CN114324723A - 一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法 - Google Patents
一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114324723A CN114324723A CN202111538291.6A CN202111538291A CN114324723A CN 114324723 A CN114324723 A CN 114324723A CN 202111538291 A CN202111538291 A CN 202111538291A CN 114324723 A CN114324723 A CN 114324723A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- radish
- glucoraphanin
- thioglycoside
- detection method
- detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，所述种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法包括：从萝卜组织中用提取溶剂进行提取，复溶后得到检测液，将所述检测液采用液相‑质谱联用仪进行检测；其中，液相‑质谱联用仪的质谱检测采用ESI负离子模式，色谱检测采用反向色谱柱。与现有技术相比，本发明的有益效果在于：通过负离子模式，反向色谱柱对萝卜组织进行液质检测，省去脱硫过程，耗时短，操作程序简单，检测时可以检测完全的硫代葡萄糖苷结构，检测结果更为准确。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体涉及一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法。
背景技术
硫苷广泛存在于十字花科植物中，如萝卜、甘蓝、辣根、白菜等。硫苷降解产物具有抗癌、杀菌、消炎的作用，是一种重要的植物功能成分。萝卜是十字花科萝卜属一二年生草本植物，是主要根菜类蔬菜之一。
当前普遍采用及国际标准化组织(ISO)推荐的是HPLC法，但是由于硫代葡萄糖苷中含有的硫酸根离子使硫代葡萄糖苷分子具有很强的极性，从而不利于HPLC分析。因此在用HPLC检测时，硫代葡萄糖苷粗提液必须经过脱硫过程来脱去硫酸根离子，而目前采用的葡聚糖凝胶和硫酸酯酶药品脱硫酸根，脱硫耗时长、过程繁琐。因此建立高效实用的快速鉴定硫苷方法十分必要。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法。
具体技术方案如下：
一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其不同之处在于，所述种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法包括：
从萝卜组织中用提取溶剂进行提取，复溶后得到检测液，将所述检测液采用液相-质谱联用仪进行检测；
其中，液相-质谱联用仪的质谱检测采用ESI负离子模式，色谱检测采用反向色谱柱。
进一步，所述萝卜组织为萝卜肉质根或萝卜叶。
进一步，对所述萝卜组织的提取方法为：先对萝卜组织进行冻干，称取冻干样磨成粉末，加入预热的提取溶剂，加入内标，涡旋混匀后水浴，随后震荡，离心，取上清，吹干，得到提取样品。
进一步，提取时将提取溶剂加热至70℃～80℃后进行恒温水浴；所述提取溶剂为甲醇，提取时间为10min～20min；提取试剂与萝卜组织的比例为(0.08～0.12)ml∶0.1g。
进一步，震荡的转速为200rmp；震荡的时间为15min；离心的转速为12000rmp～15000。
进一步，采用8％～12％甲醇进行复溶后，再用滤膜过滤得到所述检测液。
进一步，液相-质谱联用仪进行检测的过程中使用A流动相与B流动相，所述流动相A为含体积比为0.1％甲酸的水溶液，所述流动相B为含体积比为0.1％甲酸的乙腈溶液。
进一步，所述色谱柱为SHIMADZU Shim-pack GIST C18-AQ，2.1mm×100mm，1.9μm。
进一步，液相-质谱的色谱条件为：进样量：2μL，柱温：40℃，流速：0.3mL/min，波长为229nm；液相-质谱的质谱条件为：m/z：100-1050Da，鞘气流量40bar，辅助气体流量15bar，吹扫气流速0，喷雾电压3.0kV，毛细管温度350℃，S镜头射频电平55.0eV，辅助气体加热器温度350℃。
进一步，所述硫代葡萄糖苷包括4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫苷、4-甲硫基-3-丁烯基硫苷、庚基硫苷、4-甲硫基丙基硫苷、4-甲基亚磺酰丁基硫苷、3-吲哚甲基硫苷、4-羟基-3-吲哚甲基硫苷、4-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷、1-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷中的至少一种。
进一步，采用液相-质谱联用仪进行检测后根据质荷比、硫代葡萄糖苷及特征离子判断化合物，所述化合物的质荷比及硫代葡萄糖苷特征离子如下表所示：
| 化学物 | 质荷比 | 特征离子 |
| 黑芥子硫苷酸钾 | 358 | 74.99,96.96，259 |
| 4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基 | 434 | 74.99,96.96，259 |
| 4-甲硫基-3-丁烯基硫苷 | 418 | 74.99,96.96，259 |
| 庚基硫苷 | 416 | 74.99,96.96，259 |
| 4-甲硫基丙基硫苷 | 406 | 74.99,96.96，259 |
| 4-甲基亚磺酰丁基硫苷 | 436 | 74.99,96.96，259 |
| 3-吲哚甲基硫苷 | 447 | 74.99,96.96，259 |
| 4-羟基-3-吲哚甲基硫苷 | 463 | 74.99,96.96 |
| 4-甲氧基-3-吲哚甲基硫 | 477 | 74.99,96.96，259 |
| 1-甲氧基-3-吲哚甲基硫 | 477 | 74.99,96.96，259 |
。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
(1)通过负离子模式，反向色谱柱对萝卜组织进行液质检测，省去脱硫过程，耗时短，操作程序简单，检测时可以检测完全的硫代葡萄糖苷结构，检测结果更为准确，且将样品提取后进行复溶，更加利于去除其中的杂质，使目标峰更加突出；
(2)提取试剂与萝卜组织的比例控制为(0.08～0.12)ml∶0.1g，可将目标测试物提取的更加完全。
(3)采用特征离子质荷比以及硫代葡萄糖苷特征离子进行判断，可以一次性检测4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫苷、4-甲硫基-3-丁烯基硫苷、庚基硫苷、4-甲硫基丙基硫苷、4-甲基亚磺酰丁基硫苷、3-吲哚甲基硫苷、4-羟基-3-吲哚甲基硫苷、4-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷、1-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷多种硫代葡萄糖苷化合物。
附图说明
图1为实施例1萝卜中硫苷检测色谱图。
图2为实施例2萝卜中硫苷检测色谱图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例中，采用成熟的萝卜肉质根进行硫苷检测
步骤(1)所用材料为成熟的萝卜肉质根，采集时液氮速冻，随后冻干；
步骤(2)，中采用的提取溶剂为预热至75℃80％甲醇，加入10μL20mM内标(sinigrin黑芥子硫苷酸钾)，提取温度75℃，水浴时间15min，随后200rmp震荡15min，13000rmp离心，提取试剂与材料的比例为1mL∶0.1g，取上清，吹干，得到提取样品，采用200μL10％甲醇进行复溶后，用0.22μm微孔滤膜过滤再进行上机检测。
步骤(3)，上机检测，检测条件如下：
仪器：Thermo Fisher Q Exactive Plus超高效液质联用仪
进样量：2μL；柱温：40℃；流动相A：ddH2O(含体积比为0.1％甲酸)；流动相B：乙腈(含体积比为0.1％甲酸)；流速：0.3mL/min；采用岛津超高效液相色谱柱[SHIMADZU Shim-pack GIST C18-AQ(2.1mm×100mm，1.9μm)](反向色谱柱)；ESI负离子模式；m/z：100-1050Da；鞘气流量40bar；辅助气体流量15bar；吹扫气流速0；喷雾电压3.0kV；毛细管温度350℃；S镜头射频电平55.0eV；辅助气体加热器温度350℃；波长：229nm。根据保留时间和二级质谱信息(离子质荷比以及硫代葡萄糖苷特征离子)分析硫苷组分，其结果如表1以及图1所示。
表1实施例1检测结果
实施例2
本例中，采用成熟的萝卜叶进行硫苷检测步骤(1)所用材料为成熟的萝卜叶，采集时液氮速冻，随后冻干；
步骤(1)所用材料为成熟的萝卜叶，采集时液氮速冻，随后冻干；
步骤(2)，中采用的提取溶剂为预热至75℃80％甲醇，加入10μL20mM内标(sinigrin黑芥子硫苷酸钾)，提取温度75℃，水浴时间15min，随后200rmp震荡15min，13000rmp离心，提取试剂与材料的比例为1mL∶0.1g，取上清，吹干，得到提取样品，采用200μL10％甲醇进行复溶后，用0.22μm微孔滤膜过滤再进行上机检测。
步骤(3)，上机检测，检测条件如下：
仪器：Thermo Fisher Q Exactive Plus超高效液质联用仪
进样量：2μL；柱温：40℃；流动相A：ddH2O(含体积比为0.1％甲酸)；流动相B：乙腈(含体积比为0.1％甲酸)；流速：0.3mL/min；采用岛津超高效液相色谱柱[SHIMADZU Shim-pack GIST C18-AQ(2.1mm×100mm，1.9μm)](反向色谱柱)；ESI负离子模式；m/z：100-1050Da；鞘气流量40bar；辅助气体流量15bar；吹扫气流速0；喷雾电压3.0kV；毛细管温度350℃；S镜头射频电平55.0eV；辅助气体加热器温度350℃；波长：229nm。根据保留时间和二级质谱信息(离子质荷比以及硫代葡萄糖苷特征离子)分析硫苷组分，其结果如表2以及图2所示。
表2实施例2检测结果
需要说明的是，表1与表2为定型检测依据，色谱实际检测结果可以不与标准完全一致，在误差范围内检测结果均可以视为判断物质的依据。
综上，从本发明实施例可以看出，采用本发明方法可以检测出4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫苷、4-甲硫基-3-丁烯基硫苷、庚基硫苷、4-甲硫基丙基硫苷、4-甲基亚磺酰丁基硫苷、3-吲哚甲基硫苷、4-羟基-3-吲哚甲基硫苷、4-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷、1-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，所述种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法包括：
从萝卜组织中用提取溶剂进行提取，复溶后得到检测液，将所述检测液采用液相-质谱联用仪进行检测；
其中，液相-质谱联用仪的质谱检测采用ESI负离子模式，色谱检测采用反向色谱柱。
2.根据权利要求1所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，所述萝卜组织为萝卜肉质根或萝卜叶。
3.根据权利要求1所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，对所述萝卜组织的提取方法为：先对萝卜组织进行冻干，称取冻干样磨成粉末，加入预热的提取溶剂，加入内标，涡旋混匀后水浴，随后震荡，离心，取上清，吹干，得到提取样品。
4.根据权利要求1或3所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，提取时将提取溶剂加热至70℃～80℃后进行恒温水浴；所述提取溶剂为甲醇，提取时间为10min～20min；提取试剂与萝卜组织的比例为(0.08～0.12)ml∶0.1g。
5.根据权利要求3所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，震荡的转速为200rmp；震荡的时间为15min；离心的转速为12000rmp～15000。
6.根据权利要求1所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，采用8％～12％甲醇进行复溶后，再用滤膜过滤得到所述检测液。
7.根据权利要求1所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，液相-质谱联用仪进行检测的过程中使用A流动相与B流动相，所述流动相A为含体积比为0.1％甲酸的水溶液，所述流动相B为含体积比为0.1％甲酸的乙腈溶液。
8.根据权利要求1所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，液相-质谱的色谱条件为：进样量：2μL，柱温：40℃，流速：0.3mL/min，波长为229nm；液相-质谱的质谱条件为：m/z：100-1050Da，鞘气流量40bar，辅助气体流量15bar，吹扫气流速0，喷雾电压3.0kV，毛细管温度350℃，S镜头射频电平55.0eV，辅助气体加热器温度350℃。
9.根据权利要求1～8所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，所述硫代葡萄糖苷包括4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫苷、4-甲硫基-3-丁烯基硫苷、庚基硫苷、4-甲硫基丙基硫苷、4-甲基亚磺酰丁基硫苷、3-吲哚甲基硫苷、4-羟基-3-吲哚甲基硫苷、4-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷、1-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷中的至少一种。
10.根据权利要求1所述的萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法，其特征在于，采用液相-质谱联用仪进行检测后根据质荷比及硫代葡萄糖苷特征离子判断化合物，所述化合物的质荷比级硫代葡萄糖苷特征离子如下表所示：
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111538291.6A CN114324723A (zh) | 2021-12-14 | 2021-12-14 | 一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111538291.6A CN114324723A (zh) | 2021-12-14 | 2021-12-14 | 一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114324723A true CN114324723A (zh) | 2022-04-12 |
Family
ID=81053584
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111538291.6A Pending CN114324723A (zh) | 2021-12-14 | 2021-12-14 | 一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114324723A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009103680A (ja) * | 2007-10-01 | 2009-05-14 | Kirin Holdings Co Ltd | 液体クロマトグラフィーを用いたグルコシノレート類の分析及び精製法 |
| CN111624270A (zh) * | 2020-05-26 | 2020-09-04 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种菜籽硫代葡萄糖苷的提取检测方法 |
| CN112569270A (zh) * | 2020-12-18 | 2021-03-30 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种独行菜硫代葡萄糖苷提取物及其制备方法 |
| CN113391001A (zh) * | 2021-07-12 | 2021-09-14 | 上海市农业科学院 | 一种硫代葡萄糖苷类化合物的检测方法 |
-
2021
- 2021-12-14 CN CN202111538291.6A patent/CN114324723A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009103680A (ja) * | 2007-10-01 | 2009-05-14 | Kirin Holdings Co Ltd | 液体クロマトグラフィーを用いたグルコシノレート類の分析及び精製法 |
| CN111624270A (zh) * | 2020-05-26 | 2020-09-04 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种菜籽硫代葡萄糖苷的提取检测方法 |
| CN112569270A (zh) * | 2020-12-18 | 2021-03-30 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种独行菜硫代葡萄糖苷提取物及其制备方法 |
| CN113391001A (zh) * | 2021-07-12 | 2021-09-14 | 上海市农业科学院 | 一种硫代葡萄糖苷类化合物的检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| NIEVES BAENAS ET AL: "Biotic Elicitors Effectively Increase the Glucosinolates Content in Brassicaceae Sprouts", JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY, vol. 62, pages 1881, XP055589108, DOI: 10.1021/jf404876z * |
| 杨艳婧 等: "西兰花籽中完形硫代葡萄糖苷的HPLC-MS-MS鉴定", 安徽农业科学, vol. 37, no. 34, pages 16754 - 16756 * |
| 郑姝宁 等: "羽衣甘蓝和白菜型油菜硫代葡萄糖苷超高效液相色谱—飞行时间质谱分析方法", 园艺学报, vol. 43, no. 12, pages 2481 - 2490 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Condrat et al. | Qualitative and quantitative analysis of gallic acid in Alchemilla vulgaris, Allium ursinum, Acorus calamus and Solidago virga-aurea by chip-electrospray ionization mass spectrometry and high performance liquid chromatography | |
| CN109001335B (zh) | 用于测定南极磷虾中17种类固醇激素的方法 | |
| CN113391001B (zh) | 一种硫代葡萄糖苷类化合物的检测方法 | |
| CN114544312A (zh) | 用于分析使用吸附材料从样品中提取的分析物的系统和方法 | |
| JP2009103680A (ja) | 液体クロマトグラフィーを用いたグルコシノレート類の分析及び精製法 | |
| Tonde et al. | Quantitative estimation of bacoside a in polyherbal memory enhancer syrup for memory boosting activity using hptlc method | |
| CN104330516B (zh) | 一种同时测定山药中尿囊素和腺苷含量的方法 | |
| CN114324723A (zh) | 一种萝卜硫代葡萄糖苷定性检测方法 | |
| CN111624270A (zh) | 一种菜籽硫代葡萄糖苷的提取检测方法 | |
| CN104165947B (zh) | 一种定量测定植物中生长素与脱落酸含量的方法 | |
| CN112362798A (zh) | 一种化妆品中大麻二酚的检测方法 | |
| CN107607654B (zh) | 一种核桃花中黄酮类化学成分的分析方法 | |
| CN111879862B (zh) | 一种gc-ms-ssdmc法同时测定油料中游离态甾醇及甾醇糖苷的方法 | |
| CN112147249B (zh) | 一种杨梅酒中31种有效成分的UPC2-PDA-Q-Tof/MS检测方法 | |
| CN108717084A (zh) | 熊胆粉中熊去氧胆酸含量的液相色谱-质谱检测方法 | |
| CN106841461A (zh) | 一种基于疏水离子交换固相萃取的戒烟制品中n‑亚硝胺的提取及测定方法 | |
| CN113237982A (zh) | 一种羟基类代谢物的衍生化方法及非靶向代谢组学高效分析方法 | |
| Mpofu et al. | Determination of Catechins from Elephantorrhiza elephantina and Pentanisia prunelloides using Voltammetry and UV spectroscopy | |
| CN111650304A (zh) | 一种快速筛查硫熏款冬花的方法 | |
| CN113092627B (zh) | 一种化妆品中大麻素成分的检测方法 | |
| CN112461959A (zh) | 一种鉴别夏枯草蜂蜜的方法及其应用 | |
| Chu et al. | Determination of vincristine and vinblastine in Catharanthus roseus plants by high performance liquid chromatography/electrospray ionization mass spectrometry | |
| CN113866338B (zh) | 一种乳膏剂中地肤子鉴别方法 | |
| CN112730008B (zh) | 一种离子影像介导化合物提取识别系统及方法 | |
| CN116399979A (zh) | 一种同时分离榆树叶皮果中六种酚类物质的方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |