优选地有效防止下降超过13.5分任选地持续至少两年的量和给药方案施用于该患者。
47.如权利要求1-46中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该患者具有至少一个ApoE-ε4等位基因。
48.如权利要求1-47中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中，治疗前，该患者的MMSE得分是20-26，任选地24-26。
49.如权利要求1-48中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物处于以下给药方案，该给药方案包括按月的剂量，任选地持续六个月。
50.如权利要求49所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含一个或多个用于在初始按月给药方案之后施用的加强剂。
51.如权利要求50所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含至少五个加强剂。
52.如权利要求50或51所述使用的免疫原性组合物，其中这些加强剂每三个月施用一次。
53.如权利要求1-52中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含一个或多个剂量，该剂量包含至少约20μg的该免疫原性肽(任选地至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的该免疫原性肽)。
54.如权利要求53所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含一个或多个剂量，该剂量包含约20μg-50μg的该免疫原性肽。
55.如权利要求54所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含一个或多个剂量，该剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
56.如权利要求55所述使用的免疫原性组合物，其中每个剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
57.如权利要求1-56中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物以5个剂量、6个剂量、7个剂量、8个剂量、9个剂量、10个剂量、11个剂量、12个剂量、13个剂量、14个剂量、15个剂量、20个剂量、25个剂量、50个剂量、或100个剂量施用。
58.如权利要求1-57中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物以按月(任选地4周)间隔的一个或多个剂量(任选地六个剂量)随后以20周间隔的一个或多个剂量(任选地，五个剂量、六个剂量或七个剂量)进行施用。
59.如权利要求1-58中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含载剂，并且其中该载剂包含血清白蛋白；钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段；免疫球蛋白分子；甲状腺球蛋白；卵清蛋白；破伤风类毒素；来自另一种病原细菌的类毒素；减毒毒素衍生物；细胞因子，例如IL-1、IL-1α和IL-1β；IL-2；IFNγ；IL-10；GM-CSF；或趋化因子，例如MIP1α、MIP1β和RANTES。
60.如权利要求59所述使用的免疫原性组合物，其中该载剂是KLH或其片段。
61.如权利要求60所述使用的免疫原性组合物，其中该KLH或其片段通过马来酰亚胺接头与该免疫原性肽偶联，其中任选地该马来酰亚胺接头是N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-GMBS)。
62.如权利要求1-61中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含佐剂。
63.如权利要求62所述使用的免疫原性组合物，其中该佐剂包含铝化合物。
64.如权利要求63所述使用的免疫原性组合物，其中该铝化合物包含氢氧化铝(Al(OH)3)。
65.如权利要求1-64中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
66.如权利要求1-65中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽包含SEQID NO:2。
67.如权利要求1-66中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含以下：通过马来酰亚胺接头(任选地，磺基-GMBS)与KLH偶联的包含SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和体积约为0.3mL的磷酸盐缓冲液。
68.如权利要求1-65中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽包含SEQID NO:1。
69.如权利要求1-65和68中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽由SEQ ID NO:1和该序列的C-末端或N-末端的来自tau同种型2N4R中相邻氨基酸的多达5个另外氨基酸组成。
70.如权利要求1-67中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽由SEQID NO:2和该序列的C-末端或N-末端的来自tau同种型2N4R中相邻氨基酸的多达5个另外氨基酸组成。
71.如权利要求1-65中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽由SEQID NO:1组成。
72.如权利要求1-65中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽由SEQID NO:2组成。
73.一种免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含免疫原性肽，该免疫原性肽包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，该免疫原性组合物用于在治疗有需要的患者的阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍中使用，该治疗包括：
(a)确定该患者中神经丝轻链(NfL)的量；
(b)施用一个或多个剂量的该免疫原性组合物；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中NfL的量；
(d)比较来自步骤(c)的治疗后的量与来自步骤(a)的治疗前的量，其中NfL的改变的量表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
74.如权利要求73所述使用的免疫原性组合物，其中在施用一个或多个剂量的该免疫原性组合物后两年，NfL的量与基线相比增加不超过约3.2pg/mL。
75.一种免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含免疫原性肽，该免疫原性肽包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，该免疫原性组合物用于在治疗有需要的患者的阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍中使用，该治疗包括：
(a)确定该患者中神经粒蛋白的存在和/或量；
(b)施用一个或多个剂量的该免疫原性组合物；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中神经粒蛋白的量；
(d)比较来自步骤(c)的治疗后的量与来自步骤(a)的治疗前的量，其中神经粒蛋白的改变的量表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
76.一种免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含免疫原性肽，该免疫原性肽包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，该免疫原性组合物用于在治疗有需要的患者的阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍中使用，该治疗包括：
(a)确定该患者的简易精神状态检查(MMSE)得分；
(b)将来自步骤(a)的得分与阈值得分进行比较，其中任选地，该阈值得分是20-26；
(c)选择该患者进行治疗，其中该患者的MMSE得分高于该阈值；
(d)施用一个或多个剂量的该免疫原性组合物；
(e)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者的MMSE得分；
(f)比较来自步骤(e)的治疗后的MMSE得分与来自步骤(a)的治疗前的MMSE得分，其中改变的MMSE得分表示治疗功效；以及
(g)当该患者在步骤(f)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
77.一种免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含免疫原性肽，该免疫原性肽包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，该免疫原性组合物用于在治疗有需要的患者的阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍中使用，该治疗包括：
(a)确定该患者中的AD生物标志物特征(任选地，总tau蛋白>400pg/mL；pT181 tau蛋白>60pg/mL；Aβ42<600pg/mL；和Aβ42:Aβ40比率<0.089中的一个或多个)；
(b)施用一个或多个剂量的该免疫原性组合物；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中的AD生物标志物特征；
(d)将来自步骤(c)的治疗后的生物标志物特征与来自步骤(a)的治疗前的生物标志物特征进行比较，其中改变的生物标志物特征表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
78.如权利要求77所述使用的免疫原性组合物，其中，该免疫原性组合物施用后两年，pT181与基线相比降低至少8.1pg/mL和/或pT217与基线相比降低至少69.2pg/mL和/或总tau与基线相比降低至少71.8pg/mL，和/或Aβ40与基线相比降低至少888pg/mL。
79.一种免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含免疫原性肽，该免疫原性肽包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，该免疫原性组合物用于在治疗有需要的患者的阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍中使用，该治疗包括：
(a)确定根据该患者的脑MRI评估的内侧颞叶萎缩的体积；
(b)如果内侧颞叶萎缩高于阈值(任选地，Scheltens得分≥2)，则施用一个或多个剂量的该免疫原性组合物；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者的颞叶萎缩的体积；
(d)比较在步骤(c)中治疗后评估的颞叶萎缩与在步骤(a)中治疗前评估的颞叶萎缩，其中改变的颞叶萎缩表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
80.如权利要求73-79中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效产生以下的量和给药方案施用于该患者
(a)针对病理性tau的抗体的抗体滴度至少100ng/mL；和/或
(b)针对p108 tau肽的抗体的抗体滴度至少100ng/mL。
81.如权利要求73-79中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物被配制用于以有效产生以下的量和给药方案施用于该患者
(a)针对病理性tau的抗体的平均抗体滴度至少100ng/mL持续至少两年；和/或
(b)针对p108 tau肽的抗体的平均抗体滴度至少100ng/mL持续至少两年。
82.如权利要求73-81中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽诱导至少一种抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd是约10nM或更小，任选地约4.2nM或更小，进一步任选地约4.2nM至约0.01nM。
83.如权利要求82所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽诱导至少一种抗体，其特征在于针对病理性tau的Kd是约1nM或更小，任选地约1nM至约0.01nM。
84.如权利要求80-83中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中病理性tau包含tau151-391/4R。
85.如权利要求73-84中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中，治疗前，该患者年龄是50-85岁。
86.如权利要求73-85中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含一个或多个剂量，该剂量包含至少约20μg的该免疫原性肽(任选地至少约30μg、至少约40μg或至少约50μg的该免疫原性肽)。
87.如权利要求86所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含一个或多个剂量，该剂量包含约20μg-50μg的该免疫原性肽。
88.如权利要求87所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含一个或多个剂量，该剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
89.如权利要求88所述使用的免疫原性组合物，其中每个剂量包含约40μg的该免疫原性肽。
90.如权利要求73-89中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含载剂，并且其中该载剂包含血清白蛋白；钥孔戚血蓝蛋白(KLH)或其片段；免疫球蛋白分子；甲状腺球蛋白；卵清蛋白；破伤风类毒素；来自另一种病原细菌的类毒素；减毒毒素衍生物；细胞因子，例如IL-1、IL-1α和IL-1β；IL-2；IFNγ；IL-10；GM-CSF；或趋化因子，例如MIP1α、MIP1β和RANTES。
91.如权利要求90所述使用的免疫原性组合物，其中该载剂是KLH或其片段。
92.如权利要求91所述使用的免疫原性组合物，其中该KLH或其片段通过马来酰亚胺接头与该免疫原性肽偶联，其中任选地该马来酰亚胺接头是N-γ-马来酰亚胺基丁酰基-氧基磺基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-GMBS)。
93.如权利要求73-92中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含佐剂。
94.如权利要求93所述使用的免疫原性组合物，其中该佐剂包含铝化合物。
95.如权利要求94所述使用的免疫原性组合物，其中该铝化合物包含氢氧化铝(Al(OH)3)。
96.如权利要求73-95中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物进一步包含磷酸盐缓冲液，任选地该缓冲液体积约为0.3mL。
97.如权利要求73-96中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽包含SEQ ID NO:2。
98.如权利要求73-97中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物包含以下：通过马来酰亚胺接头(任选地，磺基-GMBS)与KLH偶联的包含SEQ ID NO:2的免疫原性肽、约0.5mg铝(Al3+)和体积约为0.3mL的磷酸盐缓冲液。
99.如权利要求73-96中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1。
100.如权利要求73-96和99中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽由SEQ ID NO:1和该序列的C-末端或N-末端的来自tau同种型2N4R中相邻氨基酸的多达5个另外氨基酸组成。
101.如权利要求73-98中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽由SEQID NO:2和该序列的C-末端或N-末端的来自tau同种型2N4R中相邻氨基酸的多达5个另外氨基酸组成。
102.如权利要求73-96中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽由SEQID NO:1组成。
103.如权利要求73-96中任一项所述使用的免疫原性组合物，其中该免疫原性肽由SEQID NO:2组成。
104.一种免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含免疫原性肽，该免疫原性肽包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，该免疫原性组合物用于在治疗有需要的患者的阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍中使用，该治疗包括：
(a)确定该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；
(b)施用一个或多个剂量的该免疫原性组合物；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的存在和/或量；
(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤(a)的治疗前的存在和/或量，其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR191-5p和hsa-miR-23a-3p中的一种或多种的改变的量表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
105.一种免疫原性组合物，该免疫原性组合物包含免疫原性肽，该免疫原性肽包含SEQID NO:1或SEQ ID NO:2，该免疫原性组合物用于在治疗有需要的患者的阿尔茨海默病(AD)或轻度认知障碍中使用，该治疗包括：
(a)确定该患者中一种或多种代谢物的存在和/或量；
(b)施用一个或多个剂量的该免疫原性组合物；
(c)在施用该一个或多个剂量后，确定该患者中一种或多种代谢物的存在和/或量；
(d)比较来自步骤(c)的治疗后的存在和/或量与来自步骤(a)的治疗前的存在和/或量，其中神经粒蛋白的改变的量表示治疗功效；以及
(e)当该患者在步骤(d)中表现出治疗功效时，施用一个或多个另外剂量的该免疫原性组合物。
106.一种诊断患有阿尔茨海默病的患者的方法，该方法包括检测该患者或来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或量，其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明该受试者中的阿尔茨海默病；以及诊断该患者中阿尔茨海默病的存在或不存在。
107.一种诊断患有阿尔茨海默病的患者的方法，该方法包括检测该患者血浆、血清或脑脊液(CSF)中2,4-二羟基丁酸、磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂和/或甾醇存在和/或量，其中一种或多种代谢物的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明受该试者中的阿尔茨海默病；以及诊断该患者中阿尔茨海默病的存在或不存在。
108.如权利要求106或107所述的方法，该方法进一步包括向诊断患有阿尔茨海默病的患者施用包含免疫原性肽的免疫原性组合物，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2。
109.一种用于选择患有阿尔茨海默病的患者以用包含免疫原性肽的免疫原性组合物治疗的方法，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，该方法包括：
(a)检测该患者或来自该患者的样品中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或量；
(b)与对照样品或阈值进行比较，其中hsa-let-7a-5p、hsa-miR-10a-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-103a-3p、hsa-miR-191-5p、hsa-miR-374a-5p、hsa-miR-26a-5p、hsa-miR-107、hsa-miR-15a-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-224-5p、hsa-miR-18a-5p、hsa-miR-23a-3p、hsa-miR-26b-5p、和hsa-miR-21-5p中的一种或多种的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明该受试者中的阿尔茨海默病；以及
(c)基于步骤(b)选择该患者进行治疗。
110.一种用于选择患有阿尔茨海默病的患者以用包含免疫原性肽的免疫原性组合物治疗的方法，该免疫原性肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2，该方法包括：
(a)检测该患者血浆、血清或脑脊液(CSF)中2,4-二羟基丁酸、磷脂、磷脂酰胆碱、鞘磷脂和/或甾醇存在和/或量；
(b)与对照样品或阈值进行比较，其中一种或多种代谢物的存在和/或相对于对照样品中的量或阈值改变的量表明受该试者中的阿尔茨海默病；以及
(c)基于步骤(b)选择该患者进行治疗。
111.如权利要求109或权利要求110所述的方法，该方法进一步包括将该免疫原性组合物施用于选定的患者。
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