CN114277066A - 一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于聚羟基脂肪酸酯制备技术领域，公开了一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法及其应用。该制备方法包括将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养；在发酵培养至6‑10h之后，控制碳源的质量百分数为1.3‑1.6％，氮源的质量百分数为0.015‑0.05％；在发酵至30‑40h之后，控制氮源的质量百分数为0.01‑0.015％；在发酵培养时间为45‑50h之后，停止控制氮源浓度。通过对碳源浓度、氮源浓度、加入时机等因素的控制，使得本发明提供的聚羟基脂肪酸酯的制备方法提高了聚羟基脂肪酸酯的转化率、降低了氢氧化钠的使用量，还具有制备方法简单、易于产业化的优点。

Description

一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法及其应用

技术领域

本发明属于聚羟基脂肪酸酯制备技术领域，特别涉及一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法及其应用。

背景技术

聚羟基脂肪酸酯是一类由微生物体内合成的聚酯，具有与化学合成塑料相似的物理机械特性，以及化学合成塑料所不具备的生物可降解性、生物相容性、光学活性、压电性、气体相隔性等优秀性能。聚羟基脂肪酸酯在自然界中可降解，造成的环境污染小，是可再生的生物资源，有利于可持续发展，在农业、包装材料、药物缓释载体、组织工程等很多领域有着较大的应用潜力。

盐单胞菌常被用于聚羟基脂肪酸酯的发酵制备。但是在盐单胞菌发酵制备聚羟基脂肪酸酯的过程中，会产生大量的有机酸，发酵液中的COD和BOD高，聚羟基脂肪酸酯的转化率较低。

因此，有必要对聚羟基脂肪酸酯的制备工艺进一步地改进。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法及其应用，以提高聚羟基脂肪酸酯的转化率。

本发明的第一方面提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，所述聚羟基脂肪酸酯的制备方法包括以下步骤：(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养；(2)在发酵培养的时间为6-10h之后，控制发酵体系中碳源的质量百分数为1.3％-1.6％，氮源的质量百分数为0.015％-0.05％；(3)在发酵培养时间为30-40h之后，控制发酵体系中碳源的质量百分数为1.3％-1.6％，氮源的质量百分数为0.01％-0.015％；(4)在发酵培养时间为45-50h之后，控制发酵体系中碳源的质量百分数为1.3％-1.6％。

根据本发明的一些实施例，在步骤(1-4)，控制发酵体系的pH值为7.5-10。

根据本发明的一些实施例，在步骤(1)和步骤(4)，控制发酵体系的pH值为7.5-10。

根据本发明的一些实施例，在步骤(1)发酵开始时，发酵体系中氮源与碳源的质量比为1:(5-10)。

根据本发明的一些实施例，在步骤(2)，发酵体系中氮源与碳源的质量比为1：(40-50)。

根据本发明的一些实施例，在步骤(3)，发酵体系中氮源与碳源的质量比为1：(80-90)。

根据本发明的一些实施例，在步骤(4)，在发酵体系的吸光度值不再上升时，停止发酵培养。

根据本发明的一些实施例，在步骤(1)，发酵体系中碳源浓度低于15g/L时执行步骤(2)。

根据本发明的一些实施例，发酵体系中的氮源为酵母粉、玉米浆干粉、尿素、硫酸铵、氯化铵、胰蛋白胨中的至少一种。

根据本发明的一些实施例，发酵体系中的碳源为葡萄糖、果糖、葡萄糖酸钠中的至少一种。

根据本发明的一些实施例，发酵体系中的磷源为磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钠。

根据本发明的一些实施例，发酵体系中的镁源为硫酸镁和/或氯化镁。优选地，发酵体系中的镁源为硫酸镁和氯化镁。

根据本发明的一些实施例，在步骤(1)，发酵体系的温度为25-40℃，通气量为0.1-2vvm，pH值为8-10；氯化钠浓度为10-20g/L，碳源浓度为90-150g/L。

根据本发明的一些实施例，在步骤(1)中的盐单胞菌种为盐单胞菌经活化、种子培养后得到的。

根据本发明的一些实施例，所述盐单胞菌为通过将青海艾丁湖的湖水涂布于分离纯化培养基，在33℃中静置培养24小时后得到。

根据本发明的一些实施例，所述盐单胞菌种为盐单胞菌依次经平板培养基活化、摇瓶种子培养基、摇瓶发酵培养基进行种子培养后获得。

根据本发明的一些实施例，所述平板培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8-8.5。优选地，该pH值为8.2。

根据本发明的一些实施例，该摇瓶种子培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8-8.5。优选地，该pH值为8.2。

根据本发明的一些实施例，该摇瓶发酵培养基中包括0.1％的酵母粉、3％的葡萄糖、50％的氯化钠，pH值为8.8-9.2。优选地，该pH值为9.0。

本发明的第二方面提供上述聚羟基脂肪酸酯的制备方法在制造包装材料或药物缓释载体上的应用。

根据本发明的一些实施例，上述聚羟基脂肪酸酯的制备方法在制造包装材料上的应用。

根据本发明的一些实施例，上述聚羟基脂肪酸酯的制备方法在制造药物缓释载体上的应用。

本发明的有益效果包括：

1、本发明的制备方法中，对发酵培养过程中的碳源浓度、氮源浓度以及加入时机等因素进行控制；为盐单胞菌提供了适宜生长的环境，提高了盐单胞菌产生的聚羟基脂肪酸酯的转化率；

2、本发明的制备方法中，为发酵培养基提供阶梯的氮源浓度，实现对发酵培养基中pH值的控制，大大减少了用于pH调节的氢氧化钠的使用量；

3、本发明的制备方法简单，易于产业化实现。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。

实施例1

本实施例提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，通过将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养后得到。该盐单胞菌种为盐单胞菌经活化、种子培养后得到的。该盐单胞菌为通过将青海艾丁湖的湖水涂布于分离纯化培养基，在33℃中静置培养24小时后得到。

该盐单胞菌种为依次经平板培养基活化、摇瓶种子培养基、摇瓶发酵培养基进行种子培养后获得。该平板培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶种子培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶发酵培养基中包括0.1％的酵母粉、3％的葡萄糖、50％的氯化钠，pH值为9.0。

该聚羟基脂肪酸酯的制备方法包括以下步骤：

(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵；

该发酵培养基含有葡萄糖3％、酵母粉0.2％、尿素0.04％、磷酸二氢钾0.52％、硫酸镁0.02％；

在盐单胞菌种接种到发酵培养基后，加入氢氧化钠控制发酵体系的pH值为7.5-10。

(2)在发酵至第6h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为20g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.02％；

(3)在发酵至第40h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为10g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.01％；

(4)在发酵至第48h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；加入氢氧化钠控制发酵培养基的pH值在7.5-10之间；

对发酵培养基中的吸光度值(即OD值)进行监测，在OD值不再上升时停止进一步地发酵培养。经监测，OD值为751时不再上升。

(5)对发酵培养后的发酵培养基进行聚羟基脂肪酸酯分离，得到聚羟基脂肪酸酯。

实施例2

本实施例提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，通过将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养后得到。该盐单胞菌种为盐单胞菌经活化、种子培养后得到的。该盐单胞菌为通过将青海艾丁湖的湖水涂布于分离纯化培养基，在33℃中静置培养24小时后得到。

该盐单胞菌种为依次经平板培养基活化、摇瓶种子培养基、摇瓶发酵培养基进行种子培养后获得。该平板培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶种子培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶发酵培养基中包括0.1％的酵母粉、3％的葡萄糖、50％的氯化钠，pH值为9.0。

该聚羟基脂肪酸酯的制备方法包括以下步骤：

(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵；

该发酵培养基含有葡萄糖酸钠5％、胰蛋白胨0.2％、硫酸铵3％；

在盐单胞菌种接种到发酵培养基后，加入氢氧化钠控制发酵培养基的pH值为7.5-10。

(2)在发酵至第6h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为20g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.04％；

(3)在发酵至40h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为10g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.015％；

(4)在发酵至第48h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；对发酵培养基的pH值进行监测，在pH值低于7.5时，加入氢氧化钠，使得发酵培养基中的pH保持在7.5-10之间；

对发酵培养基中的OD值进行监测，在OD值不再上升时停止进一步地发酵培养。

经监测，OD值为625时不再上升。

(5)对发酵培养后的发酵培养基进行聚羟基脂肪酸酯分离，得到聚羟基脂肪酸酯。

实施例3

本实施例提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，通过将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养后得到。该盐单胞菌种为盐单胞菌经活化、种子培养后得到的。该盐单胞菌为通过将青海艾丁湖的湖水涂布于分离纯化培养基，在33℃中静置培养24小时后得到。

该盐单胞菌种为依次经平板培养基活化、摇瓶种子培养基、摇瓶发酵培养基进行种子培养后获得。该平板培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶种子培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶发酵培养基中包括0.1％的酵母粉、3％的葡萄糖、50％的氯化钠，pH值为9.0。

该聚羟基脂肪酸酯的制备方法包括以下步骤：

(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵；

该发酵培养基含有果糖4％、玉米浆干粉1％、尿素1％、硫酸铵3％；

在盐单胞菌种接种到发酵培养基后，加入氢氧化钠控制发酵体系的pH值为7.5-10。

(2)在发酵至第6h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为20g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.04％；

(3)在发酵至第40h时，在发酵至40h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为10g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素质量百分数维持在0.013％；

(4)在发酵至第48h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；对发酵培养基的pH值进行监测，在pH值低于7.5时，加入氢氧化钠，使得发酵培养基中的pH保持在7.5-10之间；

对发酵培养基中的吸光度值(即OD值)进行监测，在OD值不再上升时停止进一步地发酵培养。

经监测，OD值为531时不再上升。

(5)对发酵培养后的发酵培养基进行聚羟基脂肪酸酯分离，得到聚羟基脂肪酸酯。

实施例4

本实施例提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，通过将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养后得到。该盐单胞菌种为盐单胞菌经活化、种子培养后得到的。该盐单胞菌为通过将青海艾丁湖的湖水涂布于分离纯化培养基，在33℃中静置培养24小时后得到。

该盐单胞菌种为依次经平板培养基活化、摇瓶种子培养基、摇瓶发酵培养基进行种子培养后获得。该平板培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶种子培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶发酵培养基中包括0.1％的酵母粉、3％的葡萄糖、50％的氯化钠，pH值为9.0。

该聚羟基脂肪酸酯的制备方法包括以下步骤：

(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵；

该发酵培养基含有葡萄糖4％、果糖1％、玉米浆干粉8％、尿素3％、硫酸铵3％；

在盐单胞菌种接种到发酵培养基后，加入氢氧化钠控制发酵体系的pH值为7.5-10。

(2)在发酵至第6h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为20g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的的质量百分数维持在0.04％；

(3)在发酵至第40h时，在发酵至40h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的的质量百分数维持在1.5％；将浓度为10g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.015％；

(4)在发酵至第48h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；对发酵培养基的pH值进行监测，在pH值低于7.5时，加入氢氧化钠，使得发酵培养基中的pH保持在7.5-10之间；

对发酵培养基中的OD值进行监测，在OD值不再上升时停止进一步地发酵培养。

经检测，OD值为418时不再上升。

(5)对发酵培养后的发酵培养基进行聚羟基脂肪酸酯分离，得到聚羟基脂肪酸酯。

实施例5

本实施例提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，通过将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养后得到。该盐单胞菌种为盐单胞菌经活化、种子培养后得到的。该盐单胞菌为通过将青海艾丁湖的湖水涂布于分离纯化培养基，在33℃中静置培养24小时后得到。

该盐单胞菌种为依次经平板培养基活化、摇瓶种子培养基、摇瓶发酵培养基进行种子培养后获得。该平板培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶种子培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶发酵培养基中包括0.1％的酵母粉、3％的葡萄糖、50％的氯化钠，pH值为9.0。

该聚羟基脂肪酸酯的制备方法包括以下步骤：

(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵；

该发酵培养基含有葡萄糖3％、葡萄糖酸钠1％、果糖1％、玉米浆干粉8％、胰蛋白胨3％、氯化钠3％；

在盐单胞菌种接种到发酵培养基后，加入氢氧化钠控制发酵体系的pH值为7.5-10。

(2)在发酵至第6h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为20g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.04％；

(3)在发酵至第40h时，在发酵至40h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为10g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.015％。

(4)在发酵至第48h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；对发酵培养基的pH值进行监测，在pH值低于7.5时，加入氢氧化钠，使得发酵培养基中的pH保持在7.5-10之间；

对发酵培养基中的OD值进行监测，在OD值不再上升时停止进一步地发酵培养。

经监测，OD值为625时不再上升。

(5)对发酵培养后的发酵培养基进行聚羟基脂肪酸酯分离。

实施例6

本实施例提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，通过将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养后得到。该盐单胞菌种为盐单胞菌经活化、种子培养后得到的。该盐单胞菌为通过将青海艾丁湖的湖水涂布于分离纯化培养基，在33℃中静置培养24小时后得到。

该盐单胞菌种为依次经平板培养基活化、摇瓶种子培养基、摇瓶发酵培养基进行种子培养后获得。该平板培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶种子培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶发酵培养基中包括0.1％的酵母粉、3％的葡萄糖、50％的氯化钠，pH值为9.0。

该聚羟基脂肪酸酯的制备方法包括以下步骤：

(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵；

该发酵培养基含有葡萄糖1％、葡萄糖酸钠1％、氯化钠3％；

在盐单胞菌种接种到发酵培养基后，对发酵培养基的pH值进行调控，在pH值低于7.5时，加入氢氧化钠。

(2)在发酵至第6h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为20g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.02％；

(3)在发酵至第40h时，在发酵至40h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；将浓度为10g/L的尿素流动滴加到发酵培养基中，控制尿素的流入速度，使发酵培养基中的尿素的质量百分数维持在0.013％；

(4)在发酵至第48h时，将浓度为500g/L的葡萄糖流动滴加至发酵培养基中，控制葡萄糖的流入速度，使发酵培养基中的葡萄糖的质量百分数维持在1.5％；对发酵培养基的pH值进行监测，在pH值低于7.5时，加入氢氧化钠，使得发酵培养基中的pH保持在7.5-10之间；

对发酵培养基中的OD值进行监测，在OD值不再上升时停止进一步地发酵培养。

经监测，OD值为480时不再上升。

(5)对发酵培养后的发酵培养基进行聚羟基脂肪酸酯分离。

对比例1

本对比例提供一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，通过将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养后得到。该盐单胞菌种为盐单胞菌经活化、种子培养后得到的。该盐单胞菌为通过将青海艾丁湖的湖水涂布于分离纯化培养基，在33℃中静置培养24小时后得到。

该盐单胞菌种为依次经平板培养基活化、摇瓶种子培养基、摇瓶发酵培养基进行种子培养后获得。该平板培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶种子培养基中包括0.5％的酵母粉、1％的蛋白胨、50％的氯化钠，pH值为8.2；该摇瓶发酵培养基中包括0.1％的酵母粉、3％的葡萄糖、50％的氯化钠，pH值为9.0。

该聚羟基脂肪酸酯的制备方法包括以下步骤：

(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵；

该发酵培养基含有葡萄糖3％、酵母粉8％、尿素2％；

在盐单胞菌种接种到发酵培养基后，对发酵培养基的pH值进行调控，在pH值低于7.5时，加入氢氧化钠。

(2)在发酵至7h时，向发酵培养基中补充葡萄糖500g/L和尿素24g/L，按葡萄糖的质量百分数为10％的速度控制葡萄糖的加入；加入氢氧化钠使发酵体系的pH值大于7.5；

(3)在步骤(2)的葡萄糖和尿素补加完之后，向发酵培养基中补充葡萄糖510g/L和尿素24g/L，按葡萄糖的质量百分数为10％的速度控制葡萄糖的加入；加入氢氧化钠使发酵体系的pH值大于7.5；

(4)在步骤(3)的葡萄糖和尿素补加完之后，向发酵培养基中补充葡萄糖500g/L；

加入氢氧化钠使发酵体系的pH值大于7.5；

对发酵培养基中的OD值进行监测，在OD值不再上升时停止进一步地发酵培养。

经监测，OD值为329时不再上升。

(5)对发酵培养后的发酵培养基进行聚羟基脂肪酸酯分离。

相关测试

对实施例1-6以及对比例1所发酵培养得到的菌体干重、聚羟基脂肪酸钠的重量、发酵培养过程中葡萄糖与氢氧化钠的使用量进行收集；计算平均每升发酵培养基所得到菌体干重、聚羟基脂肪酸钠重量、葡萄糖的使用量、氢氧化钠的使用量，将结果列于表1。

表1发酵培养结果

依据表1，本发明实施例1-6制备得到的菌体干重为74.69-120g/L，得到的聚羟基脂肪酸酯的重量为58.71-106.70g/L，葡萄糖使用量为198.81-304.8g/L，聚羟基脂肪酸酯的转化率为29.53％-35％，氢氧化钠的使用量为7.46-39.12g/L；其在菌体干重、产物聚羟基脂肪酸酯重量上远高于对比例1的相应数据，在氢氧化钠使用量上远低于对比例1的相应数据。本发明实施例1所发酵培养得到的聚羟基脂肪酸酯的转化率最高，实施例5所发酵培养得到的聚羟基脂肪酸酯的转化率最低。由此可见，利用本发明实施例提供的制备方法制备聚羟基脂肪酸酯，有利于提高聚羟基脂肪酸酯的转化率，降低氢氧化钠的使用量。聚羟基脂肪酸酯的转化率的提高有赖于对培养基中各碳源、氮源以及发酵培养环境的控制，是各种因素协同作用的结果。

最后应说明的是，以上实施例方式仅用以说明本发明的技术方案并非限制，尽管参照以上较佳实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或等同替换都不应脱离本发明技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将盐单胞菌种接种到发酵培养基中进行发酵培养；

(2)在发酵培养的时间为6-10h之后，控制发酵体系中碳源的质量百分数为1.3％-1.6％，氮源的质量百分数为0.015％-0.05％；

(3)在发酵培养时间为30-40h之后，控制发酵体系中碳源的质量百分数为1.3％-1.6％，氮源的质量百分数为0.01％-0.015％；

(4)在发酵培养时间为45-50h之后，继续控制发酵体系中碳源的质量百分数为1.3％-1.6％。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，控制发酵体系的pH值为7.5-10。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)发酵开始时，发酵体系中氮源与碳源的质量比为1:(5-10)。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)，发酵体系中氮源与碳源的质量比为1:(40-50)；在步骤(3)，发酵体系中氮源与碳源的质量比为1:(80-90)。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(4)，在发酵体系的吸光度值不再上升时，停止发酵培养。

6.根据权利要求1所述的制备方法，在步骤(1)，在发酵体系中碳源浓度低于15g/L时执行步骤(2)。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，发酵体系中的氮源为酵母粉、玉米浆干粉、尿素、硫酸铵、氯化铵、胰蛋白胨中的至少一种。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征，发酵体系中的碳源为葡萄糖、果糖、葡萄糖酸钠中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，发酵体系中的磷源为磷酸二氢钾和/或磷酸氢二钠；发酵体系中的镁源为硫酸镁和/或氯化镁。

10.权利要求1-9中任一项所述的聚羟基脂肪酸酯的制备方法在制造包装材料或药物缓释载体上的应用。