CN101011560A - 治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂及其制备方法和质控方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂及其制备方法和质量控制方法，按照重量份计算，该制剂是用复方珊瑚姜酊10～500份、水杨酸1～50份、甘油1～50份和醋酸1～50份，再加适量辅料制成的。与现有技术相比，本发明制剂采用中西药结合，能有效调整脚底气血平衡，并有效杀灭真菌，从而达到标本兼治的目的；所提供的酊剂，具有强烈渗透作用，并能溶解皮肤角质，可更好地发挥治疗作用；所提供的喷雾剂中加入成膜剂，明显减少药物的挥发，使药物持久发挥药效；所提供的搽剂使用方便，效果明显。本发明质量控制方法可有效地控制药物的质量，从而确保其临床疗效和用药安全。
Description
技术领域：
本发明涉及一种治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂及其制备方法和质量控制方法，属于制药技术领域。
背景技术：
脚癣(脚气)、手癣(鹅掌风)、指(趾)甲癣(灰指甲)是真菌滋生引起的一种疾病。手癣俗称“鹅掌风”，足癣俗称“脚气”。其主要病症是脚底、脚趾、脚趾间等部位出现瘙痒、脱皮、红肿、以至水疱等现象，如果有细菌感染，更可出现红肿、发炎、化脓等症状。手癣的表现也类似足癣，不过主要以角化脱屑型为主，偶有水泡型皮损，而指间糜烂很少见到。目前治疗脚手癣、灰指甲的药物虽然有多种，但治疗时一般只注意外部吸收达到止痒效果，而没有根治，因而其效果不够理想。为了达到防治目的，许多发明人及药品企业做了大量的研究，也提供了一些治疗的产品；如申请号为02129545.X、名称为“治疗脚手癣、灰指甲的药物”，申请号为95118302.8、名称为“一种治疗脚癣的喷雾剂”。虽然都具有一定的效果，也有其各自的局限性。临床试验证明，若长期用西药治疗，则会产生明显的副作用，效果并不理想；若采用纯中药治疗，则治疗所需的时间很长，人们很难坚持。因而长期以来，人们并未找到一种能够标本兼治的治疗脚癣(脚气)、手癣(鹅掌风)、灰指甲(指(趾)甲癣)的药物和方法。因此，提供一种疗效确切、安全方便、副作用小的治疗脚手癣疾病的药物显得十分重要。
另外，药品如果没有严格的质量标准，得到的产品质量可靠性不高，其结果必然是治疗效果不明显；所以为提高药物的治疗作用，减少药物副作用，制定一个严格可靠的质量标准成为保证药品质量的基本要求。随着现代仪器分析技术的发展，高效液相色谱法、气相色谱法等在药品的质量控制中得到了广泛的应用，可以有效地控制药物的质量，确保用药的安全
发明内容：
本发明的目的在于：提供一种治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂及其制备方法和质量控制方法。本发明从调整人体脚底的气血平衡出发，并将中西医有机地结合起来，精选具有破血行气、散结止痛等功效的中草药以及具有解热镇痛又杀菌防腐等作用的化学原料，将它们有机地结合为一体，不但能有效地调理人体内部机能，而且能有效杀灭人体脚、手部真菌，可达到标本兼治的目的。
本发明是这样构成的：一种治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂，按照重量份计算，它是用复方珊瑚姜酊10～500份、水杨酸1～50份、甘油1～50份和醋酸1～50份，再加适量辅料制成酊剂、喷雾剂、搽剂、酒剂、凝胶剂、软膏剂、洗剂、涂膜剂或其它药剂学上可以接受的剂型。
具体地说，按照重量份计算，它是用复方珊瑚姜酊250份、水杨酸20份、甘油20份和醋酸10份，再加适量辅料制成酊剂、喷雾剂或搽剂。
所述的复方珊瑚姜酊这样制备：取珊瑚姜1～100重量份、姜黄1～100重量份，用含醇量65％～95％乙醇10～2000重量份浸渍36～96小时，取浸渍液；另取冰片1～50重量份和苯甲酸1～50重量份溶解于10～500重量份乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量65％～95％乙醇至50～5000重量份，即得。
准确地说，所述的复方珊瑚姜酊这样制备：取珊瑚姜2.5重量份、姜黄5重量份，用含醇量75％乙醇200重量份浸渍48小时，取浸渍液；另取冰片2重量份和苯甲酸2重量份溶解于50重量份乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量75％乙醇至250重量份，即得。
本发明所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的制备方法为：取复方珊瑚姜酊，加入水杨酸、甘油和醋酸，混匀，然后加入适量辅料制成不同的制剂。
所述制剂中的酊剂这样制备：取复方珊瑚姜酊，加入水杨酸、甘油和醋酸，混匀，加0.1～0.5％重量份茉莉香精，再加入含醇量65％～95％乙醇200～20000重量份，即得。所述制剂中的喷雾剂这样制备：取复方珊瑚姜酊，加入水杨酸、甘油、醋酸和羟丙基纤维素10～50重量份，再加入含醇量65％～95％乙醇200～20000重量份，即得。所述制剂中的搽剂这样制备：取复方珊瑚姜酊，加入水杨酸、甘油、醋酸和苯甲酸钠1～10重量份，混匀，再加入含醇量65％～95％乙醇200～20000重量份，即得。
本发明所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的质量控制方法为：所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对制剂中冰片和姜黄的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中水杨酸和冰片的含量测定。
其中冰片的鉴别方法是以冰片对照品为对照，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝5～15∶1为展开剂的薄层色谱法；姜黄的鉴别方法是以姜黄对照药材为对照，以苯-氯仿-乙醇＝20～70∶20～70∶1～10为展开剂的薄层色谱法；水杨酸的含量测定方法是以水杨酸对照品为对照，以乙腈-冰醋酸四氢呋喃-水＝15～40∶2～8∶2～8∶50～70为流动相的高效液相色谱法；冰片的含量测定方法是以水杨酸甲酯对照品为内标的气相色谱法。
具体的鉴别方法包括以下项目中的一项或全部：
(1)取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含5～15mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝5～15∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5～1.5％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本制剂2～10ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5～2ml使溶解，再挥至约0.2～1ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.05～0.2g，加无水乙醇0.5～2ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各5～20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝20～70∶20～70∶1～10为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
具体的含量测定方法包括以下项目中的一项或全部：
(1)水杨酸 照高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝15～40∶2～8∶2～8∶50～70为流动相，检测波长250～300nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于1000；
对照品溶液的制备 取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸0.5～3mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 精密量取本制剂0.5～3ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本制剂每1ml含水杨酸C7H803应为10～30mg；
(2)冰片 照气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验 聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于2000；
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5～3mg的溶液，摇匀，即得；
校正因子测定精密称取冰片对照品5～20mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液1～10ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.2～0.8mg的溶液；吸取上述对照品0.5～3μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得；
测定法精密量取供试品溶液0.5～3ml，内标溶液0.5～3ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得；
本制剂每1ml含冰片C10H180应不低于1.0mg。
本发明所述质量控制方法包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体；
鉴别：(1)取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含5～15mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝5～15∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5～1.5％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本制剂2～10ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5～2ml使溶解，再挥至约0.2～1ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.05～0.2g，加无水乙醇0.5～2ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各5～20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝20～70∶20～70∶1～10为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：本制剂含乙醇量应不低于40％；
含量测定：(1)水杨酸照高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝15～40∶2～8∶2～8∶50～70为流动相，检测波长250～300nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于1000；
对照品溶液的制备 取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸0.5～3mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 精密量取本制剂0.5～3ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本制剂每1ml含水杨酸C7H8O3应为10～30mg；
(2)冰片 照气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验 聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于2000；
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5～3mg的溶液，摇匀，即得；
校正因子测定 精密称取冰片对照品5～20mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液1～10ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.2～0.8mg的溶液；吸取上述对照品0.5～3μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得；
测定法 精密量取供试品溶液0.5～3ml，内标溶液0.5～3ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得；
本制剂每1ml含冰片C10H18O应不低于1.0mg。
经研究发现，采用以下质量控制方法将更容易控制这种治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的质量，更利于保证该制剂的临床疗效。故所述质量控制方法也可包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体；
鉴别：(1)取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含10mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本制剂5ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，再挥至约0.5ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.1g，加无水乙醇1ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝49∶49∶2为展开剂，置用展开剂预饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：本制剂含乙醇量应不低于60％；
含量测定：(1)水杨酸 照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝23∶5∶5∶61为流动相，检测波长280nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备 取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸1.5mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 精密量取本制剂2ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本制剂每1ml含水杨酸C7H8O3应为16～24mg；
(2)冰片：照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验 柱长30m、内径0.53mm、膜厚度1.0μm的聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于5000；
内标溶液的制备称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，摇匀，即得；
校正因子测定 精密称取冰片对照品约10mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.4mg的溶液；吸取上述对照品1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得；
测定法 精密量取供试品溶液2ml，内标溶液2ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1祃，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得；
本制剂每1ml含冰片C10H18O应不低于1.6mg。
本方中，姜黄性温，味辛、苦，有破血、行气、通经、止痛的功效，其药用有效成份主要是姜黄素和姜黄油，姜黄素和姜黄油具有很好的消炎、止痛、杀菌的功效。珊瑚姜味辛辣，有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效，其挥发油具有抗菌消炎、镇痛止痒及改善皮肤微循环等功能。水杨酸具有抗真菌作用，有止痒，溶解角质等作用，能提高其他抗真菌药物的穿透性，并抑制细菌生长。甘油对皮肤粘膜有柔润安抚作用，易附着皮肤，能吸收患处的分泌液，保护患处，使细菌细胞脱水而阻止其生长。醋酸有抗细菌和真菌作用，常用于治疗手足癣，体癣等。冰片有消肿止痛，且有防腐、止痒之效，常作为外用。将上述药物组方后，能很好起到杀菌，止痒作用，可有效治疗脚癣(脚气)、手癣(鹅掌风)、指(趾)甲癣(灰指甲)。
与现有技术相比，本发明制剂采用中西药结合，能有效调整脚底气血平衡，并有效杀灭真菌，从而达到标本兼治的目的；所提供的酊剂，具有强烈渗透作用，并能溶解皮肤角质，可更好地发挥治疗作用；所提供的喷雾剂中加入成膜剂，明显减少药物的挥发，使药物持久发挥药效；所提供的搽剂使用方便，效果明显。
本发明还制定了一种治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的质量控制方法。制剂中的水杨酸发挥着主要有效成分的作用，控制该制剂中水杨酸的含量对于保证该制剂的疗效非常重要，因此本发明建立了水杨酸的高效液相含量测定，并根据多次测定水杨酸含量的结果确定了制剂中水杨酸含量的合理范围；同时建立了冰片的鉴别反应和含量测定方法。该质量控制方法可有效地控制药物的质量，从而确保其临床疗效和用药安全。
为了确保本发明制剂有效，其制备工艺和质量控制方法科学、合理、可靠，申请人进行了一系列的试验研究，主要的试验资料如下：
实验例1：复方珊瑚姜酊的制备工艺研究
(1)因素选择：中药浸提主要受提取溶剂、溶剂量、浸提时间影响，本申请人主要对提取溶剂和提取时间进行了考察。
(2)考察指标：根据目前技术，采用薄层色谱法考察浸提液。
(3)实验：称取珊瑚姜2.5g、姜黄5g磨成细粉，采用200ml水浸或200ml75％乙醇浸提，时间分为24小时和48小时，浸提液采用薄层色谱法检查姜黄，结果如下：
| 实验条件 | 水提24小时 | 醇提24小时 | 水提48小时 | 醇提48小时 |
| 结果 | 无斑点 | 斑点弱 | 斑点弱 | 斑点明显 |
由此可见，采用醇提48小时，姜黄鉴别明显，故确定用75％乙醇浸提48小时。
实验例2：药效学研究
1、原理
本实验用豚鼠作实验动物，为局部瘙痒实验。组织胺是主要的致痒介质，可使作用部位皮肤引起充血，红斑，风团等麻疹样症状，出现瘙痒反应，以一定量的磷酸组胺溶液涂于动物后足背部创面部而引起瘙痒反应。
2、观察指标
当滴加磷酸组胺累积至一定量时，动物就回头添后足创面部位。以最后出现豚鼠回头舔后足时所给予的磷酸组胺总量为致痒阈。
3、方法
取豚鼠24只，雌雄各半，体重250±50g，豚鼠按性别体重随机分为3组，每组8只。分别为对照组，高、低剂量给药组。对照组涂等量生理盐水。试验前一日将各组动物右后足背剪毛，试验当日用粗砂纸擦伤豚鼠一侧后足背剃毛处，以轻度渗血为度，面积(1cm×1cm)，在创面处滴0.01％磷酸组胺0.05ml/只，以后每隔3分钟依次0.02％、0.03％、0.04％…递增浓度，每次均为0.05ml，直至出现豚鼠回头舔该侧右后足为止，记录并比较各组的致痒阈。
4、结果
本发明制剂对豚鼠磷酸组胺致痒反应的影响
注：与对照组相比*＜0.01。
由上表可知，本发明涂药后高低两种剂量均有明显的提高磷酸组胺所致豚鼠致痒阈，与对照组比较，差异非常显著(P＜0.01)。
实验例3：质量控制的方法学考察试验：
3.1药物制剂中冰片和姜黄的薄层鉴别方法
(1)冰片的薄层鉴别考察
| 序号 | 条件 | 结果 |
| 1 | 石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-苯(8∶1∶1)硅胶G薄层板 | 阴性有干扰 |
| 2 | 乙醚-乙酸乙酯(9∶1)硅胶G薄层板 | 分离不全 |
| 3 | 石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(9∶1)硅胶H薄层板 | 对照品未分开 |
| 4 | 石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯(8∶2)硅胶G薄层板 | 分离不全 |
| 5 | 环己烷-乙酸乙酯(9∶1)硅胶G薄层板 | 阴性有干扰 |
| 6 | 石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(9∶1)硅胶G薄层板 | 斑点明显，分离效果好 |
经过筛选，确定以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，硅胶G薄层板为固定相，在此条件下，样品与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，Rf值适中，与阴性无干扰。
(2)姜黄的薄层鉴别考察
| 序号 | 条件 | 结果 |
| 1 | 苯-氯仿-水(20∶70∶10)硅胶G薄层板 | 阴性有干扰 |
| 2 | 苯-乙醚-乙醇(40∶40∶20)硅胶G薄层板 | 分离不完全 |
| 3 | 氯仿-甲醇-水(60∶20∶20)硅胶G薄层板 | 阴性有干扰 |
| 4 | 甲苯-乙醚-水(49∶49∶2)硅胶G薄层板 | Rf值过大 |
| 5 | 正丁醇-乙酸乙酯(90∶10)硅胶G薄层板 | 分离不完全 |
| 6 | 苯-氯仿-乙醇(49∶49∶2)硅胶G薄层板 | Rf值适中，斑点明显，分离效果好 |
经过筛选，确定以苯-氯仿-乙醇(49∶49∶2)为展开剂，硅胶G薄层板为固定相，在此条件下，样品与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，Rf值适中，与阴性无干扰。
3.2含量测定
3.2.1本发明建立了高效液相色谱法测定本制剂中所含的水杨酸含量的方法，具有分离效果好、灵敏、准确等优点。
3.2.1.1仪器与试药
仪器：LC-10Avp日本岛津高效液相色谱仪；SPD-10AM二极管阵列检测器；CLASS-VP色谱工作站。
柱子：岛津ODS色谱柱
试药：乙腈(色谱纯)；冰醋酸(分析纯)；四氢呋喃(分析纯)
对照品：水杨酸对照品为中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用)。
3.2.1.2色谱条件
乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水(23∶5∶5∶61)为流动相，检测波长λ＝280nm。在本实验选定的条件下，按水杨酸峰计算，理论塔板(N)为1000以上，样品中水杨酸与其它组分分离度符合要求，阴性样品图谱在水杨酸峰位置处无假阳性峰。
1.线性关系考察
精密称取水杨酸对照品27.75mg于25ml容量瓶中，用流动相定容得到浓度为1.11mg/ml的对照品溶液。分别吸取2、4、6、8、10μl进样，记录色谱，以峰面积(mAU.s)对进样量(μg)回归计算，得到一基本过原点的直线方程，回归方程为C＝1.6374×10-6A-0.0846135相关系数r＝0.9989
表1 水杨酸标准曲线
| 体积(μl) | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
| 面积(mAU.s)进样量(μg) | 13889182.22 | 27424254.44 | 41493126.66 | 55765438.88 | 674658611.10 |
回归方程拟合成过原点方程时，C＝1.61986×10-6A，r＝0.9988。结果表明，进样量在2.22μg～11.10μg范围内与峰面积线性关系良好。
2.精密度试验分别取水杨酸对照品溶液(1.11mg/ml)进样5次，每次5μl，记录色谱，相对标准偏差(RSD％)为0.53％，可看出精密度良好，结果见表2。
表2 水杨酸精密度试验
| 试验次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD％ |
| 峰面积(mAU.s) | 34002278 | 3411125 | 3449231 | 3415535 | 3426060 | 3420845.8 | 0.53 |
3.重现性试验 取同一批号(20040315)样品5份，各2ml，依本发明所述水杨酸含量测定方法处理，进样，记录色谱图，计算得到水杨酸平均值为20.262mg/ml，RSD％为0.3％，表明重现性良好。结果见表3。
表3 重现性试验
| 试验次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 平均值 | RSD％ |
| 含量(mg/ml) | 20.35 | 20.28 | 20.25 | 20.20 | 20.23 | 20.262 | 0.3 |
4.加样回收试验 取与重现性试验同一批号的样品5份，各1ml，分别加入一定量的水杨酸对照品(取浓度为3.40mg/ml水杨酸对照品溶液6ml)，依本发明所述水杨酸含量测定方法处理，进样，记录色谱，计算测得回收率。平均回收率为102.97％，RSD％为2.26％。结果见表4。
表4 加样回收试验
| 试验次数 | 取样量(ml) | 取样相当于水杨酸(mg) | 添加水杨酸对照品(mg) | 测得水杨酸的量(mg/ml) | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 1 | 1.00 | 20.262 | 20.4 | 41.775 | 105.46 | 102.97 | 2.26 |
| 2 | 41.525 | 104.26 | |||||
| 3 | 40.538 | 99.39 | |||||
| 4 | 41.106 | 102.18 | |||||
| 5 | 41.385 | 103.54 |
5.样品含量测定计算法
本测定法采用法定的外标法(《中国药典》2005年版一部附录VI D)计算含量，其公式如下：(1)含量(Mx)＝Ax×Mr/Ar
当对照品溶液以mg/ml表示时，Mr即表示对照品为mg/ml的浓度单位，同时测得样品的浓度也为mg/ml。拟定每1ml含水杨酸以mg单位表示，即mg/ml，代入下式计算即为样品的含量(mg/ml)：
(2)含量(mg/ml)＝Mx/(Wx/V)
式中Wx为样品的称量(mg)，V为提取样品的溶剂量(ml)。合并(1)、(2)式，得到含量计算公式：
含量(mg/ml)＝Ax×Mr×V/(Ar×Wx)
样品处理方法：精密量取本制剂2ml至25ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
表5 10批样品含量测定
| 含量(mg/ml) | 均值(mg/ml) | ||
| 1 | 20.18 | 20.46 | 20.32 |
| 2 | 20.34 | 20.13 | 20.24 |
| 3 | 20.36 | 20.12 | 20.24 |
| 4 | 21.12 | 21.02 | 21.07 |
| 5 | 20.38 | 20.15 | 20.27 |
| 6 | 19.47 | 19.56 | 19.52 |
| 7 | 19.32 | 19.18 | 19.25 |
| 8 | 20.13 | 20.02 | 20.07 |
| 9 | 19.54 | 19.62 | 19.59 |
| 10 | 20.08 | 20.14 | 20.11 |
经过对10批样品的含量进行测定(表5)，结果表明本含量测定法具有回收率高，精密度高，重现性好，样品处理简便，分析快速的优点，符合《中国药典》2005年版一部附录VID高效液相色谱法的各项规定。
本制剂水杨酸标示含量为20mg/ml，每批测定结果均在标示量为50.0％～150.0％的范围内。即定为：本制剂每1ml含水杨酸(C7H8O3)应为于10～30mg。10批样品均符合规定。
3.2.2本制剂处方中复方珊瑚姜酊中还含有冰片，含量测定除制定水杨酸含量测定外，还制定了简单、可靠的对冰片含量的测定方法。
1.仪器、药品与试剂 冰片对照品(中国药品生物制品检定所供含量测定用，批号(743-8902)；水杨酸甲酯(AR级)，乙酸乙酯(AR级)；珊瑚癣净(贵州金桥药业有限公司)
仪器为GC-14A日本岛津气相色谱仪系统；GC-solution色谱工作站；色谱柱为兰州中科安泰生产的聚乙二醇(PEG)-20M毛细管色谱柱(0.53mm×30M×0.1μm，柱号06-12-003)
2.对照品、样品及阴性样品 分别制备除冰片外其余各药材按处方量比例制成的制剂，用气相色谱仪检测，阴性对照未见相应物质的吸收峰，样品中冰片的吸收峰与对照品完全一致。
3.系统适用性试验 采用聚乙二醇(PEG)-20M为固定液的毛细管柱(柱长30m，内径0.53mm，膜厚度1.0μm)；柱温为140℃。进样口温度为180℃，检测器温度为200℃，FID检测器，载气为氮气(99.999％)，流速2ml/min，分流比：1∶10。理论塔板数以龙脑峰计算达到8076，异龙脑(先出峰)与龙脑(后出峰)、水杨酸甲酯完全分离，异龙脑与龙脑的分离度大于1.5。故暂定理论塔板数以龙脑峰计应不低于2000。
4.标准曲线 精密称取冰片对照品50.73mg，置50ml容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液，精密称取水杨酸甲酯208.5mg置100ml容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，作为内标溶液，分别精密吸取照品储备液2、4、5、6、8ml于10ml容量瓶中，各精密加入内标溶液2ml用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀得到不同浓度的对照品溶液。分别吸取1μl进样，记录色谱，以冰片峰面积(龙脑和异龙脑峰面积之和)与内标物质峰面积的比值对进样量(μg)进行回归计算，得到基本过原点的直线方程，A＝1.808683×C-0.001586；相关系数r＝0.999992。结果表明，进样量在0.2μg～1μg范围内与峰面积线性关系良好。见表6。
表6 冰片标准曲线(n＝5)
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | |
| 冰片峰面积 | 865168 | 1935454 | 2455353 | 2943813 | 3949101 |
| 内标峰面积 | 1178789 | 1319166 | 1340744 | 1339390 | 1344525 |
| 比值(A) | 0.73395 | 1.46718 | 1.83134 | 2.19788 | 2.93717 |
| 进样量(μg) | 0.40584 | 0.81168 | 1.01460 | 1.21752 | 1.62336 |
强制过原点的方程为A＝1.807336×C，相关系数r＝0.999991。将最低点进样量0.40584代入上述两方程计算，结果分别为0.732450和0.733489，相对偏差为0.07％，说明回归方程的截距很小，可以忽略，故可用内标一点法计算冰片的含量。
5.精密度试验 取浓度为0.5073mg/ml的对照品溶液1μl进样，进样6次，记录色谱，相对标准偏差(RSD％)为0.35％，可看出精密度良好，结果见表7。
表7 精密度试验(n＝6)
| 试验次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均值 | RSD％ |
| 冰片峰面积 | 2516840 | 2575725 | 2431442 | 2480476 | 2445447 | 2598756 | 1.829317 | 0.35 |
| 内标峰面积 | 1372981 | 1414726 | 1332958 | 1358102 | 1331843 | 1415850 | ||
| 比值 | 1.83312 | 1.82065 | 1.82409 | 1.82643 | 1.83614 | 1.83547 |
6.重复性试验 取同一批号(20060911)样品6份，依本发明所述冰片含量测定方法处理，进样，记录色谱图，计算得到冰片平均值为2.0343mg/ml，RSD％为0.35％，表明重现性良好。结果见表8。
表8 重现性试验(n＝6)
| 试验次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 平均值 | RSD％ |
| 冰片(mg/ml) | 2.0312 | 2.0387 | 2.0417 | 2.0285 | 2.0246 | 2.0412 | 2.0343 | 0.35 |
7.稳定性实验取同一份样品放置不同时间进样，样品结果变化较小，RSD为0.34％，说明在24小时内稳定性良好，结果见表9。
表9 稳定性试验(n＝5)
| 时间 | 2 | 4 | 6 | 8 | 24 | 平均值 | RSD％ |
| 冰片(mg/ml) | 2.0737 | 2.0597 | 2.0609 | 2.0550 | 2.0595 | 2.06176 | 0.34 |
8.加样回收试验取与重现性试验同一批号的样品1ml，精密量取6份，分别精密加入浓度为1.0146mg/ml的冰片对照品溶液2.5ml，依本发明所述冰片含量测定方法处理，进样，记录色谱，计算测得回收率为95.127％，RSD为0.31％。结果见表10。
表10 冰片加样回收试验
| 试验次数 | 取样量(ml) | 取样相当于冰片(mg) | 添加冰片对照品(mg) | 测得冰片的量(mg) | 回收率(％) | 平均回收率(％) | RSD(％) |
| 1 | 1 | 2.0343 | 2.5365 | 4.4391 | 94.81 | 95.127 | 0.31 |
| 2 | 4.4397 | 94.83 | |||||
| 3 | 4.4450 | 95.04 | |||||
| 4 | 4.4523 | 95.33 | |||||
| 5 | 4.4488 | 95.19 | |||||
| 6 | 4.4583 | 95.56 |
9.根据上述试验结果，确定冰片的含量测定方法为：
冰片 照气相色谱法(《中国药典》2005版一部附录VI E)测定。
色谱条件与系统适应性试验 聚乙二醇(PEG)-20M毛细管柱(柱长30m，内径0.53mm，膜厚度1.0μm)；柱温为140℃。理论板数按龙脑峰计算应不低于2000。
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，摇匀，即得。
校正因子的测定 精密称取冰片对照品适量(约10mg)，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.4mg的溶液。吸取上述对照品1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑(先出峰)与龙脑(后出峰)峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，计算校正因子，即得。
测定法 精密量取供试品溶液2ml，内标溶液2ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀。吸取上述供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得。
本制剂每1ml含冰片(C10H18O)应不低于1.0mg。
以本制剂含冰片(C10H18O)应不低于标示量的50％(标示量为每1ml含冰片2.0mg)制定限度；即得本制剂每1ml含冰片(C10H18O)应不低于1.0mg。
测得10批样品含量结果列于表11。
表11 10批样品含量测定
| 冰片 | |||
| 批号 | 含量(mg/ml) | 均值(mg/ml) | |
| 20050425 | 1.9992 | 2.0144 | 2.0068 |
| 20050504 | 1.9581 | 1.9328 | 1.9454 |
| 20050666 | 2.0135 | 2.0949 | 2.0542 |
| 20050679 | 2.0040 | 2.0052 | 2.0046 |
| 20050729 | 2.2185 | 2.1995 | 2.2090 |
| 20060905 | 2.0533 | 2.0936 | 2.0734 |
| 20060908 | 2.0482 | 2.0224 | 2.0353 |
| 20060909 | 2.0011 | 1.9921 | 1.9966 |
| 20060910 | 2.0356 | 2.0582 | 2.0469 |
| 20060911 | 2.0797 | 2.0511 | 2.0654 |
具体实施方式：
本发明的实施例1：
取珊瑚姜2.5g、姜黄5g，用含醇量75％乙醇200ml浸渍48小时，取浸渍液；另取冰片2g和苯甲酸2g溶解于50ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量75％乙醇至250ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸20g、甘油20g和醋酸10g，混匀，另加茉莉香精10ml及80％乙醇，制成1000ml，灌封，即得酊剂。
本发明的实施例2：取珊瑚姜1g、姜黄1g，用含醇量65％g乙醇50ml浸渍36小时，取浸渍液；另取冰片1g和苯甲酸1g溶解于30ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量65％乙醇至100ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸5g、甘油5g和醋酸5g，混匀，另加茉莉香精lml及65％乙醇，制成200ml，灌封，即得酊剂。
本发明的实施例3：取珊瑚姜100g、姜黄100g，用含醇量95％乙醇2000ml浸渍96小时，取浸渍液；另取冰片50g和苯甲酸50g溶解于500ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量95％乙醇至5000ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸100g、甘油100g和醋酸100g，混匀，另加茉莉香精100ml及95％乙醇，制成20000ml，灌封，即得酊剂。
本发明的实施例4：取珊瑚姜5g、姜黄5g，用含醇量70％乙醇200ml浸渍60小时，取浸渍液；另取冰片10g和苯甲酸10g溶解于100ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量70％乙醇至400ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸10g、甘油10g、醋酸10g和羟丙基纤维素30g，混匀，再加入75％乙醇制成1000ml，灌封，即得喷雾剂。
本发明的实施例5：取珊瑚姜10g、姜黄10g，用含醇量80％乙醇400ml浸渍72小时，取浸渍液；另取冰片20g和苯甲酸20g溶解于100ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量80％乙醇至600ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸50g、甘油50g、醋酸50g和羟丙基纤维素10g，混匀，再加入65％乙醇制成5000ml，灌封，即得喷雾剂。
本发明的实施例6：取珊瑚姜50g、姜黄10g，用含醇量85％乙醇1000ml浸渍84小时，取浸渍液；另取冰片50g和苯甲酸10g溶解于200ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量85％乙醇至2000ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸40g、甘油40g、醋酸40g和羟丙基纤维素50g，混匀，再加入95％乙醇制成8000ml，灌封，即得喷雾剂。
本发明的实施例7：取珊瑚姜20g、姜黄50g，用含醇量90％乙醇1600ml浸渍90小时，取浸渍液；另取冰片30g和苯甲酸40g溶解于500ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量90％乙醇至5000ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸80g、甘油80g、醋酸80g和苯甲酸钠5g，混匀，再加入85％乙醇至15000ml，灌封，即得搽剂。
本发明的实施例8：取珊瑚姜60g、姜黄80g，用含醇量85％乙醇2000ml浸渍66小时，取浸渍液；另取冰片40g和苯甲酸40g溶解于1000ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量85％乙醇至4000ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸70g、甘油70g、醋酸70g和苯甲酸钠1g，混匀，再加入65％乙醇至10000ml，灌封，即得搽剂。
本发明的实施例9：取珊瑚姜90g、姜黄70g，用含醇量75％乙醇3000ml浸渍45小时，取浸渍液；另取冰片20g和苯甲酸50g溶解于1000ml乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量75％乙醇至8000ml，得复方珊瑚姜酊；加入水杨酸30g、甘油30g、醋酸30g和苯甲酸钠10g，混匀，再加入95％乙醇至15000ml，灌封，即得搽剂。
本发明的实施例10：本发明所述质量控制方法包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体。
鉴别：(1)取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含10mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本制剂5ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，再挥至约0.5ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.1g，加无水乙醇1ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝49∶49∶2为展开剂，置用展开剂预饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：本制剂含乙醇量应不低于60％。
含量测定：(1)水杨酸 照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝23∶5∶5∶61为流动相，检测波长280nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备 取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸1.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密量取本制剂2ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得
本制剂每1ml含水杨酸C7H8O3应为16～24mg。
(2)冰片：照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验 柱长30m、内径0.53mm、膜厚度1.0μm的聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于5000。
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，摇匀，即得。
校正因子测定 精密称取冰片对照品约10mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.4mg的溶液；吸取上述对照品1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得。
测定法 精密量取供试品溶液2ml，内标溶液2ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得。
本制剂每1ml含冰片C10H180应不低于1.6mg。
本发明的实施例11：本发明所述质量控制方法可以包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体。
鉴别：取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝5∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：本制剂含乙醇量应不低于40％。
含量测定：水杨酸 照高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝15∶8∶2∶70为流动相，检测波长250nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于1000。
对照品溶液的制备 取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密量取本制剂0.5ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得
本制剂每1ml含水杨酸C7H8O3应为10～30mg；
本发明的实施例12：本发明所述质量控制方法可以包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体。
鉴别：取本制剂2ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，再挥至约0.2ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.05g，加无水乙醇0.5ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝20∶70∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：本制剂含乙醇量应不低于50％。
含量测定：冰片 照气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验 聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于2000。
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5mg的溶液，摇匀，即得。
校正因子测定 精密称取冰片对照品5mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.2mg的溶液；吸取上述对照品0.5μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得。
测定法 精密量取供试品溶液0.5ml，内标溶液0.5ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得。
本制剂每1ml含冰片C10H18O应不低于1.0mg。
本发明的实施例13：本发明所述质量控制方法可以包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体。
鉴别：(1)取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含15mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝15∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1.5％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)取本制剂10ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，再挥至约1ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.2g，加无水乙醇2ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝70∶20∶10为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查：本制剂含乙醇量应不低于40％。
本发明的实施例14：本发明所述质量控制方法可以包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体。
检查：本制剂含乙醇量应不低于50％。
含量测定：(1)水杨酸 照高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝40∶2∶8∶50为流动相，检测波长300nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸3mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密量取本制剂3ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本制剂每1ml含水杨酸C7H8O3应为10～30mg。
(2)冰片 照气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验 聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于3500。
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含3mg的溶液，摇匀，即得。
校正因子测定 精密称取冰片对照品20mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液10ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.8mg的溶液；吸取上述对照品3μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得。
测定法精密量取供试品溶液3ml，内标溶液3ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得。
本制剂每1ml含冰片C10H18O应不低于1.3mg。
Claims (11)
1.一种治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂，其特征在于：按照重量份计算，它是用复方珊瑚姜酊10～500份、水杨酸1～50份、甘油1～50份和醋酸1～50份，再加适量辅料制成酊剂、喷雾剂、搽剂、酒剂、凝胶剂、软膏剂、洗剂、涂膜剂或其它药剂学上可以接受的剂型。
2.按照权利要求1所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂，其特征在于：按照重量份计算，它是用复方珊瑚姜酊250份、水杨酸20份、甘油20份和醋酸10份，再加适量辅料制成酊剂、喷雾剂或搽剂。
3.按照权利要求1或2所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂，其特征在于：所述的复方珊瑚姜酊这样制备：取珊瑚姜1～100重量份、姜黄1～100重量份，用含醇量65％～95％乙醇10～2000重量份浸渍36～96小时，取浸渍液；另取冰片1～50重量份和苯甲酸1～50重量份溶解于10～500重量份乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量65％～95％乙醇至50～5000重量份，即得。
4.按照权利要求3所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂，其特征在于：所述的复方珊瑚姜酊这样制备：取珊瑚姜2.5重量份、姜黄5重量份，用含醇量75％乙醇200重量份浸渍48小时，取浸渍液；另取冰片2重量份和苯甲酸2重量份溶解于50重量份乙醇中；上述两溶液混匀，加含醇量75％乙醇至250重量份，即得。
5.如权利要求1-4中任一项所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的制备方法，其特征在于：取复方珊瑚姜酊，加入水杨酸、甘油和醋酸，混匀，然后加入适量辅料制成不同的制剂。
6.按照权利要求5所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的制备方法，其特征在于：所述制剂中的酊剂这样制备：取复方珊瑚姜酊，加入水杨酸、甘油和醋酸，混匀，加0.1～0.5％重量份茉莉香精，再加入含醇量65％～95％乙醇至200～20000重量份，即得；所述制剂中的喷雾剂这样制备：取复方珊瑚姜酊，加入水杨酸、甘油、醋酸和羟丙基纤维素10～50重量份，再加入含醇量65％～95％乙醇200～20000重量份，即得；所述制剂中的搽剂这样制备：取复方珊瑚姜酊，加入水杨酸、甘油、醋酸和苯甲酸钠1～10重量份，混匀，再加入含醇量65％～95％乙醇200～20000重量份，即得。
7.如权利要求1或5所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法主要包括性状、鉴别、检查以及含量测定项目中的部分或全部；其中鉴别包括对制剂中冰片和姜黄的薄层色谱鉴别；含量测定是对制剂中水杨酸和冰片的含量测定。
8.按照权利要求7所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的质量控制方法，其特征在于：冰片的鉴别方法是以冰片对照品为对照，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝5～15∶1为展开剂的薄层色谱法；姜黄的鉴别方法是以姜黄对照药材为对照，以苯-氯仿-乙醇＝20～70∶20～70∶1～10为展开剂的薄层色谱法；水杨酸的含量测定方法是以水杨酸对照品为对照，以乙腈冰醋酸四氢呋喃水＝15～40∶2～8∶2～8∶50～70为流动相的高效液相色谱法；冰片的含量测定方法是以水杨酸甲酯对照品为内标的气相色谱法。
9.按照权利要求8所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的质量控制方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下项目中的一项或全部：
(1)取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含5～15mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝5～15∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5～1.5％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本制剂2～10ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5～2ml使溶解，再挥至约0.2～1ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.05～0.2g，加无水乙醇0.5～2ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各5～20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝20～70∶20～70∶1～10为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
具体的含量测定方法包括以下项目中的一项或全部：
(1)水杨酸照高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝15～40∶2～8∶2～8∶50～70为流动相，检测波长250～300nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于1000；
对照品溶液的制备 取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸0.5～3mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 精密量取本制剂0.5～3ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本制剂每1ml含水杨酸C7H8O3应为10～30mg；
(2)冰片 照气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验 聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于2000；
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5～3mg的溶液，摇匀，即得；
校正因子测定精密称取冰片对照品5～20mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液1～10ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.2～0.8mg的溶液；吸取上述对照品0.5～3μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得；
测定法精密量取供试品溶液0.5～3ml，内标溶液0.5～3ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得；
本制剂每1ml含冰片C10H180应不低于1.0mg。
10.按照权利要求7所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体；
鉴别：(1)取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含5～15mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝5～15∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5～1.5％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本制剂2～10ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇0.5～2ml使溶解，再挥至约0.2～1ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.05～0.2g，加无水乙醇0.5～2ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各5～20μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝20～70∶20～70∶1～10为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：本制剂含乙醇量应不低于40％；
含量测定：(1)水杨酸照高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝15～40∶2～8∶2～8∶50～70为流动相，检测波长250～300nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于1000；
对照品溶液的制备 取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸0.5～3mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 精密量取本制剂0.5～3ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2～20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本制剂每1ml含水杨酸C7H8O3应为10～30mg；
(2)冰片 照气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验 聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于2000；
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含0.5～3mg的溶液，摇匀，即得；
校正因子测定 精密称取冰片对照品5～20mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液1～10ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.2～0.8mg的溶液；吸取上述对照品0.5～3μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得；
测定法 精密量取供试品溶液0.5～3ml，内标溶液0.5～3ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得；
本制剂每1ml含冰片C10H180应不低于1.0mg。
11.按照权利要求10所述治疗脚手癣、灰指甲的中西复方制剂的质量控制方法，其特征在于：所述质量控制方法包括：
性状：本制剂为草绿色至蓝色的澄明液体；
鉴别：(1)取本制剂原液，作为供试品溶液；另取冰片对照品适量，加乙醇制成每1ml含10mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃石油醚-乙酸乙酯＝9∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛硫酸溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)取本制剂5ml，水浴上蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，再挥至约0.5ml，作为供试品溶液；另取姜黄对照药材0.1g，加无水乙醇1ml冷浸，滤过，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版附录VIB薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-氯仿-乙醇＝49∶49∶2为展开剂，置用展开剂预饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；喷以硫酸，日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：本制剂含乙醇量应不低于60％；
含量测定：(1)水杨酸 照中国药典2005年版一部附录VID高效液相色谱法测定：
系统适应性试验 用十八烷基硅胶烷键合硅胶为填充剂：乙腈-冰醋酸-四氢呋喃-水＝23∶5∶5∶61为流动相，检测波长280nm；理论塔板数按水杨酸峰计算应不低于5000；
对照品溶液的制备取水杨酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml含水杨酸1.5mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备 精密量取本制剂2ml至25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
本制剂每1ml含水杨酸C7H8O3应为16～24mg；
(2)冰片：照中国药典2005年版一部附录VIE气相色谱法测定：
色谱条件与系统适应性试验柱长30m、内径0.53mm、膜厚度1.0μm的聚乙二醇PEG-20M毛细管柱；柱温140℃，理论塔板数按龙脑峰计算应不低于5000；
内标溶液的制备 称取水杨酸甲酯对照品适量，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的溶液，摇匀，即得；
校正因子测定 精密称取冰片对照品约10mg，置25ml量瓶中，精密加入内标溶液5ml，再加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，制成每1ml含冰片对照品0.4mg的溶液；吸取上述对照品1μl，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯面积，计算校正因子，即得；
测定法 精密量取供试品溶液2ml，内标溶液2ml加乙酸乙酯定容至10ml量瓶中，摇匀，吸取上述供试品溶液1祃，注入气相色谱仪，测定异龙脑与龙脑峰面积之和及水杨酸甲酯峰面积，以内标法计算含量，即得；
本制剂每1ml含冰片C10H180应不低于1.6mg。
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