CN114324624B - 一种改进的氟比洛芬酯注射液的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体提供了一种氟比洛芬酯注射液的检测方法，所述方法包括采用高效液相色谱法对其中的相关物质进行检测，所述相关物质为杂质4‑OHB、2‑OHP、4‑ACB或ALE，或它们中的两种或两种以上的组合。本发明改进的氟比洛芬酯脂注射液的检测方法为提高药品质量、提升用药安全提供了新的检测方法。

Description

一种改进的氟比洛芬酯注射液的检测方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种氟比洛芬酯注射液的检测方法。

背景技术

氟比洛芬酯是氟比洛芬的前体，是一种在临床上应用十分广泛的非甾体抗炎药物，具有解热、抗炎以及止痛的作用。其作用机理主要是抑制花生四烯酸环氧酶的活性，从而抑制疼痛和炎症反应的前列腺素的合成，起到镇痛的作用。其化学名为(±)2-(2-氟-4-联苯基)丙酸-1-乙酰氧基乙酯，结构式如下：

氟比洛芬酯脂微球注射液是通过药物传递以脂质微球为药物载体，将氟比洛芬酯包裹在里面的新型制剂，是目前唯一可用于静脉注射的非类固醇制剂。氟比洛芬酯脂微球注射液的特点主要有以下几方面:①具有很强的靶向作用，可以使包裹的药物在病发部位发挥疗效；②可以控制释放药物，使药物疗效时间延长，减少药物的使用剂量；③易于跨越细胞膜，加快药物的吸收，缩短药物起效时间；④可以用于静脉注射，避免了口服给药对消化道黏膜的损伤。然而脂微球注射液为非均相液体制剂，属于热力学不稳定体系。在制备过程中，因为高温灭菌可能出现破乳、分层等现象，破乳后部分主药进入水中会导致含量降低；在长期放置的过程中易出现粒径增大、乳滴团聚等现象，不易储存。同时，氟比洛芬酯易降解生成氟比洛芬和1-羟乙基乙酸酯，1-羟乙基乙酸酯进一步降解成乙酸和甲醛，降解生成氟比洛芬的含量越高，降解生成乙酸和甲醛的量也越高，存在安全性隐患。

专利CN109223712A公开了一种氟比洛芬酯注射用乳剂及其制备方法，在对其产品进行检测时仅仅涉及氟比洛芬的检测，并未对该产品中的其他杂质进行检测。

专利CN102988291B公开了一种氟比洛芬酯脂肪乳注射液组合物及其制备方法，其试验例1为考察成品的灭菌稳定性实验，对灭菌后制剂性状、过氧化值及氟比洛芬进行检测，同样仅仅涉及氟比洛芬的检测，并未对该产品中的其他杂质进行检测。

因此，为更加有效检测氟比洛芬酯微球注射液，以进一步提高产品的质量的要求，开发一种改进的氟比洛芬酯注射液的检测方法，以为全面提高药品质量，提升用药安全是非常必要的。

发明内容

针对以上技术现状，本发明提供一种改进的氟比洛芬酯注射液的检测方法。本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法包括对其中相关杂质进行检测，所述相关杂质为4-OHB,2-OHP,4-ACB或ALE；或它们两种或两种以上的组合。

其中杂质4-OHB(2-氟-4-羟基联苯)的结构为：

杂质2-OHP(1-乙酰氧基-2-(2-氟-4-联苯)-2-羟基丙酸酯)的结构为：

4-ACB(4-乙酰-2-氟联苯)的结构为：

ALE(烯丙基-(2-氟-4-联苯)丙酸酯)的结构为：

上述杂质为已知的化学结构，由于氟比洛芬酯注射液中上述杂质的存在产品中可能带来用药上的风险，检测氟比洛芬酯注射液中上述杂质对于产品质量提升是十分有必要的。

作为实施方案之一，本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法包括检测杂质4-OHB,2-OHP,4-ACB和ALE。

作为实施方案之一，本发明所述方法进一步包括检测相关物质的高效液相检测条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，规格为3.0-5.0mm×100-300mm×3-5μm；优选为3.5-5.0mm×150-250mm×3-5μm；最佳为4.6mm×150mm×5μm；

流动相为乙腈-水-冰醋酸溶液，流动相中有机溶剂乙腈与水的体积比为3:1-1:3，优选为3:2-2:3，最佳为3:2；冰醋酸含量为0.05％-0.3％，优选为0.1％-0.2％，最佳为0.15％；优选乙腈-水-冰醋酸混合液1200：800：3；

柱温：15-50℃，优选为25-40℃，最佳为35℃恒温；流速为0.4-1.0ml/min，优选为0.4-0.6ml/min，最佳为0.6ml/min；

运行时间30-90min，优选30-60min。

本发明方法中，作为实施方案之一，所述氟比洛芬酯注射液中检测出的相关杂质除氟比洛芬，脱氟物外不得超过0.1％，否则所述氟比洛芬酯注射液在质量上不符合相关要求。

作为实施方案之一，本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法进一步包括相关物质的检测，具体包括以下步骤：

1)取待检测样品，置于量瓶中，溶解并稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，作为供试品溶液；

2)分别取各对照品，置于量瓶中，溶解并稀释至刻度，再精密量取上述溶液加入同一容量瓶中，稀释至刻度，即得对照品溶液；

3)取供试品溶液和对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

本发明方法中，作为实施方案之一，所述步骤1)中离心包括但不限于离心转速3000-15000rpm，离心时间5-30min；优选离心转速5000-10000rpm，离心时间8-20min；最佳离心转速8000rpm，离心时间10min。

作为实施方案之一，本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法进一步包括对氟比洛芬酯注射液中的溶血磷脂酰胆碱的检测。

作为实施方案之一，进行氟比洛芬酯注射液中溶血磷脂酰胆碱的检测的高效液相色谱条件为：

填充剂为二羟基键合硅胶，色谱柱规格为250mm×4.6mm，5μm；

流动相为甲醇：冰乙酸500:8-500:12(V/V)，优选甲醇：冰乙酸500:10(V/V)，三乙胺调整pH值至7.0为流动相储备液，流动相储备液-异丙醇按体积比8:2-6:4，优选7.5:2.5-6.5:3.5，最佳7:3配成混合液；

柱温为25℃-35℃，优选为28℃-32℃，最佳为30℃；

流速为0.5ml-1.0ml/min，优选0.6-0.9ml/min，更优选0.7-0.9ml/min，最佳0.8ml/min。

作为实施方案之一，本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法进一步包括溶血磷脂酰胆碱的检测包括以下步骤：

1)待测样品和对照品的制备：

精密量取待检测样品，置于量瓶中，用异丙醇-正己烷(2：1)稀释，摇匀，作为供试品溶液；

精密量取溶血磷脂酰胆碱对照品置于量瓶中，使用三氯甲烷-甲醇(2：1)溶解，然后用异丙醇-正己烷(2：1)稀释制成每1ml中分别含有9.6μg、24μg、38.4μg、48μg、57.6μg的溶液，作为对照品溶液；

2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰胆碱的峰面积，选对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰胆碱的含量。

本发明方法中，作为实施方案之一，所述氟比洛芬酯注射液中检测出的溶血磷脂酰胆碱不得超过2.0mg/ml，否则所述氟比洛芬酯注射液在质量上不符合相关要求。

作为实施方案之一，本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法进一步包括采用高效液相法对其中溶血磷脂酰乙醇胺的检测。

作为实施方案之一，所述检测溶血磷脂酰乙醇胺的高效液相条件为：填充剂为硅胶，规格为250mm×4.6mm，5μm，流动相A相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺：830:170:6:0.6-870:130:4:0.4(V/V)，优选840:160:6:0.6-860:140:4:0.4(V/V)，最佳850:150:5:0.5(V/V)；流动相B相为异丙醇-正己烷：920:130-880:170(V/V)，优选910:140-890:160(V/V)，最佳900:150(V/V)；进行梯度洗脱，柱温为35-45℃，优选38-42℃，最佳40℃；流速为0.68-0.72ml/min,优选0.69-0.71ml/min，最佳0.7ml/min。

作为实施方案之一，本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法进一步包括血磷脂酰乙醇胺的洗脱梯度为：

处理指令：B泵为设定B泵输液所占百分比，Flow为设定系统总流速，Stop为设定系统停止采集。

作为实施方案之一，本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法进一步包括所述溶血磷脂酰乙醇胺的检测包括以下步骤：

1)待测样品和对照品的制备：

精密量取待检测样品，置于量瓶中，用异丙醇-正己烷(2：1)稀释，摇匀，作为供试品溶液；

精密量取溶血磷脂酰胆碱对照品置于量瓶中，使用三氯甲烷-甲醇(2：1)溶解，然后用异丙醇-正己烷(2：1)稀释制成每1ml中分别含有20μg、30μg、40μg、50μg、60μg的溶液，作为对照品溶液；

2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰乙醇胺的峰面积，对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰胆碱的含量。

本发明方法中，作为实施方案之一，所述氟比洛芬酯注射液中检测出的溶血磷脂酰乙醇胺不得超过0.5mg/ml，否则所述氟比洛芬酯注射液在质量上不符合相关要求。

作为实施方案之一，本发明方法中可以进一步包括氟比洛芬酯注射液的其他常规检测，本发明所述氟比洛芬酯注射液的检测方法还进一步包括但不限于标识量、pH值、过氧化值、游离脂肪酸、氟比洛芬、甲氧基苯胺值、渗透压摩尔浓度比、相对密度、粒度和粒度分布、细菌内毒素的检测方法。

其中所述标识量、pH值、过氧化值、游离脂肪酸、氟比洛芬、甲氧基苯胺值、渗透压摩尔浓度比、相对密度、粒度和粒度分布、细菌内毒素的检测方法均为本领域已记载，例如所述氟比洛芬酯注射液的检测方法已有国家质量标准或中华人民共和国药典2015年版四部中所记载。

作为实施方之一，在进行标识量检测时，含氟比洛芬酯应为标示量的90～110.0％。

本发明方法中，作为实施方案之一，所述氟比洛芬酯注射液中检测出的甲氧基苯胺值不得超过10，否则所述氟比洛芬酯注射液在质量上不符合相关要求。

作为实施方案之一，进行pH检测时，按照中国药典2015年版四部通则0631方法检查，所述氟比洛芬酯注射液pH值应为4.5-6.5。

作为实施方案之一，其中所述过氧化值检测方法为：精密量取待检测样品5ml，依照中国药典2015年版四部通则0713方法检查，同时以水做空白试验，供试品消耗硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)的毫升数不得大于0.2ml。

作为实施方案之一，其中所述渗透压摩尔浓度比检测方法为：取待检测样品，依照中国药典2015年版四部通则0632方法检查，渗透压比应为0.9-1.3。

作为实施方案之一，其中所述相对密度检测方法为：取待检测样品，依照中国药典2015年版四部通则0601方法检查，相对密度应为0.997-0.999。

作为实施方案之一，其中所述粒度和粒度分布检测方法为：取待检测样品适量，依照中国药典2015年版四部通则0982方法检查，用激光散射粒径测定仪进行测定，平均粒径为0.12-0.28μm，90％粒径累积值不得过0.35μm。

作为实施方案之一，其中所述细菌内毒素的检测方法为：取待检测样品，依照中国药典2015年版四部通则1143方法检查，每1mg氟比洛芬酯含内毒素量应小于3EU。

相对于现有氟比洛芬酯注射液的检测方法，本发明新增了相关杂质的检测，使产品的质量更加可控，提高了用药的安全，同时对其中溶血磷脂胆碱和溶血磷脂乙醇胺的检测方法进行了实质性的改进，新的检测方法的时间更短、大幅节约了时间成本。

附图说明

图1为实施例1的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图2为实施例2的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图3为实施例3的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图4为实施例4的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图5为实施例5的供试品氟比洛芬酯脂微球注射液中杂质检测结果的图谱。

图6为实施例5的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图7为实施例6的供试品氟比洛芬酯脂微球注射液中溶血磷脂酰胆碱的检测结果的图谱。

图8为实施例7的供试品氟比洛芬酯脂微球注射液中溶血磷脂酰胆碱的检测结果的图谱。

图9为实施例8的供试品氟比洛芬酯脂微球注射液中溶血磷脂酰乙醇胺的检测结果的图谱。

图10为实施例9的供试品氟比洛芬酯脂微球注射液中溶血磷脂酰乙醇胺的检测结果的图谱。

具体实施方式

以下实施例用于进一步阐述本发明，但不以任何的方式限制本发明的有效范围。

实施例1有关物质对照品的检测的验证

对照品溶液配置：分别称取4种杂质(4-OHB、2-OHP、4-ACB、ALE)及FP对照品各5mg，置于100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，取上述溶液各1ml，加入同一100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，即得对照品溶液；

按照如下条件对对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

色谱柱：Waters Xbridge系列C18 4.6×250mm，5μm颗粒直径

柱温：25℃左右恒温

流动相：乙腈-水-冰醋酸混合液,冰醋酸比例为0.2％

流速：1.0ml/min

运行时间：40min

检测结果：对照品杂质检测图谱参见附图1，保留时间2.5分钟以后杂质对照品峰依次为4-OHB，FP，2-OHP，4-ACB及ALE。

实施例2有关物质对照品的检测的验证

对照品溶液配置：分别称取4种杂质(4-OHB、2-OHP、4-ACB、ALE)及FP对照品各5mg，置于100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，取上述溶液各1ml，加入同一100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，即得对照品溶液；

按照如下条件对对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

色谱柱：内径4.6mm，柱长15cm的不锈钢管内填充5μm液相色谱用ODS

柱温：25℃左右恒温

流动相：乙腈：水＝1:1

流速：1.0ml/min

运行时间：40min

检测结果：对照品杂质检测图谱参见附图2，保留时间2.5分钟以后杂质对照品峰依次为4-OHB，FP，2-OHP，4-ACB及ALE。

实施例3有关物质对照品的检测的验证

对照品溶液配置：分别称取4种杂质(4-OHB、2-OHP、4-ACB、ALE)及FP对照品各5mg，置于100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，取上述溶液各1ml，加入同一100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，即得对照品溶液；

按照如下条件对对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

色谱柱：内径4.6mm，柱长15cm的不锈钢管内填充5μm液相色谱用ODS

柱温：35℃左右恒温

流动相：乙腈-水-冰醋酸混合液(1200∶800∶3)

流速：0.50ml/min

运行时间：40min

离心条件：10000rpm 8分钟

检测结果：对照品杂质检测图谱参见附图3，保留时间2.5分钟以后杂质对照品峰依次为4-OHB，FP，2-OHP，4-ACB及ALE。

实施例4有关物质对照品的检测的验证

对照品溶液配置：分别称取4种杂质(4-OHB、2-OHP、4-ACB、ALE)及FP对照品各5mg，置于100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，取上述溶液各1ml，加入同一100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，即得对照品溶液；

按照如下条件对对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

色谱柱：内径4.6mm，柱长15cm的不锈钢管内填充5μm液相色谱用ODS

柱温：35℃左右恒温

流动相：甲醇-水＝1：1

流速：0.50ml/min

运行时间：40min

检测结果：对照品杂质检测图谱参见附图4，保留时间5.0分钟以后杂质对照品峰依次为4-OHB，FP，2-OHP，4-ACB及ALE。

由实施例1-4的试验结果可知，检测方法中色谱柱的选择，流动相等条件均对检测条件产生重要影响，实施例1中使用了Waters Xbridge系列C18色谱柱，实施例2及实施例4中流动相分别使用了乙腈-水及甲醇-水，检测结果均显示相关杂质无法实现有效分离，当色谱柱采用ODS柱，且流动相为乙腈-水-冰醋酸混合液时，各杂质均能实现有效分离。

实施例5氟比洛芬酯脂微球注射液中有关物质的检测

按照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。

供试品溶液的配置：取氟比洛芬酯脂微球注射液供试品(批号：3E128S，北京泰德制药股份有限公司)1ml，置于10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀,8000rpm离心10min，取上清液，作为供试品溶液；

对照品溶液配置：其他有关物质(4-OHB、2-OHP、4-ACB、ALE)及FP对照品溶液的配置方法：分别称取4种杂质及FP对照品各5mg，置于100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，取上述溶液各1ml，加入同一100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，即得对照品溶液；

色谱条件：

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

色谱柱：内径4.6mm，柱长15cm的不锈钢管内填充5μm液相色谱用ODS

柱温：35℃左右恒温

流动相：乙腈-水-冰醋酸混合液(1200∶800∶3)

流速：0.60ml/min

运行时间：40min

检测结果：

名称	含量
		4-OHB	未检出
2-OHP	未检出
		4-ACB	0.01％
ALE	未检出

检测结果：

氟比洛芬酯脂微球注射液供试品中的杂质检测图谱参见附图5，其中杂质对照品图谱参见附图6。

实施例6氟比洛芬酯脂微球注射液中溶血磷脂酰胆碱的检测

氟比洛芬酯脂微球注射液供试品，批号：3E128S，北京泰德制药股份有限公司

1)待测样品和对照品的制备：

精密量取待检测样品，置于量瓶中，用异丙醇-正己烷(2：1)稀释，摇匀，作为供试品溶液；

精密量取溶血磷脂酰胆碱对照品置于量瓶中，使用三氯甲烷-甲醇(2：1)溶解，然后用用异丙醇-正己烷(2：1)稀释制成每1ml中分别含有9.6μg、24μg、38.4μg、48μg、57.6μg的溶液，作为对照品溶液；

2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰胆碱的峰面积，选对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰胆碱的含量。

色谱条件：

以二羟基键合硅胶为填充剂，色谱柱规格为250mm×4.6mm，5μm，先以甲醇-冰乙酸500:10为基础，用三乙胺调整pH值至7.0的流动相储备液，以流动相储备液-异丙醇7:3混合液为流动相。流动相的流速为0.8ml/min，柱温为30℃，检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为85℃，载气流量为1.6L/min。

检测结果：

供试品溶血磷脂酰胆碱的检测图谱参见图7，供试品中溶血磷脂酰胆碱含量为1.3mg/ml。

本次检测时间为10min。

实施例7氟比洛芬酯脂微球注射液中溶血磷脂酰胆碱的检测

氟比洛芬酯脂微球注射液供试品，批号：2E227P，北京泰德制药股份有限公司

操作步骤同实施例6.

色谱条件：

以二羟基键合硅胶为填充剂，色谱柱规格为规格为250mm×4.6mm，5μm，先以甲醇-冰乙酸500:10为基础，用三乙胺调整pH值至7.0的流动相储备液，以流动相储备液-异丙醇7:3混合液为流动相。流动相的流速为0.9ml/min，柱温为28℃，检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为85℃，载气流量为1.6L/min。

检测结果：样品检测图谱见附图8，溶血磷脂酰胆碱的含量0.961mg/ml。

本次检测时间为10min。

实施例8氟比洛芬酯脂微球注射液中溶血磷脂酰乙醇胺的检测

氟比洛芬酯脂微球注射液供试品，批号：3E128S，北京泰德制药股份有限公司

1)待测样品和对照品的制备：

精密量取待检测样品，置于量瓶中，用异丙醇-正己烷(2：1)稀释，摇匀，作为供试品溶液；

精密量取溶血磷脂酰乙醇胺对照品置于量瓶中，使用三氯甲烷-甲醇(2：1)溶解，然后用用异丙醇-正己烷(2：1)稀释制成每1ml中分别含有20μg、30μg、40μg、50μg、60μg的溶液，作为对照品溶液；

2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰乙醇胺的峰面积，对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰乙醇胺的含量。

色谱条件：

硅胶作为填充剂，色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺：850:150:5:0.5，流动相B为异丙醇-正己烷：900:150，梯度洗脱程序见下表1，柱温40℃，流速为0.7ml/min。检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为75℃，载气流量为1.5L/min。

表1

检测结果：

供试品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱参见图9，供试品中溶血磷脂酰乙醇胺含量为0.3mg/ml。

本次检测时间为35min。

实施例9氟比洛芬酯脂微球注射液中溶血磷脂酰乙醇胺的检测

氟比洛芬酯脂微球注射液供试品，批号：2E227P，北京泰德制药股份有限公司

操作步骤同实施例8

硅胶作为填充剂，色谱柱的规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相A为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺850:150:5:0.5，流动相B为异丙醇-正己烷900:150，梯度洗脱程序见表1，柱温38℃，流速为0.77ml/min。检测器为蒸发光散射检测器，其中载气为氮气，漂移管温度为75℃，载气流量为1.5L/min。

检测结果：供试品溶血磷脂酰乙醇胺的检测图谱参见图10，供试品中溶血磷脂酰乙醇胺的含量为0.346mg/ml。

本次检测时间为35min。

Claims (24)

1.一种氟比洛芬酯注射液的检测方法，其特征在于，所述方法包括对其中相关物质进行检测，所述相关物质为杂质选自2-氟-4-羟基联苯,1-乙酰氧基-2-(2-氟-4-联苯)-2-羟基丙酸酯,4-乙酰-2-氟联苯、烯丙基-(2-氟-4-联苯)丙酸酯中的两种或两种以上的组合；

色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，规格为4.6mm×150mm×5μm；

流动相为乙腈-水-冰醋酸1200：800：3的混合液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱检测条件为：

柱温：15-50℃；流速为0.4-1.0ml/min；运行时间30min-90min。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱检测条件为：

柱温为25-40℃；流速为0.4-0.6ml/min；运行时间为30min-60min。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱检测条件为：柱温为35℃恒温；流速为0.6ml/min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括相关物质的检测包括以下步骤：

1)取待检测样品，置于量瓶中，溶解并稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，作为供试品溶液；

2)分别取各对照品，置于量瓶中，溶解并稀释至刻度，再精密量取上述溶液加入同一容量瓶中，稀释至刻度，即得对照品溶液；

3)取供试品溶液和对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括对其中溶血磷脂酰胆碱的检测，其中所述检测的高效液相色谱条件为：

所述色谱柱为二羟基键合硅胶，规格为250mm×4.6mm，5μm；

以体积比为500:8-500:12的甲醇：冰乙酸，三乙胺调整pH值至7.0为流动相储备液，以流动相储备液-异丙醇按体积比8:2-6:4配成混合液作为流动相；

柱温为25℃-35℃；

流速为0.5ml-1.0ml/min。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述检测的高效液相色谱条件为：流动相中甲醇：冰乙酸的体积比为500:10。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述检测的高效液相色谱条件为：流动相储备液-异丙醇的体积比为7.5:2.5-6.5:3.5。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述检测的高效液相色谱条件为：流动相储备液-异丙醇的体积比为7:3。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述检测的高效液相色谱条件为：

柱温为28℃-32℃；

流速为0.6-0.9ml/min。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述检测的高效液相色谱条件为：

柱温为30℃；

流速为0.7-0.9ml/min。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述检测的高效液相色谱条件为：

流速为0.8ml/min。

13.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括溶血磷脂酰胆碱的检测包括以下步骤：

1)待测样品和对照品的制备：

精密量取待检测样品，置于量瓶中，用体积比为2：1的异丙醇-正己烷稀释，摇匀，作为供试品溶液；

精密量取溶血磷脂酰胆碱对照品置于量瓶中，使用体积比为2：1的三氯甲烷-甲醇溶解，然后用体积比为2：1的异丙醇-正己烷稀释制成每1ml中分别含有9.6μg、24μg、38.4μg、48μg、57.6μg的溶液，作为对照品溶液

2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰胆碱的峰面积，选对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰胆碱的含量。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括对其中溶血磷脂酰乙醇胺的检测，所述检测条件为：填充剂为硅胶，规格为250mm×4.6mm，5μm；

流动相A相为体积比为830:170:6:0.6-870:130:4:0.4的甲醇-水-冰醋酸-三乙胺；

流动相B相为体积比为920:130-880:170的异丙醇-正己烷；进行梯度洗脱；

柱温为35-45℃；

流速为0.6-0.8ml/min,。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述流动相A中甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积比为840:160:6:0.6-860:140:4:0.4。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述流动相A中的甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的体积比为850:150:5:0.5。

17.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述流动相B相中异丙醇-正己烷的体积比为910:140-890:160。

18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述流动相B相中异丙醇-正己烷的体积比为900:150。

19.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述检测的高效液相色谱条件为：

柱温为38-42℃；

流速为0.69-0.77ml/min。

20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述检测的高效液相色谱条件为：

柱温为40℃；

流速为0.7ml/min。

21.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括血磷脂酰乙醇胺的洗脱梯度为：

处理指令：B泵为设定B泵输液所占百分比，Flow为设定系统总流速，Stop为设定系统停止采集。

22.根据权利要求21所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括所述溶血磷脂酰乙醇胺的检测包括以下步骤：

1)待测样品和对照品的制备：

精密量取待检测样品，置于量瓶中，用体积比为2：1的异丙醇-正己烷稀释，摇匀，作为供试品溶液；

精密量取溶血磷脂酰乙醇胺对照品置于量瓶中，使用体积比为2：1的三氯甲烷-甲醇溶解，然后用体积比为2：1的异丙醇-正己烷稀释制成每1ml中分别含有20μg、30μg、40μg、50μg、60μg的溶液，作为对照品溶液；

2)精密量取对照品溶液及供试品溶液，注入液相色谱仪，根据供试品中磷脂酰乙醇胺的峰面积，对照品溶液以浓度的对数和对应峰面积的对数计算线性回归方程，由回归方程计算供试品中溶血磷脂酰胆碱的含量。

23.根据权利要求1～22任一所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括：所述氟比洛芬酯注射液中检测出的相关杂质不得超过0.1％；溶血磷脂酰胆碱不得超过2.0mg/ml；溶血磷脂酰乙醇胺不得超过0.5mg/ml。

24.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还进一步包括氟比洛芬酯注射液中的标识量、pH值、过氧化值、游离脂肪酸、氟比洛芬、渗透压摩尔浓度比、相对密度、粒度和粒度分布、细菌内毒素的检测。

Images