CN114324623B

CN114324623B - 一种氟比洛芬酯药品中有关杂质的检测方法

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Publication number: CN114324623B
Application number: CN202011080757.8A
Authority: CN
Inventors: 程栎; 郑瑞峥; 周丽莹; 卢迪; 姜丽华
Original assignee: Beijing Tide Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Beijing Tide Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2020-10-11
Filing date: 2020-10-11
Publication date: 2023-05-09
Anticipated expiration: 2040-10-11
Also published as: CN114324623A

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种氟比洛芬酯药品中有关杂质的检测方法，采用高效液相色谱仪对待检测样品进行检测，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为乙腈‑水‑冰醋酸的混合液。由于发明新增了对相关杂质的检测，使产品的质量更加可控，提高了用药的安全，且本发明可高效地测定氟比洛芬酯注射液中相关杂质含量，结果准确可靠。

Description

一种氟比洛芬酯药品中有关杂质的检测方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种氟比洛芬酯药品中有关杂质的检测方法。

背景技术

氟比洛芬酯是氟比洛芬的前体，是一种在临床上应用十分广泛的非甾体抗炎药物，具有解热、抗炎以及止痛的作用。其作用机理主要是抑制花生四烯酸环氧酶的活性，从而抑制疼痛和炎症反应的前列腺素的合成，起到镇痛的作用。其化学名为(±)2-(2-氟-4-联苯基)丙酸-1-乙酰氧基乙酯，结构式如下：

氟比洛芬酯脂注射液是目前唯一可用于静脉注射的非类固醇制剂，如商品名为凯纷的注射液。氟比洛芬酯脂微球注射液的特点主要有以下几方面:①具有很强的靶向作用，可以使包裹的药物在病发部位发挥疗效；②可以控制释放药物，使药物疗效时间延长，减少药物的使用剂量；③易于跨越细胞膜，加快药物的吸收，缩短药物起效时间；④可以用于静脉注射，避免了口服给药对消化道黏膜的损伤。氟比洛芬酯注射用乳剂的制备工艺复杂、生产重现性差，在商业化生产、储存过程中存在稳定性等问题。同时，其主药氟比洛芬酯易降解生成杂质氟比洛芬等杂质，具有血管刺激性。然而现有技术中对于氟比洛芬酯药品中中存在除氟比洛芬酯之外的杂质的研究甚少，特别是氟比洛芬酯原料及制剂中相关杂质的检测方法；而对其他杂质检测有利于进一步提高产品质量，提升用药安全是非常有必要的，

专利CN103393631B公开了一种氟比洛芬酯药物组合物，其实施例4记载了氟比洛芬酯脂肪乳中氟比洛芬含量检测方法，专利CN104447310A公开了一种去氟氟比洛芬酯及其制备方法；上述发明均未涉及对其他杂质的检测。

目前尚未发现氟比洛芬酯及相关制剂中除氟比洛芬外其他已知杂质的研究文献，以及对氟比洛芬酯注射液进行的除氟比洛芬外的非特定杂质研究，而且现有检测方法中所使用流动相体系均为甲醇-水-冰醋酸体系，该体系下甲醇会与氟比洛芬酯发生水解替代反应，会促进氟比洛芬酯降解，会生成新的杂质且方法稳定性不佳，为氟比洛芬酯药品的检测带来了不利影响。

因此，有必要进一步研究开发氟比洛芬酯药品中的相关杂质的新检测方法。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种药品中有关杂质的检测方法。本发明所述氟比洛芬酯药品中有关杂质的检测方法包括：采用高效液相色谱法对待检测样品进行检测，其中检测所用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为乙腈-水-冰醋酸混合液。

本发明中，作为实施方案之一，所述有关杂质为杂质4-OHB、杂质2-OHP、杂质4-ACB、杂质ALE。

其中杂质4-OHB(2-氟-4-羟基联苯)的结构为：

杂质2-OHP(1-乙酰氧基-2-(2-氟-4-联苯)-2-羟基丙酸酯)的结构为：

杂质4-ACB(4-乙酰-2-氟联苯)的结构为：

杂质ALE(烯丙基-(2-氟-4-联苯)丙酸酯)的结构为：

上述杂质为已知的化学结构，由于氟比洛芬酯注射液中上述杂质的存在产品中可能带来用药的潜在风险，检测氟比洛芬酯注射液中上述杂质对于产品质量提升是十分有必要的。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，规格为3.0-5.0mm×100-300mm×3-5μm；优选为3.5-5.0mm×150-250mm×3-5μm；最佳为4.6mm×150mm×5μm。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括流动相优选为乙腈-水-冰醋酸溶液，流动相中有机溶剂乙腈与水的体积比为3:1-1:3，优选为3:2-2:3，最佳为3:2；冰醋酸含量为0.05％-0.3％，优选为0.1％-0.2％，最佳为0.15％。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括流动相优选为乙腈-水-冰醋酸溶液，体积比为1200：800：3。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待检测样品进行检测时，柱温为15-50℃，优选为25-40℃，最佳为35℃恒温；流速为0.4-1.0ml/min，优选为0.4-0.6ml/min，最佳为0.6ml/min；运行时间为30min-90min，优选30min-60min。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法进一步高效液相色谱仪对待检测样品进行检测时，检测波长为254nm。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法进一步包括以下步骤：

1)取待检测样品，溶解并稀释，离心，取上清液，作为供试品溶液；

2)精密量取各杂质对照品，溶解并稀释，再精密量取上述溶液，混合，稀释，摇匀，作为对照品溶液；

3)取供试品溶液和自身对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

本发明中，作为实施方案之一，所述步骤1)中的离心转速为3000-15000rpm，离心时间5-30min；优选离心转速为5000-10000rpm，离心时间8-20min；最佳离心转速为8000rpm，离心时间10min。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法中进一步包括步骤1)中用乙腈溶解并稀释所述待检测样品。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法中进一步包括但不限于氟比洛芬酯药品为氟比洛芬酯原料、氟比洛芬酯注射液。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法中进一步包括供试品溶液色谱图中如有杂质峰，不计算氟比洛芬峰及氟比洛芬酯脱氟物，如有杂质4-OHB、杂质2-OHP、杂质4-ABC、杂质ALE检出，杂质色谱峰除以响应因子后应小于自身对照溶液中氟比洛芬酯两个峰的峰面积之和的0.1％，其中各杂质的含量为：4-OHB：0.0004％-0.1％，2-OHP：0.0015％-0.1％，4-ACB：0.001％-0.1％，ALE：0.002％-0.1％。

本发明中，作为实施方案之一，所述方法中进一步包括供试品溶液色谱图中如有杂质峰，其他最大单一未知杂质峰面积应小于自身对照溶液中氟比洛芬酯两个峰的峰面积之和的0.1％，杂质峰面积之和应小于自身对照溶液中氟比洛芬酯两个峰的峰面积之和的1％，，其中各杂质的含量为：4-OHB：0.0004％-0.1％，2-OHP：0.0015％-0.1％，4-ACB：0.001％-0.1％，ALE：0.002％-0.1％，杂质总量：0.002％-1.0％。

由于本发明新增了氟比洛芬酯药品中对相关杂质的检测，使氟比洛芬酯药品的质量更加可控，提高了用药的安全，与已公开氟比洛芬酯高效液相条件相比，目前无氟比洛芬酯及相关制剂中除氟比洛芬外其他已知杂质研究文献，对氟比洛芬酯注射液进行的除氟比洛芬外的非特定杂质研究，所使用方法均为甲醇-水-冰醋酸体系，该体系下甲醇会与氟比洛芬酯发生水解替代反应，促进氟比洛芬酯降解，生成新的杂质且方法稳定性不佳。

附图说明

图1为实施例1的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图2为实施例2的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图3为实施例3的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图4为实施例4的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图5为实施例5的供试品氟比洛芬酯脂微球注射液中杂质检测结果的图谱。

图6为实施例5的杂质对照品验证实验结果的图谱。

图7为实施例6的供试品氟比洛芬酯原料药中杂质检测结果的图谱。

图8为实施例6的杂质对照品验证试验结果图谱。

具体实施方式

以下实施例和试验例用于进一步阐述本发明，但不以任何的方式限制本发明的有效范围。

所用供试品氟比洛芬酯及杂质对照品来源：

实施例1有关物质对照品的检测的验证

对照品溶液配置：分别称取4种杂质(4-OHB、2-OHP、4-ACB、ALE)及FP对照品各5mg，置于100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，取上述溶液各1ml，加入同一100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，即得对照品溶液；

按照如下条件对对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

色谱柱：Waters Xbridge系列C18 4.6×250mm，5μm颗粒直径

柱温：25℃左右恒温

流动相：乙腈-水-冰醋酸混合液,冰醋酸比例为0.2％

流速：1.0ml/min

运行时间：40min

检测结果：对照品杂质检测图谱参见附图1，保留时间2.5分钟以后杂质对照品峰依次为4-OHB，FP，2-OHP，4-ACB及ALE。

实施例2有关物质对照品的检测的验证

按照如下条件对对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

色谱柱：内径4.6mm，柱长15cm的不锈钢管内填充5μm液相色谱用ODS

柱温：25℃左右恒温

流动相：乙腈：水＝1:1

流速：1.0ml/min

运行时间：40min

检测结果：对照品杂质检测图谱参见附图2，保留时间2.5分钟以后杂质对照品峰依次为4-OHB，FP，2-OHP，4-ACB及ALE。

实施例3有关物质对照品的检测的验证

按照如下条件对对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

柱温：35℃左右恒温

流动相：乙腈-水-冰醋酸混合液(1200∶800∶3)

流速：0.50ml/min

运行时间：40min

离心条件：10000rpm 8分钟

检测结果：对照品杂质检测图谱参见附图3，保留时间2.5分钟以后杂质对照品峰依次为4-OHB，FP，2-OHP，4-ACB及ALE。

实施例4有关物质对照品的检测的验证

按照如下条件对对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

柱温：35℃左右恒温

流动相：甲醇-水＝1：1

流速：0.50ml/min

运行时间：40min

检测结果：对照品杂质检测图谱参见附图4，保留时间5.0分钟以后杂质对照品峰依次为4-OHB，FP，2-OHP，4-ACB及ALE。

由实施例1-4的试验结果可知，检测方法中色谱柱的选择，流动相等条件均对检测条件产生重要影响，实施例1中使用了Waters Xbridge系列C18色谱柱，实施例2及实施例4中流动相分别使用了乙腈-水及甲醇-水，检测结果均显示相关杂质无法实现有效分离，当色谱柱采用ODS柱，且流动相为乙腈-水-冰醋酸混合液时，各杂质均能实现有效分离。

实施例5氟比洛芬酯注射液供试品检测

按照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。

供试品溶液配置：取氟比洛芬酯脂微球注射液供试品(北京泰德制药股份有限公司)1ml，置于10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀,8000rpm离心10min，取上清液，作为供试品溶液；

对照品溶液配置：其他有关物质(4-OHB、2-OHP、4-ACB、ALE)及FP对照品溶液的配置方法：分别称取4种杂质及FP对照品各5mg，置于100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，取上述溶液各1ml，加入同一100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，即得对照品溶液；

按照如下条件分别对供试品溶液及对照品溶液进行高效液相检测。

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

柱温：35℃左右恒温

流动相：乙腈-水-冰醋酸混合液(1200∶800∶3)

流速：0.60ml/min

运行时间：40min

检测结果：

杂质名称	含量(％)
		4-OHB	未检出
2-OHP	未检出
		4-ACB	0.012
ALE	0.010

氟比洛芬酯脂微球注射液供试品检测图谱参见附图5，其中杂质对照品图谱参见附图6。

实施例6氟比洛芬酯原料中有关物质的检测

供试品溶液配置：取氟比洛芬酯原料10mg，置于10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀,8000rpm离心10min，取上清液，作为供试品溶液；

对照品溶液配置：其他有关物质对照品溶液的配置方法：分别称取4种杂质(4-OHB、2-OHP、4-ACB、ALE)及FP、氟比洛芬酯对照品、杂质A对照品各5mg，置于100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，取上述溶液各1ml，加入同一100ml容量瓶中，乙腈稀释至刻度，即得对照品溶液；

按照如下条件分别对供试品溶液及对照品溶液进行高效液相检测：

检测器：紫外检测器(检测波长：254nm)

柱温：25℃左右恒温

流动相：乙腈-水-冰醋酸混合液(1200∶800∶3)

流速：1.00ml/min

运行时间：90min

检测结果：

氟比洛芬酯原料中有关物质的检测结果如下

杂质名称	含量(％)
		4-OHB	未检出
2-OHP	未检出
		4-ACB	0.012
ALE	未检出

氟比洛芬酯原料供试品检测结果图谱参见附图7，其中杂质对照品图谱参见附图8，其中图8中杂质保留时间顺序如下：

Claims

1.一种氟比洛芬酯药品中有关杂质的检测方法，其特征在于，所述方法包括采用高效液相色谱仪对待检测样品进行检测，

其中检测所用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱规格为4.6mm×150mm×5μm；

流动相为乙腈-水-冰醋酸混合液，所述流动相中乙腈-水-冰醋酸的体积比为1200：800：3；

所述有关杂质为2-氟-4-羟基联苯、1-乙酰氧基-2-(2-氟-4-联苯)-2-羟基丙酸酯、4-乙酰-2-氟联苯、烯丙基-(2-氟-4-联苯)丙酸酯。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待检测样品进行检测时，柱温为15-50℃；流速为0.4-1.0ml/min；运行时间为30min-90min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待检测样品进行检测时，柱温为25-40℃；流速为0.4-0.6ml/min；运行时间为30min-60min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待检测样品进行检测时，柱温为35℃恒温；流速为0.6ml/min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括高效液相色谱仪对待检测样品进行检测时，检测波长为254nm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括以下步骤：

3)取供试品溶液和对照品溶液，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中离心转速为3000-15000rpm，离心时间为5-30min。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中离心转速为5000-10000rpm，离心时间为8-20min。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中离心转速为8000rpm，离心时间为10min。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤1)用乙腈溶解并稀释所述待检测样品。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氟比洛芬酯药品为氟比洛芬酯原料、氟比洛芬酯注射液。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括供试品溶液色谱图中不计算氟比洛芬及氟比洛芬酯脱氟物，杂质2-氟-4-羟基联苯、杂质1-乙酰氧基-2-(2-氟-4-联苯)-2-羟基丙酸酯、杂质4-乙酰-2-氟联苯、杂质烯丙基-(2-氟-4-联苯)丙酸酯检出，杂质色谱峰除以响应因子后应小于自身对照溶液中氟比洛芬酯两个峰的峰面积之和的0.1％，其中各杂质的含量为：2-氟-4-羟基联苯：0.0004％-0.1％，1-乙酰氧基-2-(2-氟-4-联苯)-2-羟基丙酸酯：0.0015％-0.1％，4-乙酰-2-氟联苯：0.001％-0.1％，烯丙基-(2-氟-4-联苯)丙酸酯：0.002％-0.1％。

13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包括供试品溶液色谱图中杂质峰，其他最大单一未知杂质峰面积应小于自身对照溶液中氟比洛芬酯两个峰的峰面积之和0.1％，杂质峰面积之和应小于自身对照溶液中氟比洛芬酯两个峰的峰面积之和的1％，其中各杂质的含量为：2-氟-4-羟基联苯：0.0004％-0.1％，1-乙酰氧基-2-(2-氟-4-联苯)-2-羟基丙酸酯：0.0015％-0.1％，4-乙酰-2-氟联苯：0.001％-0.1％，烯丙基-(2-氟-4-联苯)丙酸酯：0.002％-0.1％，杂质总量：0.002％-1.0％。