CN114295452A - 一种人精子形态学染色试剂及染色方法 - Google Patents
一种人精子形态学染色试剂及染色方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114295452A CN114295452A CN202111677213.4A CN202111677213A CN114295452A CN 114295452 A CN114295452 A CN 114295452A CN 202111677213 A CN202111677213 A CN 202111677213A CN 114295452 A CN114295452 A CN 114295452A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- staining
- sperm
- human sperm
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及人类精子检测领域，具体来说是一种人精子形态学染色试剂及染色方法，人精子染色液SVS包括：0.1‑1M的氯化钠溶液，20‑100mM的伊红溶液，100‑200g/L的苯胺黑溶液，0.01‑1%的甲醛溶液，1M的氢氧化钠溶液、盐酸溶液调节pH值位于7.3‑9.5。本发明为一步法，简洁高效，仅一瓶试剂即可满足所有染色需求，仅需30~60秒即可完成染色，待风干后在显微镜下进行人精子染色剂精子形态学的观察，操作简单，耗时短。
Description
技术领域
本发明涉及人类精子检测领域，具体来说是一种人精子形态学染色试剂及染色方法。
背景技术
本发明应用于医疗行业，适用于现在辅助生殖技术，可用于对精子染色，进而进行精子的形态学检测，精子的形态学检测是评估精子功能和男子生育力的重要指标，且随着男性学的发展而日益受到临床的重视。
现有的精子染色法，诸如改良巴氏染色方法、Papanicolaou染色法等配方组成复杂，操作时间长；Diff-Quik法，它原是一种用于白细胞分类检测的常规快速染色法，操作简便快速，但其原料价格昂贵，难以购买。
申请公布号为CN103558200A的中国发明专利中公开了“使用灭菌天然海水分别配制4～6g/L伊红生物染色液和90～100g/L的苯胺黑的生物染色液，然后等体积混合得到混合染色液，将混合染色液和化学处理后精子悬液按照体积比例为1～2uL：8～9uL混匀并置于载玻片上，于光学显微镜下观察，根据活精子不着色、死精子呈紫红色，记录200个精子着色情况，计算得出精子成活率。”虽然本发明与对比文件所用染色液相同，但是本发明与对比文件领域不同，染色时间更快速，操作更简洁方便。对比文件需要对精子悬浊液进行化学处理，本发明不需要对人精子悬浊液处理，直接将染色液与精子悬浊液等体积混合即可完成染色。克服了对比文件操作繁琐的缺陷。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种染色迅速、操作快捷方便地对人精子染色的染色液及染色方式。
为了实现上述目的，设计一种人精子形态学染色试剂，染色液SVS包括：0.1-1M的氯化钠溶液，20-100mM的伊红溶液，100-200g/L的苯胺黑溶液，0.01-1％的甲醛溶液，1M的氢氧化钠溶液、盐酸溶液调节pH值位于7.3-9.5。
一种采用上述人精子染色剂的染色方法，具体步骤如下：
(1)取等量的精子染色液和精子标本于试管内混合均匀，在室温下保持15-30秒；
(2)取20μL步骤S1中配置的混合液滴在标记了的显微镜载玻片上；
(3)将载玻片自然风干，用油滴覆盖，在明亮的区域使用显微镜进行观察。
优选地，步骤(3)中，使用显微镜的物镜为40X或100X。
本发明同现有技术相比，其优点在于：本发明为一步法，简洁高效，仅一瓶试剂即可满足所有染色需求，仅需30～60秒即可完成染色，待风干后在显微镜下进行人精子染色剂精子形态学的观察，操作简单，耗时短。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例：
1.本产品需要与光学显微镜(40-100X倍率)配合使用。
2.使用前摇晃瓶身。
3.取等量的精子染色液和精子标本，50μL SVS染色剂和50μL精子标本，使用艾本德试管混合均匀。
4.在室温下保持15-30秒。
5.准备载玻片。
6.用移液管将20μL的液滴滴在标记了的显微镜载玻片上，用液滴在载玻片中间画一条线。
7.用另一个显微镜载玻片盖住这个载玻片，当液滴均匀分散在两个载玻片中间时，将两个载玻片水平拉开，就有了两块制作好的载玻片。
8.将两个载玻片自然风干并且测试。也可以使用DPX或其他等效的固封剂与盖玻片，将载玻片堆叠起来，储存起来为后续的测试使用。
9.用油滴覆盖后，在明亮的区域使用40X的物镜或100X的物镜进行观察。
10.以200个精子数量为参考，白色的(未染色的)精子为活性的，红色或粉色的是死细胞，只有颈部染色的精子算是活精子。
只需一瓶试剂即可满足所有染色需求，仅需30～60秒即可完成染色，待风干后在显微镜下进行人精子染色剂精子形态学的观察，操作简单，耗时短。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种人精子形态学染色试剂，其特征在于，人精子染色液SVS包括：0.1-1M的氯化钠溶液，20-100mM的伊红溶液，100-200g/L的苯胺黑溶液，0.01-1%的甲醛溶液，1M的氢氧化钠溶液、盐酸溶液调节pH值位于7.3-9.5。
2.一种采用如权利要求1所述人精子染色剂的染色方法，其特征在于，具体步骤如下：
S1. 取等量的精子染色液和精子标本于试管内混合均匀，在室温下保持15-30秒；
S2. 取20µL步骤 S1中配置的混合液滴在标记了的显微镜载玻片上；
S3. 将载玻片自然风干，用油滴覆盖，在明亮的区域使用显微镜进行观察。
3.根据如权利要求2所述人精子染色剂的染色方法，其特征在于，步骤S3中，使用显微镜的物镜为40X或100X。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111677213.4A CN114295452A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种人精子形态学染色试剂及染色方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111677213.4A CN114295452A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种人精子形态学染色试剂及染色方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114295452A true CN114295452A (zh) | 2022-04-08 |
Family
ID=80976182
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111677213.4A Pending CN114295452A (zh) | 2021-12-31 | 2021-12-31 | 一种人精子形态学染色试剂及染色方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114295452A (zh) |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07110328A (ja) * | 1993-10-08 | 1995-04-25 | Hitachi Ltd | 染色試薬とその調整方法およびその使用方法 |
| WO1996011401A1 (fr) * | 1994-10-08 | 1996-04-18 | Kouji Aoki | Colorant supravital contenant un fixateur pour cellules |
| CN1927226A (zh) * | 2006-09-11 | 2007-03-14 | 华中农业大学 | 一种奶牛性控精子冷冻保存精液稀释液 |
| GB201114752D0 (en) * | 2011-08-25 | 2011-10-12 | Royal Brompton & Harefield Nhs Foundation Trust | Cell staining process |
| CN103558200A (zh) * | 2013-07-30 | 2014-02-05 | 广西壮族自治区水产科学研究院 | 对虾精子成活率和质量的评价方法 |
| WO2014057413A1 (en) * | 2012-10-08 | 2014-04-17 | Roumen Parapanov | Methods and kits for sperm quality assessment and uses thereof |
| WO2015150423A1 (en) * | 2014-04-01 | 2015-10-08 | FertiPro N.V. | Method for semen analysis |
| CN105998662A (zh) * | 2016-07-15 | 2016-10-12 | 黄淮学院 | 一种治疗生精障碍的中药散剂 |
| RU2726207C1 (ru) * | 2019-11-18 | 2020-07-09 | Жанна Юрьевна Сапожкова | Способ комбинированного измерения концентрации пероксидазо-положительных клеток (нейтрофильных гранулоцитов) и сперматозоидов в эякуляте человека с использованием вариаций на основе цитохимического окрашивания |
-
2021
- 2021-12-31 CN CN202111677213.4A patent/CN114295452A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07110328A (ja) * | 1993-10-08 | 1995-04-25 | Hitachi Ltd | 染色試薬とその調整方法およびその使用方法 |
| WO1996011401A1 (fr) * | 1994-10-08 | 1996-04-18 | Kouji Aoki | Colorant supravital contenant un fixateur pour cellules |
| CN1927226A (zh) * | 2006-09-11 | 2007-03-14 | 华中农业大学 | 一种奶牛性控精子冷冻保存精液稀释液 |
| GB201114752D0 (en) * | 2011-08-25 | 2011-10-12 | Royal Brompton & Harefield Nhs Foundation Trust | Cell staining process |
| WO2014057413A1 (en) * | 2012-10-08 | 2014-04-17 | Roumen Parapanov | Methods and kits for sperm quality assessment and uses thereof |
| CN103558200A (zh) * | 2013-07-30 | 2014-02-05 | 广西壮族自治区水产科学研究院 | 对虾精子成活率和质量的评价方法 |
| WO2015150423A1 (en) * | 2014-04-01 | 2015-10-08 | FertiPro N.V. | Method for semen analysis |
| CN105998662A (zh) * | 2016-07-15 | 2016-10-12 | 黄淮学院 | 一种治疗生精障碍的中药散剂 |
| RU2726207C1 (ru) * | 2019-11-18 | 2020-07-09 | Жанна Юрьевна Сапожкова | Способ комбинированного измерения концентрации пероксидазо-положительных клеток (нейтрофильных гранулоцитов) и сперматозоидов в эякуляте человека с использованием вариаций на основе цитохимического окрашивания |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 王建福;李洁;邵淑娟;张勤;张兆旺;: "鲤鱼精子染色方法学研究", 甘肃农业大学学报 * |
| 章其琪\N\N\N\N,JOAQUIN GADEA: "精子形态的实验室检查", 国外畜牧学.猪与禽 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20080199430A1 (en) | Methods and kits for qualifying sperm cells | |
| CN109612807A (zh) | 一种尿液有形成分染色液 | |
| CN113945440A (zh) | 一种巴氏染色试剂盒及其制备方法和染色方法 | |
| EP2717034A1 (en) | Methods and kits for sperm quality assessment and uses thereof | |
| CN114563253A (zh) | 一种妇科荧光染色液及其制备方法和应用 | |
| CN114295452A (zh) | 一种人精子形态学染色试剂及染色方法 | |
| US3796594A (en) | Stain coated slides for differentially staining blood | |
| Annino et al. | Determination of 3-methoxy-4-hydroxymandelic acid (VMA) in urine by thin-layer chromatography | |
| CN114324274B (zh) | 特异性核酸荧光染色反应液及其在精子dna完整性检测中的应用 | |
| CN103196906B (zh) | 用于检测临床标本中白假丝酵母的特异性方法 | |
| CN1811370A (zh) | 一种理想的血细胞髓过氧化物酶染色试剂盒 | |
| US20160153871A1 (en) | Cytoplasmic Stain Composition | |
| RU2730947C1 (ru) | Способ для определения целостности хроматина/ДНК в сперматозоидах | |
| Kanna et al. | Eosin Nigrosin staining technique in assessment of sperm vitality in medical laboratories–A snippet from our experience on implementing the staining, interpretation and quality control procedures | |
| JP3875916B2 (ja) | 尿沈渣検査用試薬及び尿沈渣の検査方法 | |
| WO2017156844A1 (zh) | 一种体外获能后精子质量评估的试剂盒及其使用方法 | |
| CN115326519A (zh) | 一种精子dna碎片染色试剂盒及其应用 | |
| Srivastava et al. | Evaluating sperm cell morphology | |
| JPH04278460A (ja) | 尿沈渣検査成績管理方法 | |
| Kass | Identification of normal and leukemic granulocytic cells with merocyanine 540 | |
| CN107807032A (zh) | 一种改良结晶紫染色法检测精子顶体的方法 | |
| CN117030411A (zh) | 一种精子核dna完整性检测试剂盒 | |
| CN117367922A (zh) | 卵磷脂小体染色试剂、制备方法和染色方法 | |
| Uzaru et al. | Formaldehyde as a contrast enhancer in gram’s staining analysis | |
| Song et al. | Vaginal Secretion and Cervical Analyzer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |