CN114317586A - 一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体及其表达方法和应用 - Google Patents
一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体及其表达方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114317586A CN114317586A CN202111675968.0A CN202111675968A CN114317586A CN 114317586 A CN114317586 A CN 114317586A CN 202111675968 A CN202111675968 A CN 202111675968A CN 114317586 A CN114317586 A CN 114317586A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- powdery mildew
- cells
- gfp
- pjnarg
- plasmid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000221785 Erysiphales Species 0.000 title claims abstract description 75
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 244000043261 Hevea brasiliensis Species 0.000 title claims description 8
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 claims abstract description 42
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 37
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N Carbendazim Natural products C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000006013 carbendazim Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims abstract description 21
- 101001105692 Homo sapiens Pre-mRNA-processing factor 6 Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102100021232 Pre-mRNA-processing factor 6 Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 241000221787 Erysiphe Species 0.000 claims abstract description 11
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229920003211 cis-1,4-polyisoprene Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 4
- JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=C[CH]C2=NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 38
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 claims description 14
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 claims description 6
- 102000002278 Ribosomal Proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010000605 Ribosomal Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 3
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 claims 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 claims 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 6
- 241000221020 Hevea Species 0.000 abstract description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241000510928 Erysiphe necator Species 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000335423 Blastomyces Species 0.000 description 2
- 235000009852 Cucurbita pepo Nutrition 0.000 description 2
- 241000219104 Cucurbitaceae Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 2
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 241001480060 Blumeria Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000896246 Golovinomyces cichoracearum Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000006552 constitutive activation Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000024241 parasitism Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体，所述荧光载体为基于pJNARG质粒改造的质粒pJNARG‑RP60‑GFP，该质粒在XcmI酶切位点处被插入了一个多菌灵抗性基因，质粒pJNARG‑RP60‑GFP的多克隆位点在启动子RP60和GFP绿色荧光蛋白编码基因之间。本发明提供了用于评价白粉菌转化效率的有力工具，即用电击转化法转化含有荧光基因的质粒，使其在白粉菌细胞中表达荧光基因，并通过荧光标记所转化的白粉菌细胞计算白粉菌转化效率，从而有利于研究其他同时导入白粉菌细胞的外源或自身基因的作用。
Description
技术领域
本发明属于转基因白粉菌细胞技术领域，涉及一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体。
背景技术
白粉菌为植物白粉病的病原真菌，在重要粮食作物和经济作物上可引起严重的产量损失。通过转基因技术进行白粉菌致病基因的功能研究对病害防控具有重要意义。因为白粉菌为专性活体寄生，无法离开植物活体组织培养，所以难以对其进行转基因操作。这和兼性寄生真菌是不同的，兼性寄生真菌可在人工培养基上培养，更有利于遗传操作。
白粉菌的转基因技术有电击转化法和农杆菌介导的转化法。基因转化操作过程中需要保证白粉菌细胞能寄生于植物活体组织，用于转化的质粒携带合适的抗性基因，并在植物表面施加抑菌剂进行抗性胁迫筛选。比如，应用携带抗性基因Tub2的质粒转化瓜类白粉菌，并用药剂多菌灵MBC进行转化子筛选。被转化的细胞则具有多菌灵抗性，在植物叶片上生长。
目前对白粉菌的转基因技术仍具有一些缺点和限制，比如载体表达不稳定、被转化基因无法稳定遗传、外源基因无法表达等。再者，仅通过抑菌剂进行转化子筛选仍然无法很好地保证转化成功率。
发明内容
为了解决上述背景技术中提到的问题，本发明以橡胶树白粉菌为研究材料，提供了一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体，有助于在进行白粉菌基因转化的过程中更严格地控制转化质量，实现准确地计算转化效率，从而更好地保证对后续转基因白粉菌细胞的研究和利用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体，所述荧光载体为基于pJNARG质粒改造的质粒pJNARG-RP60-GFP，该质粒pJNARG-RP60-GFP在XcmI酶切位点处被插入了一个多菌灵抗性基因，质粒pJNARG-RP60-GFP的多克隆位点在启动子RP60和GFP绿色荧光蛋白编码基因之间。
本发明中，所述多菌灵抗性基因来自于瓜类白粉菌的Tub2多菌灵抗性基因。
本发明中，所述多菌灵抗性基因的启动子为橡胶树白粉菌的核糖体蛋白编码基因启动子RP60。
本发明中，所述荧光载体的表达方法包括以下步骤：
步骤一：将质粒pJNARG-RP60-GFP和白粉菌分生孢子混合，利用电击转化法将此混合质粒转化至白粉菌细胞；
步骤二：将转化后的白粉菌细胞侵染幼嫩橡胶叶片进行培养；
步骤三：筛选白粉菌细胞并进行荧光检测，其中：
所述筛选方式为：对接种后的橡胶叶片喷施多菌灵药剂，多菌灵药剂的浓度为0.4μg/ml，通过药剂筛选的方法获得成功转化的白粉菌细胞；
所述荧光检测为：当电击转化成功时，质粒pJNARG-RP60-GFP会被导入白粉菌细胞，pJNARG-RP60-GFP质粒中的启动子RP60则会启动GFP绿色荧光蛋白基因表达，在荧光显微镜GFP通道下，可观察到被成功转化的白粉菌细胞被激发出绿色荧光。
相比于现有技术，本发明具有如下优点：
1、本发明提供了用于评价白粉菌转化效率的有力工具，即用电击转化法转化含有荧光基因的质粒，使其在白粉菌细胞中表达荧光基因，并通过荧光标记所转化的白粉菌细胞计算白粉菌转化效率，从而有利于研究其他同时导入白粉菌细胞的外源或自身基因的作用；
2、本发明使用的载体中，多菌灵抗性基因的启动子是由橡胶树白粉菌的RP60启动子替换质粒pJNARG-RP60-GFP中的RP27启动子所得，其在橡胶树白粉菌中具有较高的启动子活性，更加有利于启动质粒中GFP绿色荧光蛋白基因的表达。
附图说明
图1为本发明橡胶树白粉菌菌丝的GFP信号检测示意图。
图2为本发明橡胶树白粉菌分生孢子的GFP信号检测示意图。
图3为本发明橡胶树白粉菌qRT-PCR检测转化效率示意图。
图4为质粒pJNARG-RP60-GFP的结构示意图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。
本发明提供了一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体，该荧光载体有利于在橡胶树白粉菌转化的过程中控制转化质量，计算白粉菌细胞转化效率。所述荧光载体为基于pJNARG质粒改造的适用于荧光标记橡胶树白粉菌的质粒pJNARG-RP60-GFP。该质粒pJNARG-RP60-GFP在XcmI酶切位点处被插入了一个多菌灵抗性基因，即来自于瓜类白粉菌的Tub2多菌灵抗性基因。多菌灵抗性基因的启动子选用橡胶树白粉菌的核糖体蛋白编码基因启动子RP60。在真菌中，核糖体蛋白编码基因的启动子具有较好的组成性激活的活性。多克隆位点位于该质粒pJNARG-RP60-GFP的真菌组成型启动子RP27和GFP绿色荧光蛋白编码基因之间。但目前RP27启动子在橡胶树白粉菌中的启动子活性较差，因此本发明将质粒pJNARG-RP60-GFP中的RP27启动子替换为橡胶树白粉菌的RP60启动子，拟启动质粒中GFP绿色荧光蛋白基因的表达。
荧光载体的表达方法包括以下步骤：
步骤一、在白粉菌转化中，将10μg质粒pJNARG-RP60-GFP和白粉菌分生孢子混合，利用电击转化法将此混合质粒转化至白粉菌细胞；具体电击转化过程为：收集生长7d左右的白粉菌孢子，加入电击缓冲液(含0.5wt％吐温20)，重悬浮，分装孢子液与质粒混合(总体积不超过200μL)，冰上放置15min；电击转化1.7kV/ms，间隔5s，电击3次，冰上放置5min。5000rpm离心5min，吸出缓冲液，加ddH2O重悬。
步骤二：将转化后的白粉菌细胞侵染幼嫩橡胶叶片(如古铜期橡胶叶片)进行培养,可在25℃和湿度较高的环境下进行培养。
步骤三：筛选白粉菌细胞并进行荧光检测：
1、筛选：
接种后的橡胶叶片喷施多菌灵药剂，多菌灵药剂浓度为0.4μg/mL，通过药剂筛选的方法获得成功转化的白粉菌细胞。
2、荧光检测：
当电击转化成功时，质粒pJNARG-RP60-GFP会被导入白粉菌细胞，pJNARG-RP60-GFP质粒中的启动子RP60则会启动GFP绿色荧光蛋白基因表达，在荧光显微镜GFP通道下，可观察到被成功转化的白粉菌细胞被激发出绿色荧光。
为确保荧光载体表达实验的准确性，以上荧光载体的表达方法设置三次生物学重复，每次生物学重复包含三次技术重复，并且在整个实验过程中，使用未转化的白粉菌细胞作为实验对照，以排除白粉菌细胞自发荧光的干扰：如图1和图2所示，左侧均为未转化的白粉菌细胞，无法发出荧光；右侧均为转化的白粉菌细胞，可以发出荧光。
通过荧光显微观察，根据绿色荧光对转化后的白粉菌细胞进行转化效率评价，其中：
转化效率(％)＝发射绿色荧光的白粉菌细胞数/所有被观察的白粉菌细胞数×100％。
转化效率结果如表1所示：
表1橡胶树白粉菌转化效率统计
同时，提取转化后的及未转化的白粉菌基因组总RNA，反转录成cDNA并进行quantitative Real Time-PCR检测，定量计算白粉菌的转化效率，具体结果如图3所示。
由此可知，用电击转化法转化含有荧光基因的质粒pJNARG-RP60-GFP，使其在白粉菌细胞中表达荧光基因，并通过荧光标记所转化的白粉菌细胞，能够计算白粉菌转化效率，从而有利于研究其他同时导入白粉菌细胞的外源或自身基因的作用。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
序列表
<120> 一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体及其表达方法和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 800
<212> DNA
<213> 启动子RP60（Erysiphe quercicola）
<400> 1
tcgtgaaaat gaggattacc aatggtatat gaaattaagg tgttacaggc gctcaaaaaa 60
cggggttgta tgcgataatt gtatactatt ttgtctaaac aatatctgac tacccctaat 120
tgattcgtac agtaaaagta aaagtaatta tcggcatcca gactgctcaa aagactatct 180
agacttgact ggggaaggaa tctcttaaat taagccaaca ggtaatgttt tgaattacta 240
tagaaaaaac ctaatataat agctagaagt tgactatctt cttatgaggc actaatttga 300
cgcagcatct caacataaag gtttttgggt caaaatagtg acactcagtt tccataggtc 360
tacacaggtt tcctcattgt tataatagga acaacatgat agcaatatat acacgtagta 420
gcaaatttct acattacttt tattctacac atttaaatta tcttctaaag cgtcgtcact 480
ggagtgatat gctcctcagt gttaacgata atttttgaaa ttatagttat ttgccaaggt 540
actaatcgct taaaaattcc ctggctaacc tattctagga aattgttggc gatagatatg 600
tcgcttaata ttttttaata tccaagtttc ttccgcacac tctgcatatc caaaaactct 660
tgaattcatc aatttgtaga acttgacgtt tcagtctccg ccacatcgcg gttaaattga 720
ttgatcctgc tgttctaacg acattgactt gatatctcag taccctttca caggatttta 780
ctgcatccaa aaagtcaaag 800
Claims (6)
1.一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体，其特征在于所述荧光载体为基于pJNARG质粒改造的质粒pJNARG-RP60-GFP，该质粒pJNARG-RP60-GFP在XcmI酶切位点处被插入了一个多菌灵抗性基因，质粒pJNARG-RP60-GFP的多克隆位点在启动子RP60和GFP绿色荧光蛋白编码基因之间。
2.根据权利要求1所述的标记橡胶树白粉菌的荧光载体，其特征在于所述多菌灵抗性基因来自于瓜类白粉菌的Tub2多菌灵抗性基因。
3.根据权利要求1或2所述的标记橡胶树白粉菌的荧光载体，其特征在于所述多菌灵抗性基因的启动子为橡胶树白粉菌的核糖体蛋白编码基因启动子RP60。
4.一种权利要求1-3任一项所述标记橡胶树白粉菌的荧光载体的表达方法，其特征在于所述表达方法包括以下步骤：
步骤一：将质粒pJNARG-RP60-GFP和白粉菌分生孢子混合，利用电击转化法将此混合质粒转化至白粉菌细胞；
步骤二：将转化后的白粉菌细胞侵染幼嫩橡胶叶片进行培养；
步骤三：筛选白粉菌细胞并进行荧光检测，其中，所述筛选白粉菌细胞的方式为：对接种后的橡胶叶片喷施多菌灵药剂，通过药剂筛选的方法获得成功转化的白粉菌细胞；所述荧光检测为：当电击转化成功时，质粒pJNARG-RP60-GFP会被导入白粉菌细胞，pJNARG-RP60-GFP质粒中的启动子RP60则会启动GFP绿色荧光蛋白基因表达，在荧光显微镜GFP通道下，可观察到被成功转化的白粉菌细胞被激发出绿色荧光。
5.根据权利要求4所述标记橡胶树白粉菌的荧光载体的表达方法，其特征在于，步骤三中筛选白粉菌细胞采用的多菌灵药剂浓度为0.4μg/mL。
6.一种权利要求1-3任一项所述荧光载体在标记橡胶树白粉菌中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111675968.0A CN114317586A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体及其表达方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111675968.0A CN114317586A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体及其表达方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114317586A true CN114317586A (zh) | 2022-04-12 |
Family
ID=81023273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111675968.0A Pending CN114317586A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体及其表达方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114317586A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114540402A (zh) * | 2022-01-11 | 2022-05-27 | 海南大学 | 一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法 |
| CN114540401A (zh) * | 2022-01-06 | 2022-05-27 | 海南大学 | 一种用于橡胶树白粉菌遗传转化的多菌灵抗性筛选载体 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060041956A1 (en) * | 2004-04-06 | 2006-02-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Vectors for plant transformation and methods of use |
| CN107760681A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-03-06 | 海南大学 | 启动子wy195及其用途 |
| CN107974454A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-05-01 | 海南大学 | 橡胶树白粉菌内源启动子wy193及其用途 |
| CN107974455A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-05-01 | 海南大学 | 橡胶树白粉菌内源启动子wy7及其用途 |
| CN108374012A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-08-07 | 海南大学 | 橡胶树白粉菌内源启动子wy51及其用途 |
| CN114540402A (zh) * | 2022-01-11 | 2022-05-27 | 海南大学 | 一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法 |
| CN114540401A (zh) * | 2022-01-06 | 2022-05-27 | 海南大学 | 一种用于橡胶树白粉菌遗传转化的多菌灵抗性筛选载体 |
-
2021
- 2021-12-31 CN CN202111675968.0A patent/CN114317586A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20060041956A1 (en) * | 2004-04-06 | 2006-02-23 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Vectors for plant transformation and methods of use |
| CN107760681A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-03-06 | 海南大学 | 启动子wy195及其用途 |
| CN107974454A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-05-01 | 海南大学 | 橡胶树白粉菌内源启动子wy193及其用途 |
| CN107974455A (zh) * | 2017-12-26 | 2018-05-01 | 海南大学 | 橡胶树白粉菌内源启动子wy7及其用途 |
| CN108374012A (zh) * | 2018-02-06 | 2018-08-07 | 海南大学 | 橡胶树白粉菌内源启动子wy51及其用途 |
| CN114540401A (zh) * | 2022-01-06 | 2022-05-27 | 海南大学 | 一种用于橡胶树白粉菌遗传转化的多菌灵抗性筛选载体 |
| CN114540402A (zh) * | 2022-01-11 | 2022-05-27 | 海南大学 | 一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| WANG Y ET AL: "WY195, a New Inducible Promoter From the Rubber Powdery Mildew Pathogen, Can Be Used as an Excellent Tool for Genetic Engineering" * |
| 朱利;王义;殷金瑶;王晨;王秋萱;刘文波;缪卫国;: "橡胶树白粉菌内源强启动子WY193的克隆及功能鉴定" * |
| 殷金瑶;王义;徐良向;朱利;王晨;刘文波;缪卫国;: "橡胶树白粉菌(HO-73)启动子WY172不同长度片段的克隆及表达活性分析" * |
| 王义: "橡胶树白粉菌遗传转化体系的构建及内源启动子筛选与鉴定研究" * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114540401A (zh) * | 2022-01-06 | 2022-05-27 | 海南大学 | 一种用于橡胶树白粉菌遗传转化的多菌灵抗性筛选载体 |
| CN114540402A (zh) * | 2022-01-11 | 2022-05-27 | 海南大学 | 一种评估橡胶树白粉菌遗传转化体系转化效率的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106916820B (zh) | 能有效编辑猪ROSA26基因的sgRNA及其应用 | |
| CN106701830B (zh) | 一种敲除猪胚胎p66shc基因的方法 | |
| CN114317586A (zh) | 一种标记橡胶树白粉菌的荧光载体及其表达方法和应用 | |
| CN108610399A (zh) | 特异性增强crispr-cas系统在表皮干细胞中进行基因编辑效率的方法 | |
| CN113881652B (zh) | 新型Cas酶和系统以及应用 | |
| CN106191116A (zh) | 基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系统及其建立方法和应用 | |
| CN109136248A (zh) | 多靶点编辑载体及其构建方法和应用 | |
| CN108130342A (zh) | 基于Cpf1的植物基因组定点编辑方法 | |
| US11286504B2 (en) | Method to produce protein in Penicillium amagasakiense's sleeping spores by transformation of ssRNA | |
| CN106086031B (zh) | 猪肌抑素基因编辑位点及其应用 | |
| CN103403022A (zh) | 来自玉米的植物基因表达调节序列 | |
| CN106754949B (zh) | 猪肌抑素基因编辑位点864-883及其应用 | |
| US11236362B2 (en) | Method for direct transformation of exogenous DNA into resting spores of Penicillium amagasakiense | |
| CN113373152B (zh) | 山羊友好位点SETD5-IN和特异靶向该位点的sgRNA及其编码DNA和应用 | |
| CN114540421B (zh) | 一种针对家蚕msg和psg表达基因的可控编辑方法 | |
| CN104744577A (zh) | 球孢白僵菌抗菌蛋白Bbafp及其表达载体、含有其基因的转基因植物的制备方法和应用 | |
| CN107674880A (zh) | 细长聚球藻pcc 7942的基因表达调控系统及其应用 | |
| CN113151577A (zh) | 一种用于鉴定香菇同一菌株不同单核体交配型A的InDel分子标记及方法 | |
| CN116240209B (zh) | 中国春小麦中受白粉菌强诱导的增强子及其应用 | |
| CN115029357B (zh) | 昆虫m6A甲基化阅读蛋白elF3-S6基因的dsRNA及其应用 | |
| CN112921041B (zh) | 一种斑玉蕈强启动子及其应用 | |
| CN114891791B (zh) | 特异性靶向犬Rosa26基因的sgRNA及其应用 | |
| CN102533741B (zh) | 猪假attp位点及其用途 | |
| CN116536347B (zh) | 钙依赖蛋白激酶基因GhCCAMK在植物抗黄萎病中的应用 | |
| CN113388636B (zh) | 一种外源基因瞬时转化杨树茎段的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220412 |